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排序：

Elevated atmospheric CO2 concentration effects on soil nitrification activity and ammonia-oxidizing bacteria in a Chinese rice-wheat rotation field

Elevated atmospheric CO2 concentration effects on soil nitri...

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者： HU Jun-li LIN Xian-gui CHU Hai-yan YIN Rui ZHU Jian-guo (State Key Laboratory of Soil and Sustainable Agriculture,Institute of Soil Science,Chinese Academy of Sciences,Nanjing 210008,China)(Joint Open Laboratory of Soil and the Environment,Institute of Soil Science and Hongkong Baptist University,Nanjing 210008,China)(Graduate University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China)

A FACE （free-air carbon dioxide enrichment） system in a rice-wheat rotation field, conducted from June,2001 at Wuxi,China,was used to investigate the effects of elevated atmospheric CO concentration on soil nitrification activity and ammonia-oxidizing bacteria （AOB）.Atmospheric CO concentrations were 200 μ*** higher in FACE plots than those in ambient ones,and two N fertilizer application rates （normal N and high N） were included in this *** elevated CO concentration altered the dominant species of AOB from Nitrosomonas *** Nitrosococcus *** Nitrosococcus *** Nitrosovibrio sp.,also decreased the number of soil AOB at normal N application rate while did not affect it at high N application *** under elevated CO concentration had lower nitrate-N contents but higher ammonium-N contents than those in the ambient,suggesting that elevated CO concentration decreased soil nitrification *** decreased nitrification activities were also observed in the subsequent incubation experiment,but the significant effect at normal N application rate lasted much longer than that at high N application *** results indicated that elevated CO concentration decreased soil nitrification activity in rice-wheat rotation fields,also altered the population and community composition of soil AOB,while N fertilizer application rate had a critical effect.

关键词： elevated atmospheric CO2 concentration soil ammonia-oxidizing bacteria nitrification activity N application rate

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Potential inhibitors against Sclerotinia sclerotiorum,produced by fungus Myrothecium *** with marine sponge Axinella sp.

Potential inhibitors against Sclerotinia sclerotiorum,produc...

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：谢练武姜淑梅孙伟朱红惠欧阳永长戴世鲲李翔 LMB-CAS LMM-GDSouth China Sea Institute of OceanologyChinese Academy of Sciences Guangdong Institute of Microbiology Guangdong Academy of Sciences

Sclerotinia sclerotiorum is a worldwide spreading ascomycete fungal plant pathogen,which causes enormous yield losses on major economic crops such as crucifer crops,grain legumes and several other plant *** objective of this research is to isolate and characterize some bioactive products from cultures of marine fungi associated with marine sponge Axinella sp. Totally 9 cultivable fungal isolates were obtained from marine sponge Axinella *** from the South China Sea.A group of test strains including two G strains （Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus）,two G strains （Escherichia coli and Pseudomon aseruginosa） and three fungi （Saccharomyces cerevisiae Hansen,two plant pathogenic fungi Sclerotinia sclerotiorum and Magnaporthe grisea） was employed as the indicate organism for bioactivity *** antagonistic test and bioactive screenings of the EtOAc extracts of the corresponding cultures, Fungal isolate JS9 showed the stronge efficacy against the test indicator strains especially the indicator fungal *** JS9 was further identified as Myrothecium *** a combination of morphological features and 18S rDNA BLAST on *** macrocyclic trichothecenes,roridin A （compound 1） and roridin D （compound 2） were purified and characterized by activity tracking method for fractionation of the EtOAc extract together with spectral analyses including MS,H-NMR,C-NMR and disortionless enhancement by polarization transfer （DEPT）.In vitro antifungal tests showed that the two macrocyclic trichothecenes were bioactive against ***,*** and *** with MICs of 31.25,125 and 31.25 μg/ml for roridin A,and 62.5,250 and 31.25 μg/ml for roridin D respectively. The present investigation demonstrated that two antifungal trichothecenes including roridin A and roridin D produced by marine fungus Myrothecium *** with marine sponge Axinella *** be potential inhibitors against plant pathogen *** the ror

关键词： Sclerotinia sclerotiorum roridin A roridin D Myrothecium sp. Axinella sp. activity tracking method

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选择16S rDNA不同高变区研究微生物群落多样性的比较

选择16S rDNA不同高变区研究微生物群落多样性的比较

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：李慧何晶晶张颖徐慧史荣久陈冠雄中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室

随着现代分子生物学技术在土壤微生物生态学研究中的应用,一系列基于16S rDNA-PCR 技术的微生物群落分析方法逐渐发展起来,使研究者能够在分子水平研究土壤微生物群落的多样性和结构组成。大多数研究通常采用一对通用引物扩增16S rDNA ... 详细信息

随着现代分子生物学技术在土壤微生物生态学研究中的应用,一系列基于16S rDNA-PCR 技术的微生物群落分析方法逐渐发展起来,使研究者能够在分子水平研究土壤微生物群落的多样性和结构组成。大多数研究通常采用一对通用引物扩增16S rDNA 基因的部分片段,但少数研究者提出由于引物位置的不同,16S rDNA 的 PCR 扩增存在很大种群偏倚性。在我们的前期研究工作中也发现,应用变性梯度凝胶电泳（Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）技术分析石油污染土壤微生物群落多样性时,选择细菌16S rDNA 上的不同高变区,导致 DGGE 图谱和群落指纹信息的偏差,直接影响石油污染与微生物群落多样性关系的阐明。本研究将在前期工作的基础上,以沈抚灌区石油污染土壤样品为研究对象,选择8对不同细菌通用引物,采用 DGGE 和扩增核糖体 DNA 限制性分析（Amplified ribosomal DNA restriction analysis,ARDRA）技术,通过群落多样性、丰度、均度和偏倚扩增种群等信息的综合分析,系统评价选择16S rDNA 不同高变区对微生物群落多样性研究的影响,研究结果将为以后类似工作提供科学依据。DGGE 分析结果表明,多高变区 PCR 扩增产物比单高变区获得的带型总数丰富;多高变区 V-V（8f-519r）区丰度最高,其次是 V-V（341f-907r）区和 V-V（968f-1401r）区,采用引物63f-518r 扩增 V-V区则条带丰度不高,获得带型总数最少的是 V-V（533f-907r）区;单高变区获得的带型总数 V （341f-518r）>V（41f-130r）>V（1070f-1392r）;基于 V-V（8f-519r）、V-V和 V-V 区 DGGE 指纹图谱分析获得的多样性指数 H 与总石油烃（TPH）含量呈显著负相关,而基于 V,区 DGGE 指纹图谱分析获得的多样性指数 H 与 TPH 含量呈显著正相关;由于降解石油烃优势种群的存在,石油烃污染较严重样点 DGGE 指纹图谱的均度较差（E=0.88-0.93）, 而污染较轻样点 DGGE 指纹图谱的均度稍好（E=0.95-0.98）。ARDRA 分析与 DGGE 结果基本一致,V-V（8f-519r）区 OTUs 总数最多（143个）,其次是 V-V区（109个）;优势 OTUs 测序结果表明,不同高变区在 PCR 扩增过程中存在很大的种群偏倚性,V-V（8f-519r）区选择扩增的优势类群为 Actinobacteria（15.4%）、Firmicutes（8.0%）、Chloroflexi（6.7%）、 Acidobacteria（6.0%）;V-V区选择扩增的优势类群为 Actinobacteria（23.8%）、B-Proteobacteria （10.1%）、Chloroflexi（9.1%）和 et-Proteobacteria（6.5%）;V-V区选择扩增的优势类群为 Chlamydiae（20.4%）、B-Proteobacteria（20.4%）、Firmicutes（11.1%）和 Actinobacteria（5.5%）;V区选择扩增的优势类群为γ-Proteobacteria（29.2%）、B-Proteobacteria（14.0%）、Actinobacteria （8.3%）和 Nitrospirae（7.3%）。综合以上结果,采用基于16S rDNA-PCR 的技术研究土壤微生物群落多样性和结构组成时,应慎重选择通用引物,至少选取2对以上引物进行研究, 且最好选择跨多个高变区的引物对;在研究石油污染土壤样品时,V-V（8f-519r）区和 V-V 区能够获得较高的种群丰富度。

关键词：高变区微生物群落多样性

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Microbial Degradation of Cyanide using Pseudomonas aeruginosa KT-C001 and Expression of Cyanide Hydratase Gene

Microbial Degradation of Cyanide using Pseudomonas aeruginos...

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者： Qiao Lin Sha Shengde Wang Liying Cao Xiaojin Xia Mian 1,Beijing Wei Ming Kai Tuo Agriculture Biotechnology Co.,Ltd.Beijing,100085 2,Institute of Nuclear and New Energy Technology,Tsinghua University,Beijing,100084

本室从清华大学环境工程系经多种工业废水长期培养驯化的活性污泥中分离到一株可以以氰化物为唯一碳、氮源的降解细菌 KT-C001。经形态、生理、生化实验和16srRNA 基因序列比对鉴定该菌为 Pseudomonas aeruginosa,己保藏于中国普通微生... 详细信息

本室从清华大学环境工程系经多种工业废水长期培养驯化的活性污泥中分离到一株可以以氰化物为唯一碳、氮源的降解细菌 KT-C001。经形态、生理、生化实验和16srRNA 基因序列比对鉴定该菌为 Pseudomonas aeruginosa,己保藏于中国普通微生物菌种保藏中心, 编号为 CGMCCl445。研究发现,该菌的静息细胞在52小时内对氰化物的降解率为78.45 %。菌体不仅可以降解氰化物,还可以利用苯、苯酚、甲苯、二甲苯和喹啉。通过 PCR 技术从 Pseudomonas aeruginosa KT-C001扩增到一段氰化物水合酶基因的片段 cya-1。经序列分析发现 cya-1的氨基酸序列与 Pseudomonas sp.的其它推测的氰化物水合酶基因的氨基酸序列相似性很高。经 RT-PCR 分析发现 cya-1的表达受到氰化物的诱导。体外表达后,重组蛋白的分子量约为34.7KDa,细胞上清液酶活为35.8mg/l-min-mg protein。纯化后的重组蛋白的酶活为859.2 mg/l-min-mg protein。测定了纯化后重组蛋白的酶反应动力学参数,结果如下: 底物浓度范围:0.3mM～0.6mM;米氏常数为0.27 mM;酶作用的最适温度和 pH 分别为35℃和7.5。Mn浓度在100μM～400μM范围内对酶活有促进作用。由于本文克隆的降解基因采用的模板序列是已测序的 Pseudomonas aeruginosa PAO1的基因组中的一个推测蛋白的基因,故可以认为本文克隆的氰化物水合酶基因 cya-1是一个证明有功能的新基因,这为今后构建降解氰化物的基因工程菌提供了良好的材料。

关键词： Pseudomonas aeruginosa 氰化物生物降解氰化物水合酶基因

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实验动物现状及发展趋势

实验动物现状及发展趋势

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：程水生中国兽医药品监察所北京100081

实验动物学(LaboratoryAnimalScience)是在现代科学带动下新崛起的一门综合性独立的新兴学科.它涉及到医学、生物学、兽医学、免疫学、微生物学、寄生虫学、传染病学、动物学、植物学、化学、物理学、畜牧学、遗传学、生理学、病理学、... 详细信息

实验动物学(LaboratoryAnimalScience)是在现代科学带动下新崛起的一门综合性独立的新兴学科.它涉及到医学、生物学、兽医学、免疫学、微生物学、寄生虫学、传染病学、动物学、植物学、化学、物理学、畜牧学、遗传学、生理学、病理学、营养学、建筑学、机械工程学、生态学、气象学等等.本文概述了实验动物发展现状与发展趋势，详细介绍了兽用生物制品实验动物的现状、存在问题及对策建议。

关键词：实验动物生物安全兽用生物制品

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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化

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2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善雷明军潘晖榕林绮萍张仁利高世同黄达娜广东医学院微生物学教研室深圳市疾病预防控制中心广东医学院微生物学教研室华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院华南农业大学兽医学院深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心

目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白, 并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T 载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白, 并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T 载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2, 构建pGEX-esat-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌JM109;PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用谷胱甘肽-琼脂糖亲合层析法纯化融合蛋白。结果PCR扩增出esat-6 288bp的基因,克隆到T载体中,经测序与GenBank中序列一致;随后亚克隆到表达载体pGEX-4T-2构建重组表达质粒,在JM109中表达了ESAT-6融合蛋白,表达的蛋白能被GST 免疫血清识别;通过亲和层析纯化获得的蛋白能被结核病人血清识别。结论成功构建esat-6重组表达质粒,该质粒在JM109中表达ESAT-6融合蛋白,并获得较纯的蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 表达纯化

来源：评论

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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化

引用

2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕张仁利高世同黄达娜广东医学院微生物学教研室深圳市疾病预防控制中心广东医学院微生物学教研室华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心华南农业大学兽医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心

目的构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段, 克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后... 详细信息

目的构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段, 克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pET-23a(+),构建pET-esat-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3);PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用His-BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。结果从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出esat-6基因片段,成功构建重组表达质粒pET-esat-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-16重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别。结论利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 Esat-6 表达纯化

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重组弓形虫GRA4的原核表达与纯化

重组弓形虫GRA4的原核表达与纯化

引用

2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：林绮萍吴少庭翁亚彪雷明军潘晖榕袁仕善温见翔秦莉黄达娜张仁利高世同华南农业大学兽医学院深圳市疾病预防控制中心华南农业大学兽医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心广东医学院微生物学教研室华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心

目的构建能在pET原核系统中高效表达的弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化。方法采用PCR方法自pMD18-GRA4(pGEX)重组子中扩增GRA4基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-23a(+),转化***21(DE3),以His·... 详细信息

目的构建能在pET原核系统中高效表达的弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化。方法采用PCR方法自pMD18-GRA4(pGEX)重组子中扩增GRA4基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-23a(+),转化***21(DE3),以His·BindTM柱亲和层析纯化表达产物;用此纯化重组蛋白加CFA经皮下注射免疫小鼠三次,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度。结果成功构建了重组表达质粒pET-GRA4,SDS-PAGE显示其表达产物约为40kD,主要以包涵体的形式存在,经亲和纯化后的pET-GRA4重组蛋白产量大、纯度高,能被兔抗弓形虫免疫血清所识别;免疫小鼠后亦可诱导产生出高滴度的特异性IgG抗体。结论利用pET原核系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究奠定了基础。

关键词：弓形虫 GRA4 原核表达蛋白纯化

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弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定

弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定

引用

2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系深圳市疾病预防控制中心分子生物室华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系华南农业大学动物医学系广东医学院微生物学教研室深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室深圳市疾病预防控制中心分子生物室

目的克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α... 详细信息

目的克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α。限制性酶切分析及测序鉴定后以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ双酶切pMD-18T-SAG2质粒与表达质粒载体Pet23a的BamHⅠ和SalⅠ多克隆位点,构建重组体Pet23a-SAG2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21 (DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。表达产物经金属鏊合层析纯化。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达与纯化产物。结果PCR扩增出约503bp的SAG2编码基因目的片段,与预期片段大小相符;所构建的PET23a-SAG2重组体阳性克隆经双酶切与测序鉴定,与预期结果一致。SDS-PAGE与免疫印迹显示,表达产物约18kD。结论成功构建PET23a-SAG2表达质粒,诱导表达并纯化出了弓形虫RH株SAG2蛋白,并以免疫印迹鉴定。

关键词：弓形虫 SAG2 克隆基因表达纯化免疫印迹

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SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究

SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究

引用

2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：秦莉吴少庭王西明袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕黄达娜温见翔高世同张仁利屈伸华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心华南农业大学兽医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院深圳市疾病预防控制中心广东医学院微生物学教研室深圳市疾病预防控制中心深圳市疾病预防控制中心华中科技大学同济医学院

目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1 和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两... 详细信息

目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1 和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的基因片段, 定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-S1和pVAC-S2重组质粒。并把它们通过Lipofectamine 2000 转染到HEK293细胞,RT-PCR和western-blot鉴定重组质粒在细胞中的转录和表达。构建的重组质粒直接免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及抗体亚类,流式细胞仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,并可在HEK293细胞中表达。免疫小鼠三次后,抗体滴度达到了1:3200。pVAC-S1诱导了高滴度的IgG2a,IgG2b和IgG1,pVAC-S2刺激产生高滴度IgG2a,IgG2b和较高滴度的IgG3。脾脏T淋巴细胞亚群分析CD3+和CD8+T细胞明显升高。结论构建的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2能在哺乳动物细胞中表达,免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。

关键词： SARS冠状病毒 DNA疫苗棘突蛋白

来源：评论

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