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主题

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5 篇 基因克隆
5 篇 克隆
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5 篇 微生物
5 篇 微生物群落
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5 篇 序列分析
5 篇 生长

机构

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16 篇 华南农业大学
15 篇 广西大学
13 篇 华中农业大学
10 篇 南京农业大学
10 篇 贵州大学
9 篇 郑州大学
9 篇 山东农业大学
8 篇 中国地质大学
8 篇 吉林大学
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7 篇 中国科学院成都生...
7 篇 北京师范大学
6 篇 安徽农业大学
6 篇 湖南农业大学
6 篇 农业微生物学国家...
6 篇 中国农业大学
6 篇 厦门大学
6 篇 南开大学
6 篇 中国科学技术大学

作者

13 篇 陈国南
10 篇 袁倬斌
9 篇 丁延芹
9 篇 杜秉海
8 篇 赵德刚
8 篇 刘波
8 篇 姚良同
8 篇 庄惠生
7 篇 谢孟峡
7 篇 王琼娥
7 篇 张洪斌
6 篇 吴新杰
6 篇 张书胜
6 篇 刘红霞
6 篇 李俊
6 篇 沈德龙
5 篇 付艳苹
5 篇 张桂敏
5 篇 胡雪芹
5 篇 姜昕

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568 篇 中文

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四川根瘤菌多样性、系统发育及初步应用研究

四川根瘤菌多样性、系统发育及初步应用研究

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第六届全国农业微生物研究及产业化研讨会、第十五届全国杀虫微生物学术研讨会、第十一届全国虫生真菌学术研讨会

作者：徐开未邹兰熊峰陈远学周涛李娜兰琴张小平陈强四川农业大学资源学院四川成都611130

大豆和蚕豆是中国、也是四川种植面积和产量最大的两大食用豆类作物。我国是大豆起源国,蚕豆也有4000-5000 年的种植史。这两豆类作物在四川广泛分布,地方品种多,同时四川大豆和蚕豆种植的地形地貌、土壤类型多样,蕴育着丰富的大豆和蚕... 详细信息

大豆和蚕豆是中国、也是四川种植面积和产量最大的两大食用豆类作物。我国是大豆起源国,蚕豆也有4000-5000 年的种植史。这两豆类作物在四川广泛分布,地方品种多,同时四川大豆和蚕豆种植的地形地貌、土壤类型多样,蕴育着丰富的大豆和蚕豆根瘤菌资源。而四川大豆和蚕豆根瘤菌未进行全面系统的调查研究,为揭示其遗传多样性、特异性以及系统发育地位,从四川广元、达州、凉山州等地47 个县(区)大豆根瘤中分离获得178 株大豆根瘤菌,39 个县(区)的大豆根瘤中分离得到150 株蚕豆根瘤菌,采用16S rDNA PCR-RFLP、IGS rDNA PCR-RFLP、ERIC-PCR 及代表菌株的16S rDNA、recA、atpD、glnII、nodC 和nifH 序列分析方法,对它们进行了遗传多样性及系统发育研究。

关键词：根瘤菌系统发育基因水平转移多位点基因序列分析共生匹配性

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Bacillus aryabhattaiβ-淀粉酶的重组表达及酶学性质分析

Bacillus aryabhattaiβ-淀粉酶的重组表达及酶学性质分析

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第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：段绪果周素雅王耀松苏二正黄梅桂南京林业大学轻工与食品学院食品科学与工程系

β-淀粉酶（EC 3.2.1.2）又称淀粉1,4-麦芽糖苷酶,属于糖苷水解酶14家族,是一种外切型糖化酶。β-淀粉酶主要存在于高等植物和细菌中,它能从淀粉或糖原的非还原性末端顺次切下两个葡萄糖组成的单元,生成麦芽糖。植物是β-淀粉酶的最主... 详细信息

β-淀粉酶（EC 3.2.1.2）又称淀粉1,4-麦芽糖苷酶,属于糖苷水解酶14家族,是一种外切型糖化酶。β-淀粉酶主要存在于高等植物和细菌中,它能从淀粉或糖原的非还原性末端顺次切下两个葡萄糖组成的单元,生成麦芽糖。植物是β-淀粉酶的最主要来源,对广泛存在于谷物、豆类种子及番薯块根中,其不但在禾谷类作物生长发育过程中起着重要作用,还与薯类块茎中淀粉含量、种子萌发以及逆境耐受性密切相关。其中,大麦是商品化β-淀粉酶的主要来源之一。但是,植物提取β-淀粉酶仍然存在需要消耗大量粮食;批次稳定性差、产品中容易混杂有其它淀粉酶等缺点,制约了植物β-淀粉酶应用范围的进一步拓展。微生物是β-淀粉酶的另一个主要来源。国内外科技工作者一直致力于筛选产β-淀粉酶的微生物,早期筛选到的产β-淀粉酶的菌种有巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、多粘芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）、环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）等。近年来,一些新的产β-淀粉酶菌株被分离出来,包括:嗜盐芽孢杆菌LY9（Halobacillus ***9）、嗜盐盐渍微菌（Salimicrobiumhalophilum）、***和***等。这些新产酶菌株的筛选为新型β-淀粉酶的开发提供了更加丰富的微生物种质和基因资源。本研究从土壤中筛选到几株对淀粉有较高降解能力的菌株,通过摇瓶发酵复筛,筛选出一株淀粉水解活性最高的菌株NJFU-FJ-1739。通过形态观察、16S rDNA序列比对分析,该菌被初步鉴定为阿氏芽孢杆菌Bacillusaryabhattai。对菌株进行了发酵培养,并对所产淀粉水解酶进行了分离纯化,其中一个组分对淀粉具有较高的水解能力,通过蛋白指纹图谱分析和淀粉水解产物分析,发现该酶可能是一种β-淀粉酶。抽提该菌基因组DNA为模板,参考NCBI数据库中阿氏芽孢杆菌基因组序列,设计PCR扩增引物,扩增得到一段1.5kb左右大小的DNA片段。将该基因片段连接到枯草芽孢杆菌表达载体pBE-S中,并转化枯草芽孢杆菌表达宿主RIK1285,得到重组菌。重组菌发酵后,对重组酶进行了分离纯化及酶学性质分析。结果显示,重组β-淀粉酶的最适温度为50C,最适pH为7.0。在50C、pH7.0半衰期为3小时。1mmol/L的EDTA对重组酶处理后,残余酶活力为83.9%,5mmol/L的EDTA对重组酶处理后,残余的酶活力为81.8%。Mn、Fe~(2+Ca对重组酶酶活有一定的促进作用。

关键词： β-淀粉酶克隆表达最适温度最适pH

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春尺蠖作为资源昆虫开发价值分析

春尺蠖作为资源昆虫开发价值分析

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：庞竟公尚北晨王鹏军肖海兵熊仁次杨明禄塔里木大学植物科学学院新疆阿拉尔843300

春尺蠖是林业上的重要害虫之一,可取食胡杨、杨树、苹果、梨树、沙枣等多种寄主叶片组织,幼虫发生期集中、生物量巨大,是一种潜在的可利用资源昆虫.以春尺蠖幼虫、蛹和成虫为研究对象，利用热干燥法、索氏抽提法考、马斯亮蓝法和蒽酮比... 详细信息

春尺蠖是林业上的重要害虫之一,可取食胡杨、杨树、苹果、梨树、沙枣等多种寄主叶片组织,幼虫发生期集中、生物量巨大,是一种潜在的可利用资源昆虫.以春尺蠖幼虫、蛹和成虫为研究对象，利用热干燥法、索氏抽提法考、马斯亮蓝法和蒽酮比色法，分别测定其水分、干虫脂肪、鲜虫蛋白质和总糖含量，对比了各成分在春尺蠖幼虫、蛹和成虫的含量。

关键词：森林病虫害生物防治春尺蠖取食行为

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竹荪研究现状及应用进展探讨

竹荪研究现状及应用进展探讨

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第十一届中国化妆品学术研讨会

作者：刘沙沙孟宏刘月恒北京工商大学中国化妆品协同创新研究中心

竹荪营养丰富,具有多种生物活性,如抗肿瘤、抗菌等,对其研究现状进行总结,以期为其综合开发利用提供理论基础。通过对现有有关竹荪公开文献及专利的搜索,对竹荪的活性成分及其提取工艺、生物活性及应用现状等方面进行检索和分析。结果发... 详细信息

竹荪营养丰富,具有多种生物活性,如抗肿瘤、抗菌等,对其研究现状进行总结,以期为其综合开发利用提供理论基础。通过对现有有关竹荪公开文献及专利的搜索,对竹荪的活性成分及其提取工艺、生物活性及应用现状等方面进行检索和分析。结果发现,竹荪在食品、药品方面应用广泛,在化妆品领域也具有相当高的开发价值。竹荪在化妆品领域的应用及其深加工技术还有更多的研究空间。

关键词：竹荪生物活性应用

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靶向CyclinD1-CDK4激酶复合物的肝癌治疗研究

靶向CyclinD1-CDK4激酶复合物的肝癌治疗研究

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第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：薛莹苗海鹏夏思敏武艳赵佳亮张影赵良中杨方李桂英吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室

肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是在世界范围内最普遍,致死率位居第二的恶性肿瘤,严重危害人类的健康,目前尚缺乏有效的治疗手段。我国是肝癌的高发区,而且肝癌的发病率也在逐年递增,因此寻求有效肝癌防治策略的研究具有重要的... 详细信息

肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是在世界范围内最普遍,致死率位居第二的恶性肿瘤,严重危害人类的健康,目前尚缺乏有效的治疗手段。我国是肝癌的高发区,而且肝癌的发病率也在逐年递增,因此寻求有效肝癌防治策略的研究具有重要的科学价值和社会意义。细胞周期失控是造成肿瘤细胞恶性增殖的主要原因之一。CDK4作为细胞进入增殖周期第一个被激活的的周期蛋白依赖性蛋白激酶,通过与其调节亚基Cyclin D1结合形成有活性的Cyclin D1-CDK4激酶复合物,促进细胞G0→S期的转换,是细胞周期进程中G1/S期转换的限速因子。Cyclin D1-CDK4激酶的过度活化与包括肝癌在内的多种肿瘤的发生、发展、预后密切相关,是肿瘤治疗的重要潜在靶点。胞内抗体技术是一项实现细胞内重要靶蛋白表型敲除的技术。本研究在制备靶向Cyclin D1-CDK4激酶复合物胞内抗体的基础上,进一步探究其对肝癌细胞生长增殖的抑制作用。本研究以催化亚基CDK4为靶点获得靶向Cyclin D1-CDK4激酶复合物人源胞内抗体,进而利用细胞转染实验、裸鼠荷瘤实验等在体内外探讨胞内抗体对肝癌的生长和转移的影响。结果发现该胞内抗体在HepG2,SMMC-7721肝癌细胞中有效表达,且能够与细胞内CDK4蛋白结合。MTT细胞增殖特性、流式细胞术分析结果表明,与对照组细胞相比,胞内抗体的表达可明显抑制HepG2,SMMC-7721细胞的生长、增殖能力,引起细胞周期G1期阻滞,显著诱导细胞凋亡(P<0.01)。划痕实验显示,表达胞内抗体的HepG2,SMMC-7721肝癌细胞"伤口"的闭合率显著下降(P<0.01)。这说明抗CDK4胞内抗体的表达明显抑制HepG2,SMMC-7721肝癌细胞的生长、迁移能力。裸鼠荷瘤治疗实验结果表明,胞内抗体治疗后显著抑制裸鼠异体移植瘤体的生长。上述实验结果表明靶向Cyclin D1-CDK4胞内抗体显著抑制肝癌的生长和转移,具有较好的抑瘤效应,为肝癌的治疗提供了新的思路和实验依据。

关键词： CDK CyclinD1-CDK4 肝癌细胞酶复合物肝癌治疗

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高分子右旋糖酐的改性及生物多糖絮凝剂的合成

高分子右旋糖酐的改性及生物多糖絮凝剂的合成

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第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：曾涛张洪斌合肥工业大学生物与医学工程学院制药系

右旋糖酐作为一类在医学和工业领域有重要作用的中性多糖,可合成高效、环保的新型生物多糖絮凝剂,具有十分广阔的应用前景。该生物多糖絮凝剂的絮凝性能与右旋糖酐分子量及其改性作用有关。本研究在高分子右旋糖酐生产工艺优化的基础之... 详细信息

右旋糖酐作为一类在医学和工业领域有重要作用的中性多糖,可合成高效、环保的新型生物多糖絮凝剂,具有十分广阔的应用前景。该生物多糖絮凝剂的絮凝性能与右旋糖酐分子量及其改性作用有关。本研究在高分子右旋糖酐生产工艺优化的基础之上进行一定的改性反应,从而获得具有良好絮凝性能的生物多糖絮凝剂,具体研究结果如下:1、首先从改变底物浓度、酶用量和投料方式出发,对右旋糖酐蔗糖酶以蔗糖为底物催化合成高分子右旋糖酐的工艺进行了研究。实验结果表明,当蔗糖底物浓度为1000mM,右旋糖酐蔗糖酶投加量为0.8U/mL时,在25℃条件下发酵24小时可获得分子量为1132万的右旋糖酐;采用浓度由高到低的均衡间歇补料方式可以使合成的右旋糖酐分子量更高。研究发现酶催化反应副产物果糖的积累会抑制右旋糖酐链的增长,反应后期体系粘度的增高会阻碍右旋糖酐链的延长。2、其次对高分子右旋糖酐与丙烯酰胺(AM)的接枝共聚反应进行研究,获取具有良好絮凝性能的右旋糖酐衍生物,并分析了接枝产物的絮凝机制。实验结果表明,当引发剂浓度为2mmol/L,m(AM):m(右旋糖酐)为2.0:1,反应时间为3.5小时,反应温度为35℃时,接枝反应单体转化率达到95.4%。模拟水样絮凝实验结果表明,pH为6.0时,投入0.5mg/L接枝产物处理赤铁矿悬浊液时去浊度为94%,投入4.15mg/L接枝产物处理高岭土悬浊液时去浊度为91.2%。絮凝剂在絮凝过程中起主要作用的是电中和和吸附架桥,同时伴随网捕、卷扫等多种作用发生,协同絮凝。3、最后对高分子右旋糖酐酯化和氧化的改性反应进行了初探,对产物进行了结构、性质分析并检测其絮凝性能。实验结果表明,酯化过程破坏了右旋糖酐分子的无定形区并对糖酐的结晶区也产生影响,酯化过程反应速率慢,取代程度不高,氧化过程为自由基链式反应,氧化程度适当时具有良好的絮凝性能。高岭土实验结果表明,酯化产物投加量为15mg/L时,去浊度可达91.7%,氧化产物投加量为16mg/L时,去浊度可达93.4%。高分子右旋糖酐的改性产物在水溶液中呈无规则线型分布,具有可伸展性和柔顺性,含有多个吸附位点,对水体系中的胶体颗粒有较好的凝集成团能力,从而促进杂质的沉降。综上所述,本研究为高分子量右旋糖酐催化合成及工业化生产提供了一定的理论依据,为高分子量右旋糖酐衍生物的合成与新型多糖絮凝剂的制备和应用打下了坚实的基础,具有较为广泛的应用价值。

关键词：右旋糖酐蔗糖酶高分子右旋糖酐改性絮凝性能多糖絮凝剂

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糖苷合成酶的设计改造与催化体系的优化

糖苷合成酶的设计改造与催化体系的优化

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第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：李卓马富强杨广宇上海交通大学生命科学技术学院

鞘糖脂是一大类由神经酰胺与寡糖链以糖苷键结合形成的双亲分子(Angewandte Chemie Intemational Edition,1999,38(11):1532-1568),作为人体内一大类生物活性物质参与多种生理与病理过程,如信号传导、免疫、癌症发生、胰岛素抗性等(Chem... 详细信息

鞘糖脂是一大类由神经酰胺与寡糖链以糖苷键结合形成的双亲分子(Angewandte Chemie Intemational Edition,1999,38(11):1532-1568),作为人体内一大类生物活性物质参与多种生理与病理过程,如信号传导、免疫、癌症发生、胰岛素抗性等(Chemical reviews,2011,111(10):6387;Journal ofBiological Chemiary,2001,276(45):41527-41542;Glycoconjugate joumal,1996,13(2):123-126)。人们发现某些鞘糖脂类可以作为疾病潜在的诊断标记、治疗靶标、药物,因此对鞘糖脂的合成就显得尤为重要。当前,鞘糖脂主要通过天然提取的方法获得,然而天然提取方法受成本高、来源有限,并且有受人畜共患病污染的潜在危险的限制,已经无法满足需求。利用化学方法合成鞘糖脂也有较多报道(Carbohydrate Research,2007,342(12):1595-1612;Chemical Society Reviews,2000,29(3):201-216),然而由于鞘糖脂结构中具有多个手性碳原子,在合成的过程中需要反复的保护、去保护步骤,导致此类方法步骤繁杂,耗费大量人力,成本较高,而且产率通常较低,此外化学合成过程中需要大量的有机溶剂,污染环境,这些因素限制了化学法合成在鞘糖脂大规模生产中的实际应用。因此应用现代生物学技术发现和建立新的、经济有效的鞘糖脂合成途径势在必行。糖苷合成酶是糖苷水解酶的亲核残基突变体,将糖苷水解酶的亲核攻击基团定点突变为不具备亲核功能的氨基酸,可以破坏水解反应的第一步,从而废除天然酶的水解活性;与此同时,利用具有自我夺电子能力的α-D-氟化糖作为糖基供体,则可以在酶的活性中心实现转糖苷反应,从而使糖苷水解酶变成糖苷合成酶,有效催化糖苷键的合成(Journal ofAmerican Chemical Society,1998,120(22):5583-5584)。然而,进化后的EGCase II糖苷合成酶活性仍较低、底物谱较窄,限制了该酶的应用范围。因此,利用蛋白质工程策略构建更高效的EGCaseⅡ突变体,大幅度提高其催化活性,将有利于构建更高效的糖苷合成酶,为酶法合成鞘糖脂类药物提供性质更优良的酶源。本文以103S EGCaseI晶体结构为基础,通过103S EGCaseI与EGCase II晶体结构的对比,找到EGCaseII关键的催化区域,通过理性设计的方式获得活力提高的突变体,从而提高了EGCaseII的催化活性。同时以此活性提高的突变体为出发点,建立了以α-D-氟化糖、D-sphingosine为底物的合成体系,同时建立了基于荧光的HPLC产物分析方法,对合成体系中的温度、pH、酶浓度、反应时间等因素进行优化,从而使其转化率达到95%。

关键词：糖苷合成酶糖苷水解酶突变体鞘糖脂天然提取晶体结构催化体系

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通过截断和受体位点定点改造研究右旋糖酐蔗糖酶对小分子非碳水化合物的转糖基作用

通过截断和受体位点定点改造研究右旋糖酐蔗糖酶对小分子非碳水化...

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第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：李瑶张洪斌胡雪芹杨静文合肥工业大学生物与医学工程学院

本实验室通过克隆拷贝肠膜状明串珠菌Leuconostoc mesenteroides 0326的右旋糖酐蔗糖酶dextransucrase(EC 2.4.1.5)的基因dex-YG,构建右旋糖酐蔗糖酶大肠杆菌表达体系的工程菌。右旋糖酐蔗糖酶以蔗糖为底物通过水解转移葡萄糖基合成高... 详细信息

本实验室通过克隆拷贝肠膜状明串珠菌Leuconostoc mesenteroides 0326的右旋糖酐蔗糖酶dextransucrase(EC 2.4.1.5)的基因dex-YG,构建右旋糖酐蔗糖酶大肠杆菌表达体系的工程菌。右旋糖酐蔗糖酶以蔗糖为底物通过水解转移葡萄糖基合成高分子葡聚糖。本文通过对右旋糖酐蔗糖酶基因dex-YG进行截短,受体结合相关位点的突变改造,对右旋糖酐蔗糖酶结构功能进行探究同时扩大其应用领域。以右旋糖酐蔗糖酶基因序列dex-YG为基础,通过生物信息的学比对分析,对其二级结构以及三级结构进行预测分析,对其C端序列进行一系列的截短,分析其结构功能的关系。通过片段截短的方法对其糖链延伸的控制,寡聚糖合成区域,以及完全保守区域进行了研究分析。对其末端重复序列删除,会极大的影响其合成葡聚糖的能力,截短片段长度增加,其合成高分子葡聚糖的能力急剧下降,在一定长度的截短后,其右旋糖酐的合成能力完全丧失。反应极大的偏向受体反应,从而起寡聚糖的合成能力显著提升,随着更进一步的片段截短直至其保守序列motif I,其受体反应的催化性能也极具下降,其酶活力几乎完全丧失。其中通过截短C-端1494 bp片段,得到剩余1-3087 bp基因片段的DSR-S1-△A突变酶。对其进行酶学性质研究表明,DSR-S1-△A酶在没有受体情况下,酶活完全丧失,受体存在时,DSR-S1-△A酶活是原始酶酶活的71.4%,其中糖基转移活性是水解活性的5.3倍,其主要活性为转糖基功能,多糖聚合能力低。通过用麦芽糖、纤维二糖、棉子糖和水苏糖等不同糖类和多个非糖类小分子为转糖基受体的转糖基研究表明:麦芽糖是该酶转糖基反应的最佳受体,同时对纤维二糖、棉子三糖和水苏糖都有活性,但转糖基依次减弱;不同天然低聚糖的转糖基反应都趋向于生成低分子量的糖,转移1-2个葡萄糖基到受体分子,并且受体分子量越小越易进行转糖基作用非碳水化合物小分子为受体底物;可利用Vc为转糖基受体进行转糖基反应,得到Vc葡萄糖衍生物,正在进行对其产物的进一步研究。此外本实验在之前对右旋糖酐蔗糖酶基因序列dex-YG二级三级预测分析的基础上,结合相关家族酶的目前的研究基础,在预测的受体结合位点进行突变改造,进一步探究此酶结构与转糖基功能间关系,以期得到对更多的非碳水化合物药用分子有转糖基作用的工程菌,从而制备药用分子的糖苷衍生物,改变其原来天然化合物的理化性质,提高生物利用度。目前已初步完成了突变体的构建和部分工程菌的筛选。综上,本研究明确了右旋糖酐蔗糖酶转糖基功能的分子区域,有助于进一步认识右旋糖酐蔗糖酶的催化机制;同时对于非碳水化合物药用分子的糖基化研究具有重要意义。

关键词：右旋糖酐蔗糖酶截短定点突变转糖基非碳水化合物

来源：评论

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基于转录组测序数据分析香猪基因组可变剪接事件

基于转录组测序数据分析香猪基因组可变剪接事件

引用

第十一届西南三省一市生物化学与分子生物学学术研讨会

作者：唐靓婷冉雪琴王嘉福

可变剪接(alternative splicing)是基因最常见的转录调控方式之一,是真核生物控制基因表达,使转录组和蛋白质组产生多样性的重要机制.本文采用Illumina Hiseq2000测序平台对高产和低产香猪共八个样本进行转录组测序,与Sus Scrofa10.2猪... 详细信息

可变剪接(alternative splicing)是基因最常见的转录调控方式之一,是真核生物控制基因表达,使转录组和蛋白质组产生多样性的重要机制.本文采用Illumina Hiseq2000测序平台对高产和低产香猪共八个样本进行转录组测序,与Sus Scrofa10.2猪参考基因组进行比对.利用ASprofile从香猪基因组中共鉴定48755个可变剪接事件,影响19748个基因,占猪总基因数的78％.

关键词：香猪基因组可变剪接事件转录组测序

来源：评论

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铜绿假单胞菌碱性纤维素酶对蔗渣纤维素降解作用的研究

铜绿假单胞菌碱性纤维素酶对蔗渣纤维素降解作用的研究

引用

第十一届中国酶工程学术研讨会

作者：芦志龙陆琦陈英吴仁智黄俊陈小玲陈东黄日波广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西大学生命科学与技术学院广西科学院国家非粮生物质能源研究工程中心

碱性纤维素酶(β-1,4-葡聚糖苷酶)通常仅存在于细菌中。为从产碱性纤维素酶的铜绿假单胞菌PKC中分离其碱性纤维素酶基因,采用常见纤维素酶催化结构域保守序列,使用本地化的BLAST2.0对其全基因组序列进行PBLASTN查询,得到与Cellulase M... 详细信息

碱性纤维素酶(β-1,4-葡聚糖苷酶)通常仅存在于细菌中。为从产碱性纤维素酶的铜绿假单胞菌PKC中分离其碱性纤维素酶基因,采用常见纤维素酶催化结构域保守序列,使用本地化的BLAST2.0对其全基因组序列进行PBLASTN查询,得到与Cellulase M结构域氨基酸序列相似度达到70%的序列,并以此设计引物扩增得到碱性纤维素酶基因(图1-A,B)。序列分析发现这是一个编码序列为1077bp、具有典型的信号肽的碱性纤维素酶基因(图2)。将此基因连入pET22b表达载体,转化大肠杆菌BL21并用0.01M IPTG诱导表达(图1-C,D)。粗酶活力最高可达11.2U/mL粗酶液(pH=8.5)(图1-E)。通过对2%的稀碱高压120℃蒸煮2h处理的蔗渣样品开展碱性纤维素酶单一酶糖化实验,发现糖化后固相比重由52.0%降低到26.5%。液相中游离态纤维素占全部纤维素38.2%,游离态半纤维素占全部半纤维素84.0%。测得还原糖转化率为29.02%,戊糖率转化几乎不可检。残渣中半纤维素含量由18.9%减少到13.5%,而纤维素和木质素含量分别提高11.53%和1.9%。残渣吸附的还原糖和戊糖分别上升1.5%和0.14%(表1)。通过对残渣进行采用BT-2001型激光粒度分布仪(湿法)进行测定,发现酶切组中位粒径63.04μm,比对照组和前处理组分别降低了60.89μm和12.95μm,体积平均径74.83μm,比对照组和前处理组分别降低了79.77μm和10.95μm,呈现出明显的降解作用(图2)。可见,铜绿假单胞菌碱性纤维素酶的作用主要在于纤维素晶体结构破坏,促使非晶体态纤维素释放到溶剂中,同时随着纤维素-半纤维素-木质素交联结构的疏松,半纤维素和木质素随之释放,其中半纤维素的降解程度最为剧烈。液相中被释放的纤维素和半纤维素只有少量被降解为单糖,可见其主要作用于晶体态纤维素,而非游离纤维素。综上,碱性纤维素酶有助于提高碱性环境下蔗渣纤维的糖化水平。

关键词：木质素碱性纤维素酶纤维素降解铜绿假单胞菌

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