黄曲霉毒素(Aflatxoin,AFT)是由黄曲霉(As-pergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiti-cus))等多种真菌产生的次级代谢产物,其中分布范围最广、化学性质最为稳定的为黄曲霉毒素B 1(Afalatoxin B1,AFB1)。目前,利用微生物及其代谢产物对黄曲霉毒素进行生物解毒,具备效果稳定、特异性强及效率高等优势而成为研究的热点。在微生物降解黄曲霉毒素方面,已经研究了有不同的微生物,细菌如红色棒状杆菌(Mann and Rehm,1977;Wu et al.,2009),荧光假单胞菌,败血假单胞菌,葡萄球菌(Oluwaffemi et al.,2016),真菌如假蜜环菌(Liu et al.,2001),平谷菌(Yehia,2014)。使用安全、特异性强、降解效率高,是解决黄曲霉毒素污染的首要任务。泰山属暖温带季风气候,地表植物种类繁多,土壤主要由棕壤组成,富含矿物质和有机质成分,非常适合微生物包括枯草芽孢杆菌的生长。为此,本试验首次从泰山土壤中分离对AFB1具有高降解作用的枯草芽孢杆菌,并对其降解过程进行了初步研究,为AFB1的生物性降解和霉变饲料控制方面的应用研究奠定基础。枯草芽孢杆菌是对人,家畜是有益的土壤居住菌。该菌能分泌的代谢物中含有大量的活性物质。由于该细菌代谢物对黄曲霉毒素的效果研究未见报道,利用生物方法降解黄曲霉毒素也受到了广泛的关注。因此,本实验从土壤中分离了枯草芽孢杆菌,并进行了鉴定。经16sRNA基因测序鉴定为枯草芽孢杆菌,最终确定1株具有较高降解作用的枯草芽孢杆菌。并利用该菌株的代谢物对AFB1进行了降解率、代谢物活性组分、性质的确定及降解饲料中AFB1效果的研究。结果表明,泰山枯草芽孢杆菌代谢物对AFB1的降解率达90.28%,其中,泰山枯草芽孢杆菌发酵后的上清液对AFB1的降解活性最高,确定发酵后的上清液中存在解毒活性组分;对解毒活性物质进行加热和蛋白酶K变性处理后,解毒活性显著降低,表明起解毒作用的活性物质是其分泌的一种胞外酶;应用性试验也证明了该菌的代谢产物对对霉变饲料中黄曲霉毒素的降解作用。总之,此次枯草芽孢杆菌代谢物对黄曲霉毒素B1的有效降解,显示了枯草芽孢杆菌在饲料和饲料行业中应用潜力。
生物气溶胶是是气溶胶的一种主要组成部分。它包括细菌、真菌、病毒、尘螨、花粉、孢子及其它一些微生物粒子和动物的一些代谢产物(胡家骏,1988;章澄昌,1995)。生物气溶胶在空气中的传播可以导致人和动物的很多疾病(Spendlove,J.C.,1974;胡庆轩,1988;张劲松,1990;Lighthart,B.,1994),比如一些呼吸道疾病,包括:哮喘、鼻炎、遗传性过敏症、慢性支气管炎、皮肤过敏和过敏性齿槽炎等在奶牛舍内有过报道(Malmberg-P,1990;Dutkiewicz-J,1994)。然而,微生物是导致动物舍环境污染的主要因素。动物舍的污染可以引起一些流行性疾病的发生及一系列环境问题。动物舍空气中的细菌包括致病菌、条件性致病菌和非病原菌,所有这些细菌在一定程度上均可导致人及动物的很多疾病。甚至是极少量的致病菌就可直接导致呼吸道的感染,特别是下呼吸道的感染(Jamych,1976;Mehlhom,1979)。所以,空气中微生物气溶胶的污染,不仅能够影响人及动物的健康和动物生产能力的下降,而且更为重要的是引起一些传染性疾病在人和动物间的流行。我们都知道,动物舍内微生物,特别是一些气载的致病性微生物,它不仅能够污染舍内及其周围环境,而且能够通过空气传播很远的距离,造成传染病的流行(Alex Donaldson,1999)。1981年口蹄疫病毒(FMD)由法国布列塔尼以惊人的速度传到英格兰南部(Donaldson,A.I.,1982);台湾爆发的禽流感(Klontz,K.C.,1989);最典型的是麻疹病毒通过空气的传播,引起了未接种疫苗地区的人们麻疹病的大流行(Riley,E.,1978)以及2001-2002年在美国由于气载炭疽引起的人的大批死亡(Centers for Disease Control and Prevention(CDC),2003)等等。但是,我们利用什么方法才能验证它的传播呢?在2006年,Alex ***用生物标记的方法研究过气载微生物与真菌的来源问题。在本试验中,我们不仅测量了鸡舍舍内及舍外不同距离的大肠杆菌含量,而且还利用ERIC-PCR方法来研究从动物舍内不同环境中分离到的大肠杆菌,通过这个试验以便找到这些不同来源的大肠杆菌DNA图谱之间的关系,比较其同源性,确定舍外大肠杆菌的来源问题。由于动物舍环境中的微生物可以随着舍内外空气的交换而改变,特别是受到气象条件的影响,如温度、湿度、风速和光照等(Donaldson,A.I.,Ferris,N.P.,1976)。因此,在该试验中,我们选择在风速不太大的气候条件下,且舍外障碍物相对较少的鸡舍进行的,不仅从动物的新鲜粪便中分离到了大肠杆菌,而且还从距离动物舍不同的距离(上风方向和下风方向)分离到了空气中的大肠杆菌,同时也对环境中的温度、湿度和风速进行了测量。本试验分离了5个鸡舍舍内、舍外环境中的大肠杆菌,包括鸡的粪便、舍内空气、舍外上风10m、50m和下风10m、50m、100m、200m、400m、600m不同距离的大肠杆菌,计算每一个采样点的大肠杆菌的浓度(CFU/m3空气),并利用肠杆菌基因间重复一致序列为引物的聚合酶链式反应(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR,ERIC-PCR)分型技术扩增具有不同来源大肠杆菌(包括动物粪便,舍内空气和舍外空气)的DNA图谱。通过这种方法研究动物舍环境微生物向舍外环境的传播问题。研究结果显示:鸡舍舍内空气中大肠杆菌的浓度要远远高于舍外环境(P<0.05或P<0.01),但仅仅依靠大肠杆菌的浓度的这种变化并不能很好地说明舍外空气中的大肠杆菌来源于舍内;而ERIC-PCR结果表明从鸡的粪便中分离的大肠杆菌与从舍内空气中分离的多数大肠杆菌具有极高的同源性,而与从鸡舍上风分离到的大肠杆菌同源性较远;从鸡舍舍外下风方向分离到的大多数大肠杆菌与舍内空气或粪便中的大肠杆菌也具有极高的同源性,而与上风方向分离到的大肠杆菌遗传进化关系较远。所以,我们可以说鸡粪便中的大肠杆菌既能传播到舍内空气中,又能传播到舍外下风不同的距离。也就是说鸡粪便中的大肠杆菌既能污染舍内空气,又能对其周围的环境构成污染。
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