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2 篇 microrna
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6 篇 四川大学
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5 篇 北京大学
4 篇 南京农业大学
4 篇 沈阳农业大学
3 篇 中国科学院华南植...
3 篇 中国农业科学院植...
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3 篇 上海交通大学
3 篇 农业微生物学国家...
3 篇 塔里木大学
3 篇 北京农学院
2 篇 中国农业科学院植...
2 篇 浙江师范大学
2 篇 首都师范大学
2 篇 海南大学
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作者

5 篇 付艳苹
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5 篇 姜道宏
5 篇 谢甲涛
5 篇 程家森
4 篇 范振鑫
4 篇 房克凤
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3 篇 张卿
3 篇 石磊
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BBSV sat-RNA与复制酶结合能力对其复制的影响

BBSV sat-RNA与复制酶结合能力对其复制的影响

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：崔灿徐进张永亮王献兵韩成贵李大伟于嘉林中国农业大学农业生物技术国家重点实验室

卫星RNA(sat-RNA)是已知的通过依赖辅助病毒复制的最小的侵染物,利用本实验的材料甜菜黑色焦枯病毒(beet black scorch virus,BBSV)及其变异体BBSV-m294,sat-RNA体外转录物与BBSV的共接种实验结果表明,所获得的45个sat-RNA自发突变体(mu... 详细信息

卫星RNA(sat-RNA)是已知的通过依赖辅助病毒复制的最小的侵染物,利用本实验的材料甜菜黑色焦枯病毒(beet black scorch virus,BBSV)及其变异体BBSV-m294,sat-RNA体外转录物与BBSV的共接种实验结果表明,所获得的45个sat-RNA自发突变体(mutant satellite RNA,M sat-RNA)菌只能依赖BBSV m294的复制,而不依赖野生型BBSV进行复制。为了找到sat-RNA依赖辅助病毒复制的关键区,以BBSV sat-RNA为模板,构建出了不同的骨架重组及点突变体。设计特异探针Northern Blot验证其复制能力。得到BBSV sat-RNA复制关键区为510～615nt,并且由该区域的位点共同决定作用。此外,477～480位点处的茎环结构无论对于野生型还是突变型sat-RNA的均为正常复制所必须。为深入研究wt BBSV和BBSV-m294对于wt sat-RNA和mutant sat-RNA的复制能力的不同,通过原核表达并且纯化了wt BBSV和BBSV-m294删除p23重叠区的复制酶大亚基P82C蛋白,通过EMSA结合实验发现:在相同的条件下,wt BBSV的复制酶蛋白结合wt sat-RNA的能力强于结合mutant sat-RNA的能力。并且,BBSV-m294结合wt sat-RNA与mutant sat-RNA的能力几乎一致。以上结果表明,BBSV对于不同sat-RNA的复制差异与复制酶蛋白对其识别能力的不同有关。

关键词：复制酶 BBSV sat-RNA 复制能力病毒复制

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番茄抗南方根结线虫基因同源序列的克隆与分析

番茄抗南方根结线虫基因同源序列的克隆与分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：陆秀红黄金玲刘志明万宇力高淋淋广西农业科学院植物保护研究所广西作物病虫害生物学重点实验室广西大学农学院

根结线虫（Meloidogyne spp.）病是番茄（Solanum lycopersicum）的重要病害之一,选育和推广抗病品种是防治该病最经济、有效、安全的方法,利用基因工程技术获得抗病基因是一条新的抗病育种途径。本试验采用同源克隆（resistance-gene a... 详细信息

根结线虫（Meloidogyne spp.）病是番茄（Solanum lycopersicum）的重要病害之一,选育和推广抗病品种是防治该病最经济、有效、安全的方法,利用基因工程技术获得抗病基因是一条新的抗病育种途径。本试验采用同源克隆（resistance-gene analog,RGA）的方法,根据已克隆植物抗病基因的NBS（Nucleotide binding site）保守区域设计简并引物,对三份番茄抗根结线虫材料（TY52、T27、Bss368）基因组进行体外扩增,获得约500bp的预期片段;PCR产物目的片段克隆获得35条PCR扩增序列,其中3条序列具有完整开放阅读框（ORF）和NBS-LRR结构域。聚类分析结果显示,3条番茄RGAs（resistance-gene analogs）与马铃薯抗胞囊线虫基因Gpa2、番茄抗胞囊线虫基因Hero、番茄抗丁香假单孢菌基因Prf、番茄抗根结线虫基因Mi聚为一类,这三个基因为CC-NBS-LRR基因;这3条RGAs之间的相似性为35%7%;同源性分析表明,3条RGAs与已知抗病基因的NBS区域的氨基酸序列间的相似性差异较大,与Gpa2相应区域氨基酸相似性为36%3%、与Hero相应区域氨基酸相似性为32%7%、与Prf相应区域氨基酸相似性为34%1%、与Mi相应区域氨基酸相似性为34%1%。研究发现的RGAs可用于分子标记辅助育种和为功能性抗病相关基因的克隆奠定基础。

关键词：番茄南方根结线虫抗病基因同源序列

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抗烟草花叶病毒活性菌株的筛选及其活性物质的分离

抗烟草花叶病毒活性菌株的筛选及其活性物质的分离

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：赵磊侯彩婷郝兴安吴云锋旱区作物逆境生物学国家重点实验室与西北农林科技大学植物保护学院

植物病毒一直是农业生产中的一大危害,素有植物"癌症"之称。自然状态下,植物一旦感染病毒,便会终身带毒。全球每年因植物病毒病危害农作物而造成的损失高达200亿美元以上,病毒病的防治成为全世界植物保护工作者所面临的重要... 详细信息

植物病毒一直是农业生产中的一大危害,素有植物"癌症"之称。自然状态下,植物一旦感染病毒,便会终身带毒。全球每年因植物病毒病危害农作物而造成的损失高达200亿美元以上,病毒病的防治成为全世界植物保护工作者所面临的重要问题。寻找生物活性高、对作物安全、低毒、低残留、高效的抗病毒活性物质是一项艰巨的任务。随着分子生物学、有机化学以及现代分离技术的迅速发展,人们已在植物源以及微生物源抗病毒活性物质的研究方面取得了很大的进展。但是,人类对植物与微生物抗病毒资源的开发还远远不够,许多来自植物以及微生物的新化合物不断被发现,许多微生物的新属、新种不断被鉴定,同时许多新的抗病毒活性化合物也时有报道。本研究,采集秦岭高海拔地区野生植物以及土壤样品320余份,分离到放线菌约2 600株,细菌约460株,真菌约220株,所有菌株发酵后利用发酵液进行抗烟草花叶病毒筛选,最终筛选到7株抗病毒效果较好的菌株,其中4株放线菌、2株细菌、1株真菌。经形态学与16S基因测序初步鉴定一株抗病毒效果较好的细菌为解淀粉酶芽孢杆菌。制备该菌株LB培养基发酵液约50L,经过D101大孔树脂分离,得到8g 20%0%甲醇段活性组分。该活性组分再经过MCI材料分离后得到2g活性较高的组分,取活性部位进一步利用LH-20葡聚糖凝胶分离,最终得到200mg活性较高的组分。该组分经过核磁共振分析,鉴定其主要成分为多糖。酚硫酸法测定其多糖含量为78%。心叶烟半叶法测定该多糖组分在100μg/mL浓度时对烟草花叶病毒钝化效果为95%,治疗效果为76%。下一步将利用制备液相进一步纯化该多糖组分,并解析其结构,以及进一步研究其抗病毒机理。

关键词：抗病毒菌株活性物质抗病毒鉴定

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真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘四谢甲涛程家森姜道宏付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协... 详细信息

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进化。目前关于真菌病毒与寄主互作的研究主要集中在栗疫病菌弱毒病毒与栗疫病菌之间的互作,其他真菌病毒与寄主（病毒与核盘菌等）的互作体系也已陆续建立。前期研究过程中克隆得到真菌病毒BfHV-2/10HN454,该病毒基因组由6 251个核苷酸（不含Poly A结构）组成,含有两个推定的开放性阅读框（ORF）。ORF1编码具有RdRp结构域特性的蛋白,基于该结构域分析,病毒BfHV-2/10HN454与Hypoviridae科的病毒亲缘关系较近;ORF2推定编码的蛋白与人及动物的epidermal growth factor receptor（EGFR）pathway substrate（EGFRS）蛋白具有一定的相似性。其中与西印度海牛（Trichechus manatus latirostris）的EGFRS蛋白（XP04384482.1）相似性最高为25%,E值为0.053。保守结构域搜索发现该蛋白存在Chromosome segregation ATPases（Cell division and chromosome partitioning）保守结构域,E值为1.17e-07,并将该蛋白命名为EGFRS-1ike蛋白。EGFRS蛋白在生物体内与突触囊泡的回收和EGFR受体的内吞及其在质膜上的定位相关,但在病毒基因组中尚未见报道。该蛋白的类似基因为何会出现在真菌病毒BfHV-2/10HN454基因组中,其在寄主体内是否会表达并对寄主产生影响?为了解答该问题,我们通过农杆菌介导转化（ATMT）技术将该基因分别导入核盘菌和灰葡萄孢菌中,同时获得了生长缓慢、畸形扇变、菌丝尖端变细且分支增多、产孢量降低及致病力减弱的转化子;进一步通过DAPI染色及电镜观察细胞核,发现转化子的细胞核形态异常、核仁较少见且发生聚集现象。这些生物学表型与原始携带病毒BfHV-2/10HN454的菌株10HN454表型相似。说明该蛋白可能在核盘菌和灰葡萄孢菌中表达并且具有一定的功能,对寄主产生了一定的影响,相关分子机理研究正在进行之中。

关键词：真菌病毒 EGFRS-like蛋白病毒与寄主互作

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我国稻田常见杂草黑粉病的调查与鉴定

我国稻田常见杂草黑粉病的调查与鉴定

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：邓启得雍明丽李丹阳赖朝晖陈宏明樊晶金莉杨炳辉胡东维浙江大学生物技术研究所/水稻生物学国家重点实验室浙江省象山县植保站四川农业大学植保学院汉中市种子管理站

近年来,稻曲病在我国各主要稻区的发生不断加重,已经成为影响水稻丰产性的严重问题。但对于稻曲病菌完整生活史却缺乏全面的了解。目前的研究表明,稻曲病是一个孕穗期侵染的阶段性病害。稻曲病菌的厚垣孢子和菌核只在秋季产生,它们如何... 详细信息

近年来,稻曲病在我国各主要稻区的发生不断加重,已经成为影响水稻丰产性的严重问题。但对于稻曲病菌完整生活史却缺乏全面的了解。目前的研究表明,稻曲病是一个孕穗期侵染的阶段性病害。稻曲病菌的厚垣孢子和菌核只在秋季产生,它们如何成功越冬并在来年的秋季侵染成为揭示稻曲病菌生活史的关键问题。前期有多个研究报道了水稻常见田间杂草可能是稻曲病菌的中间寄主(alternative host),其中包括马唐、稗草和白茅草等。但上述研究缺乏对病原菌进行分子鉴定。从2006年开始我们对此问题一直给予高度关注,对包括这些杂草在内的水稻田间杂草进行了持续的观察。但极少有类似黑粉病和稻曲病症状的杂草植株。2013年,我们在浙江省象山县发现了成片的疑似马唐黑粉病的植株,并在四川雅安四川农大校园发现了疑似稗草黑粉病的植株。对两种病样孢子的扫描电子显微镜观察发现,其形态与稻曲病菌截然不同。rDNA-ITS序列分析表明,它们分别属于马唐黑粉病菌和稗草黑粉病菌。进一步的超微结构分析发现,这两种病菌为活体寄生真菌,但可直接侵入寄主细胞内部;在马唐茎部和穗轴的薄壁细胞中和细胞间隙中均存在大量的菌丝体,说明是系统性侵染病害。以上结果表明,我国尚未大批量的疑似稻曲病菌的中间寄主存在;也没有确认的中间寄主。因此,中间寄主在我国稻曲病的生活史和流行中的作用甚微。

关键词：稻曲病菌马唐稗草黑粉病中间寄主

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灰葡萄孢转录调控因子BcLTF1功能结构域的重组表达、纯化及晶体生长

灰葡萄孢转录调控因子BcLTF1功能结构域的重组表达、纯化及晶体生...

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：陈霞刘俊峰张国珍中国农业大学农学与生物技术学院植物病理学系

灰葡萄孢(Botrytis cinerea)寄主范围广泛,能够侵染200多种植物,由其引发的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害。灰葡萄孢的生长发育受光的调解,对其调解机制的研究引起了众多研究人员的关注。已有的研究表明,灰葡萄孢对不同波长的... 详细信息

灰葡萄孢(Botrytis cinerea)寄主范围广泛,能够侵染200多种植物,由其引发的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害。灰葡萄孢的生长发育受光的调解,对其调解机制的研究引起了众多研究人员的关注。已有的研究表明,灰葡萄孢对不同波长的光会作出不同的反应:紫外光诱导分生孢子的产生;红光促进菌核的发育;蓝光导致产生不分化的气生菌丝。BcLTF1是灰葡萄孢的光响应转录因子,又是一种新的含有GATA锌指结构的致病性相关蛋白,在光敏分化调节、活性氧的产生和去除以及次生代谢等方面都发挥了一定作用。为了深入了解BcLTF1感受光信号及其传递和调节致病的分子机制,本研究开展了BcLTF1功能结构域(含有GATA锌指结构的404-481的氨基酸)的重组表达、纯化和晶体生长等方面的工作,获得了如下结果。首先将合成的目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pRSET中,然后将构建好的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,通过添加终浓度为0.1mmol/L的IPTG诱导表达了带有YFP黄色荧光蛋白的表达产物。并选用Hitrap chelating Column柱进行亲和层析,初步纯化了该重组蛋白。Westernblot验证了所纯化的样品为含有标签的重组蛋白。进一步采用GE公司的SuperdexTM200凝胶过滤层析柱进行蛋白质样品的纯化和分析,结果表明该蛋白存在单体和二体两种形式。采用坐滴气相扩散法在16℃条件下对纯化的样品进行晶体生长条件的筛选和晶体培养的优化,初步筛选出了晶体的生长条件。上述试验结果为进一步解析灰葡萄孢中光响应转录因子和致病蛋白的晶体结构以及作用机制提供了参考和借鉴。

关键词：灰葡萄孢转录因子蛋白质的重组与纯化晶体培养

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MoPacC DNA结合结构域的重组表达、纯化及其与DNA结合的分析

MoPacC DNA结合结构域的重组表达、纯化及其与DNA结合的分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘怀安赵彦翔程先坤魏来陈小林杨俊刘俊峰彭友良中国农业大学植物病理学系/农业部植物病理学重点开放实验室农业生物技术国家重点实验室

MoPacC是稻瘟菌中pH信号途径中的一个重要调控蛋白,在稻瘟菌的菌丝生长、分生孢子发育、附着胞形成、侵染钉穿透寄主以及侵染菌丝在寄主体内扩展等环节都起着重要的作用。前期的研究发现MoPacC的49～158AA包含三个锌指结构,是其DNA结合... 详细信息

MoPacC是稻瘟菌中pH信号途径中的一个重要调控蛋白,在稻瘟菌的菌丝生长、分生孢子发育、附着胞形成、侵染钉穿透寄主以及侵染菌丝在寄主体内扩展等环节都起着重要的作用。前期的研究发现MoPacC的49～158AA包含三个锌指结构,是其DNA结合结构域。为深入了解MoPacC的调控机制,本研究利用大肠杆菌表达系统对MoPacC截断体进行了重组表达和纯化,期望获得其蛋白核酸复合物的晶体并解析其结构,从而为揭示MoPacC与DNA的结合模式及其调控机理提供结构基础。首先,将编码目标片段（49～158AA）的DNA片断克隆到一个pRSET-B的衍生载体中。所构建的质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,通过优化诱导条件确定了表达体系:18℃过夜诱导,诱导剂IPTG浓度为0.1mmol/L。然后,综合使用各种层析技术,对目标蛋白进行了纯化。在此过程中,采用差示扫描荧光分析（Differential Scanning fluorimetry,DSF）技术对纯化的缓冲体系进行了优化,确定了50mmol/L HEPES pH值=7.4,500mmol/L NaCl,1mmol/L DTT,2μmol/L ZnSO作为纯化缓冲液。在此条件下,制备了纯度高达90%以上的目标蛋白。纯化的MoPacC利用等温滴定量热（Isothermal Titration Calorimetry,ITC）技术进行DNA结合试验验证其是否与DNA结合以制备其复合物。GCCAAG被认为是MoPacC的特异DNA结合序列,ITC实验的结果表明MoPacC可以与含有特异结合序列的DNA（GCGCCAAGGCC）发生结合,结合比列为1:1,解离常数为（1.77×10～5±3.99×10～4）/mol。本研究采用大肠杆菌表达体系成功表达了目的蛋白MoPacC,获得了纯度高、聚集状态均一的目的蛋白。同时利用ITC技术确定了纯化的目标蛋白能够结合DNA（GCGCCAAGGCC）,为DNA复合物的制备提供了基础。

关键词： MoPacC 重组表达 DNA结合活性

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稻瘟病菌中一个假定的柠檬酸合成酶基因的功能分析

稻瘟病菌中一个假定的柠檬酸合成酶基因的功能分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：石磊郑文辉刘丽巧韩景华骆琼鲁国东 Li Guangpu 周洁王宗华福建农林大学功能基因组研究中心

稻瘟病是一种重要的水稻病害,几乎在全世界的各个水稻产区都有发生。深入了解稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）的致病机理,对于稻瘟病的防控有着重要的意义。糖代谢为稻瘟病菌的生理活动提供了大量的能量和物质,柠檬酸合成酶（Citrate sy... 详细信息

稻瘟病是一种重要的水稻病害,几乎在全世界的各个水稻产区都有发生。深入了解稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）的致病机理,对于稻瘟病的防控有着重要的意义。糖代谢为稻瘟病菌的生理活动提供了大量的能量和物质,柠檬酸合成酶（Citrate synthase）是糖代谢途径中一种关键酶,具有高度的特异性,其特异性催化乙酰辅酶A与草酰乙酸的缩合反应,生成柠檬酸和辅酶A。在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中,有Cit1p,Cit2p和Cit3p三个柠檬酸合成酶,它们分别在线粒体或过氧化物酶体中起作用。通过生物信息学分析,稻瘟病菌MGG7202基因编码的蛋白与酵母中Cit1p,Cit2p和Cit3p的同源性分别为71%,64%和46%。通过在线预测软件TargetP 1.1 Server,SignalP 4.1 Server和TMHMM Setver y.2.0分析结果显示,该蛋白定位于线粒体中,不含信号肽和跨膜结构域。利用同源重组的方法对该基因敲除得到三个突变体:△MoCit-1,△MoCit-5和△MoCit-11。表型分析发现,MoCit基因缺失突变体不影响孢子与菌丝的形态建成,但是在CM,OAM,RPA和SYM培养基中均表现出生长缓慢。对突变体进行产孢量分析发现,分生孢子数量较野生型减少。用菌丝块和孢子液接种大麦叶片证实,突变体的致病性减弱。说明MoCit在稻瘟病菌中可能通过调控糖代谢作用来控制菌体的生长发育及致病侵染。

关键词：稻瘟病菌柠檬酸合成酶糖代谢生物信息学

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玉米田常用除草剂对土传病害及土壤微生物群落结构的影响

玉米田常用除草剂对土传病害及土壤微生物群落结构的影响

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：李婉莹高增贵刘限姚远王晓东苏家沈阳农业大学植物免疫研究所

玉米是我国的重要粮食作物,除草剂为农产品增产、稳产提供重要保障,玉米田施用化学除草剂已十分普遍,除草剂对非靶标生物的影响受到广泛的关注。玉米土传病害是威胁玉米生产的一类重要病害,其中纹枯病、茎腐病和丝黑穗病发生尤为严重。... 详细信息

玉米是我国的重要粮食作物,除草剂为农产品增产、稳产提供重要保障,玉米田施用化学除草剂已十分普遍,除草剂对非靶标生物的影响受到广泛的关注。玉米土传病害是威胁玉米生产的一类重要病害,其中纹枯病、茎腐病和丝黑穗病发生尤为严重。本文选用玉米田常用的三氮苯类(莠去津)、磺酰脲类(烟嘧磺隆)、苯氧羧酸类(2,4-D丁酯)、三酮类(硝磺草酮)和酰胺类(乙草胺)5种除草剂,测定了5种除草剂在玉米苗期和成株期对玉米土传病害发生、玉米株高、产量及土壤微生物种群结构的影响。研究结果表明,除草剂对玉米主要土传病害发生呈现不同程度的影响,对玉米株高、茎粗及产量具有一定的促进作用。2,4-D丁酯抑制玉米苗期纹枯病和茎腐病的发生;施用莠去津和烟嘧磺隆促进玉米苗期纹枯病和茎腐病的发生;莠去津、烟嘧磺隆和2,4-D丁酯均抑制玉米成株期纹枯病的发生;高浓度的莠去津、烟嘧磺隆和2,4-D丁酯抑制玉米茎腐病的发生;莠去津、烟嘧磺隆和高浓度的2,4-D丁酯抑制玉米丝黑穗病的发生。施用不同浓度的除草剂后,土壤中细菌、真菌以及放线菌的种群数量均发生不同程度的变化,莠去津和烟嘧磺隆,对土壤中细菌、真菌及放线菌具有抑制作用;2,4-D丁酯对土壤中细菌的作用是抑制—促进作用,低浓度的2,4-D丁酯对真菌具抑制作用,高浓度的2,4-D丁酯则对真菌产生促进作用,对放线菌产生促进作用;硝磺草酮对土壤中真菌产生抑制作用,在低浓度时对细菌起促进作用,高浓度时则对细菌产生抑制作用,放线菌反之;乙草胺对土壤中细菌和真菌产生抑制作用,对放线菌产生促进作用。本文通过玉米田5种常用除草剂的温室模拟和田间试验,探讨除草剂、玉米及其土传病害、玉米根围土壤微生物之间相互影响关系,以便找到合适的玉米田除草剂使用方法和剂量,减轻除草剂在使用过程中给非靶标生物带来的不利影响,同时为减轻玉米土传病害发生、增加玉米亩产提供理论依据。

关键词：玉米除草剂土传病害土壤微生物

来源：评论

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核盘菌菌株PX14中携带病毒多样性分析

核盘菌菌株PX14中携带病毒多样性分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王其华程家森谢甲涛付艳苹姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学)

病毒混合侵染现象在受真菌病毒感染的真菌中普遍存在,核盘菌中感染ssRNA病毒的菌株均是被病毒复合侵染。前期筛选获得核盘菌异常菌株PX14,该菌株产生黄色色素但不产菌核,其致病力呈现弱毒特性。提取dsRNA发现菌株PX14中至少含有7条dsRN... 详细信息

病毒混合侵染现象在受真菌病毒感染的真菌中普遍存在,核盘菌中感染ssRNA病毒的菌株均是被病毒复合侵染。前期筛选获得核盘菌异常菌株PX14,该菌株产生黄色色素但不产菌核,其致病力呈现弱毒特性。提取dsRNA发现菌株PX14中至少含有7条dsRNA条带(按片段大小分别命名为dsRNA-A,B,As,C,D,E,F)。采用常规克隆dsRNA的策略,获得了dsRNA-A的cDNA部分序列及dsRNA-B、dsRNA-D及dsRNA-F的全长cDNA序列,并对获得的序列信息进行了初步分析。DsRNA-A是核盘菌中已报道Sclerotinia sclerotiorum hypovirus 1(SsHV1)的复制体形成,而dsRNA-As是SsHV1的一个卫星RNA。dsRNA-B全长含有8 152bp,编码三个推定的开放阅读框(0RF1,ORF2,ORF3),其中ORF1含有甲基转移酶(methyltransferase),解旋酶(viral helicase),依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp)保守结构域,三个结构域分别与Botrytis virus F(BVF),Botrytis virus X(BVX)和Sclerotinia sclerotiorum debilitation-associated virus(SsDRV)相应结构域有相似性;ORF2可能编码与病毒复制相关蛋白;ORF3未比对到任何保守结构域,未知其功能,但据已报道的BVF和BVX的基因结构推断ORF3可能编码病毒的外壳蛋白。多重比对及聚类分析表明dsRNA-B代表一种新的正单链RNA病毒的复制体形成,并将该病毒命名为Sclerotinia sclerotiorum ssRNA virus(SsR-V/PX14)。dsRNA-D和dsRNA-F的cDNA全长分别为1 828bp和751bp,由于dsRNA-D和dsRNA-F的5'末端序均与SsRV/PX14的5'末端序列类似,因此推测这两个dsRNA片段可能是SsRV/PX14的卫星RNA,目前正在对其作进一步的验证。由于存在于真菌中且类似于植物芜菁花叶病毒科病毒的报道现在仅限于BVF和BVX,这些类真菌病毒与典型的芜菁花叶病毒科相比,缺少运动蛋白,外壳蛋白的功能也没有进行完善的研究,而且它们的3'端是否存在芜菁花叶病毒科典型的三叶草结构,并没有进行相关验证。因此,在对这类真菌病毒的研究,将对人们更好的认识病毒的寄主适应性提供材料支持。此外,包括SsDRV,BVF,BVX以及本研究中SsRV/PX14在内的真菌病毒与植物芜菁花叶病毒科病毒的差异也将促使我们考虑命名新的病毒类型,从而更好的将这些病毒与传统的芜菁花叶病毒科病毒区分开来。目前,菌株PX14中的其他dsRNA片段正在克隆分析中。

关键词：真菌病毒核盘菌芜菁花叶病毒

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