目的扩增蛇蛔虫(Ophidascaris sp.)的核糖体大亚基(28S r DNA)、小亚基(18S r DNA)并进行序列分析,探索蛇蛔虫的种系发育关系。方法对采自我国安徽省合肥市大王蛇的蛇蛔虫(Ophidascaris sp.)进行研究,用保守引物扩增蛇蛔虫的28S r DNA、...
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目的扩增蛇蛔虫(Ophidascaris sp.)的核糖体大亚基(28S r DNA)、小亚基(18S r DNA)并进行序列分析,探索蛇蛔虫的种系发育关系。方法对采自我国安徽省合肥市大王蛇的蛇蛔虫(Ophidascaris sp.)进行研究,用保守引物扩增蛇蛔虫的28S r DNA、18S r DNA基因,将扩增出的目的片段纯化后与PMD18-T连接,通过菌液PCR鉴定重组质粒后,送阳性克隆菌进行DNA测序;对测序结果进行BLAST,对所得序列与Gen Bank上其他蛔科线虫的序列进行同源性分析;以犬钩口线虫(Ancylostoma caninum)为外群,采用贝叶斯法(BI)绘制Ophidascaris sp.及其他蛔虫的28S r DNA、18S r DNA系统进化树。结果 28S1F/R引物扩增出大小为787 bp的28S基因片段;18S2F/R引物扩增出1842 bp的18S基因片段。Blast分析显示,扩增出的28S基因片段与狮弓蛔虫(Toxascaris leonina)的同源性最高(89%);1842 bp的18S基因片段与猫弓首蛔虫(Toxocara cati)的同源性最高(99%)。基于28S r RNA的系统发育树将Ophidascaris sp.与狮弓蛔虫和人蛔虫聚集;基于18S r RNA的系统发育树显示Ophidascaris sp.与猫弓首蛔虫距离较近,位于同一分支。结论本研究首次报道了Ophidascaris sp.的18S r DNA及28S r DNA部分序列。序列比对及进化分析结果表明,28S r DNA、18S r DNA序列因种间差异太小,不适合作为蛔科线虫的分子标记,只适合作为更高阶元系统发育研究的分子标记。
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