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彗星实验(SCGE)检测洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼细胞DNA损伤的研究

彗星实验(SCGE)检测洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼细胞DNA损伤的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：梁雯霏孙永学华南农业大学兽医学院国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大)

(目的)本文以土壤蚯蚓和池塘鲫鱼为指示生物,探讨了洛克沙胂暴露胁迫对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝脏细胞DNA损伤的影响情况,为洛克沙胂环境暴露的生态毒性效应评价与风险评估提供依据。（方法）1.以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为土壤指示生... 详细信息

(目的)本文以土壤蚯蚓和池塘鲫鱼为指示生物,探讨了洛克沙胂暴露胁迫对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝脏细胞DNA损伤的影响情况,为洛克沙胂环境暴露的生态毒性效应评价与风险评估提供依据。（方法）1.以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为土壤指示生物,在室内土壤模拟环境中设洛克沙胂浓度组20mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg（以As计）和空白组;2.以鲫鱼为水体环境指示生物,设洛克沙胂50μg/L、150μg/L、300μg/L、500μg/L（以As计）浓度组和空白组,每组为15尾鲫鱼,蚯蚓和鲫鱼均分别于暴露第7、14、21 d采样,采用单细胞凝胶电泳技术（彗星实验）进行了洛克沙胂对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝细胞DNA损伤的遗传毒性试验,应用CASP软件分析彗星尾部DNA百分含量、彗星尾部长度和Olive尾距等指标,导入统计分析软件SPSS17.0进行分析,对洛克沙胂与DNA损伤之间的时间与剂量依赖关系进行了探讨。（结果）结果表明:1.蚯蚓连续7 d、14 d和21 d暴露于20mg/kg00 mg/kg洛克沙胂中均能引起蚯蚓体腔细胞出现明显的DNA损伤,与空白对照组比较呈显著性差异（P<0.05）,在暴露第21d后,在20 mg/kg00 mg/kg浓度范围内出现明显的剂量-效应关系,并且随着暴露时间的延长,100mg/kg和200 mg/kg浓度的洛克沙胂对蚯蚓体腔细胞的损伤表现加重的趋势,呈现一定的时间-效应关系;2.在50μg/L00μg/L暴露浓度中,洛克沙胂对鲫鱼肝细胞DNA可造成明显的损伤,与空白对照组相比呈极显著差异（P<0.01）,在暴露第7天、14天后,50μg/L00μg/L浓度范围内表现一定的剂量-效应关系,且随着暴露时间的延长,50μg/L、150μg/L和500μg/L浓度组洛克沙胂对鲫鱼肝细胞的损伤呈现加重的趋势,呈现一定的时间-效应关系。（结论）本文初步探讨了洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼的分子毒性效应,洛克沙胂可致使蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝细胞的DNA损伤,预示着洛克沙胂的环境暴露存在着潜在的遗传毒性效应,单细胞凝胶电泳技术可作为有机胂DNA损伤的有效检测手段。

关键词：洛克沙胂蚯蚓鲫鱼彗星实验 DNA损伤

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洛克沙胂暴露胁迫对鲫鱼肝脏蛋白差异性表达的影响研究

洛克沙胂暴露胁迫对鲫鱼肝脏蛋白差异性表达的影响研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：钟晓霞高上吉梁雯霏孙永学华南农业大学兽医学院国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大)

(目的)本文通过建立池塘型水体有机胂暴露胁迫模型,研究鲫鱼在洛克沙胂暴露胁迫下肝脏蛋白的差异性表达,旨在为有机胂添加剂所致的养殖场周边水环境砷污染引起的生态毒性和早期的分子诊断提供科学依据。(方法)选取6～8cm鲫鱼为实验动物... 详细信息

(目的)本文通过建立池塘型水体有机胂暴露胁迫模型,研究鲫鱼在洛克沙胂暴露胁迫下肝脏蛋白的差异性表达,旨在为有机胂添加剂所致的养殖场周边水环境砷污染引起的生态毒性和早期的分子诊断提供科学依据。(方法)选取6～8cm鲫鱼为实验动物,在室内水池模拟环境中(水温21+2℃、pH6.5±0.5、溶解氧D.O7.5～8.5mg/L)设洛克沙胂组(150μgAs/L)和空白组,分别于7、14、21天采样。采用双向凝胶电泳技术优化分离鲫鱼肝脏蛋白,并对其中匹配良好的显著性差异点采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱技术(MALDI-TOF/MS)进行检测,由数据库检索鉴定与分析其差异蛋白分类及特性。(结果)结果表明:(1)在洛克沙胂的暴露胁迫下,鲫鱼肝脏产生的差异蛋白共有101种(P<0.05),其中有74种蛋白表达上调,27种表达下调,在暴露胁迫的中期(14天),蛋白的变化种类最多,有49种,其中29种发生了上调变化,20种发生了下调变化;在暴露胁迫的后期(21天),有20种蛋白发生变化,全部为上调。(2)经选取36个匹配良好的显著性差异点进行鉴定,在这36种蛋白中,有27种蛋白属于鲤科,与鲫鱼属同一科,占75%。(3)依据蛋白质的GO注释和在相关文献中报道的所参与的生物过程和分子功能,将鉴定得到的鲫鱼肝脏蛋白分为8类,包括碳水化合物代谢相关蛋白(10个点,占28%),细胞骨架蛋白(6个点,占17%),能量代谢相关蛋白(3个点,占8%),信号转导相关蛋白(5个点,占14%),氨基酸代谢相关蛋白(4个点,占1l%),分子伴侣蛋白(5个点,占14%),氧化应激相关蛋白(2个点,占5%),未分组蛋白(1个点,占3%)。(结论)本文从蛋白水平初步探讨了洛克沙胂对水生生物鲫鱼的分子生态毒性效应,获得与其暴露胁迫密切相关的肝脏差异蛋白,为有机肿添加剂暴露胁迫下对水环境的分子生态毒理学研究及其早期预警分子标志物的筛选提供依据。

关键词：洛克沙胂鲫鱼差异蛋白

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生物可降解纳米靶向细胞内传递抗菌药物的研究进展

生物可降解纳米靶向细胞内传递抗菌药物的研究进展

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：谢书宇潘源虎程冬梅陶燕飞刘振利袁宗辉华中农业大学动物科学技术动物医学院国家兽药残留基准实验室

胞内感染性疾病是危害动物和人类健康与生命的全球性顽疾之一,例如布氏杆菌病、结核病、李斯特杆菌病等。胞内菌可通过多种巧妙机制逃避宿主的杀灭作用,在不损伤宿主细胞的前提下持续繁殖和不断传播,从而导致持续、严重和潜在的感染。... 详细信息

胞内感染性疾病是危害动物和人类健康与生命的全球性顽疾之一,例如布氏杆菌病、结核病、李斯特杆菌病等。胞内菌可通过多种巧妙机制逃避宿主的杀灭作用,在不损伤宿主细胞的前提下持续繁殖和不断传播,从而导致持续、严重和潜在的感染。高效治疗胞内感染的前提是敏感抗菌药物在细菌寄居的细胞和部位具有足够的浓度和抗菌活性,但大多数抗菌药物不易穿透细胞膜且在细胞内极易被排除或失活。如恩诺沙星等氟喹诺酮类等抗菌药物虽然能有效进入细胞内但易被吞噬细胞膜表面的有机阴离子载体迅速外排导致细胞内浓度随着细胞外液浓度的下降迅速减少。研究报道蓄积在肺巨噬细胞和多型核白细胞中80%和90%的恩诺沙星在10min内就被排除到细胞培养基中,在外周血白细胞内也随着血浆药物浓度的下降快速消除。又如氨基糖苷类和β-内酰胺类极性太强、不易进入细胞,在溶酶体极易失活。大环内脂类在溶酶体和相关囊泡失活,外排速度快、滞留能力弱、药效持续时间短。另外抗菌药物常规制剂进入机体后呈自由的分布,半衰期短、消除快,在感染细胞内不能维持有效的治疗浓度,需长时间大量用药才能消除沙门氏菌的携带状态。长时间高剂量用药会增加药物的毒副作用、动物应激、养殖成本、药物残留和环境污染。因此,胞内感染疾病的临床治疗面临诸多瓶颈,亟需开发新的治疗策略。生物可降解纳米因其表面效应、量子尺寸效应、小尺寸效应等独特的优点已经成为靶向细胞内传递抗菌药物的一种有效载体。为了发展、丰富和完善生物可降解纳米靶向细胞内传递抗菌药物的理论和研发策略,本文分为四个章节详细论述了纳米靶向细胞内传递抗菌药物的研究进展以及面临的问题和挑战。本论文将有助于兽医药理工作者系统掌握生物可降解纳米靶向细胞内传递抗菌药物的理论、挑战和机遇,从而开发更加有效的生物可降解纳米传递系统,用于畜禽胞内感染疾病的治疗。

关键词：靶向细胞抗菌药物生物可降解

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盐酸头孢噻呋在奶牛血浆中UPLC-MS/MS检测方法的建立与确证

盐酸头孢噻呋在奶牛血浆中UPLC-MS/MS检测方法的建立与确证

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王建中孙菲菲张素霞龚晓会曹兴元中国农业大学动物医学院

【目的】头孢噻呋属于广谱半合成的第三代头孢菌素类抗生素,具有抗菌谱广、耐青霉素酶、临床疗效高、毒性低等优点,广泛应用于奶牛疾病的治疗。本实验通过将盐酸头孢噻呋在牛血浆中的主要代谢产物DFC衍生化为稳定DCA,并建立高效灵敏的UP... 详细信息

【目的】头孢噻呋属于广谱半合成的第三代头孢菌素类抗生素,具有抗菌谱广、耐青霉素酶、临床疗效高、毒性低等优点,广泛应用于奶牛疾病的治疗。本实验通过将盐酸头孢噻呋在牛血浆中的主要代谢产物DFC衍生化为稳定DCA,并建立高效灵敏的UPLC-MS/MS检测方法,为研究盐酸头孢噻呋在牛体内的药代动力学特征提供支持。【方法】提取与衍生化:取样品血浆500μL,加标50μL,涡动10s,加0.4%二硫赤藓糖醇溶液5.5mL,涡动2min,50℃水浴振荡15min,取出放置室温,加14%碘乙酰胺溶液1.5mL,避光室温下静置衍生30 min,用25%的磷酸溶液调节pH至2.5-2.6,离心15min（4℃,6000r/min）;净化:依次用10 mL甲醇、10 mL水活化HLB萃取柱,取上清液过柱,用3 mL水淋洗小柱之后,用2.5 mL90%乙腈溶液洗脱,洗脱液于氮吹仪吹干,残余物用500μL0.2%的甲酸溶液复溶,过0.22μm滤膜,取5μL进仪器分析。色谱条件:C色谱柱（50×2.1 mm,2.6μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液:0.1%甲酸乙腈溶液（95:5,V/V）,流速:0.4mL·min,柱温30℃。质谱条件:ESI+,多反应监测,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,毛细管电压3kV,脱溶剂气流速800L/h。在200μg/L,1000μg/L,2000μg/L三个浓度进行添加回收实验。【结果】血浆中DCA在100-5000μg/L的浓度范围内,方法线性关系良好,相关系数r为0.9936。定量限（LOQ）和检测限（LOD）分别为10050μg/L和50μg/L。三个添加浓度的回收率在96.62%-106.06%;日内变异系数均小于6.45%,日间变异系数小于1.41%。待测物在冻融、室温、前处理后、在血浆中的稳定性试验检测的变异系数均低于15%。【结论】建立的UPLC-MS/MS方法满足分析检测要求。

关键词：盐酸头孢噻呋 DCA 奶牛 UPLC-MS/MS

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物源食品中氟喹诺酮类残留检测的生物发光微生物传感器技术研究

物源食品中氟喹诺酮类残留检测的生物发光微生物传感器技术研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王玉莲程古月黄明威董小冰袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)

氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones,FQNs）在畜牧生产中应用广泛,然而大量使用会导致氟喹诺酮类药物在动物源食品中残留和细菌耐药性的产生,这不仅危害消费者健康,还影响我国动物源产品出口,制约我国养殖业可持续发展,是严重威胁食品安... 详细信息

氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones,FQNs）在畜牧生产中应用广泛,然而大量使用会导致氟喹诺酮类药物在动物源食品中残留和细菌耐药性的产生,这不仅危害消费者健康,还影响我国动物源产品出口,制约我国养殖业可持续发展,是严重威胁食品安全和社会稳定的重大问题。因此,加强动物源食品中氟喹诺酮类的残留监控十分必要。本研究利用氟喹诺酮类药物对大肠杆菌作用的分子机理,选择对氟喹诺酮类药物敏感和特异的启动子RecA,构建携带荧光素酶基因的质粒pRecAlux3,经转化、筛选获得一株敏感、特异和稳定的生物发光细菌E coli pK12,建立基于E coli pK12的氟喹诺酮类药物残留检测的生物发光微生物传感器方法,并对方法的灵敏度、准确度、精密度、交叉反应率等指标进行考察。该法能够识别恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、麻保沙星和奥比沙星等11种氟喹诺酮类药物,对猪、鸡、牛的肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉和牛奶等11种动物可食性组织中11种氟喹诺酮类药物的最低检测限为12.5μg/kg00μg/kg,添加回收率在60～125%,批内和批间变异系数均小于25%;对β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、大环内酯类等药物的最低检测限均在3×MRL以上。经动物试验和仪器方法比对试验结果表明该法与仪器方法符合良好,适用于动物源食品中氟喹诺酮类残留的快速筛选。本方法是一种新型的快速检测氟喹诺酮类残留的微生物学筛选方法,较传统微生物学法灵敏度更高、特异性强,为兽药残留检测方法研究提供了新的思路。

关键词：氟喹诺酮类生物发光微生物传感器大肠杆菌残留动物源食品

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美洛昔康在牛血浆中HPLC方法建立与确证

美洛昔康在牛血浆中HPLC方法建立与确证

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：孙菲菲王建中张素霞范瑞威龚晓会曹兴元中国农业大学动物医学院

【目的】美洛昔康是一种新型非甾体类抗炎药,具有良好的抗炎、镇痛、解热作用,且引起胃肠道和肾脏不良反应的发生率较其他同类药物显著降低。本实验旨在建立快速高效,节约成本,灵敏度高的检测方法为研究美洛昔康在牛体内的药代动力学特... 详细信息

【目的】美洛昔康是一种新型非甾体类抗炎药,具有良好的抗炎、镇痛、解热作用,且引起胃肠道和肾脏不良反应的发生率较其他同类药物显著降低。本实验旨在建立快速高效,节约成本,灵敏度高的检测方法为研究美洛昔康在牛体内的药代动力学特征以期制定合理的给药方案奠定基础。【方法】取1 mL奶样于10 mL离心管中,加入20μL5 MNaOH,涡动30s,在4℃,9000 rpm,离心3 min,取上清于新的10mL离心管中,加入200μL 1 M HC1,5 mL乙酸乙酯,涡动1 min,4℃,9000 rpm,离心3 min,离心取上清,再加入3 mL乙酸乙酯于沉淀中进二次提取,取上清,合并两次上清液;上清液于45℃氮吹至干,用200μL流动相复溶,涡动后过0.2μm滤膜,进行HPLC分析。色谱条件:C18色谱柱（2.1×250mm,5μm）,流动相为0.1%甲酸甲醇:0.1%甲酸水（75:25,v/v）,检测波长:355nm,流速:1.0mL·min。在10 ng·mL,15 ng·mL,30 ng·mL三个浓度进行添加回收实验。【结果】血浆中美洛昔康在10-2000ng·mL的浓度范围内,方法线性关系良好,相关系数r为0.9998。定量限（LOQ）和检测限（LOD）分别为10 ng·mL,8 ng·mL。三个添加浓度的回收率在80.1%-101.4%;日内和日间变异系数均小于13.6%。待测药物在冻融过程中的稳定性、室温条件下药物的稳定性、待测物在前处理后的稳定性、长期稳定性、储备液稳定性等5个稳定性试验的变异系数均低于13.2%。【结论】建立的HPLC-UV检测方法快捷灵敏,满足残留检测要求。采用酸碱萃取法进行前处理,整个过程需要大约1 h,实验过程中无需过SPE柱,节约成本。

关键词：美洛昔康牛 HPLC

来源：评论

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高效液相色谱-串联质谱法测定动物可食性组织中镰刀菌毒素

高效液相色谱-串联质谱法测定动物可食性组织中镰刀菌毒素

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈冬梅陶燕飞潘源虎谢书宇黄玲利王玉莲袁宗辉农业部兽药残留检测重点实验室/国家兽药残留基准实验室(HZAU)华中农业大学动物医学院

【目的】镰刀菌毒素类在自然界分布极为广泛,它不但可以引起人畜急、慢性中毒,还具有致癌、致畸、致突变的潜在危害,对人类的健康造成严重危害。因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要。但是现有的检测镰刀菌毒素类的检测方法并不完善... 详细信息

【目的】镰刀菌毒素类在自然界分布极为广泛,它不但可以引起人畜急、慢性中毒,还具有致癌、致畸、致突变的潜在危害,对人类的健康造成严重危害。因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要。但是现有的检测镰刀菌毒素类的检测方法并不完善,还存在一些问题,如检测的毒素种类少,只检测毒素毒素原型,对于代谢物关注极少;检测的样品种类单一,动物可食性组织的检测较少;样品前处理复杂、价格昂贵。针对以上问题,本方法旨在建立简便、快速,测定多种动物可食性组织中多种镰刀菌毒素的多残留方法。【方法】采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立猪牛羊肌肉、肝脏中19种镰刀菌毒素的多残留检测方法。组织样品采用β-葡萄糖醛苷酶水解,乙腈和水提取,正己烷脱脂,Bond Elut Mycotoxin柱净化。采用MRM监测模式,正负离子同时扫描。采用C18色谱柱,乙腈和水溶液为流动相,梯度洗脱方式进行色谱分离。【结果】19种镰刀菌毒素在不同样品中最低定量限为0.37μg/kg.41μg/kg,在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率介于64.8%05.0%之间,变异系数≤18.6%。【结论】本方法采用采用乙腈和水萃取提取动物可食性组织中19种镰刀菌毒素,样品前处理简单,方法回收率高,有机试剂用量少。采用Bond Elut Mycotoxin固相萃取柱进行样品净化,操作简单,同文献报道的免疫亲和柱相比,降低了检测成本,避免了样品基质干扰。本方法首次采用高效液相色谱-串联质谱同时测定了19种镰刀菌毒素,检测限低,特异性好,方法性能参数满足兽药残留监控要求。本方法弥补了真菌毒素在动物性食品中定量确证检测方法的空白,为保障人类和动物健康具有十分重要的意义。

关键词：镰刀菌毒素高效液相色谱-串联质谱固相萃取动物可食性组织

来源：评论

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马波沙星在牛感染多杀性巴氏杆菌组织笼模型中的药动/药效学初步研究

马波沙星在牛感染多杀性巴氏杆菌组织笼模型中的药动/药效学初步...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：曾长福孙美珍卢燕曾庆龄刘伟曾振灵华南农业大学兽医学院/国家兽药残留基准实验室广东广州510642

本研究在皮下埋置组织笼模型的基础上,进行了马波沙星在犊黄牛的药物动力学及对多杀性巴氏杆菌药效学研究,从而优化给药方案,以期更好的指导马波沙星兽医临床上的应用.本文研究的主要内容及结果如下：选用5头健康犊黄牛,按2 mg/kg b.w... 详细信息

本研究在皮下埋置组织笼模型的基础上,进行了马波沙星在犊黄牛的药物动力学及对多杀性巴氏杆菌药效学研究,从而优化给药方案,以期更好的指导马波沙星兽医临床上的应用.本文研究的主要内容及结果如下：选用5头健康犊黄牛,按2 mg/kg b.w以单次肌内注射给药后,采用反相高效液相色谱法测定血清中马波沙星的浓度,用WinNonlin药动学软件处理血清中药物浓度—时间曲线.马波沙星在黄牛血清中的药时曲线数据符合一级吸收二室模型,其主要药动学参数为：t1/2Ka为0.253 h,Tmax为0.898 h,Cmax为1.983μg/mL,AUC为14.093 h·μg/mL,t1/2β为8.044 h,Vd/F为1.164 L/kg,CL/F为0.152 L/h/kg.选用5头健康犊黄牛,按2 mg/kg b.w以单次肌内注射给药后,按预定时间点收集血清.将终浓度为107 CFU/mL多杀性巴氏杆菌与预定时间点收集的血清混合在37℃孵育1h,采用离心除药法将药物稀释后,测定马波沙星对多杀性巴氏杆菌在血清中半体内抗菌后效应(PAE),通过非线性回归分析,可知当血清中马波沙星浓度在2MIC、4MIC、8MIC时,其PAE的值分别为1.90 h、2.65 h、3.50 h.选用18头健康的犊黄牛,随机分成8个剂量试验组,每组2头(每头牛植入2个组织笼,共4个组织笼),另选2头健康的犊黄牛作为空白对照组.向每个组织笼内注射对数期的多杀性巴氏杆菌CVCC1669(组织液细菌终浓度为5 105 CFU/mL),孵育大约24h后,治疗组分别以单剂量、肌内注射一系列浓度的马波沙星注射液,对照组给予生理盐水处理.按预定时间点分别测定组织液中马波沙星浓度和细菌含量.应用非线性回归分析,可知马波沙星对多杀性巴氏杆菌的抗菌效果和AUC24h/MIC或AUC24h/MPC相关性最好(R2=0.8514).运用WinNonlin软件提供的Sigmoid模型对马波沙星对多杀性巴氏杆菌的抗菌效应与AUC24h/MIC或者AUC24h/MPC进行数据拟合,可知,下降1个Log值所需要的AUC24h/MIC、AUC24h/MPC分别为18.60 h和4.67 h.下降3个Log所需要的AUC24h/MIC、AUC24h/MPC分别为50.65 h和12.89 h.

关键词：马波沙星多杀性巴氏杆菌组织笼模型抗菌药后效药动/药效黄牛

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喹赛多在猪体内残留的生理药动学预测模型研究

喹赛多在猪体内残留的生理药动学预测模型研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：黄玲利林周梦周璇祝美玲 Ronette Gehring Jim E.Riviere 袁宗辉农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 美国堪萨斯州立大学兽医学院信息化比较药理学研究中心华中农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室

生理药动学模型(PBPK)是预测药物在食品动物体内组织分布与消除的有效工具。目前PBPK模型在食品安全领域的应用主要集中于预测原形药物的残留消除,对于代谢物的残留预测鲜有报道。本研究首次构建了能同时描述喹赛多(Cyadox,CYA)及其残... 详细信息

生理药动学模型(PBPK)是预测药物在食品动物体内组织分布与消除的有效工具。目前PBPK模型在食品安全领域的应用主要集中于预测原形药物的残留消除,对于代谢物的残留预测鲜有报道。本研究首次构建了能同时描述喹赛多(Cyadox,CYA)及其残留标志物脱二氧喹赛多(Bisdesoxycyadox,BDCYA)在猪体内残留消除动态过程的PBPK模型。该模型包括CYA和BDCYA两个子模型,各子模型分别设置7个房室,包括血液、肝脏、肾脏、胃肠道、肌肉、脂肪和其他组织。模型假设CYA和BDCYA的分布仅受到血流速率限制,肝脏和肠道均可代谢发生代谢,主要经粪、尿和胆汁消除。通过文献调研获得猪各项生理参数和部分药动学参数。采用平衡透析法和稳态给药法分别测定了CYA和BDCYA的血浆蛋白结合率与组织/血浆分配系数,通过静脉输注给药测定CYA和BDCYA的肾清除率。利用文献报道的喹赛多口服给药5天的药动学和残留消除数据构建出CYA和BDCYA模型,然后外推至连续2个月混饲给药的暴露方式,最后利用连续混饲给药14天的残留消除数据对模型预测的准确性进行验证。结果表明,模型能同时准确模拟喹赛多和脱二氧喹赛多在口服和混饲两种给药方式下肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中停药后24-120h的残留消除特征。模型对混饲给药后6-12h肌肉中CYA和肾脏中BDCYA残留量的预测偏高。灵敏度分析表明,体重、吸收速率常数、生物利用度、肝脏代谢速率常数、肠道代谢速率常数、肾清除率均对模型预测结构有显著影响。蒙特卡洛分析结果表明,模型预测的CYA和BDCYA在各组织中残留量的分布范围较好地涵盖了目前文献报道的实测结果,证明模型具有良好的适用性。本研究构建的PBPK模型为喹赛多在食品动物的残留监控提供了新型预测手段,同时为实现PBPK模型同时预测兽药原形及其代谢物在食品动物体内的残留奠定了良好的基础。

关键词：喹赛多脱二氧喹赛多 PBPK模拟组织消除残留预测灵敏度分析蒙特卡洛分析

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喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王旭白毅杰程古月郝海红刘振利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细... 详细信息

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细胞系为细胞模型进行基因组学研究。结果显示,10μM喹烯酮处理组与空白组相比有349个差异表达基因,其中上调基因有210个(名称和功能己知的基因有150个),下调基因有139个(己知基因有98个);20μM喹烯酮处理组与空白组相比有4583个差异表达基因,上调的有2835个(名称和功能已知的基因有1931个),下调的有1748个(已知基因有1095个)。将这些差异基因按生物学进程分为6类:与细胞内物质和能量合成代谢相关、与转运相关、与细胞应激相关、与信号转导相关、与细胞发育过程相关及与转录调控相关。分析相关基因功能,与无机离子、氨基酸、神经递质、糖类、嘌呤和脂肪酸等物质转运相关的基因的表达量发生改变,提示喹烯酮干扰了细胞内正常的生命活动。参与类固醇激素合成和代谢的基因表达量也发生了改变,特别是与胆固醇合成相关的一些基因的表达量均上调,而负责将胆固醇外排出细胞的脂质转运体也发生上调表达;同时,胆固醇合成原料乙酰辅酶A提供者-脂肪酸在一种高度上调表达的SREBF1的作用下合成甘油三酯的进程加剧,三者协同作用影响醛固酮合成原料-胆固醇的浓度;控制类固醇激素合成方向的基因CYP17A1表达量上调,导致醛固酮合成受阻;另外调控CYP11B2转录的一种重要转录因子NR4A2的表达量下调,抑制其转录;同时与氧化应激相关的一些基因表达量下调,提示QCT可能通过抑制Nrf2/Keap1/ARE通路的下游基因NQO1、HMOX1、G6PD和SRXN1等的表达,加剧药物造成的氧化应激现象,进而造成ROS的大量蓄积,引起肾上腺皮质细胞毒性。综上所述,本研究首次运用基因组技术发现ABCG1、SREBF1等与调控胆固醇浓度的相关基因及CYP1 7A1、NR4A2、G6PD等与醛固酮合成相关基因是喹烯酮下调醛固酮合成和分泌的重要分子靶点。

关键词：喹烯酮 H295R细胞毒性醛固酮基因组肾上腺

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