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大肠杆菌中携带tet(X4)基因的IncQ1型质粒特征分析

大肠杆菌中携带tet(X4)基因的IncQ1型质粒特征分析

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陈冲崔超月张燕吴小亭贺骞孙坚廖晓萍刘雅红国家兽医微生物耐药性风险评估实验室华南农业大学兽医学院

[目的]本课题主要是在前期研究的基础上,对我国大肠杆菌中携带替加环素耐药基因tet（X4）的IncQ1型质粒流行情况和特征进行研究。[方法]采用全基因组测序和Southern blot杂交技术对代表菌株大肠杆菌LHM10-1中的tet（X4）阳性质粒进行分... 详细信息

[目的]本课题主要是在前期研究的基础上,对我国大肠杆菌中携带替加环素耐药基因tet（X4）的IncQ1型质粒流行情况和特征进行研究。[方法]采用全基因组测序和Southern blot杂交技术对代表菌株大肠杆菌LHM10-1中的tet（X4）阳性质粒进行分析和定位。通过接合转移实验和质粒稳定性实验对该质粒向肠杆菌科细菌尤其是临床重要致病菌株的传播风险进行评估。结合overlapping PCR、最小抑菌浓度（MIC）测定、多位点序列分型（MLST）和质粒共线性分析,对携带该类型质粒大肠杆菌的分布情况、药物敏感性和亲缘关系等进行研究。[结果]大肠杆菌LHM10-1属于ST515类型,携带包括tet（X4）、mcr-1和bla在内的8类抗生素耐药基因。其中,tet（X4）基因位于大小为12.8 kb的IncQ1型质粒pLHM10-1-p6。该质粒能够高效地转移并稳定地存在于产NDM-5大肠杆菌和产KPC-2肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌中。携带mcr-1基因的IncX4、IncFⅡ和IncI2型质粒能够有效促进IncQ1型质粒pLHM10-1-p6的传播。通过overlapping PCR共筛选得到24株携带pLHM10-1-p6相似质粒的大肠杆菌,包括ST8302（n=16）、ST515 （n=6）、ST761 （n=1）和ST871 （n=1）四种类型。上述菌株均对替加环素、四环素、磺胺甲噁唑-二甲氧苄啶和氟苯尼考耐药,对头孢噻肟、黏菌素、环丙沙星和庆大霉素的耐药率在20%-35%之间,而对FDA最新批准的四环素类新药Eravacycline和Omadacycline的MICs也分别达到了4 ug/mL和8 ug/mL。质粒共线性分析结果表明,该类型质粒具有相似的复制区域和转移区域,而中间可变区域含有包括tet（X4）在内的多种耐药基因,且常与插入序列共同区ISCR2有关。[结论]IncQ1型质粒是tet（X4）基因在大肠杆菌中传播的重要载体,并且存在向人医临床进一步扩散的风险。因此,我们应当密切监测该类型质粒在人类、动物及周边环境中的流行情况并加以防控。

关键词：替加环素大肠杆菌 tet(X4) IncQ1型质粒

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Piezo1通道对细菌抗生素耐受性调控的力学生物学机制研究

Piezo1通道对细菌抗生素耐受性调控的力学生物学机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘晓晔韩益明韩飞黄建永朱奎北京食品营养与人类健康高精尖创新中心中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心中国农业大学动物医学院北京大学工程科学与新兴技术高精尖创新中心北京大学工学院

抗生素的过度和不合理使用导致全球性的耐药危机。上皮细胞介导的抗生素耐受性（antibiotic tolerance）促进了耐药性的进化。该种耐受性的发生依赖于细菌入侵的机械行为。Piezo1通道是调控细胞机械刺激的主要离子通道。然而,上皮细胞Pi... 详细信息

抗生素的过度和不合理使用导致全球性的耐药危机。上皮细胞介导的抗生素耐受性（antibiotic tolerance）促进了耐药性的进化。该种耐受性的发生依赖于细菌入侵的机械行为。Piezo1通道是调控细胞机械刺激的主要离子通道。然而,上皮细胞Piezo1通道对细菌抗生素耐受性形成的调控机制仍不清楚。[目的]因此,本课题期望从力学生物学的角度,揭示Piezo1通道调节耐受性形成的力学生物学规律。[方法]构建细菌细胞互作感染模型,采用活菌计数法和流式细胞分析术比较上皮细胞内和细胞外抗生素的杀菌效率和细菌感染比率。利用聚丙烯酰胺凝胶制作不同基底刚度凝胶,检测细胞牵引力的变化,从而比较不同上皮细胞硬度对抗生素耐受性的影响,以研究Piezo1通道对细菌抗生素耐受性形成的力学调控。采用蛋白印记,免疫荧光,CRISPRcas-9等技术研究Piezo1通道对细菌抗生素耐受性的力学信号转导,对其生物学信号通路级联反应和骨架蛋白动态变化研究,从而确定其分子生物学调控机制。[结果]结果表明,八种细菌均具有入侵上皮细胞的能力,其中蜡样芽孢杆菌（*** NVH0075/95）和大肠杆菌（*** ATCC25922）对环丙沙星的细胞外MBC和细胞内MBC分别从1μg mL提升到了70μg mL,以及从0.25μgmL提升到了150μgmL。这些细菌的入侵都依赖于piezo1的激活,免疫荧光的结果显示piezo1蛋白在细菌入侵细胞的位点聚集。暴露在硬基底的细胞更容易感染细菌,并且在硬基底上的细胞piezo1蛋白显著增加,Piezo1蛋白激活感知细菌的入侵,继而导致细胞内骨架微丝蛋白的动态平衡破坏,主要依赖于MLCK-MLC通路的激活加剧钙离子内流,传递细菌感染的力学信号为生物学信号。[结论]研究成果可为耐药性机制研究带来新的研究思路,为治疗和控制耐受菌的传播提供科学的理论依据和力学生物学的用药靶点。

关键词：抗生素耐受性 Piezol通道上皮细胞力学生物学机制

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蛴螬抗菌肽与抗菌药物合用对大肠杆菌抑菌的作用

蛴螬抗菌肽与抗菌药物合用对大肠杆菌抑菌的作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：薛皓月贺靖丰曹鹤鑫孙英健沈红北京农学院动物科学技术学院/动物类国家级实验教学示范中心(北京农学院)

[目的]大肠杆菌已出现许多耐药菌株,给临床医学用药带来极大不便。大肠杆菌耐药性的产生原因十分复杂,研究表明大肠杆菌是由质粒介导耐药性的细菌之一,细胞外膜通透性的改变和超量表达的主动外输系统是产生耐药作用的重要原因。中药对... 详细信息

[目的]大肠杆菌已出现许多耐药菌株,给临床医学用药带来极大不便。大肠杆菌耐药性的产生原因十分复杂,研究表明大肠杆菌是由质粒介导耐药性的细菌之一,细胞外膜通透性的改变和超量表达的主动外输系统是产生耐药作用的重要原因。中药对病原菌有突出的抑制作用因含有多种抗菌成分,研究表明,蛴螬体内含有许多种发挥抗菌作用的抗菌肽,抗菌肽是生物体合成的一种具有生物活性小分子多肽,有很强杀菌作用,对于耐药性病原菌有很好抑制作用。本研究探讨蛴螬多肽与抗菌药用对耐药性大肠杆菌抑菌作用的影响。目前研究普遍认为,改善肠道的环境、恢复正常的菌群是最好的抑制耐药质粒体内转移的方法,也可通过进行耐药质粒的消除。[方法]通过平板划线法纯化大肠杆菌,正交实验和离子层析法提取蛴螬抗菌肽,双缩脲法测定蛋白浓度,K-B法测定蛴螬抗菌肽抑菌效果,麦氏比浊法检测蛴螬抗菌肽MIC,微孔板稀释法检测蛴螬抗菌肽单独使用和联合用药时对大肠杆菌的抗菌效果。通过连续7天给昆明系小鼠灌服蛴螬抗菌肽制备含药血清,并检测含药血清对大肠杆菌的抑菌效果。[结果]结果显示蛴螬抗菌肽对大肠杆菌的MIC为32mg/ml;蛴螬抗菌肽为64mg/ml时对耐药性大肠杆菌的抑菌圈直径为14mm,即其对大肠杆菌有抑菌作用;高浓度的蛴螬多肽可以有效降低大肠杆菌对抗生素的耐药性,使用亚抑菌浓度(16mg/ml、8mg/ml)将蛴螬多肽与抗生素联用使细菌存活率明显降低,减小抗生素的MIC,蛴螬抗菌肽与多种临床常用抗菌中药(黄连、黄芩、金银花、连翘)合用时可以明显提高抑制大肠杆菌的能力,但小鼠含药血清抑菌效果不明显。[结论]本研究表明蛴螬多肽具有一定的抑制大肠杆菌的作用,且联合用药能提高抗生素和复方中药对耐药性大肠杆菌的抑菌作用,减少药物的使用剂量,减缓大肠杆菌耐药性的产生。为科学合理用药提供依据。

关键词：蛴螬多肽大肠杆菌抗菌作用

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食品动物源沙门菌CTX-M-55型超广谱β-内酰胺酶传播机制

食品动物源沙门菌CTX-M-55型超广谱β-内酰胺酶传播机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：常满霞丁晓敏张传珍章婧蒋红霞华南农业大学兽医学院国家兽医微生物耐药性风险评估实验室

[目的]探讨食品动物源沙门菌中bla型超广谱β-内酰胺酶传播机制,并对染色体上qnrS1-bla耐药基因岛与IncHI2-LT2型质粒的关联性进行分析。[方法]我们在前期研究中,已获得了两株可接合的bla沙门菌（OYZ4及PJM1）及其接合子（C-OYZ4、C-PJM... 详细信息

[目的]探讨食品动物源沙门菌中bla型超广谱β-内酰胺酶传播机制,并对染色体上qnrS1-bla耐药基因岛与IncHI2-LT2型质粒的关联性进行分析。[方法]我们在前期研究中,已获得了两株可接合的bla沙门菌（OYZ4及PJM1）及其接合子（C-OYZ4、C-PJM1）。通过复制子分型、S1-PFGE、Southem-blot杂交对质粒特征进行分析,并通过PacBio和/或Illumina对染色体及质粒全序列测序,PCR-mapping的方法分析bla基因环境。[结果]复制子分型与WGS测序生信分析发现,2株可接合bla沙门菌（OYZ4及PJM1）及其接合子（C-OYZ4、C-PJM1）均具有典型的IncHI2-LT2质粒骨架。S1-PFGE、Southem-blot杂交结果显示,OYZ4及其接合子C-OYZ4均携带～280kb的qnrS1-bla-IncHI2型耐药质粒,PJM1中没有检测到可自主复制的质粒,但bla基因及复制子型IncHI2均可检出,且定位于染色体,其接合子C-PJM1携带～250kb IncHI2-LT2型质粒,bla定位于该质粒上。进一步对PacBio和/或Illumina测序结果进行生信分析发现,PJM1染色体上携带bla、qnrS1、blaLAP-2、blaTEM-1等基因所形成的的耐药基因岛,且该基因岛上存在IncHI2-LT2质粒骨架,进一步的线性比对分析发现,该耐药基因岛与接合子C-PJM1携带～250kb IncHI2-LT2型质粒同源性达到100%。不同的是,在PJM1耐药基因岛的两侧是两个拷贝的同向插入序列TnAs1;而在C-PJM1携带的～250kb质粒上仅检测到单个拷贝的TnAs1。基因环境分析表明,定位于染色体和质粒上的bla基因具有相似的ISEcp1-bla-orf477转座单元,该转座单元将一完整的Tn2复合转座子的转座酶截断。[结论]耐药质粒不仅可以独立于染色体进行自主复制,也可以整合到染色体中形成耐药基因岛,伴随染色体复制而复制,插入序列TnAs1同源重组可能介导了质粒和基因岛之间的结构转换。ISEcp1-bla-orf477转座单元促进了bla基因在不同菌之间进行转移。

关键词：食品动物沙门菌 qnrS1 blaCTX-M-55 染色体、转移机制

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同时携带tet(X4)和mcr-1的ST1196型大肠杆菌菌株特征分析

同时携带tet(X4)和mcr-1的ST1196型大肠杆菌菌株特征分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：崔超月陈冲张燕贺骞吴小亭孙坚廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院国家兽医微生物耐药性风险评估实验室

[目的]本研究拟对我国广西省同时携带tet(X4)和mcr-1的大肠杆菌进行流行病学调查与菌株特征分析。[方法]对2017年8月采集于广西省4个猪场共计362个样品进行分离,使用含替加环素(2mg/L)和黏菌素(2mg/L)的麦康凯琼脂板筛选不敏感菌株,通... 详细信息

[目的]本研究拟对我国广西省同时携带tet(X4)和mcr-1的大肠杆菌进行流行病学调查与菌株特征分析。[方法]对2017年8月采集于广西省4个猪场共计362个样品进行分离,使用含替加环素(2mg/L)和黏菌素(2mg/L)的麦康凯琼脂板筛选不敏感菌株,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)对细菌种属进行鉴定,借助PCR对tet(X4)和mcr-1基因进行筛查。使用琼脂稀释法和肉汤稀释法测定菌株的最小抑菌浓度(MIC)。而后通过PFGE、接合转移、S1-PFGE及Southern杂交、全基因组测序(WGS)等技术对其亲缘关系、质粒结构、传播机制和基因遗传环境进行分析。[结果]本实验分离到4株同时携带tet(X4)和mcr-1基因的ST1196型大肠杆菌,其PFGE为同一谱型。MIC结果显示,4株菌株对头孢噻肟、磺胺甲噁唑/二甲氧苄啶、氟苯尼考、黏菌素呈现耐药表型,并对四环素类药物高度耐药,其中对替加环素,eravacycline和omadacycline的MIC值分别为8 mg/L、4 mg/L和16 mg/L。接合转移结果显示,有三株菌的tet(X4)基因成功接合转移至大肠杆菌C600,而mcr-1基因均成功转移。大肠杆菌G3X16-2的全基因组测序结合S1-PFGE及Southern杂交结果表明,tet(X4)位于大小为140.0 kb的IncF型质粒上(pG3X16-2-p2),mcr-1基因位于一个大小为265.6 kb的IncHI2型质粒上(pG3X16-2-p1)。其中,pG3X16-2-p2上含有4个串联重复ISCR2-catD-tet(X4)-ISCR2的基因结构,tet(X4)基因两侧均含有一个同向的ISCR2插入序列。[结论]同时携带了tet(X4)和mcr-1的大肠杆菌能够对替加环素和黏菌素这两种重要药物产生耐药性,给临床治疗带来了巨大的挑战,tet(X4)基因易通过质粒接合的方式进行水平传播。插入序列ISCR2与tet(X4)的传播密切相关。

关键词： tet(X4) mcr-1 ST1196 替加环素 ISCR2

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土霉素对室内抗生素-粪便-土壤模型中反硝化群落响应机制研究

土霉素对室内抗生素-粪便-土壤模型中反硝化群落响应机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：谢希颖林曼霞孙永学华南农业大学兽医学院/国家兽药安全评价(环境评估)实验室/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

[目的]随着畜牧业的发展,我国抗生素使用量日益增多。而抗生素被动物体摄入后大部分以原型或代谢产物的形式经粪尿等排泄物进入到环境中。反硝化是氮循环的重要组成部分,这一过程正受到环境中抗生素残留的干扰。为了评估土霉素残留对环... 详细信息

[目的]随着畜牧业的发展,我国抗生素使用量日益增多。而抗生素被动物体摄入后大部分以原型或代谢产物的形式经粪尿等排泄物进入到环境中。反硝化是氮循环的重要组成部分,这一过程正受到环境中抗生素残留的干扰。为了评估土霉素残留对环境中反硝化微生物群落的影响,本实验通过构建室内施粪菜地土壤的土霉素胁迫模型,对不同浓度土霉素条件下土壤中微生物结构、功能多样性以及反硝化主要功能基因的响应特征及过程进行系统研究。[方法]设置空白组、低浓度组(20μg/kg)、中浓度组(200μg/kg)和高浓度组(2000μg/kg),分别在1、7、14、30、60天采集土壤样品,运用实时荧光定量法检测各主要反硝化功能基因的丰度,通过T-RFLP技术分析反硝化功能基因多样性变化,使用HiSeq4000 PE150测序平台进行宏基因组测序研究菌群结构和功能多样性变化。[结果]低、中浓度土霉素对携带nirS、nirK基因的反硝化菌群有促进作用,而高浓度则表现为抑制作用。nosZ基因丰度在前30天无明显变化,而30天后则呈增加趋势。对nirS、nosZ进行末端限制性片段长度多态性分析,发现土霉素对土壤中携带有nirS、nosZ基因的优势片段无明显变化,而携带nirS基因的反硝化优势片段在后期发生了变化。对第1、30天各浓度土霉素胁迫下的土壤样品进行高通量测序,菌群注释结果显示,土壤中门水平优势细菌有变形杆菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)及厚壁菌门(Firmicutes)。而放线菌门(Actinobacteria)在第30天的相对丰度有所上升。功能注释结果表明第1天的"碳水化合物"代谢能力比第30天的强,而土霉素各浓度对其影响并不大,说明土壤中鸡粪的添加可能对微生物碳代谢的影响更大。另外,反硝化代谢功能第30天比第1天强,在反硝化通路中硝酸还原酶相对丰度最高,土霉素处理组的硝酸还原酶相对丰度亦比空白组高。此外,亚硝酸还原酶、一氧化二氮还原酶的相对丰度在第30天都有所上升,说明反硝化酶的表达可能受多种因素的共同影响。[结论]这些结果表明长期施加含有土霉素的畜禽粪便对土壤中氮肥会造成损失,甚至接抑制土壤菌群的生长,对土壤微生物造成破坏。

关键词：土霉素反硝化过程高通量测序反硝化功能基因

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同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林的UPLC-MS/MS方法的建立

同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林的...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王玉可陶燕飞王旭黄玲利袁宗辉谢书宇潘源虎华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU) 农业部食品安全评价重点开放实验室

[目的]本研究旨在建立同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林残留的UPLC-MS/MS检测方法。[方法]用2%的氨化乙腈提取样品中的目标化合物,重复提取,合并上清,于40℃水浴下氮气吹干,1mL流动相复溶,过滤膜,超高效液... 详细信息

[目的]本研究旨在建立同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林残留的UPLC-MS/MS检测方法。[方法]用2%的氨化乙腈提取样品中的目标化合物,重复提取,合并上清,于40℃水浴下氮气吹干,1mL流动相复溶,过滤膜,超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)进行分析。0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,电喷雾电离,正离子-多反应监测扫描模式。[结果]在猪肌肉、肝脏、肾脏组织中,磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑及艾地普林在20～2000μg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为1μg/kg和5μg/kg。在猪肌肉中,磺胺甲恶唑和乙酰磺胺甲恶唑在20、100、200μg/kg添加浓度下,平均回收率在92.3-105.3%范围内,日内变异系数小于5.2%,日间变异系数小于7.3%,艾地普林在20、50、100μg/kg添加浓度下,平均回收率在90.32-95.63%范围内,日内变异系数小于6.4%,日间变异系数小于8.3%;在猪肝脏中,磺胺甲恶唑和乙酰磺胺甲恶唑在20、100、200μg/kg添加浓度下,平均回收率在85.3%-93.6%范围内,日内变异系数小于4.8%,日间变异系数小于8.6%,艾地普林在20、50、100μg/kg添加浓度下,平均回收率在90.4%-98.6%范围内,日内变异系数小于3.6%,日间变异系数小于7.9%;在猪肾脏中,磺胺甲恶唑和乙酰磺胺甲恶唑在20、100、200μg/kg添加浓度下,平均回收率为91.2%-101.3%范围内,日内变异系数小于3.8%,日间变异系数小于6.4%,艾地普林在20、50、100μg/kg添加浓度下,平均回收率在86.5%-106.4%范围内,日间变异系数小于4.3%,日内变异系数小于5.6%[结论]本研究建立的猪肌肉、肝脏、肾脏组织中同时检测磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林的UPLC-MS/MS方法在特异性、准确度、精密度、可重复性方面均满足猪组织中残留检测的要求。

关键词：磺胺甲恶唑乙酰磺胺甲恶唑艾地普林猪可食性组织 UPLC-MS/MS

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基于lncRNA的T-2毒素致细胞损伤的机制初步探究

基于lncRNA的T-2毒素致细胞损伤的机制初步探究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陆启荣彭大鹏陶燕飞陈冬梅程古月刘振利谢长清袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从长链非编码RNA (lncRNA)角度诠释T-2所致的细胞损伤的机制研究,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一... 详细信息

[目的]T-2毒素是由镰刀菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,对人类和动物的生命健康造成很大的损伤与危害。本实验旨在从长链非编码RNA (lncRNA)角度诠释T-2所致的细胞损伤的机制研究,以期为T-2毒素新型解毒剂的研制和开发提供一定的理论依据。[方法]本研究一方面以大鼠为实验动物模型,开展T-2毒素(2mg/kg bw)7天毒性试验,检测T-2毒素对大鼠体重、生长激素、血常规指标和血生化指标的变化以及脑垂体基因芯片检测,寻找与T-2毒素所致的细胞损伤相关的lncRNA;另一方面以GH3细胞为模型,应用cDNA末端快速扩增技术扩增细胞损伤相关的lncRNA全长,并应用生物学软件对其分子特征和编码能力进行分析。此外,采用核质分离实验研究其细胞内分布情况。构建lncRNA的过表达载体并联合10 nM和40 nM T-2毒素研究其对细胞损伤相关基因(CYP450,线粒体呼吸链,凋亡,炎症)的影响,并应用流式细胞仪分析其对活性氧和凋亡的影响。[结果]实验结果表明,T-2毒素能明显导致大鼠体重和生长激素降低,谷草转氨酶和血糖浓度升高,尿素和甘油三酯降低。lncRNA-mRNA基因芯片联合分析显示lncRNA靶基因主要富集于线粒体分裂、代谢进程调控、个体和器官发育、应激反应调控等生物学进程。通过对细胞损伤相关的基因MSTRG10078全长和分子特征分析显示MSTRG10078全长为1964 bp,主要位于大鼠的1号染色体且不具有蛋白编码能力,命名为lncMSTRG10078。lncMSTRG10078在细胞核和细胞质均有分布,其胞核和胞质的分布比大约为5.5:4.5。lncMSTRG10078过表达能够在一定程度的拮抗10 nM和40 nM T-2毒素所引起的细胞损伤,集中体现在逆转40 nMT-2毒素所引起的细胞凋亡、线粒体功能改变、炎性因子释放、活性氧的产生以及线粒体相关代谢酶的变化,以此来拮抗T-2毒素对细胞的损伤作用。[结论]本研究发现lncMSTRG10078在T-2毒素所致的细胞损伤中的潜在机制,对T-2毒素产生的细胞损伤作用具有一定拮抗作用,为后期进一步诠释T-2毒素所致的细胞损伤机制以及新型T-2毒素核酸药物拮抗剂的研发奠定科学基础。

关键词： lncRNA T-2毒素细胞损伤拮抗

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中国畜牧兽医学会家禽学会分会第十五次全国家禽学术讨论会暨家禽学分会成立30周年庆祝大会优秀学术论文获奖人名单

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中国家禽 2011年第23期33卷 73-73页

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薄层色谱-高效液相色谱法检测猪可食性组织中氟苯尼考的总残留物

薄层色谱-高效液相色谱法检测猪可食性组织中氟苯尼考的总残留物

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：周丹娜李亚超黄玲利钱鸣蓉杨波湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北省病毒载体技术研究工程中心/武汉生物工程学院国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室浙江省农业科学院农产品质量标准研究所

[目的]氟苯尼考结合残留物在猪可食性组织中的蓄积威胁食品安全,影响养猪业的可持续发展。已报道的检测方法以色-质联用技术为主,且绝大多数不能检测氟苯尼考的结合残留物。本研究建立了一种猪可食性组织中氟苯尼考总残留物（以氟苯尼... 详细信息

[目的]氟苯尼考结合残留物在猪可食性组织中的蓄积威胁食品安全,影响养猪业的可持续发展。已报道的检测方法以色-质联用技术为主,且绝大多数不能检测氟苯尼考的结合残留物。本研究建立了一种猪可食性组织中氟苯尼考总残留物（以氟苯尼考胺计算）的薄层色谱-高效液相色谱法。[方法]均质的组织样品经过强酸水解以释放氟苯尼考结合残留物,同时将氟苯尼考及所有代谢物转化为氟苯尼考胺。组织水解物经冷却后以乙酸乙酯洗涤去除部分杂质。洗涤后的样品调节pH至碱性,然后以乙酸乙酯提取。于提取液（乙酸乙酯层）中加入适量冰乙酸溶液,并在50℃下空气流挥干乙酸乙酯。剩余的冰乙酸溶液经过正己烷脱脂和再次浓缩后以薄层色谱净化。薄层展开剂为乙酸乙酯-丙酮-氨水（2:8:0.5,v/v/v）。净化后的样品在Waters Symmetry C柱上以乙腈-磷酸盐缓冲液混合物（33.3:66.7,v/v）作为流动相进行分离,在225 nm检测。[结果]空白组织样品的色谱图中氟苯尼考胺保留时间附近未见杂质干扰,说明方法特异性良好;在0.0625-8μg/mL的浓度范围内氟苯尼考胺的浓度与峰面积呈现良好的线性关系,回归方程为y=282116x+9413.7,相关系数大于0.999;方法检测猪肌肉、肝脏、肾脏中氟苯尼考总残留物的最低检测限均为20μg/kg,最低定量限分别为40、50、40μg/kg;CCα分别为319.29、2060.03、526.96μg/kg,CCβ分别为340.29、2186.69、575.05μg/kg;方法检测猪肌肉、肝脏、肾脏中氟苯尼考胺的回收率分别为84.38%-109.47%、80.78%-94.02%和83.08%-98.64%,日间相对标准偏差≤8.99%,日内相对标准偏差≤11.27%。[结论]方法各项指标均符合欧盟2002/657/EC决议的要求,且检测成本低廉,特别适用于基层检测机构日常对猪可食性组织中氟苯尼考进行残留监控;方法以薄层色谱作为样品净化的手段,有效地去除了组织水解物中共存的内源性干扰物,确保了良好的特异性;方法将薄层色谱与高效液相色谱结合,有望弥补高效液相色谱在特异性上的不足,拓宽高效液相色谱在兽药残留分析中的应用。

关键词：薄层色谱法高效液相色谱法氟苯尼考总残留物氟苯尼考胺猪可食性组织

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