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溶磷菌YM3-2S溶磷基因的克隆与表达

溶磷菌YM3-2S溶磷基因的克隆与表达

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：赵珂陈强四川农业大学资源环境学院

洋葱伯克氏菌(Burkholderia cepacia)YM3-2S 是一株具有溶解无机磷能力的细菌,本文根据已发表的 gabY 基因设计克隆引物,扩增得到 YM3-2S 的溶磷基因片段,连接扩增片段至克隆载体 pMD19-T 获得质粒 pD6034,将该质粒并转入 DH5α得到阳... 详细信息

洋葱伯克氏菌(Burkholderia cepacia)YM3-2S 是一株具有溶解无机磷能力的细菌,本文根据已发表的 gabY 基因设计克隆引物,扩增得到 YM3-2S 的溶磷基因片段,连接扩增片段至克隆载体 pMD19-T 获得质粒 pD6034,将该质粒并转入 DH5α得到阳性克隆子。序列分析表明,YM3-2S 的溶磷基因共421bp,与已报道的 gabY 基因相似性为97.49%。进而设计出表达引物,将扩增片段连接到 pET-30a(+)载体,在大肠杆菌 BL21(DE3)pLySs 中表达,重组子能产生溶磷圈,其培养液 pH 值明显下降;SDS-PAGE 分析该基因的表达产物, 表明该基因编码产物能直接分泌到胞外作用,这与出发菌株溶磷功能相吻合。

关键词： YM3-2S 溶磷动力学 gabY 克隆表达 SDS-PAGE

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微生物燃料电池中脱色希瓦氏菌S12的产电特性研究

微生物燃料电池中脱色希瓦氏菌S12的产电特性研究

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：李登兰许玫英孙国萍广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室

为了确定脱色希瓦氏菌 S12的电化学活性,采用循环伏安法（cyclic voltammograms,CV）对厌氧培养的菌株 S12进行曲线扫描,所得曲线表明 S12具有一定的电化学活性,可以用来进行产电实验。研究了不同电子供体和供体浓度对菌株 S12产电的影... 详细信息

为了确定脱色希瓦氏菌 S12的电化学活性,采用循环伏安法（cyclic voltammograms,CV）对厌氧培养的菌株 S12进行曲线扫描,所得曲线表明 S12具有一定的电化学活性,可以用来进行产电实验。研究了不同电子供体和供体浓度对菌株 S12产电的影响,结果表明,以浓度为10 mM 的不同有机酸（甲酸钠、乳酸钠和丙酮酸钠）分别作为电子供体时,乳酸钠产电量最大,其最大功率密度 Pmax 为21.93 mW/m,增加乳酸钠的浓度,菌株 S12的产电量也相应增加,当乳酸钠的浓度为20 mM 时,所产生的最大功率密度达55.72 mW/m。

关键词：电化学活性产电电子供体功率密度

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大孔树脂吸附-生物再生两步法处理高盐苯酚废水的研究

大孔树脂吸附-生物再生两步法处理高盐苯酚废水的研究

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：顾锡慧周集体张爱丽冯志军王学清尤涛大连理工大学环境与生命学院西安蓝深交换吸附材料有限责任公司

本文利用大孔吸附树脂吸附-生物再生两步法处理高盐苯酚废水。大孔吸附树脂 XDA-1 对苯酚的具有选择性吸附性,可以有效地吸附苯酚和无机盐。由于盐析作用,盐度增大促进苯酚在 XDA-1表面的吸附;拟二级动力学模型可对不同盐度条件下的苯... 详细信息

本文利用大孔吸附树脂吸附-生物再生两步法处理高盐苯酚废水。大孔吸附树脂 XDA-1 对苯酚的具有选择性吸附性,可以有效地吸附苯酚和无机盐。由于盐析作用,盐度增大促进苯酚在 XDA-1表面的吸附;拟二级动力学模型可对不同盐度条件下的苯酚吸附动力学进行较好的描述。微生物对脱附苯酚的降解作用促进了苯酚的脱附,从而树脂吸附容量的不断得到再生,在生物再生过程中,吸附质物理脱附是整个过程的限速步骤。循环再生实验结果表明 XDA-1吸附-生物再生法处理高盐苯酚废水效果稳定,6次再生效率仍可维持在81%以上,对 NaCl 的分离效率均大于99%。再生 XDA-1的大部分孔隙结构没有受到破坏,表面性质保持较好,由此可以认定生物再生是一种较为安全的再生方法。

关键词：苯酚吸附高盐废水生物再生 XDA-1

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降解苯丙烯酸和苯甲酸光合细菌的分离筛选和初步鉴定

降解苯丙烯酸和苯甲酸光合细菌的分离筛选和初步鉴定

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：程萍喻国辉陈燕红杨鹏陈远凤珠海市农业科学研究中心

本实验用以苯丙烯酸为唯一碳源的无机盐培养基筛选到6株能有效降解苯丙烯酸和苯甲酸的光合细菌。其中菌株3-1对0.5 g/L 苯丙烯酸的降解效果最好,降解率为99.09%, 而对更高浓度的苯丙烯酸的降解率却很低;菌株2-1对0.5 g/L 的苯甲酸的降... 详细信息

本实验用以苯丙烯酸为唯一碳源的无机盐培养基筛选到6株能有效降解苯丙烯酸和苯甲酸的光合细菌。其中菌株3-1对0.5 g/L 苯丙烯酸的降解效果最好,降解率为99.09%, 而对更高浓度的苯丙烯酸的降解率却很低;菌株2-1对0.5 g/L 的苯甲酸的降解率最高,其生物降解率为84.53%。通过细胞形态、菌落和培养特征、以及生理特性等研究,初步鉴定 1-2,2-1和2-3为红假单胞菌属菌株,2-2为红游动菌属菌株。其它两株3-1和3-2的培养特征和生理特性与紫色红假单胞菌的一样,但由于是 G菌,所以待定。

关键词：苯丙烯酸分离鉴定红假单胞菌属红游动菌属

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PCR介导的一步法敲除枯草杆菌基因及其应用

PCR介导的一步法敲除枯草杆菌基因及其应用

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：闫新于豪杰李顺鹏

将 PCR 和 Cre/loxP 定点重组系统结合实现便捷的不依赖于载体构建的枯草杆菌基因敲除同时实现抗性标记拯救。抗性标记片断两边含有突变的 loxP 位点,通过 PCR 方法将待敲除基因的上游片断(约1kb)、抗性标记片断(约1kb)和待敲除基因的... 详细信息

将 PCR 和 Cre/loxP 定点重组系统结合实现便捷的不依赖于载体构建的枯草杆菌基因敲除同时实现抗性标记拯救。抗性标记片断两边含有突变的 loxP 位点,通过 PCR 方法将待敲除基因的上游片断(约1kb)、抗性标记片断(约1kb)和待敲除基因的下游片断(约1kb) 融合。将 PCR 产物直接转化枯草杆菌感受态细胞,用相应的抗生素筛选发生基因敲除的菌株;把携带 Cre 重组酶基因的温敏型载体导入上述菌株;表达的 Cre 重组酶使两个突变的 loxP 位点间发生定点重组从而删除抗性标记,留下的双突变 loxP 位点对 Cre 重组酶亲和力极低而不会干扰下轮的操作;提高培养温度消除载体后最终获得突变株。整个敲除过程可以在几天内完成,大大提高了效率。

关键词： PCR Cre/loxP 定点重组系统枯草杆菌基因敲除

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乙肝病毒的体外抑制实验研究

乙肝病毒的体外抑制实验研究

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：董继华饶敏张淑玲华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室

探讨高三尖杉酯碱、干扰素α、羟基喜树碱和诺氟沙星这四种药物对乙肝病毒的体外抑制作用。利用 HBV 全基因组转染的人肝癌细胞系（HepG2.2.15）,采用 CPE 方法观察四种药物对 HepG2.2.15的毒性大小,在最大无毒浓度下,将药物加入 HepG2.... 详细信息

探讨高三尖杉酯碱、干扰素α、羟基喜树碱和诺氟沙星这四种药物对乙肝病毒的体外抑制作用。利用 HBV 全基因组转染的人肝癌细胞系（HepG2.2.15）,采用 CPE 方法观察四种药物对 HepG2.2.15的毒性大小,在最大无毒浓度下,将药物加入 HepG2.2.15培养8天收集培养液,用 ELISA 法和荧光定量 PCR 法分别测定药物对细胞培养上清中 HBsAg 和 HBeAg 及 HBV-DNA 的抑制作用。结果显示高三尖杉酯碱、干扰素α和羟基喜树碱在体外对乙肝病毒均有明显的抑制作用。诺氟沙星各浓度均未见对病毒有抑制作用。本实验为临床抗乙肝药物的研究提供了一定的理论依据。

关键词：高三尖杉酯碱 HepG2.2.15 HBVDNA 荧光定量 PCR

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酸性矿山废水环境中微生物生态及铁氧化系统研究

酸性矿山废水环境中微生物生态及铁氧化系统研究

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：肖升木谢学辉柳建设东华大学环境科学与工程学院

采用了不依赖于培养技术的可用于环境样品的16S rDNA 克隆文库方法,限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)方法,对采自东乡铜矿(江西省),银山铅锌矿(江西省), 云浮硫铁矿(广东省),中条山铜矿(山西省),大冶铜绿山铜矿(湖北省)等地的酸性矿... 详细信息

采用了不依赖于培养技术的可用于环境样品的16S rDNA 克隆文库方法,限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)方法,对采自东乡铜矿(江西省),银山铅锌矿(江西省), 云浮硫铁矿(广东省),中条山铜矿(山西省),大冶铜绿山铜矿(湖北省)等地的酸性矿山废水样品进行了微生物生态多样性分析。结果发现:不同来源的酸性矿山废水样品中微生物组成存在很大差异,有些样品中存在古菌,有些则无古菌。酸性矿山废水样品中检测到的细菌主要分为3大类:Proteobacteria,Nitrospira 和 Firmicutes。从来自东乡铜矿,银山铅锌矿和大冶铜绿山铜矿的酸性矿山废水样品中检测到了古菌。检测到的古菌主要是 Thermoplasma 和 Ferroplasma 属的,Sulfolobales 和 Methanothermus 属的古菌也有少量被检测到。通过样品地球化学性质与微生物组成的相关性研究发现,高浓度的 As 及其他金属离子比如 Cu,Fe,Zn 和 Ag 等似乎对样品中微生物群落结构起着重要的决定作用,尤其是对一些典型的铁氧化细菌(比如 Acidithiobacillus ferrooxidans(A.f)和 Leptospirillum 属的菌种)。

关键词：酸性矿山废水环境微生物微生物生态铁氧化系统

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Pseudomonas aeruginosa S6分泌的生物表面活性剂的特性

Pseudomonas aeruginosa S6分泌的生物表面活性剂的特性

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：强婧尹华彭辉叶锦韶秦华明张娜何宝燕暨南大学环境工程系

研究了1株铜绿假单胞菌 S6(Pseudomonas aeruginosa S6)产生的生物表面活性剂的理化性质。该生物表面活性剂的临界胶束浓度为50mg/L,此时其表面张力为29.3mN/m。pH 值对 S6产表面活性剂有较大的影响,在中性及弱碱性条件下,S6长势较好且... 详细信息

研究了1株铜绿假单胞菌 S6(Pseudomonas aeruginosa S6)产生的生物表面活性剂的理化性质。该生物表面活性剂的临界胶束浓度为50mg/L,此时其表面张力为29.3mN/m。pH 值对 S6产表面活性剂有较大的影响,在中性及弱碱性条件下,S6长势较好且表面活性剂表面张力较低。该生物表面活性剂对菲具有非常明显的增溶效应,使水中菲的溶解度增加了约 23倍。原油的加入有利于 S6产表面活性物质。与原油的相互作用说明该生物表面活性剂能够乳化原油且维持乳化液稳定性于82%以上;油浓度为6%～8%时,能达到最佳乳化效果。

关键词：生物表面活性剂铜绿假单胞菌菲原油

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生物强化SMBR降解溴氨酸的研究

生物强化SMBR降解溴氨酸的研究

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：王竞周集体宋国军曲媛媛吕红大连理工大学环境与生命学院

本文在序批式膜生物反应器(SMBR)中投加溴氨酸高效降解菌鞘氨醇单胞菌 QYY,对溴氨酸(BAA)废水进行了生物强化降解研究。在驯化过程中加入链霉素来促进强化菌在污泥中优势生长。结果表明经过一个月驯化后,系统达到稳定,并连续运行3个月以... 详细信息

本文在序批式膜生物反应器(SMBR)中投加溴氨酸高效降解菌鞘氨醇单胞菌 QYY,对溴氨酸(BAA)废水进行了生物强化降解研究。在驯化过程中加入链霉素来促进强化菌在污泥中优势生长。结果表明经过一个月驯化后,系统达到稳定,并连续运行3个月以上, 效果稳定,污泥浓度及膜通量基本不变;进水溴氨酸浓度为550ppm,降解时间12小时,脱色率为98%左右,COD 去除率大于50%,。进水浓度最大提高到2600ppm,降解时间延长至33小时,系统运行10天,溴氨酸脱色率达到97%,COD 去除率为52%。核糖体基因间区序列分析(RISA)显示稳定期活性污泥以强化菌 QYY 占优势,同时生物多样性下降。

关键词：生物强化溴氨酸序批式膜生物反应器鞘氨醇单胞菌

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PCR-DGGE法解析酵母菌处理高含油废水中的菌株归趋

PCR-DGGE法解析酵母菌处理高含油废水中的菌株归趋

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：吕文洲刘英杨敏宁波大学建筑工程与环境学院环境工程系中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室

通过优化了的反复冻融法对酵母菌处理高含油废水系统中的酵母菌基因组 DNA 进行了快速提取,并利用 PCR-DGGE 技术对不同菌株复合体系下各菌株在扩大培养和连续废水处理过程中的归趋进行了动态分析,结果表明:反复冻融法可以高效、快速提... 详细信息

通过优化了的反复冻融法对酵母菌处理高含油废水系统中的酵母菌基因组 DNA 进行了快速提取,并利用 PCR-DGGE 技术对不同菌株复合体系下各菌株在扩大培养和连续废水处理过程中的归趋进行了动态分析,结果表明:反复冻融法可以高效、快速提取环境样品中的酵母菌基因组 DNA 并适用于 PCR-DGGE 分析;DGGE 结果表明:能够降解废水中污染物的功能菌株并不一定可以定植于系统并成为系统中的优势菌株;在10株酵母菌菌株中, Candida tropicalis,Candida,lipolytica 和 Candida halophila 是系统中高效稳定菌株,其它菌株在扩大培养过程中即被淘汰。

关键词：酵母菌高含油废水处理 PCR-DGGE 菌株归趋

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