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喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定

喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：戴梦红涂名邵羊阳王旭刘振利王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点开放实验室华中农业大学

【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PC... 详细信息

【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测L-02细胞中EGF mRNA的表达水平,以验证结构改造物的生物活性。将喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧与富含氨基的树脂基质ToyopearlAF-Amino-650M偶联,并利用高效液相色谱(HPLC)检测偶联效率。将固定化配体喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧-亲和基质与L-02细胞各亚细胞组分蛋白裂解液分别进行连续亲和层析(SAC)实验,通过生物质谱技术鉴定差异蛋白,并利用WesternBlot技术验证质谱结果的可靠性。利用RT-qPCR方法检测喹赛多孵育L02细胞后hnRNPA2/B1 mRNA、原癌基因c-mycmRNA、细胞增殖抗原Ki-67蛋白的基因mki-67mRNA及细胞周期基因p21、ccnd2mRNA的表达变化。【结果】与喹赛多作用类似,2μM喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧孵育L-02细胞1 h后,即可显著(p<0.05)上调EGFmRNA的表达水平,而且将喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧作为配体与树脂基质进行偶联的效率能够达到75%以上。通过偶联得到的固定化配体捕获到5个差异蛋白,并成功鉴定3个,分别是核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)、核内不均一核糖核蛋白U(hnRNP U)以及核内不均一核糖核蛋白H(hnRNP H),均为细胞核蛋白。Western Blot结果显示,随着蛋白裂解液与固定化配体孵育次数的增加,hnRNP A2/B1蛋白丰度逐渐减小,因此说明hnRNP A2/B1蛋白是喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧的特异性结合蛋白。2μM喹赛多孵育L-02细胞1 h后,hnRNPA2/B1与mki-67基因分别出现显著性(p<0.05)下调与上调表达。10μM喹赛多作用细胞0.5 h后即可检测到mki-67 mRNA的表达水平上调显著(p<0.05),但是细胞周期蛋白D2相关基因ccnd2 mRNA在1 h时出现显著性(p<0.05)上调表达。因此我们推测喹赛多与hnRNP A2/B1蛋白结合后,通过调控细胞增殖与细胞周期等相关基因的表达,促进细胞生长。【结论】喹赛多能进入细胞核内与靶蛋白hnRNPA2/B1结合,调节下游基因的表达,从而促进细胞生长。

关键词：喹赛多结合蛋白连续亲和层析质谱分析技术

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广州流溪河沉积物反硝化细菌群落结构、丰度与环境因子相关性研究

广州流溪河沉积物反硝化细菌群落结构、丰度与环境因子相关性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王勉之丁雪瑶孙静马驿范葶莉孙永学华南农业大学兽医学院兽药安全评估国家重点实验室广东海洋大学农学院动物医学系

(目的)本文以反硝化细菌硝酸盐还原酶的narG基因和亚硝酸盐还原酶的nirS基因作为分子标示物,研究反硝化细菌的群落结构、丰度与环境因子之间的相关性。（方法）实验对流溪河流域从上游至下游十个不同位点进行沉积物采样,进行环境因子（... 详细信息

(目的)本文以反硝化细菌硝酸盐还原酶的narG基因和亚硝酸盐还原酶的nirS基因作为分子标示物,研究反硝化细菌的群落结构、丰度与环境因子之间的相关性。（方法）实验对流溪河流域从上游至下游十个不同位点进行沉积物采样,进行环境因子（温度、pH、氨态氮、硝态氮、亚硝态氮、总氮、COD）理化数据测定,对narG基因和nitS基因构建基因文库,分析流溪河流域沉积物中反硝化细菌的群落结构和多样性,再结合实时荧光定量PCR法（RT-PCR）对反硝化细菌的丰度进行研究,并通过主坐标分析和冗余度分析等多变量统计分析方法研究了反硝化细菌的群落结构、丰度与环境因子之间的相关性。（结果）结果表明:十个位点环境因子数据显示,硝态氮（NO3-N）含量变化不大,浓度均接近3.0 mg/L、亚硝态氮（NO-N）浓度均很低,约为0.08 mg/L;narG基因和nirS基因文库分析显示流溪河流域不同采样位点的沉积物中反硝化菌群落结构表现出差异性,用MOTHUR软件对其做多样性指数分析,在所有采样点中7.-CH、6-LK、9-RH采样点的物种多样性指数相对于其他采样点较高,上游两个采样点（1-SK和2-WQ）的多样性指数低;荧光定量分析结果,反硝化细菌nirS基因拷贝数范围为7.89×10～3.34×10～4copies/g,narG基因拷贝数为5.97×10～2.64×10～4 copies/g,nirS基因丰度变化范围为0.01%.1%,narG基因丰度变化范围为0.01%.5%,构建系统发育树发现,沉积物样品中大多数nirS基因克隆与目前已知可培养的反硝化细菌的亲缘关系较远,大部分为未被认知的微生物类群,其中已知的nirS型反硝化菌属于变形菌Alpproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria,其中大部分属于Betaproteobacteria;最后用冗余分析（RDA）和典范对应分析（CCA）对三者相关性进行分析。（结论）结果显示,环境因子中亚硝态氮（NO）生化因子对反硝化细菌群落结构起着决定性的作用,与环境因子的相关性大小依次表现为:NO2-N>TN>NH4..N>COD>NO3-N>pH>Temp;反硝化细菌丰度与环境因子的Person相关系数分析表明,河流沉积物中总细菌16S rDNA基因丰度与环境因子之间无显著的相关性,而nirS基因型反硝化细菌数量与NH-N和IN因子浓度之间差异极显著（P<0.01）,与NO3-N因子差异显著（P<0.05）,narG基因型反硝化菌数量与NO因子浓度差异显著（P<0.05）,但与其它环境因子差异不显著（P>0.05）。

关键词： narG nirS 反硝化细菌群落结构丰度多样性环境因子

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CFG桩刚性桩复合地基在兰州新区的工程应用

CFG桩刚性桩复合地基在兰州新区的工程应用

引用

第十三届全国地基处理学术讨论会

作者：鲁海涛魏秦滕文川甘肃土木工程科学研究院甘肃兰州 730020

兰州国家级新区地质条件复杂,地基处理较多采用了CFG桩刚性桩复合地基,通过介绍CFG桩复合地基技术的在兰州新区工程应用,阐述了CFG桩刚性桩复合地基的基本原理,通过工程实例,对静载试验结果进行分析,提出在兰州新区复合地基设计时,βp、... 详细信息

兰州国家级新区地质条件复杂,地基处理较多采用了CFG桩刚性桩复合地基,通过介绍CFG桩复合地基技术的在兰州新区工程应用,阐述了CFG桩刚性桩复合地基的基本原理,通过工程实例,对静载试验结果进行分析,提出在兰州新区复合地基设计时,βp、βs、λ及β取值的建议值.

关键词：刚性桩复合地基水泥粉煤灰碎石桩参数设计载荷性能

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放射性标记技术在兽药安全评价中的应用

放射性标记技术在兽药安全评价中的应用

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：潘源虎朱洪鹏谢书宇陶燕飞陈冬梅黄玲利刘振利袁宗辉农业部兽药残留检测重点实验室/国家兽药残留基准实验室(HZAU)华中农业大学动物医学院

兽药的安全评价的最重要的的目的之一就是为了保障人的食品安全,包括系统开展兽药的毒理学、代谢动力学和残留消除研究,确定人日允许摄入量（ADI）,残留标示物和靶组织,进而制订出最高残留限量（MRL）和休药期,从而对兽药进行最好的风... 详细信息

兽药的安全评价的最重要的的目的之一就是为了保障人的食品安全,包括系统开展兽药的毒理学、代谢动力学和残留消除研究,确定人日允许摄入量（ADI）,残留标示物和靶组织,进而制订出最高残留限量（MRL）和休药期,从而对兽药进行最好的风险管理。FAO/WHO食品添加剂联合专家委员会（JECFA）对于MRL的制订方法,推荐采用放射标记药物在靶动物的代谢研究来确定靶组织和标示残留物,进行药物在靶动物的总残留消除试验确定总残留物与标示残留物的比率,制订出科学合理的MRL值。本文将从放射性示踪技术在兽药在动物体内的ADME及残留消除研究方面的运用来阐述该技术在兽药的安全评价中的重要性。研究药物在体内的吸收时采用放射性标记药物,借助液闪计数器可以直接测定给药后不同时间点生物样品中的放射性浓度,计算得到药物吸收速率、达峰时间和生物利用度等参数。全面研究药物在体内的代谢,可以阐明兽药在动物体内的代谢途径,预测药物的药效及其潜在的毒性作用。但是药物在体内往往代谢生成多种代谢产物,而放射性示踪技术则可以明确区分与药物相关的代谢物,随着高效液相与放射性检测和质谱联用,能够实现对兽药相关的代谢物同时进行定性和定量分析,而且可以方便地比较药物在不同种属的代谢情况。对于药物排泄研究,即使不知道代谢物具体信息,利用放射性特点通过分别测定粪便、尿液和胆汁样品的总放射量,从而获得物料平衡的准确信息。如对阿维菌素同系物MAB1a的研究采用和C双标记方法研究其鸡体内代谢。连续口服给药7d（1mg/kg bw/d）,收集每天的鸡蛋和粪便,分离鸡蛋的蛋白和蛋黄,停药后20h宰杀鸡,收集肝脏、肾脏、心脏、肌肉、脂肪、卵巢、肌胃、消化道和内容物、尸体等检测。在粪便和消化道及其内容物中回收到总给药放射性的70%,组织和鸡蛋中回收了6%。分离和鉴定了两个代谢产物及其8个结合物,占组织和鸡蛋的总放射性的8～70%,并证明了MAB1a在禽类和哺乳动物体内生物转化不同。放射性示踪技术在兽药的安全评价中最具特色可能就是在残留消除研究中的应用。通过对不同的靶动物使用放射性标记的药物,在不同的时间点检测不同组织中的放射性水平,确定残留靶组织,并对靶组织中的各个代谢产物先定性（确定其结构）、后定量（确定其含量）,从而确定靶组织的主要代谢产物（含量>10%）和其结构,然后在主要代谢产物中,将那些与总残留呈稳定比例关系又能在体外稳定存在的一种或几种代谢产物拟定为残留标示物。如研究罗硝唑在火鸡和猪体内的残留消除,给火鸡和猪服用C标记的罗硝唑,到休药期第10天的时候残留量分别为鸡肉0.26 mg/kg,肾脏0.14mg/kg和肝脏0.05mg/kg。休药期42天时,罗硝唑在猪体内残留量分别为肌肉130μg/kg,肝脏、肾脏和脂肪大约50-60μg/kg。由于在猪和火鸡的残留消除实验中肌肉在休药期后药物的残留量最高,最终确定罗硝唑在火鸡和猪中的残留靶组织均为肌肉。又如对头孢噻呋残留标示物的确定,利用C标记的头孢噻呋动物体内进行残留研究。在肾脏中,主要的存在物是去呋喃甲酰基头孢噻呋半胱氨酸二硫化物;在肝脏中,主要的代谢物是去呋喃甲酰基头孢噻呋和3,3'-去呋喃甲酰基头孢噻呋二硫二聚物,最终确定了残留标示物是去呋喃甲酰基头孢噻呋。低能量的4C和H是药物ADME研究中最常用的放射性核素。由于具有标记位点稳定的优点,C作为最常用的放射性核素通常标记在分子的骨架结构上,缺点是C的来源较少且价格高。而H标记具有合成方便,氚源相对容易而且检测灵敏度高的优点,也常做为示踪剂,但是存在可能会与易与环境中的氢发生交换,稳定性不如C,一般要求氚水交换比例小于5%。作者所在实验室近几年陆续开展了喹噁啉类兽药喹赛多,喹烯酮和喹乙醇在实验动物和猪鸡鱼的放射性示踪研究,阐明了这些药物在动物体内的代谢差异及分布和残留消除规律,为制定这类药物残留限量和休药期进行探索性工作。随着国家对食品安全的日益重视,为了进一步加强兽药的食品安全性评价,放射性同位素示踪技术在兽药的新药研发及一些兽药的再评价中的地位应该得到重视,与国外的法规和指南接轨。

关键词：兽药安全评价放射性示踪代谢残留消除

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中国博览会会展综合体项目地基处理设计

中国博览会会展综合体项目地基处理设计

引用

第十三届全国地基处理学术讨论会

作者：吴江斌胡耘黄昱挺华东建筑设计研究总院地基基础与地下工程设计研究中心上海 200002 上海基坑工程环境安全控制工程技术研究中心上海 200002

为保证软土地区大面积展场功能的发挥,需有针对性地开展场地地基处理.中国博览会会展综合体项目是国家级大型项目,室内展场面积约24万m2,是目前世界上面积最大的建筑单体和会展综合体.本文综合考虑土层条件、使用荷载要求和相邻环境条件... 详细信息

为保证软土地区大面积展场功能的发挥,需有针对性地开展场地地基处理.中国博览会会展综合体项目是国家级大型项目,室内展场面积约24万m2,是目前世界上面积最大的建筑单体和会展综合体.本文综合考虑土层条件、使用荷载要求和相邻环境条件,特别是轨道交通限制等条件,对不同区域分别采用针对性的地基处理方法:35kPa使用荷载区域充分考虑展厅荷载的时间与空间分布特性,仅采用清表回填对表层土作处理;50kPa使用荷载区域采用大间距布置且设置独立承台的PHC管桩复合地基对深部软弱土层作处理,轨道交通控制线50m范围内采用常规钻孔灌注桩和筏形承台板形成的桩基础作处理.多种处理方式相结合,充分满足了使用要求,且兼顾了工期与经济合理.

关键词：会展场馆地基处理荷载特性软土地区

来源：评论

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外加偏压对有机自旋阀磁电阻符号的调制

外加偏压对有机自旋阀磁电阻符号的调制

引用

第十三届全国低温物理学术讨论会

作者：吴镝南京大学物理学院南京固体微结构国家重点实验室南京210093

来源：评论

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