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作者

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联合用药对blaKPC阳性肺炎克雷伯菌的体外药效学研究

联合用药对blaKPC阳性肺炎克雷伯菌的体外药效学研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：蔡达同郑思琳于洋孙坚刘雅红廖晓萍华南农业大学兽医学院国家兽医微生物耐药性风险评估实验室

[目的]临床用于治疗耐碳青霉烯肠杆菌（CRE）感染的抗菌药物主要为多粘菌素、替加环素、磷霉素和氨基糖苷类。然而产酶菌株的多重耐药现象及有效新型抗菌药物的缺乏使得临床有效治疗CRE感染成了难题,因此联合利用现有的抗菌药物,寻求合... 详细信息

[目的]临床用于治疗耐碳青霉烯肠杆菌（CRE）感染的抗菌药物主要为多粘菌素、替加环素、磷霉素和氨基糖苷类。然而产酶菌株的多重耐药现象及有效新型抗菌药物的缺乏使得临床有效治疗CRE感染成了难题,因此联合利用现有的抗菌药物,寻求合理有效的给药方法已成为克服这类感染性疾病的有效手段。本研究针对临床感染常见的产blaKPC酶肺炎克雷伯菌,研究头孢他啶-阿维巴坦（Ceftazidime-Avibactam,CAZ-AVI）与八种常用抗菌药（多粘菌素E、多粘菌素B、替加环素、磷霉素、安普霉素、庆大霉素、阿米卡星、美罗培南）的协同作用,探究不同药物之间的联合抗菌作用,为临床合理用药提供理论依据。[方法]采用微量肉汤稀释法对实验室保存的27株bla阳性肺炎克雷伯菌进行抗菌药物敏感性测定;采用棋盘法测定CAZ-AVI与不同抗菌药物组合的联合抗菌作用,并计算联合作用指数FIC抑菌浓度,判定联合效应,筛选有协同作用效果的药物组合。随后,体外测定协同药物组合对27株bla阳性菌的体外抗菌效果。[结果]27株KPC阳性肺炎克雷伯菌对头孢他啶、美罗培南的耐药率高达100%,对多粘菌素耐药率为77.8%,对多粘菌素B耐药率为70.3%,对磷霉素耐药率为77.7%,对替加环素耐药率为39.3%,对安谱霉素耐药率为38.5%,对庆大霉素耐药率为44.4%,对阿米卡星耐药率为29.6%。联合药敏结果表明CAZ-AVI联合美罗培南对bla阳性肺炎克雷伯菌均具有协同作用,联合用药时CAZ-AVI和美罗培南的MIC值显著下降;与庆大霉素或阿米卡星联合作用时仅对部分菌株有协同作用。[结论]CAZ-AVI联合美罗培南治疗bla阳性肺炎克雷伯菌感染具有显著的协同作用效果,联合应用时可以提高两种药物的敏感性。

关键词：产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌 blaKPC MIC 联合用药 CAZ-AVI

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北京地区零售肉类食源性病原体的流行情况

北京地区零售肉类食源性病原体的流行情况

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘颖彭文静崔一芳丁双阳朱奎北京食品营养与人类健康高精尖创新中心中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心中国农业大学动物医学院

[目的]目前"超级细菌"的出现使得抗生素与治疗策略显得束手无策。多重耐药性细菌病原体的出现已成为公众关注的主要问题。本研究目的是对肉类食品的最后一个销售环节的安全性进行全面的评估。[方法]在本研究中,我们从熟肉、... 详细信息

[目的]目前"超级细菌"的出现使得抗生素与治疗策略显得束手无策。多重耐药性细菌病原体的出现已成为公众关注的主要问题。本研究目的是对肉类食品的最后一个销售环节的安全性进行全面的评估。[方法]在本研究中,我们从熟肉、生肉、环境和人源四个不同来源收集了与零售肉类有关的样本。我们在不同样本中分离鉴定菌株,比较不同来源菌株组成的差异。根据2013年CDC关于具有重大威胁耐药菌的报告以及2017年WTO发表的多耐药细菌清单,对主要病原菌的耐药表型进行了筛查,并对耐药菌株的遗传环境进行了分析。此外,我们还筛选了潜在食源性致病菌中的毒力因子。从而,对肉类产业链最后一个环节的安全性进行全面的评估。[结果]在2018年4月至7月期间,在北京四个区的24个大型超市采集了134个样本,其中包括37份熟肉、53份生肉、26份环境样本和18份人源样本,共分离到674株菌株。不同来源样本中微生物组成不同,肉类和环境样本或人源样本中的主要病原体是克雷伯菌属和葡萄球菌属。所有分离株对阿莫西林克拉维酸钾(耐药率为46.78%)、四环素(44.66%)和红霉素(32.73%)的耐药性普遍存在。根据全基因组分析,已筛查到两株肺炎克雷伯菌的ESBLs基因位于移动元件上和两株携带mcr-7基因的嗜水气单胞菌分离株。在我们的分离株中,还发现芽孢杆菌的主要毒素基因、与粘附和入侵相关的毒力因子。[结论]这些结果表明肉类食品确实存在潜在的公共卫生风险,需要引起消费者的注意。

关键词：零售肉类食源性致病菌耐药性毒力因子

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酵母细胞壁多糖的应用及提取纯化鉴定技术研究进展

酵母细胞壁多糖的应用及提取纯化鉴定技术研究进展

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘亚娜周喆麒王芳吴香云郝海红程古月王玉莲华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)

酵母细胞壁多糖的主要活性成分是β-葡聚糖和甘露聚糖,在动物机体内通过利用其结构与肠道受体竞争吸附病原菌以及在肠道降解提供能量等改善动物肠道环境,也会利用其结构与Fe2+离子螯合抑制羟自由基的产生以及防止脂质过氧化连锁反应等... 详细信息

酵母细胞壁多糖的主要活性成分是β-葡聚糖和甘露聚糖,在动物机体内通过利用其结构与肠道受体竞争吸附病原菌以及在肠道降解提供能量等改善动物肠道环境,也会利用其结构与Fe2+离子螯合抑制羟自由基的产生以及防止脂质过氧化连锁反应等提高抗氧化能力,并且其特有的化学位点会通过多种分子间作用力吸附霉菌毒素;β-葡聚糖和甘露聚糖通过作用于巨噬细胞、调节多种细胞因子等多个途径增强机体的特异性和非特异性免疫力。目前在养殖业中可用于替代抗生素控制鸡的坏死性肠炎、减少水产动物细菌感染、降低猪、牛等幼畜腹泻率、预防各种老化性疾病以及促进动物生长发育。酵母细胞壁多糖不同提取方法结果进行比较,提取β-葡聚糖,选用超声辅助酶解产率最高、效果最好;用低浓度的氢氧化钠溶液提取甘露聚糖以及酶碱法提取酵母多糖效果最好。分离纯化技术效果分别比较,除去酵母细胞壁多糖中蛋白质的最佳方法是Sevage法;脱除色素的最佳方法是颗粒活性炭吸附法;单一多糖分离纯化采用DEAE-纤维素A52阴离子交换柱和Sephadex G-100柱联用的方法是为最佳。总结对比现有的鉴定技术,酵母细胞壁多糖结构鉴定可以采用高效液相法测定多糖的单糖组成、高效凝胶渗透色谱测定多糖的均匀性和分子量以及傅立叶变换红外光谱、气相色谱-质谱和核磁共振测定多糖的精细结构。本综述通过对酵母细胞壁多糖的作用及应用,提取、分离纯化和鉴定技术进行阐述,为酵母细胞壁多糖作为抗生素替代品在畜牧业生产中的推广应用提供理论依据,为抗生素替代品的研发提供新的思考方向。

关键词：酵母细胞壁多糖结构鉴定动物肠道分离纯化技术抗生素替代品坏死性肠炎高效凝胶渗透色谱病原菌主要活性成分提取纯化

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DNA甲基化在T-2毒素致炎性细胞因子表达中的作用

DNA甲基化在T-2毒素致炎性细胞因子表达中的作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘爱梅吴庆华潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从DNA甲基化和炎症角度诠释T-2所致肝细胞损伤的分子机制,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一定的理论... 详细信息

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从DNA甲基化和炎症角度诠释T-2所致肝细胞损伤的分子机制,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一定的理论依据。[方法]本研究一方面以大鼠为实验动物模型,开展T-2毒素(2 mg/kg bw) 7天毒性试验,检测T-2毒素对大鼠肝中炎性细胞因子的表达以及炎性因子启动子区甲基化的变化,探索T-2毒素下DNA甲基化和炎性细胞因子的关系;另一方面以BRL细胞为模型,应用qPCR、Western blot、亚硫酸氢盐测序(BSP)和流式细胞术在分子水平检测细胞损伤。此外,用DNA甲基化抑制剂和T-2毒素的联合孵育细胞,来更进一步证明DNA甲基化参与T-2毒素所致的炎性细胞因子的表达。[结果]实验结果表明,T-2毒素导致大鼠肝炎性增生,且炎性细胞因子(IL-6、IL-1β、IL-11、IL-1α和TNF-α)大量表达;同时T-2毒素显著提高全基因组5-甲基胞嘧啶(5-mc)水平和肝损伤部位的DNA甲基转移酶(DNMT1,DNMT3a)水平。值得注意的是,在T-2毒素作用下,DNA去甲基化直接增加了炎性细胞因子IL-11、IL-6、IL-α和TNF-α的表达。DNA甲基化抑制剂联合T-2毒素直接或间接诱导炎症细胞因子的产生,加重细胞凋亡。[结论]综上所述,本研究发现DNA甲基化介导了T-2毒素诱导的肝损伤中炎症细胞因子的表达,表明DNA甲基化是T-2毒素诱导肝毒性的一个潜在机制,这为后期进一步诠释T-2毒素所致的细胞损伤机制以及拮抗T-2毒素炎性的新型药物的研发奠定科学基础。

关键词： DNA甲基化 T-2毒素炎性拮抗

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CYP1A1和CYP1B1在阿奇霉素和多西环素联合诱导的L02细胞氧化应激损伤中的作用

CYP1A1和CYP1B1在阿奇霉素和多西环素联合诱导的L02细胞氧化应激...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘爱梅潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]四环素类抗生素多西环素与大环内酯类抗生素阿奇霉素联合应用是为了提高疗效和延缓细菌耐药性的产生,临床上常用于治疗支原体感染以及呼吸系感染。然而,一些报道表明,这两种药物联合导致肝脏损伤,且致肝损害的分子机制尚不清楚,因... 详细信息

[目的]四环素类抗生素多西环素与大环内酯类抗生素阿奇霉素联合应用是为了提高疗效和延缓细菌耐药性的产生,临床上常用于治疗支原体感染以及呼吸系感染。然而,一些报道表明,这两种药物联合导致肝脏损伤,且致肝损害的分子机制尚不清楚,因此,本研究的目的是探索多西环素和阿奇霉素致肝损害的潜在分子机制,为预防和治疗这两种药物联合使用导致的肝损伤提供重要的参考价值。[方法]本研究以L02细胞为研究模型模型,单一和联合药物孵育细胞后,通过探索qPCR、Western blot检测代谢酶CYP1A1和CYP1B1,以及氧化应激基因HSP70、HO-1、NQO1、GCLC、AHR、ARNT、PXR和Nrf2的表达;用氧化应激指标检测试剂盒(8-OHdG、MDA、GSH、SOD、LDH和ROS)的变化;并且超表达和干扰CYP1A1和CYP1B1后加入药物,检测代谢酶在药物诱导的氧化应激中的作用。[结果]实验结果表明,多西环素和阿奇霉素以及联合使用可增加代谢酶CYP1A1和CYP1B1的表达,且氧化应激基因和指标也增加。同时,通过超表达或干扰CYP1A1和CYP1B1后加药,更加重了细胞的损伤,表明CYP1A1和CYP1B1介导了多西环素和阿奇霉素的氧化损伤。[结论]综上所述,本研究发现多西环素和阿奇霉素以及联合使用可通过CYP1A1和CYP1B1表达水平的增加而引起药物的氧化损伤,这将为多西环素和阿奇霉素以及联合用药时引起的药物性氧化肝损伤的治疗和预防提供参考价值。

关键词：多西环素阿奇霉素氧化损伤 CYP450酶

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Bacaucin分子抗菌机制研究

Bacaucin分子抗菌机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陈上宋玫蓉丁双阳朱奎北京食品营养与人类健康高精尖创新中心中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心中国农业大学动物医学院

[目的]研究环状脂肽bacaucin (杆农素)特异性抗金黄色葡萄球菌的作用机制,为筛选新型抗菌靶位点提供新思路。[方法]首先,采用亚抑菌浓度bacaucin连续诱导金黄色葡萄球菌的敏感菌株*** ATCC29213,使之在低浓度药物压力下产生耐药突变体... 详细信息

[目的]研究环状脂肽bacaucin (杆农素)特异性抗金黄色葡萄球菌的作用机制,为筛选新型抗菌靶位点提供新思路。[方法]首先,采用亚抑菌浓度bacaucin连续诱导金黄色葡萄球菌的敏感菌株*** ATCC29213,使之在低浓度药物压力下产生耐药突变体进而筛选bacaucin潜在抗菌靶点。随后,通过微量肉汤稀释法测定突变株对常用抗生素的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值,验证其是否与常用抗生素存在交叉耐药。其次,通过对敏感菌及两株耐药菌的全基因组测序,对所得全基因组序列进行单核苷酸突变位点(single nucleotide polymorphisms,SNP)分析。随后,通过结晶紫半定量分析敏感菌株和耐药菌株产生物膜能力的差异。最后,通过扫描电镜观察敏感菌株和耐药菌株的外部形态变化。[结果]在连续培养150天后获得对bacaucin最小抑菌浓度值分别升高4倍(R4)和64倍(R64)的耐药突变体。检测最小抑菌浓度发现敏感菌和两株耐药菌对羧苄青霉素,万古霉素以及达托霉素均敏感,无交叉耐药情况,表明bacaucin可能具有一种新的抗菌机制。分析全基因组数据发现高耐药菌株R64青霉素结合蛋白合成基因和fmtA基因发生突变。青霉素结合蛋白和FmtA蛋白都被报道与细菌细胞壁的合成有关,其中fmtA基因还与细菌生物膜的形成有关。通过结晶紫半定量分析发现耐药菌株R4产生生物膜的能力较敏感菌株*** ATCC 29213提升了近10倍,而耐药菌株R64几乎不产生生物膜。最后,采用扫描电镜观察敏感菌和耐药菌的外部形态变化,发现敏感菌株和耐药菌株R4细菌表面保持光滑,耐药菌株R64细胞表面发生变化,出现许多絮状凸起。[结论]Bacaucin可能通过与青霉素结合蛋白以及FmtA蛋白结合,影响细菌细胞壁的合成,从而有效杀死细菌。FmtA尚未报道为有效的金黄色葡萄球菌的抗菌靶点,本实验提示可以筛选靶向FmtA蛋白的药物,从而有效拮抗金黄色葡萄球菌。

关键词： Bacaucin 抗菌靶点单核苷酸突变位点细胞壁

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土壤中氟苯尼考及其代谢物的HPLC测定方法

土壤中氟苯尼考及其代谢物的HPLC测定方法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：马文瑾黄玲利国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院

[目的]建立土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法,为研究氟苯尼考在临床使用过程中的环境风险大小奠定基础。[方法]按照土壤学分类采集了壤土、砂土、砂壤土。土壤中的氟苯尼考及氟苯尼考胺使用水和丙酮进行提取,二氯甲... 详细信息

[目的]建立土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法,为研究氟苯尼考在临床使用过程中的环境风险大小奠定基础。[方法]按照土壤学分类采集了壤土、砂土、砂壤土。土壤中的氟苯尼考及氟苯尼考胺使用水和丙酮进行提取,二氯甲烷进行液液萃取,采用Agilent SB-C18（2504.6mm）色谱柱和等度洗脱（A:B=65%:35%）分离待测样品中的各组分。流动相A是磷酸盐缓冲液（pH=4.5）,B是乙腈,流速为0.8mL/min,进样量为20μL。[结果]在选定的色谱条件下,氟苯尼考及氟苯尼考胺在25-5000 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999。本方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为15ng/mL和50ng/mL。在空白土壤中药物添加浓度分别为1倍、2倍、4倍定量限（50、100、200ng/mL）。在壤土中,添加FF的批间回收率分别为97.08±7.22%,95.10±4.45%,99.37±5.74%,日内变异系数<2.74%,日间变异系数<9.12%,添加FFA的批间回收率分别为88.77±6.97%,92.57±6.27%,96.86±4.79%,日内变异系数<7.63%,日间变异系数<8.23%。在砂土中,添加FF的批间回收率分别为94.22±6.92%,93.34±4.30%,95.95±2.42%,日内变异系数<6.64%,日间变异系数<9.41%,添加FFA的批间回收率分别为87.16±4.76%,87.10±13.95%,88.39±6.97%,日内变异系数<7.77%,日间变异系数<9.35%。在砂壤土中,添加FF的批间回收率分别为97.55±6.72%,91.01±8.41%,90.16±4.77%,日内变异系数<2.36%,日间变异系数<10.52%,添加FFA的批间回收率分别为67.63±5.28%,81.42±9.65%,75.07±3.73%日内变异系数<7.83%,日间变异系数<8.68%。[结论]方法学研究结果表明,本试验建立的土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法适用于土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的测定。

关键词：氟苯尼考氟苯尼考胺土壤 HPLC

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蛴螬肽提取物通过Nrf2-ARE信号通路对H2O2刺激的肌卫星细胞保护作用的研究

蛴螬肽提取物通过Nrf2-ARE信号通路对H2O2刺激的肌卫星细胞保护作...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陈靖阳孙英健徐小艾曹硕沈红北京农学院动物科学技术学院/动物类国家级实验教学示范中心(北京农学院)

[目的]随着畜禽集约化养殖提高,养殖过程中氧化应激发生极为常见,氧化应激造成过量自由基产生影响畜禽的肉品质,骨骼肌的生长发育对畜禽的产肉性能有非常重要影响,而骨骼肌的损伤修复主要依赖于骨骼肌卫星细胞。前期研究发现,蛴螬经蛋... 详细信息

[目的]随着畜禽集约化养殖提高,养殖过程中氧化应激发生极为常见,氧化应激造成过量自由基产生影响畜禽的肉品质,骨骼肌的生长发育对畜禽的产肉性能有非常重要影响,而骨骼肌的损伤修复主要依赖于骨骼肌卫星细胞。前期研究发现,蛴螬经蛋白酶解获得的短肽具有较强的抗氧化作用,目前蛴螬肽对抗氧化机制未见相关报道,本研究探讨蛴螬肽对HO刺激的肌卫星细胞的保护作用,以期为未来开发蛴螬肽用于畜禽养殖过程中预防氧化应激提供实验依据。[方法]首先体外培养小鼠骨骼肌卫星细胞（C2C12）,然后将细胞分为空白对照组、HO组、蛴螬肽组、阳性药物对照组（TBHQ）,采用MTT、分光光度法、探针法、Westem Blot、荧光RT-PCR法、免疫荧光及单细胞凝胶电泳法检测C2C12细胞活力、抗氧化酶活力、过氧化物（MDA）含量、细胞内乳酸脱氢酶（LDH）泄漏率、活性氧（ROS）含量、细胞DNA损伤情况、Nrf2蛋白核移位情况、Nrf2和HO-1及凋亡相关蛋白表达。[结果]结果蛴螬肽在180-900μg/ml浓度范围内可提高HO刺激的C2C12细胞活力,与模型组比较蛴螬肽可减少细胞LDH泄漏率、降低细胞内MDA和ROS含量、提高抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力及基因表达、缓解DNA损伤、促进Nrf2核移位、上调Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达量,以及调节凋亡相关蛋白（bcl-2、Bax）表达。[结论]结果表明蛴螬肽可通过Nrf2-ARE信号通路提高C2C12细胞抗氧化能力,缓解其氧化损伤,减轻氧化应激引起的细胞凋亡。

关键词：蛴螬多肽 C2C12细胞 Nrf2-ARE信号通路抗氧化作用

来源：评论

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氟苯尼考胁迫下菜地土壤中氮循环及ARGs响应特征

氟苯尼考胁迫下菜地土壤中氮循环及ARGs响应特征

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王美谢希颖王勉之周亲刘俊林孙永学华南农业大学兽医学院/国家兽药安全评价(环境评估)实验室/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

[目的]抗生素在畜禽养殖生产中的大量使用,使得动物体及养殖场周围环境中的抗生素耐药菌日益增加,对人类健康和公共卫生安全造成威胁。氮循环是生态系统中重要的物质循环之一,抗生素在环境中的残留一定程度上阻碍氮循环进程,进而影响氮... 详细信息

[目的]抗生素在畜禽养殖生产中的大量使用,使得动物体及养殖场周围环境中的抗生素耐药菌日益增加,对人类健康和公共卫生安全造成威胁。氮循环是生态系统中重要的物质循环之一,抗生素在环境中的残留一定程度上阻碍氮循环进程,进而影响氮素平衡,扰乱环境微生物群落的功能代谢。通过监测抗生素进入土壤后对氮循环微生物及其耐药性造成的影响,有助于明确抗生素对菜地土壤微生物造成的危害。[方法]本文构建了氟苯尼考(FFC)-粪便-土壤模型,以FFC为胁迫因子,构建室内粪便-土壤模型,分别设空白组(0μg/kg)、低浓度药物组(0.167μg/kg)和高浓度药物组(16.67μg/kg),每组重复三次。于第1、3、7、14和30 d进行样品采集。采用宏基因组学和qPCR等技术分析FFC对土壤微生物耐药性和氮循环进程的影响。[结果]结果表明,低浓度FFC对土壤氮循环功能基因抑制范围广,而高浓度FFC抑制程度较大。此外,高浓度FFC明显提高土壤中floR、fexB、fexA耐药基因的丰度。FFC诱导了土壤微生物呈现不同的耐药图谱,表现在初期(1～3 d)部分优势ARGs类型丰度发生显著变化。研究还发现了高浓度FFC显著改变变形菌、放线菌、拟杆菌和厚壁菌菌群丰度,其中明显降低鞘脂单胞菌科中各类菌属丰度。值得注意的是,土壤理化性质是影响土壤优势菌属分布的主导因素。FFC还可降低蛋白质代谢功能,并影响大部分氮代谢功能;在氮代谢通路中,NO还原酶在FFC的胁迫下较敏感于其它酶,相关酶包括硝酸盐还原酶、亚硝酸盐还原酶和一氧化二氮还原酶亦呈现轻度响应。此外,FFC对携带氮循环基因丰度较高的菌属的影响随孵育时间延长而发生变化。[结论]总的来说,这些研究结果为养殖场合理使用兽用抗生素提供理论指导,也为评估抗生素引发微生物耐药性导致的环境生态风险提供参考数据。

关键词：宏基因组氮循环粪便氟苯尼考抗生素耐药性

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同时检测猪可食性组织中多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺的UPLC-MS/MS方法的建立

同时检测猪可食性组织中多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺的UPLC...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：朱敏娟黄玲利华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室

[目的]建立可以在猪可食性组织中同时检测多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺的UPLC-MS/MS方法,为后续研究多西环素与氟苯尼考复方混悬液在猪可食性组织中的残留消除规律奠定基础。[方法]称取2g猪可食性组织,以氨化乙腈和EDTA-Mcllvaine... 详细信息

[目的]建立可以在猪可食性组织中同时检测多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺的UPLC-MS/MS方法,为后续研究多西环素与氟苯尼考复方混悬液在猪可食性组织中的残留消除规律奠定基础。[方法]称取2g猪可食性组织,以氨化乙腈和EDTA-Mcllvaine缓冲溶液作为提取液,重复两次提取,于70℃条件下氮吹干,10%乙腈水复溶后上机待测。流动相A相为超纯水、B相为乙腈,流速为0.2mL/min,进样量为5μL,洗脱梯度如下:初始时,B相比例为5%,2分钟时,B相比例上升到10%,5分钟时,B相比例上升到20%,7分钟时,B相比例又逐渐下降到5%,并保持到8分钟。质谱采用电喷雾离子源(ESI),正负离子同扫模式,多反应监测(MRM)系统。[结果]猪肌肉、肝脏、肾脏组织中的多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺在20～2000μg/kg范围内均保持良好的线性关系,相关系数均大于0.999。方法的LOD (检测限)为1μg/kg,LOQ (定量限)为5μg/kg。在猪肌肉中,多西环素在20、100、200μg/kg添加浓度时,平均回收率为90.31-102.82%,日内变异系数小于4.72%,日间变异系数小于6.83%,而氟苯尼考与氟苯尼考胺在20、300、600μg/kg添加浓度时,平均回收率为91.73-98.82%,日内变异系数小于3.87%,日间变异系数小于5.66%;在猪肝脏中,多西环素在20、300、600μg/kg添加浓度时,平均回收率为84.56%-92.54%,日内变异系数小于4.26%,日间变异系数小于7.74%,而氟苯尼考与氟苯尼考胺在20、500、1000μg/kg添加浓度时,平均回收率为93.52%-101.57%,日内变异系数小于5.66%,日间变异系数小于7.28%;在猪肾脏中,多西环素在20、600、1200μg/kg添加浓度时,平均回收率为92.38%-103.54%,日内变异系数小于3.89%,日间变异系数小于5.89%,而氟苯尼考与氟苯尼考胺在20、500、1000μg/kg添加浓度时,平均回收率为88.66%-103.5%,日间变异系数小于4.29%,日内变异系数小于6.37%[结论]本研究建立的猪肌肉、肝脏、肾脏组织中同时检测多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺的UPLC-MS/MS方法在特异性、准确度、精密度、可重复性方面均良好,可满足猪组织中药物残留的检测要求。

关键词：多西环素氟苯尼考氟苯尼考胺猪可食性组织 HPLC-MS/MS

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