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Coupling switch of P2Y-IP3 receptors mediates differential Ca2+-signaling in human embryonic stem cells and derived cardiovascular progenitor cells

Coupling switch of P2Y-IP3 receptors mediates differential C...

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第十一届全国钙信号和细胞功能研讨会

作者： Jijun Huang Min Zhang Peng Zhang He Liang Kunfu Ouyang Huang-Tian Yang Key Laboratory of Stem Cell Biology Institute of Health Sciences Shanghai Institutes for Biological Sciences Chinese Academy of Sciences Drug Discovery Center Key Laboratory of Chemical Genomics Peking University Shenzhen Graduate School

Purinergic signaling mediated by P2 receptors(P2Rs) plays important roles in embryonic and stem cell development. However, how it mediates Ca signals in human embryonic stem cells(h ESCs) and derived cardiovascular progenitor cells(CVPCs) remains unclear. Here, we determined the role of P2 Rs in mediating Ca mobilizations of these cells. IP3R3 knockdown(KD) or IP3R2 knockout(KO) h ESCs were established by sh RNA-or TALEN-mediated gene manipulations, respectively. Confocal imaging revealed that Ca responses in CVPCs to ATP and UTP were more sensitive and stronger than those in h ESCs. Consistently, the gene expression levels of most P2 YRs except P2Y1 were increased in CVPCs. Suramin or PPADS blocked ATP-induced Ca transients in h ESCs but only partially inhibited those in CVPCs. Moreover, the P2Y1 receptor-specific antagonist MRS2279 abolished most ATP-induced Ca signals in h ESCs but not in CVPCs. P2Y1 receptor-specific agonist MRS2365 induced Ca transients only in h ESCs but not in CVPCs. Furthermore, IP3R2 KO but not IP3R3 KD decreased the proportion of h ESCs responding to MRS2365. In contrast, both IP3R2 and IP3R3 contributed to UTP-induced Ca responses while ATP-induced Ca responses were more dependent on IP3R2 in the CVPCs. In conclusion, a predominant role of P2Y1 receptors in h ESCs and a transition of P2Y-IP3 R coupling in derived CVPCs are responsible for the differential Ca mobilization between these cells

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Investigating the role of TPC2-mediated Ca2+ signaling during the development of slow muscle cells and primary motor neurons in zebrafish

Investigating the role of TPC2-mediated Ca2+ signaling durin...

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第十一届全国钙信号和细胞功能研讨会

作者： Sarah E.Webb Jeffrey J.Kelu Margarida Ruas John Parrington Antony Galione Andrew L. Miller Division of Life Science and State Key Laboratory of Molecular Neuroscience HKUST Department of Pharmacology University of Oxford

Ca signaling is reported to play a key role in the regulatory networks that control differentiation in many cell types, including vertebrate skeletal muscle and neurons. We are using transgenic lines of zebrafish that express: 1) the bioluminescent Ca reporter, apoaequorin, specifically in the skeletal muscle;and 2) the fluorescent Ca reporter, GCa MP7, specifically in the primary motor neurons. Using the aequorin line of fish, we recently showed that two pore channel 2(TPC2),(which is a novel member of the voltage-gated channel superfamily that is located in the membrane of lysosomes and proposed to be activated by nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate), plays a crucial role in generating Ca signals during slow muscle cell(SMC) myogenesis in zebrafish. Morpholino(MO)-based knock-down of TPC2 resulted in a dramatic attenuation of the Ca signals, whereas co-injection of TPCN2 m RNA or treatment with IP/BM partially rescued the Ca signaling signature in the SMCs. Dual-color STED super-resolution microscopy demonstrated the presence of Ry R-TPC2 "nano"-domains in the sarcomeric Z-lines of mature myotubes. Injection of the TPCN2-MO into embryos of the GCa MP7 line of fish, resulted in an inhibition of the alternate firing of the contralateral caudal primary motor neurons(Ca Ps). This suggests a possible regulatory role for TPC2-mediated Ca signaling during Ca P activation. To validate the MO-generated data, we are in the process of generating a TPC2 zebrafish mutant line using CRISPR/Cas9 gene editing. Our preliminary results indicate that there are similarities between the MO-generated TPC2 knock-down and CRISPR/Cas9-generated TPC2 knock-out embryos obtained. Together, our data provide evidence to suggest that spontaneous TPC2-mediated Ca release might be essential for regulating the development and function of SMCs in zebrafish via modulating the upstream neurogenic signals.

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TRPC3 plays a role in the neural differentiation of mouse embryonic stem cells and cell survival

TRPC3 plays a role in the neural differentiation of mouse em...

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第十一届全国钙信号和细胞功能研讨会

作者： Helen Baixia Hao Sarah E.Webb Marc Moreau Catherine Leclerc Jianbo Yue Andrew L. Miller Division of Life Science and State Key Laboratory of Molecular Neuroscience HKUST Centre de Biologie du Développement UMR-CNRS 5547 and GDR2688 Université Toulouse III Department of Biomedical Sciences City University of Hong Kong

The neural differentiation of embryonic stem cells（ESCs） is a dynamic and complex process, which has been shown to be regulated by several different signaling pathways. Ca2+is a highly versatile intra-and intercellular second messenger, has been reported to be involved in several of these regulatory pathways. Thus, by inference we hypothesized that Ca2+ may play an important role in regulating neural differentiation of ESCs. The goal of our research was, therefore, to investigate the role of canonical transient receptor potential channel subtype 3（TRPC3）, a cation channel that is permeable to both Ca2+ and Na+, in the regulation of the neural differentiation of mouse ESCs（m ESCs）. We demonstrate that TRPC3 is expressed in m ESCs and that it contributes to store-operated Ca2+ entry（SOCE） in these cells following treatment with thapsigargin. We also show that the level of TRPC3 expression gradually increases as m ESCs differentiate into cells of the neural lineage. sh RNA knockdown of TRPC3 suppressed its expression by 0% and led to a reduction in the expression of the neural differentiation markers: nestin, sox1 and tuj1. Furthermore, treatment of m ESCs with the TRPC3 inhibitor, pyr3, also inhibited the expression of these neural differentiation markers and reduced the amount of SOCE. Interestingly, TRPC3 knockout with CRISPR/Cas9, or inhibition with pyr3 also resulted in dramatic cell death during the early stages of m ESC-derived neural differentiation. Taken together, TRPC3 appears to positively regulate the neural differentiation of m ESCs and it is also appears to be required for cell survival during this process. We are now studying how the suppression of TRPC3 affects the cellular and molecular mechanisms involved in the inhibition of neural differentiation and cell survival.

关键词： TRPC3 plays a role in the neural differentiation of mouse embryonic stem cells and cell survival

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Expression and reconstitution of the bioluminescent Ca2+ reporter aequorin in human embryonic stem cells, and determination of the presence of functional IP3 receptors at the earliest stages of their differentiation into cardiomyocytes

Expression and reconstitution of the bioluminescent Ca2+ rep...

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第十一届全国钙信号和细胞功能研讨会

作者： Harvey Y.S.Chan Man Chun Cheung Yi Gao Andrew L.Miller Sarah E.Webb Division of Life Science & State Key Laboratory of Molecular Neuroscience HKUST Stem Cell & Regenerative Medicine Consortium Li Ka Shing Faculty of Medicine The University of Hong Kong

In order to develop a novel method of visualizing possible Ca signaling during the early differentiation of h ESCs into cardiomyocytes and avoid some of the inherent problems associated with using fluorescent reporters, we expressed the bioluminescent Ca reporter, apoaequorin, in HES2 cells. Active holo-aequorin was then reconstituted in the apo-aequorinexpressing cells, by incubation with f-coelenterazine, one of a variety of prosthetic co-factors of the holo-aequorin complex. Holo-f-aequorin is a Ca-sensitive bioluminescent protein complex that emits light at 70 nm on binding with Ca and it is 9 times brighter than heterogeneous natural aequorin. Being bioluminescent, aequorin does not require excitation light;it remains in the cells that it is injected into or in the cell compartments where it is targeted to;and it has minimal buffering capacity. The temporal nature of the Ca signals generated by the holo-f-aequorin-expressing HES2 cells during the earliest stages of differentiation into h ESC-v CMs（i.e., in cardiospheres during the first 12 days） was then investigated using a luminometer. Our data show that no endogenous Ca transients（generated by release from intracellular stores） could be detected in 1-12 day old cardiospheres but that Ca transients were generated in cardiospheres following stimulation with KCl or CaCl, indicating that holof-aequorin was functional in these cells during this developmental time-window. In addition, following the addition of exogenous ATP, an agonist of the inositol trisphosphate receptor（IP3R）, Ca transients were generated from day 4 onward. That ATP was inducing Ca release from functional IP3 Rs was demonstrated by treatment with 2-APB, a known IP3 R antagonist. On the other hand, following treatment with caffeine, an agonist of the ryanodine receptor（Ry R）, a minimal Ca response was observed at day 8 of differentiation only. Thus, our data indicate that sarcoplasmic reticulum-based IP3 Rs are present and functional at these e

关键词： and determination of the presence of functional IP3 receptors at the earliest stages of their differentiation into cardiomyocyte Expression and reconstitution of the bioluminescent Ca reporter aequorin in human embryonic stem cells

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砷对人正常膀胱上皮细胞Ca2+/CaN/NFATc1信号通路的影响

砷对人正常膀胱上皮细胞Ca2+/CaN/NFATc1信号通路的影响

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第十一届全国环境与职业医学研究生学术研讨会

作者：刘婕瑜中国医科大学北京110000

本研究发现砷处理人正常膀胱上皮细胞24 h后，细胞内ca2+水平发生了变化，当亚砷酸钠浓度达到4、8和10μmol／L浓度时，细胞内Ca2+水平显著高于对照组，并以10μmol／L剂量组细胞内Ca2+水平最高。说明高剂量亚砷酸钠刺激人正常膀胱上皮... 详细信息

本研究发现砷处理人正常膀胱上皮细胞24 h后，细胞内ca2+水平发生了变化，当亚砷酸钠浓度达到4、8和10μmol／L浓度时，细胞内Ca2+水平显著高于对照组，并以10μmol／L剂量组细胞内Ca2+水平最高。说明高剂量亚砷酸钠刺激人正常膀胱上皮细胞，引发钙动员，细胞内钙离子水平持续升高。亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞24h后，细胞核NFATcl蛋白表达水平也显著增高，其增高趋势与细胞内Ca2+水平结果相一致。提示亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞后，Ca2+／CaN／NFATcl信号通路被激活。亚砷酸钠可以通过该信号通路发挥作用，诱导其下游靶基因的转录，调控细胞的生长与分化、血管发生甚至肿瘤发生过程，可能在砷致膀胱癌过程中发挥作用。

关键词：膀胱癌亚砷酸钠钙离子活化T细胞核因子核蛋白

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皮肤原位诱导再生材料:从结构修复到功能重建

皮肤原位诱导再生材料:从结构修复到功能重建

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：马列李秀媛李乾李陆艳高长有浙江大学高分子科学与工程学系杭州310027

由于烧伤、机械创伤和慢性疾病(如糖尿病)等导致的皮肤缺损一直是影响人类生命和生存质量的重大医学问题之一。组织工程与再生医学的不断发展使皮肤的结构修复成为可能。然而，现有的技术手段，往往只能实现表皮层和真皮层的简单结构修... 详细信息

由于烧伤、机械创伤和慢性疾病(如糖尿病)等导致的皮肤缺损一直是影响人类生命和生存质量的重大医学问题之一。组织工程与再生医学的不断发展使皮肤的结构修复成为可能。然而，现有的技术手段，往往只能实现表皮层和真皮层的简单结构修复，难以实现皮肤功能重建与再生，依然存在如瘢痕化和附属器官缺失等问题。因此，如何实现缺损皮肤从结构修复到功能重建与再生的飞跃，是皮肤再生材料研究的重点和难点。组织、器官的再生修复涉及一系列复杂生物信号的调控，因此赋予生物材料的更高的生物活性是实现缺损组织再生修复的关键。针对皮肤再生和功能重建难题，采用基因活性技术与原位诱导再生材料相结合的思路，通过赋予皮肤再生材料原位激活或沉默组织再生修复关键信号的性能，有效调控皮肤再生过程特定细胞的生长、迁移及分化等行为，构建具有重建皮肤高级功能的新型基因活性皮肤诱导再生材料，实现了具有复杂组成和结构组织或器官的高层次修复与再生。

关键词：皮肤功能再生瘢痕附属器官诱导再生材料

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USP18在丙肝病毒耐受Ⅰ型和Ⅲ型干扰素中的作用及分子机制:目标蛋白鉴定及功能研究

USP18在丙肝病毒耐受Ⅰ型和Ⅲ型干扰素中的作用及分子机制:目标蛋...

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：焦佰海李世林陈利民中国医学科学院北京协和医学院输血研究所输血传染病研究中心四川省输血传播疾病重点实验室四川成都 610052 中国医学科学院北京协和医学院输血研究所输血传染病研究中心四川省输血传播疾病重点实验室四川成都 610052 加拿大多伦多大学

研究背景:丙型肝炎是由丙肝病毒(HCV)感染引起的一种严重肝脏疾病.目前缺乏治疗前疗效预测方法,且对丙肝病毒耐受干扰素的分子机理不清楚.我们前期研究在筛选出18个肝脏差异表达基因用于疗效预测(准确率96％)的基础上,发现内源性干扰素...

研究背景:丙型肝炎是由丙肝病毒(HCV)感染引起的一种严重肝脏疾病.目前缺乏治疗前疗效预测方法,且对丙肝病毒耐受干扰素的分子机理不清楚.我们前期研究在筛选出18个肝脏差异表达基因用于疗效预测(准确率96％)的基础上,发现内源性干扰素信号传导通路的激活导致干扰素刺激基因(ISG)在肝组织不同细胞内表达,特别是ISG15/USP18类泛素化通路的激活与HCV耐受干扰素及持续感染有关.

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嗅觉受体在坐骨神经和背根节神经元中的表达与鉴定

嗅觉受体在坐骨神经和背根节神经元中的表达与鉴定

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：龚蕾蕾陈倩倩王鸿奎李石营顾晓松南通大学神经再生重点实验室南通226001

主要定位于嗅觉上皮神经元的嗅觉受体参与辨别多样化的气味分子，然而，在一些非嗅觉组织中也逐渐发现有嗅觉受体的表达，而这些嗅觉受体的功能大多都不清楚。在本研究中，确认了嗅觉受体在坐骨神经和背根神经节中的表达，而且坐骨神经... 详细信息

主要定位于嗅觉上皮神经元的嗅觉受体参与辨别多样化的气味分子，然而，在一些非嗅觉组织中也逐渐发现有嗅觉受体的表达，而这些嗅觉受体的功能大多都不清楚。在本研究中，确认了嗅觉受体在坐骨神经和背根神经节中的表达，而且坐骨神经损伤后，其中大量的嗅觉受体的表达发生改变，这提示嗅觉受体在坐骨神经损伤和再生修复中具有重要作用;我们进一步用原位杂交确认了嗅觉受体在坐骨神经中的表达，用qPCR验证了坐骨神经损伤后嗅觉受体在其中的表达变化;最后，我们发现施万细胞受到H2O2刺激后，嗅觉受体的表达上调，因此我们推测嗅觉受体的功能应该是参与刺激信号的检测。本研究首次报道和确认了嗅觉受体在坐骨神经和背根神经节中的表达，并推测嗅觉受体可能通过参与坐骨神经损伤后刺激信号的检测从而调控神经再生。

关键词：嗅觉受体坐骨神经施万细胞背根节神经元

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牛膝有效部位在肿瘤微环境下促进DC成熟及功能调控的研究

牛膝有效部位在肿瘤微环境下促进DC成熟及功能调控的研究

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第十一届全国中西医结合基础理论学术研讨会

作者：陈文娜王俊岩贾连群丛培玮孙宏伟辽宁中医药大学

目的:观察牛膝有效部位在肿瘤微环境下对DC成熟的促进及功能调控作用。方法:干燥牛膝粉末提取并鉴定牛膝总皂苷和牛膝多糖;建立模拟肿瘤微环境的MCF-7乳腺癌细胞与DC共培养体系,并分别给予牛膝多糖、牛膝总皂苷及牛膝多糖和总皂苷协同刺... 详细信息

目的:观察牛膝有效部位在肿瘤微环境下对DC成熟的促进及功能调控作用。方法:干燥牛膝粉末提取并鉴定牛膝总皂苷和牛膝多糖;建立模拟肿瘤微环境的MCF-7乳腺癌细胞与DC共培养体系,并分别给予牛膝多糖、牛膝总皂苷及牛膝多糖和总皂苷协同刺激;流式细胞仪检测DC表面分子的表达及DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,ELISA法检测培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-10和IL-12的水平,Western blot检测JAK/STAT3信号通路中p-JAK、JAK、p-STAT3、STAT3的蛋白表达。结果:在肿瘤微环境下,牛膝有效部位牛膝总皂苷和牛膝多糖均可以通过TLR4及Dectin-1受体途径,启动DC细胞JAK/STAT3信号通路,上调DC细胞表面分子CD80、CD86及CD40的表达,从而诱导DC的成熟与分化,促进TNF-α、IL-12、IL-10及IL-1β等细胞因子的分泌,两者协同较单独应用作用加强。结论:以适当形式的中药有效部位作为免疫增强剂联合DC疫苗,可有效纠正肿瘤微环境下的免疫缺陷,有效激活肿瘤特异性CTL细胞,从而产生特异性抗肿瘤效应。

关键词：牛膝树突状细胞肿瘤微环境

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多糖降解产物通过miR-27a/FOXO1调节施万细胞增殖促进神经再生

多糖降解产物通过miR-27a/FOXO1调节施万细胞增殖促进神经再生

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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会

作者：赵亚红王亚玲龚佳欢杨宇民江苏省神经再生重点实验室南通大学南通226007

天然多糖是组织工程中应用最为广泛的生物材料之一.这些降解产物在体内的功效与其他副本类似,通常比较显著,决定着生物材料支架的临床效能.为了完全阐明多糖降解产物的生理功能,我们以壳聚糖的降解中间体一壳寡糖为研究对象,研究其对损... 详细信息

天然多糖是组织工程中应用最为广泛的生物材料之一.这些降解产物在体内的功效与其他副本类似,通常比较显著,决定着生物材料支架的临床效能.为了完全阐明多糖降解产物的生理功能,我们以壳聚糖的降解中间体一壳寡糖为研究对象,研究其对损伤的周围神经的效应.壳寡糖促进施旺细胞增殖达到促进神经再生.壳寡糖对施旺细胞效应的相关信号机制其后通过转录组测序和基因调控网络进行推断.壳寡糖处理后,引起一系列增殖相关的miRNAs和mRNAs的变化,其中miR-27a/FOXO1是施旺细胞增殖调控的主导线索.miR-27a下调会减弱壳寡糖的促增殖效应,这个效应可以通过FOXO1siRNA的敲除得到拯救.施旺细胞转染miR-27a抑制剂后细胞周期阻滞在S/G2期,由周期蛋白A和B调控;FOXO1siRNA的敲除可以拯救细胞使细胞重新进入到G2期,这个结果提示壳寡糖促进施旺细胞增殖是通过miR-27a/FOXO1调节细胞周期的进行.结果证实多糖降解产物在体内的促进效应和潜在的分子机制,为多糖类生物材料的应用和研究提供了有效指导.

关键词：生物材料多糖降解产物微小RNA-27a FOXO1蛋白细胞增殖神经再生

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