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牛泰勒虫病通用血清学诊断方法的建立

牛泰勒虫病通用血清学诊断方法的建立

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：赵帅阳李有全刘爱红刘军龙殷宏关贵全罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

目的:牛泰勒虫病是由泰勒虫属的原虫寄生于牛的网状内皮细胞和红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病。在我国,已报道的有环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒虫三种病原,目前尚没有同时检测3种牛泰勒虫病的血清学方法。本研究以建立的牛泰勒... 详细信息

目的:牛泰勒虫病是由泰勒虫属的原虫寄生于牛的网状内皮细胞和红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病。在我国,已报道的有环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒虫三种病原,目前尚没有同时检测3种牛泰勒虫病的血清学方法。本研究以建立的牛泰勒虫病通用ELISA方法,对部分地区牛泰勒虫病流行情况进行调查,为牛泰勒虫病的防控提供技术支持。方法:以主要梨浆虫表面膜蛋白(Major Piroplasm Surface Protein,MPSP)为研究对象,以原核表达系统对环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒的MPSP分别进行表达纯化,Western Blot结果表明,这3种泰勒虫的重组蛋白均能与其他两种牛泰勒虫阳性血清反应,但与牛巴贝斯虫、大巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫等阳性血清没有交叉反应,从而表现出泰勒虫属特异性;3种重组抗原在同一抗原浓度及反应条件下进行间接ELISA结果与Western Blot一致,考虑到蛋白活性,浓度以及反应原性,选择中华泰勒虫MPSP重组蛋白为抗原建立牛泰勒虫病的通用ELISA方法并进行相关条件的优化,确定抗原、血清及二抗稀释倍数为1:100、1:200和1:40000,封闭液为2%BSA,利用Med Calc对47份PCR检测为阴性的血清和67阳性血清OD值的ROC曲线进行分析,从而确定该ELISA方法的阈值为30.33%,敏感性和特异性分别为100%和95.7%结果:以建立的间接ELISA方法对我国陕西、青海、新疆、西藏、甘肃、河北、河南、辽宁、吉林和内蒙古10个省份的1936血清进行了检测,抗体阳性率在23.1%-67.3%之间,结论:牛泰勒虫病在这些地区均有不同程度的流行。由于交通运输的便利及市场需求的增加,家畜活动范围的不断扩大,使得该病的流行范围不断扩大,以该方法对局部地区牛泰勒虫病的流行情况进行调查,为我国牛泰勒虫的防治提供可靠依据及技术支持。

关键词：牛泰勒虫 MPSP Western-blot ELISA 血清学调查

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2014年春季伊犁地区蜱传性病原微生物分子流行病学调查

2014年春季伊犁地区蜱传性病原微生物分子流行病学调查

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：陈秋语陈荣贵赵卫东陈泽任巧云罗金王素艳李凯刘小翠卢海燕刘光远家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心

目的:本实验于2014年春季对新疆伊犁地区五个县的牛、羊蜱传性疾病进行了调查,采集血样若干,提取基因组,运用PCR的方法在样品中检测包括巴贝斯虫、泰勒虫、无浆体、立克次体以及莱姆病螺旋体在内的共五类病原的感染情况,以了解我国新疆... 详细信息

目的:本实验于2014年春季对新疆伊犁地区五个县的牛、羊蜱传性疾病进行了调查,采集血样若干,提取基因组,运用PCR的方法在样品中检测包括巴贝斯虫、泰勒虫、无浆体、立克次体以及莱姆病螺旋体在内的共五类病原的感染情况,以了解我国新疆伊犁地区蜱传疾病的感染率以及分布情况,为该区域蜱传性疾病的防制打下基础。方法:在新疆伊犁地区选择了5个采样点,采集动物血液样品和蜱虫样本。采集的血样提取全血基因组,采集的蜱样鉴定种属后也提取基因组。在基因的保守区域设计引物,运用PCR的方法检测血液基因组样品中的以上5类病原,并对检测结果进行分析。结果:2014年在伊犁地区总共采集牛、羊血液样品共计233份,其中牛血液样品108份,羊血液样品125份。根据巴贝斯虫及泰勒虫18Sr RNA序列设计通用引物,运用套式PCR的方法检测上述样品,共检出阳性123份(其中牛21份,羊102份),测序结果经比对后正确的有102份。通过序列分析,在这102份阳性样品中泰勒虫属有三种,分别是泰勒虫OT3(Theileria ***3)71份,水牛泰勒虫(Theileria buffeli)26份以及羊泰勒虫(Theileria ovis)1份;巴贝斯虫阳性样品有4份,为莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)。基于无浆体16S r RNA的基因序列设计引物,运用套式PCR检测上述样品,阳性结果共计122份(其中牛13份,羊109份)。通过序列分析,共有三种结果,分别是绵羊无浆体(Anaplasma ovis)68份,嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)51份以及Uncultured Anaplasma 3份。在上述血液样品中未检出莱姆病螺旋体。值得一提的是,以立克次体gro EL为参照基因设计引物,在样品中扩增出了1份立克次体阳性样品,且序列分析后为正确结果。这也是迄今为止本实验室第一次从血液样品中扩增出的立克次体的阳性结果。结论蜱传病原对我国乃至世界家畜养殖业造成了严重的危害,因此,厘清诸如巴贝斯虫,泰勒虫以及其他蜱传性细菌病病原在家畜中的感染及流行情况,能够对这些病原的防控提供参考依据。

关键词：伊犁牛羊蜱传疾病流行病学调查

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河南南阳某种牛场泰勒虫流行病学调查

河南南阳某种牛场泰勒虫流行病学调查

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：刘娟刘军龙关贵全刘爱红赵洪喜杨聪山赵帅阳李有全殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

目的:牛泰勒虫病是由泰勒科(Theileriidae)泰勒属(Theileria)的原虫所引起的一种蜱传性梨形虫病,对生产养殖危害极大;我国已报道出现过的有环形泰勒虫、中华泰勒虫和瑟氏泰勒虫三种病原,其中环形泰勒虫致病性最强,瑟氏泰勒虫分布最广泛... 详细信息

目的:牛泰勒虫病是由泰勒科(Theileriidae)泰勒属(Theileria)的原虫所引起的一种蜱传性梨形虫病,对生产养殖危害极大;我国已报道出现过的有环形泰勒虫、中华泰勒虫和瑟氏泰勒虫三种病原,其中环形泰勒虫致病性最强,瑟氏泰勒虫分布最广泛。牛的瑟氏泰勒虫病最早是在韩国,日本的放牧牛上出现,在中国能引起水牛和牛出现精神不振、发热、贫血和淋巴结肿胀。为此我们对南阳某种牛场的18份血样进行了泰勒虫检测,分析确定该牛场泰勒虫的感染情况,可以为养防一体做好监控。方法:ITS转录间隔区存在着中间变异、种内变异以及个体内的变异,这为分类学提供了更充足的依据。梨浆虫主要表面蛋白MPSP(major piroplasm surface protein),是泰勒虫属的一个保守性蛋白,可用作研究其流行病学和系统发育的标记分子。根据MPSP的等位基因,可将瑟氏泰勒虫划分5种亚型,分别是I(Ikeda)、C(Chitose)、B(buffeli)1 and 2、and Thai;同时根据MPSP在国内牛的泰勒虫属可分为1-7型。我们采用已建立的泰勒虫PCR诊断方法,分别对ITS基因通用引物和五种MPSP等位基因引物进行扩增,克隆测序后,进行序列比对和多态性分析,确定了其感染类型。结果:结合血涂片,我们从18份牛血样中检测出了三份瑟氏泰勒虫感染,均未检测出环形泰勒虫和中华(东方)泰勒虫;成功扩增了三个阳性样品的瑟氏MPSP等位基因型:I(Ikeda)、C(Chitose)、B(buffeli)型,未扩出Thai型;用泰勒虫MPSP基因的通用引物扩增测序,得到了相应的进化树分析,其感染存在MPSP1型和2型,从而确立了该牛场感染泰勒虫的种属和分型。结论:由此我们得出该种牛场存在瑟氏泰勒虫感染情况,且同时存在四种MPSP等位基因型;考虑到牛场的地理环境位置,我们初步推断怀疑是运输饲草带蜱感染,进而说明了泰勒虫的感染并不局限与放牧或半放牧下的家畜。

关键词：牛泰勒虫转录间隔(ITS) 主要梨形虫表面膜蛋白(MPSP) 进化树分析

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旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：朱伟李江艳李倩王小莉杨小迪夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

目的:观察旋毛虫感染对CIA模型小鼠的疾病发生、病情的影响并探讨旋毛虫感染对CIA模型小鼠可能的免疫调控机制。方法:建立小鼠胶原性关节炎(CIA)模型,以旋毛虫肌幼虫分别于CIA造模前2W、造模同时、造模后2W感染小鼠。观察小鼠关节炎的... 详细信息

目的:观察旋毛虫感染对CIA模型小鼠的疾病发生、病情的影响并探讨旋毛虫感染对CIA模型小鼠可能的免疫调控机制。方法:建立小鼠胶原性关节炎(CIA)模型,以旋毛虫肌幼虫分别于CIA造模前2W、造模同时、造模后2W感染小鼠。观察小鼠关节炎的发病情况,判断旋毛虫不同时期感染对CIA小鼠的影响。首次CⅡ免疫6W后处死小鼠,取小鼠足爪和膝关节部位进行病理切片,观察其不同组间病理变化。ELISA法检测小鼠血清CⅡ胶原特异Ig G及其亚类抗体Ig G1、Ig G2a水平。3H-Td R掺入法检测脾淋巴细胞增殖反应。流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中Th1、Th2、Th17、Terg细胞亚群比例。结果:与CIA模型对照组相比较,CIA造模前2W感染旋毛虫组,能显著减轻CIA小鼠关节炎的病情,减轻病理损伤;血清中CⅡ胶原特异性Ig G、Ig G2a水平显著降低,Ig G1水平升高。脾淋巴细胞对Con A多克隆刺激及CⅡ抗原特异性刺激诱发的增值反应明显降低。CIA造模同时感染旋毛虫组对病情和发病率,脾淋巴细胞增殖以及血清CⅡ胶原Ig G及其亚类未有明显影响。CIA造模后2W感染旋毛虫组则加重了关节炎病情及病理损伤,但对脾淋巴细胞增殖和血清CⅡ胶原Ig G及其亚类未有明显影响。与CIA模型对照组相比,CIA造模前2W感染旋毛虫组IFN-γ+CD4+T和IL-17+CD4+T细胞亚群比例显著降低,IL-4+CD4+T和Treg细胞亚群比例显著升高。CIA造模同时感染旋毛虫组及CIA造模后2W感染旋毛虫组的IFN-γ+CD4+T、IL-17+CD4+T、IL-4+CD4+T和Treg细胞亚群比例较CIA模型对照组无显著性差异。结论:预先感染旋毛虫能够减轻CIA小鼠的临床症状及病理损伤,这有赖于造模前预先感染旋毛虫启动Th2、Treg优势应答来抑制异种Ⅱ型胶原诱发的致病性Th1和Th17应答。

关键词：旋毛虫免疫调节 Th细胞胶原性关节炎

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中国地区羊泰勒虫病患病率流行病学调查研究

中国地区羊泰勒虫病患病率流行病学调查研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：李倩李有全陈泽刘志杰刘军龙杨吉飞李亚琼任巧云关贵全罗建勋殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

目的羊泰勒虫病给羊养殖业带来了大量的经济损失,尤氏泰勒虫和吕氏泰勒虫被认为是制约我国羊泰勒虫病流行区的羊养殖业的主要因素之一。在我国一些地区,如甘肃、青海、内蒙古、河南、辽宁、湖北、浙江等地,已有泰勒虫病的相关报道,然而... 详细信息

目的羊泰勒虫病给羊养殖业带来了大量的经济损失,尤氏泰勒虫和吕氏泰勒虫被认为是制约我国羊泰勒虫病流行区的羊养殖业的主要因素之一。在我国一些地区,如甘肃、青海、内蒙古、河南、辽宁、湖北、浙江等地,已有泰勒虫病的相关报道,然而,对于其他省份羊泰勒虫病的情况依然知之甚少。因此,开展流行病学调查对于了解和掌握中国其他地区羊泰勒虫病患病情况是非常必要的。方法何海宁于2013年建立了间接酶联免疫吸附方法(i ELISA),已被实验证实具有高度灵敏度(97.1%)和特异度(97.9%),而且与巴贝斯虫无交叉反应。结果本研究运用该方法对中国21个省份的泰勒虫病进行了血清学阳性率调查研究。21个省份的泰勒虫患病率从0.0%到76.0%,患病率的均值是41.0%。甘肃省患病率最高,为76.0%,这与郭等(Guo et al.,2002)的报告一致。甘肃省的高患病率很可能与该地区的青海血蜱和长角血蜱的分布和密度、以及蜱的荷虫率高等因素密切相关(Luo and Yin et al.,1997)。在此之前,没有关于内蒙古的泰勒虫病患病率相关的报告,此次调查研究表明,其患病率高达40.1%。浙江省的患病率为6.8%,与通过PCR检测得到的结果一致(Ge et al.,2012)。在47个地区中,舟曲患病率为96.0%,伊犁患病率为93.2%,渭源患病率为92.0%,远高于患病率的平均水平。曹等(Cao et al.,2013)通过巢式PCR检测结果表明,吉林省头道镇患病率为24%,略高于我们的结果 11.3%。这两个结果并不矛盾,因为ELISA检测的是抗体水平(属于既往感染),而PCR检测的是感染状态。另外,在甘肃省景泰县和青海省祁连地区未检测到泰勒虫。

关键词：流行病学调查羊泰勒虫 ELISA

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羊巴贝斯虫对常见抗寄生虫化学药物的药敏试验研究

羊巴贝斯虫对常见抗寄生虫化学药物的药敏试验研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：谢俊仁马米玲关贵全刘爱红刘军龙李有全罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室

目的:梨形虫病是一种虫媒病,广泛存在于热带和亚热带国家,属于自然疫源性疾病,给畜牧业造成严重的经济损失,目前尚无特效疗法,只能使用化学药物进行预防和治疗,其病原包括巴贝斯虫和泰勒虫两大类。由于常用的抗寄生虫药物对原虫病的防... 详细信息

目的:梨形虫病是一种虫媒病,广泛存在于热带和亚热带国家,属于自然疫源性疾病,给畜牧业造成严重的经济损失,目前尚无特效疗法,只能使用化学药物进行预防和治疗,其病原包括巴贝斯虫和泰勒虫两大类。由于常用的抗寄生虫药物对原虫病的防治效果不同,因而需要建立一种方法来客观评价各种化学药物对治疗原虫病的疗效。方法:本研究在两种羊源巴贝斯虫单克隆株（巴贝斯虫新疆未定种G5株和莫氏巴贝斯虫临潭G7株）的培养体系中分别加入在不同浓度的18种常用化学药物后,通过统计连续培养5d内细胞培养上清OD值的变化和红细胞染虫率,来评价这些药物抑制巴贝斯虫生长的效果。结果:经过5d培养后空白对照组的巴贝斯虫在红细胞中的染虫率从0.4%增加到3%%;而加入100pg/m L的浓度以上咪唑苯脲、三氮脒、贝尼尔和蒿甲醚的培养基中的巴贝斯虫的不生长;加入1μg/m L以上的浓度的喷它脒羟乙磺酸盐能抑制巴贝斯虫的生长;加入50μg/m L以上氯喹啉、伯胺奎才能抑制巴贝斯虫生长;浓度在50μg/m L以上的强力霉素、阿奇霉素和克林霉素只能部分地抑制巴贝斯虫的生长;而青蒿葫酯、二氢青蒿素、吖啶黄、弗甲喹羟哌啶、奎宁、氯胍磺胺嘧啶和乙嘧啶在浓度10μg/m L时巴贝斯虫仍能正常生长。结论:由于没有宿主的免疫压力,巴贝斯虫的生长与红细胞的染虫率呈正相关,以上结果说明18种化学药物抑制巴贝斯虫生长的效果不同,其有效浓度的最小值越低其抑制效率越高,这意味着临床用药时疗效会越好,因而可以用其有效浓度的最小值来衡量抑制巴贝斯虫生长效率的参数,这为临床治疗和预防各种原虫病的用药提供了相对可靠的理论依据。

关键词：巴贝斯虫体外培养体系染虫率抗寄生虫药抑制效率

来源：评论

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中缅边境间日疟原虫氯喹敏感性研究

中缅边境间日疟原虫氯喹敏感性研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：李江艳李倩陶志勇王英夏惠 Liwang Cui 方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室第三军医大学热带医学教研室美国宾州大学

目的:调查中缅边境间日疟原虫氯喹敏感性及其可能分子标志物Pvmdr1的基因多态性。方法:(1)将分离自中缅边境经镜检与PCR确认的间日疟患者的血样进行短期体外培养,采用微量法检测间日疟原虫对氯喹的药物敏感性。(2)应用PCR扩增间日疟原... 详细信息

目的:调查中缅边境间日疟原虫氯喹敏感性及其可能分子标志物Pvmdr1的基因多态性。方法:(1)将分离自中缅边境经镜检与PCR确认的间日疟患者的血样进行短期体外培养,采用微量法检测间日疟原虫对氯喹的药物敏感性。(2)应用PCR扩增间日疟原虫多重耐药蛋白1(Pvmdr1)基因片段、产物测序,进行多态性分析。结果:(1)40例中缅边境间日疟原虫氯喹IC50值2.11613.2n M,几何均数(Geometric mean)、95%CI(95%CI of ***)及中位数(Median)分别为88.82n M、59.333n M和86.82n M。其中8例间日疟原虫样本氯喹IC50大于220n M。(2)成功扩增并测序上述进行氯喹敏感性测定样本中25例样本的Pvmdr1基因,经过序列比对分析,发现3例存在Y976F突变(突变率为12.00%),16例存在F1076L突变(突变率为64.00%),3例Y976F、F1076L双突变(突变率为12.00%)。(3)氯喹IC50大于220n M的8例样本中6例测序成功,其中1例存在Y976F突变、4例存在F1076L突变,1例Y976F、F1076L双突变;而氯喹IC50小于220n M的32例样本中19例扩增并测序成功,其中2例存在Y976F突变,12例存在F1076L突变,2例Y976F、F1076L双突变;在氯喹IC50大于220n M的样本中与氯喹IC50小于220n M的样本之间Pvmdr1基因Y976F突变率、F1076L突变率及Y976F、F1076L双突变率均无显著差异(P>0.05)。结论:(1)中缅边境地区存在氯喹敏感性降低的间日疟原虫虫株。(2)中缅边境间日疟原虫Pvmdr1基因存在Y976F突变、F1076L突变以及Y976F、F1076L双突变现象。(3)未发现Pvmdr1基因Y976F突变、F1076L突变及Y976F、F1076L双突变与中缅边境地区间日疟原虫氯喹敏感性降低存在关联。

关键词：间日疟原虫氯喹药物敏感性间日疟原虫多重耐药蛋白1

来源：评论

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我国九省羊的巴贝斯虫分布状况调查

我国九省羊的巴贝斯虫分布状况调查

引用

中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：杨强刘爱红刘军龙李有全殷宏罗建勋关贵全家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

目的:羊的巴贝斯虫病是一种经蜱传播的血液原虫病,感染动物表现发热、黄疸、贫血、血红蛋白尿、甚至死亡。该病在热带、亚热带、温带均有流行,给世界畜牧业造成严重的危害。在我国,羊巴贝斯虫病最早于上世纪八十年代在四川和黑龙江省发... 详细信息

目的:羊的巴贝斯虫病是一种经蜱传播的血液原虫病,感染动物表现发热、黄疸、贫血、血红蛋白尿、甚至死亡。该病在热带、亚热带、温带均有流行,给世界畜牧业造成严重的危害。在我国,羊巴贝斯虫病最早于上世纪八十年代在四川和黑龙江省发现并报道。中国农业科学院兰州兽医研究所分离出几株羊的巴贝斯虫,并依据18S r RNA序列比对,将这些感染羊的巴贝斯虫可分为两组,即莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)和巴贝斯虫未定种(Babesia ***)。本研究的目的是通过分子流行病学调查,探明我国羊的巴贝斯虫的流行情况。方法:以本团队2014年建立的以18S r RNA为靶基因的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)为检测技术,该方法可特异性的检测莫氏巴贝斯虫临潭株、莫氏巴贝斯虫宁县株、莫氏巴贝斯虫天祝株、莫氏巴贝斯虫河北株和羊巴贝斯虫未定种新疆株,与牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫和牛巴贝斯虫未定种、吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、绵羊无浆体无交叉反应。应用该方法对采集于甘肃、内蒙古、辽宁、重庆、海南、浙江、贵州和湖北9个省382份羊血液样品进行了检测。结果:实时荧光定量PCR检测结果显示,共检出阳性样品132份,阳性率为34.6%。其中浙江采集的42份羊血液样品感染率最高,阳性率为69.4%。辽宁检测羊血液样品45份,阳性样品出现13份,感染率为28.9%,而重庆采集的55份血液样品感染率最低,为10.9%。可见不同省份的羊巴贝斯虫感染率差异很大。结论:本研究首次应用实时荧光定量PCR对我国羊巴贝斯虫病的流行状况进行大范围的调查,更加准确的掌握羊巴贝斯虫病的流行情况,为进一步了解我国羊巴贝斯虫的分布情况和羊巴贝斯虫病防控策略的制定提供了可靠的流行病学信息。

关键词：羊的巴贝斯虫流行病学调查 Real-time PCR

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草鱼寄生指环虫的季节动态和空间分布

草鱼寄生指环虫的季节动态和空间分布

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：杨宝娟李文祥邹红吴山功周顺王桂堂中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室

目的:草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国最重要养殖品种之一,然而病害严重影响着草鱼的养殖产量,在这些病害中,除了草鱼出血病,烂鳃病是另一种重要疾病。寄生虫感染是引起草鱼烂鳃病的重要原因之一,而指环虫是最主要的寄生虫病原。... 详细信息

目的:草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国最重要养殖品种之一,然而病害严重影响着草鱼的养殖产量,在这些病害中,除了草鱼出血病,烂鳃病是另一种重要疾病。寄生虫感染是引起草鱼烂鳃病的重要原因之一,而指环虫是最主要的寄生虫病原。为弄清草鱼寄生指环虫的流行病学规律,本研究调查了草鱼寄生指环虫的季节动态,分析了其空间分布特点。方法:2012年9月—2014年12月,草鱼每月取自于湖北省武汉市江夏区多福科技农庄某口池塘,每次约50尾。整个养殖过程中只投喂人工饲料,不使用任何杀虫药物。将鱼运回实验室后,测量尾叉长,剪下鳃片,置于解剖镜下鉴定至种。鳃片按照从内(最靠近鳃盖)到外的顺序依次划分为鳃1、2、3、4。其中每片鳃又被划分为9个区域包括3个分区和3个分段,记录每个区域指环虫的种类和数量。寄生虫种类的鉴定是根据其形态学特征进行。结果:2012年9月-2013年12月(调查期Ⅰ)仅发现鳃片指环虫(Dactylogyrus lamellatus),2014年1月-2014年12月(调查期Ⅱ)共发现鳃片指环虫和鲩指环虫(***)两种指环虫。在调查期Ⅰ,鳃片指环虫的总感染率为86.51%。平均丰度自11月(2.81±2.74)逐渐上升,3月达到高峰(92.88±96.48),随后迅速下降,7月降至最低(0.72±1.03),8、9月份迎来一个小高峰。在调查期Ⅱ,鳃片指环虫的总感染率为95.68%。平均丰度变化规律与调查期Ⅱ相似但略有不同,最高峰出现在2月(215.26±102.57),最低出现在10月(3.60±3.08),8、9月份未见明显的小高峰。鲩指环虫总感染率高达96.76%。平均丰度3月最低(12.25±9.32),自4月开始升高,并维持在较高的感染丰度直到11月(10月稍微下降),最高值出现在6月(46.68±48.85)。在空间分布上,鳃片指环虫在左、右鳃上的平均丰度没有显著性差异(P>0.05),但在各鳃片间、鳃片分区、鳃丝分段上的分布均具有显著性差异(P<0.05)。鳃片指环虫在第2片鳃上的平均丰度最高,第4片鳃最低;在鳃片分区上,中区的平均丰度最高;在鳃丝分段上,远段的平均丰度最高。鲩指环虫的空间分布规律同鳃片指环虫类似,尽管右鳃的平均丰度显著性大于左鳃(P<0.05)。两种指环虫没有发现显著的相关关系(P>0.05)。结论:鳃片指环虫的发生有明显的季节性,虽然全年均有发生,但在冬季感染水平较高,至冬末初春达到高峰,在夏秋季维持在一个较低的水平上。与鳃片指环虫不同,鲩指环虫在夏秋季感染水平较高,冬季和春季较低。在空间分布上,两种指环虫对鳃片上的寄生位置均具有较强的选择性,且喜好位置相似,但是两种指环虫没有明显的生态位竞争。

关键词：草鱼指环虫季节动态空间分布

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残缘璃眼蜱半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)生物学特性分析

残缘璃眼蜱半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)生物学特性分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：王素艳陈荣贵赵卫东田占成任巧云陈泽罗金陈秋语李凯刘光远家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心

目的残缘璃眼蜱属于专性外吸血寄生虫,能够传播多种病原体,特别是对环形泰勒虫的传播给畜牧业造成较大的损失。目前蜱的防治越来越多的应用免疫方法,但对残缘璃眼蜱防治的研究较少,同时对媒介蜱传播环形泰勒虫的防控过程研究基本没有;因... 详细信息

目的残缘璃眼蜱属于专性外吸血寄生虫,能够传播多种病原体,特别是对环形泰勒虫的传播给畜牧业造成较大的损失。目前蜱的防治越来越多的应用免疫方法,但对残缘璃眼蜱防治的研究较少,同时对媒介蜱传播环形泰勒虫的防控过程研究基本没有;因此,本试验通过对残缘璃眼蜱中肠、唾液腺中的活性分子研究,以期筛选出有效的控蜱及蜱传病候选抗原。方法本研究以残缘璃眼蜱饥饿成蜱为模板,cys500为引物扩增得到半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)保守区域;通过5’和3’RACE c DNA末端快速扩增技术获得CP基因全长序列。将CP基因ORF PCR产物经Eco R I和Not I双酶切后连接至表达载体p ET-30a,重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中,37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析CP蛋白体外表达特征,Western blotting分析CP免疫原性,实时荧光定量进行CP不同发育阶段和组织定位。结果结果显示:CP基因序列全长为1192bp,其中保守区域为507bp,包含一个999bp的开放阅读框(ORF),编码332个氨基酸,等电点为5.53。BLAST分析得知,残缘璃眼蜱CP基因序列与Gen Bank中登录的小亚璃眼蜱半胱氨酸L样蛋白酶基因序列同源性为95%,且氨基酸序列中含有保守的中间型序列(ERFNIN),因此属于半胱氨酸L样蛋白酶。利用生物学软件分析得知,CP基因在不同蜱种间有很大的种属差异,但具有一定的保守性。连接到p ET-30a载体上成功表达,重组蛋白约为45ku;SDS-PAGE和Western blotting分析显示,融合蛋白以包涵体的形式存在,并和兔抗全蜱血清有较强的免疫反应,表明该蛋白具有良好的抗原反应原性。实时荧光定量分析显示,CP基因表达具有较强的选择性,组织中仅中肠有较高的表达丰度,其他组织表达丰度很低,基本可以忽略;蜱卵中该基因表达丰度较高,蜱吸血过程中基因表达丰度出现上调现象;因此该基因可能和卵的发育、吸血及血液消化相关。动物保护性试验和RNAi结果表明:蜱的吸血、饱血程度及产卵情况受到影响,证明CP与蜱卵的发育和生长发育有关。结论通过以上实验表明半胱氨酸蛋白酶在残缘璃眼蜱中可能与蜱吸血、宿主血液消化以及卵的发育等相关,可为抗蜱及蜱传病疫苗研制提供技术和理论支持。

关键词：残缘璃眼蜱半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease CP) 免疫分析保护性实验

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