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文献类型

125 篇 会议
8 篇 期刊文献

馆藏范围

133 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

81 篇 农学
- 80 篇 兽医学
- 1 篇 畜牧学
68 篇 医学
- 36 篇 公共卫生与预防医...
- 25 篇 基础医学(可授医学...
- 21 篇 药学(可授医学、理...
- 9 篇 临床医学
- 1 篇 护理学（可授医学、...
3 篇 理学
- 2 篇 生物学
- 1 篇 化学
3 篇 工学
- 1 篇 建筑学
- 1 篇 土木工程
- 1 篇 化学工程与技术
- 1 篇 石油与天然气工程
- 1 篇 交通运输工程
2 篇 管理学
- 2 篇 公共管理

主题

15 篇 狂犬病
10 篇 狂犬病病毒
6 篇 弓形虫
5 篇 人兽共患病
4 篇 jev
4 篇 流行特征
4 篇 流行病学
3 篇 免疫原性
3 篇 分析
3 篇 三带喙库蚊
3 篇 原核表达
3 篇 血吸虫病
3 篇 监测
3 篇 布病
3 篇 乙脑病毒
3 篇 禽流感病毒
3 篇 库蚊黄病毒
3 篇 狂犬病毒
3 篇 疫情
2 篇 狂犬病疫苗

机构

13 篇 中国疾病预防控制...
10 篇 吉林农业大学
9 篇 中国农业科学院上...
8 篇 军事医学科学院军...
6 篇 中国疾病预防控制...
6 篇 吉林大学
5 篇 四川农业大学
5 篇 中国农业大学
4 篇 华中农业大学
3 篇 中国食品药品检定...
3 篇 云南省地方病防治...
3 篇 山东省疾病预防控...
3 篇 前郭尔罗斯蒙古族...
3 篇 农业部兽用药物与...
3 篇 延边大学
3 篇 中国疾病预防控制...
3 篇 中国科学院微生物...
2 篇 吉林省地方病防治...
2 篇 剑桥大学
2 篇 安徽农业大学

作者

16 篇 梁国栋
12 篇 付士红
9 篇 王环宇
7 篇 李浩
5 篇 陶晓燕
5 篇 曹玉玺
4 篇 马志永
4 篇 王力华
4 篇 曹三杰
4 篇 何英
4 篇 唐青
4 篇 文心田
4 篇 刘文军
4 篇 仇旭升
4 篇 涂长春
4 篇 张海林
4 篇 刘全
4 篇 高晓艳
4 篇 丁铲
3 篇 雷晓思

语言

133 篇 中文

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辽宁病毒研究进展

辽宁病毒研究进展

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：吕志梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性脑炎室

辽宁病毒（Liao ning virus, LNV）属于呼肠病毒科Seadonravirus病毒属,为12节段双链RNA病毒。该病毒自1990年代首次在我国东北地区采集的伊蚊标本分离以来,目前全球仅在中国境内北纬36-47°地区采集的多种蚊虫标本分离该病毒。200... 详细信息

辽宁病毒（Liao ning virus, LNV）属于呼肠病毒科Seadonravirus病毒属,为12节段双链RNA病毒。该病毒自1990年代首次在我国东北地区采集的伊蚊标本分离以来,目前全球仅在中国境内北纬36-47°地区采集的多种蚊虫标本分离该病毒。2005年以来,LNV陆续从中国新疆维吾尔自治区喀什地区的库蚊、巴音郭楞蒙古自治区的库蚊和背点伊蚊及阿勒泰地区背点伊蚊,青海省采集的凶小库蚊和山西省采集的背点伊蚊和淡色库蚊标本中分离到。其中,新疆南部喀什地区蚊虫标本的带毒率明显高于其它地区。对46株分离自新疆、青海、山西及东北等地区不同蚊种的LNV病毒的第10节段基因核苷酸序列进行分子遗传进化分析。结果显示,LNV可以分为3个基因型别。基因I型:由新疆喀什地区、新疆巴音郭楞蒙古自治州及新疆阿勒泰地区分离株组成;II型为1997年东北地区分离株（LNV-NE9712）、青海省和山西省分离株;而III型则由另一株1997年东北地区分离株（LNV-NE9731）则独立形成。各型别在进化地位上具有明显的地域分布特征。核苷酸同源性分析显示,3个基因型别辽宁病毒内部核苷酸同源性较高,大于94%;而型别间同源性较低,仅为72-76%之间。其中以1997年东北地区分离株LNV-NE9731变异最为明显。应用Bayesian方法对LNV病毒基因溯源分析显示,LNV病毒最早出现于318年前（95%可信区间为30-719年）的东北地区,病毒核苷酸进化速率为1.993×10/年,碱基变异速率明显大于其它常见虫媒病毒,提示LNV病毒时间发生并不久远,且处于快速变异过程中。该病毒首次接种小鼠,会引起小鼠虚弱乏力等症状,5天后康复。而再次接种后,小鼠于第4天死于鼻腔和皮下等多部位出血。病毒核酸可以从死亡小鼠的脾脏、血液,尾巴、四肢的匀浆液中检测到。目前,该病毒与人畜疾病关系尚待进一步研究。

关键词：核苷酸同源性分离株东北地区基因型别

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日本脑炎病毒基因Ⅰ型和基因Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立

日本脑炎病毒基因Ⅰ型和基因Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：张亮田耕石双艳袁磊刘澣扬黄小波伍锐文翼平曹三杰文心田四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站

日本脑炎病毒(JEV)是一种重要的人兽共患传染病病原,我国流行的日本脑炎病毒基因型为基因Ⅰ型和基因Ⅲ型。本研究为建立一种简单、快捷的鉴别JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的方法,通过对Genebank中登录的基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV核酸序列的比对分... 详细信息

日本脑炎病毒(JEV)是一种重要的人兽共患传染病病原,我国流行的日本脑炎病毒基因型为基因Ⅰ型和基因Ⅲ型。本研究为建立一种简单、快捷的鉴别JEV基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的方法,通过对Genebank中登录的基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV核酸序列的比对分析,分别确定了基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV基因型特异性序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1/P3和P2/P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应体系及反应条件的优化,建立了一种可快速鉴别JEV基因Ⅰ型和Ⅲ型的复合RT-PCR方法,并进行了特异性试验、灵敏性试验和重复性试验,同时利用建立的方法对采自四川省部分地区的27份临床样品进行了JEV的检测及基因型的鉴定。结果显示,以设计合成的PCR引物进行复合RT-PCR扩增,基因Ⅰ型JEV可得到与预期相符的381 bp的特异性条带,基因Ⅲ型JEV可得到与预期相符的550 bp的特异性条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合模板则同时出现381 bp和550 bp的2个特异性条带,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性,显示出较高的特异性;敏感性试验结果显示,该方法对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的最小检出量分别为2.0 pg和20 pg,敏感性很高;利用建立的复合RT-PCR方法对27份临床样品检测结果显示,共有7份样品为JEV阳性,其中5份为基因Ⅰ型,2份为基因Ⅲ型,基因型鉴定结果与核苷酸序列分析结果一致。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、结果可靠、快速简便等特点,可用于JEV的检测及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的鉴定。

关键词：日本脑炎病毒复合RT-PCR 基因Ⅰ型基因Ⅲ型鉴别

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利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系

利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：胡跃孙英杰王晓旭仇旭升宋翠萍谭磊胡桂学丁铲吉林农业大学动物科技学院中国农业科学院上海兽医研究所安徽农业大学

维甲酸诱导基因I型(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年才发现的一种细胞内的模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒的RNA,进而发挥抗病毒效应,是机体先天性免疫的重要组成部分。在病毒感染机体、在细胞内复制增殖时,R... 详细信息

维甲酸诱导基因I型(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年才发现的一种细胞内的模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒的RNA,进而发挥抗病毒效应,是机体先天性免疫的重要组成部分。在病毒感染机体、在细胞内复制增殖时,RIG-I能特异性地识别并结合这一过程中所产生的RNA,改变自身构象,与下游接头分子结合,开启信号通路,最终使机体发挥先天性免疫作用。RIG-I在进化中是保守的,鸡基因组内没有RIG-I基因,鸭和鹅则具有完整的RIG-I基因。新城疫和禽流感每次爆发都造成鸡的大面积感染,RIG-I可以识别并结合这两种病毒在细胞内复制时产生的RNA,这两者中是否存在联系,引起了很多研究人员的兴趣。本试验利用PiggyBac转座子系统,构建稳定表达鹅源RIG-I基因的鸡胚成纤维细胞(DF-1)系,为后续的试验研究奠定基础。本试验主要内容和结果如下:1.稳定表达鹅源RIG-I的鸡胚成纤维细胞的构建根据GenBank上的RIG-I序列,结合PiggyBac-513B-1载体序列设计出引物,以质粒Flag-RIG-I为模板进行PCR扩增,经酶切后将RIG-I与载体PiggyBac-513B-1相连,转染入细胞后使用嘌呤霉素进行筛选,经两次亚克隆获得单细胞株,将单细胞持续传代,收集样品验证稳定性。2.稳定表达细胞系的鉴定经两次亚克隆的细胞株持续传代,在第1代、第5代、第10代、第15代、第20代、第30代收取样品,分别用RT-PCR及Western Blot验证m RNA水平和蛋白水平RIG-I基因的表达情况,再以免疫荧光辅助验证,结果表明构建的细胞系持续传代性良好,可用于后续试验。

关键词： RIG-I 细胞系鹅 DF-1 PiggyBac

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猪源附红细胞体rnpB基因的克隆与序列比较

猪源附红细胞体rnpB基因的克隆与序列比较

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：王向佩周鹏米荣升沈莉萍黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权吉林农业大学动物科学技术学院中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海市动物疫病预防控制中心

RNA酶P RNA(RNase P RNA,rnpB)基因在微生物中是编码单一RNA的内切核糖核酸酶P,相比16S rRNA序列,rnpB基因具有较高的核苷酸变异率,更适合用于分类单元相近微生物之间的系统发育分析。为了解猪源附红细胞体(Mycoplasmaspp.)rnpB基因序... 详细信息

RNA酶P RNA(RNase P RNA,rnpB)基因在微生物中是编码单一RNA的内切核糖核酸酶P,相比16S rRNA序列,rnpB基因具有较高的核苷酸变异率,更适合用于分类单元相近微生物之间的系统发育分析。为了解猪源附红细胞体(Mycoplasmaspp.)rnpB基因序列变异状况,探讨其在附红细胞体分类中的作用,将实验室保存的经16S rRNA基因序列分析鉴定的53份猪源附红细胞体阳性DNA样品用于进行rnp B基因的扩增,扩增产物克隆到pMD18-T载体并进行序列测定。将获得的序列与GenBank登录的猪附红细胞体(Mycoplasma suis)德国分离株rnpB基因序列(登录号EF523602)进行分析和比对,利用MEGA5.0软件构建系统发育树,并与16S rRNA判定结果进行比较。结果共得到42条猪附红细胞体rnpB基因和11条小附红细胞体(M. parvum)rnpB基因序列。猪附红细胞体上海分离株rnpB基因与GenBank登录的猪附红细胞体德国分离株rnpB基因之间的核苷酸序列一致性在98.1%～100.0%;小附红细胞体上海分离株rnpB基因与猪附红细胞体德国分离株rnpB基因序列的一致性为91.0%,与猪附红细胞体上海分离株rnpB基因序列一致性在90.0%～91.0%之间。系统进化分析显示猪附红细胞体rnp B基因与小附红细胞体rnp B基因分布在不同聚簇上,与16S rRNA基因序列鉴定结果一致。

关键词：附红细胞体分离株基因序列序列比较

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新城疫病毒诱导原代鸡胚成纤维细胞自噬

新城疫病毒诱导原代鸡胚成纤维细胞自噬

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：王晓旭孙英杰胡跃仇旭升谭磊宋翠萍王桂军丁铲安徽农业大学动物科技学院中国农业科学院上海兽医研究所吉林农业大学动物科技学院

自噬(Autophagy)是进化学上保守的一种细胞内膜运输的过程,是细胞内物质成分转运至溶酶体被降解过程的统称,主要通过降解细胞中损坏的或不需要的成分来负责压力条件下细胞内环境的稳态。细胞自噬不仅调控细胞正常的生长代谢,还在抗外界... 详细信息

自噬(Autophagy)是进化学上保守的一种细胞内膜运输的过程,是细胞内物质成分转运至溶酶体被降解过程的统称,主要通过降解细胞中损坏的或不需要的成分来负责压力条件下细胞内环境的稳态。细胞自噬不仅调控细胞正常的生长代谢,还在抗外界微生物感染中发挥一定的作用。与逃逸先天性免疫机制类似,病毒在长期进化过程中也有了自身的一套逃逸细胞自噬对病毒的负面影响,甚至能够利用细胞自噬为自身服务。我们的前期研究证明,NDV能够在肿瘤细胞中如人脑胶质瘤细胞(U251)中诱导自噬产生。作为一种对养禽业危害巨大的疾病,NDV感染的宿主主要是禽类。鉴于禽和哺乳动物在细胞和组织上的种种差异,以及为了避免传代细胞的不稳定性,本实验以原代鸡胚成纤维细胞为模式细胞,从细胞自噬角度出发研究NDV的致病机理,试图以病毒与细胞互作机制为理论基础探寻新的抗病毒疗法。本研究首先以NDV感染CEF后,以电镜观察自噬体形成、GFP-LC3荧光迁移以及Western-blot检测LC3-I/II转化判定自噬。p62降解和GFP-LC3向溶酶体的转移判定自噬流。电镜结果显示:在感染后12-24h能在细胞中发现大量双层或单层膜结构;转染的GFP-LC3质粒在病毒感染后呈现显著的点状分布,尤其在NDV感染形成的合胞体中明显;且病毒感染后期发生明显的LC3-I向LC3-II的转化。NDV感染能够诱导p62蛋白的降解,共聚焦结果显示GFP-LC3在病毒感染中后期发生向溶酶体的转移,证明NDV感染能够诱导完整自噬流的产生。本研究首次以原代鸡胚成纤维细胞作为模式细胞研究NDV与自噬之间的关系,证实了NDV能够强烈诱导CEF自噬稳态和自噬流的产生,为进一步研究NDV的致病机理以及开发新型抗病毒药物奠定了基础。

关键词：新城疫病毒原代鸡胚成纤维细胞自噬自噬流

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甘肃省河西走廊地区2011-2012年虫媒病毒调查

甘肃省河西走廊地区2011-2012年虫媒病毒调查

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：付士红于德山査冰梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所甘肃省疾病预防控制中心

为了解甘肃省河西走廊地区蚊虫种类及其携带虫媒病毒特征等,本研究连续两年夏季(2011-2012年)在甘肃省河西走廊地区7个县(市)(武威、张掖、酒泉、兰州、白银、庆阳和金昌)采集蚊虫标本。蚊虫分类鉴定后液氮保存并运送至实验室备检。蚊... 详细信息

为了解甘肃省河西走廊地区蚊虫种类及其携带虫媒病毒特征等,本研究连续两年夏季(2011-2012年)在甘肃省河西走廊地区7个县(市)(武威、张掖、酒泉、兰州、白银、庆阳和金昌)采集蚊虫标本。蚊虫分类鉴定后液氮保存并运送至实验室备检。蚊虫标本研磨后采用组织培养法分离病毒,并对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定,利用生物信息学技术对新分离病毒的序列进行分析,完成同源性和系统发生分析。本项目共采集到蚊虫标本3属6种27760只,其中淡色库蚊和刺扰伊蚊为优势蚊种,淡色库蚊占采集总数的37.3%(10367/27,760),刺扰伊蚊其次占28.5%(7914/27,760),采集的蚊虫还还包括三带喙库蚊、中华按蚊、凶小库蚊、黄背伊蚊及蠓。2011年蚊虫标本分为339批研磨,分离到1株在BHK细胞引起病变的病毒分离物,分子生物学鉴定为盖塔病毒。此外,在32批蚊虫标本中检测到3种病毒核酸阳性,其中19批为库蚊黄病毒,4批为盖塔病毒,9批为辽宁病毒。其中酒泉和庆阳采集的蚊虫标本病毒阳性检出率最高。2012年蚊虫标本分为75批研磨,细胞培养法分离到35株病毒分离物,血清学及分子生物学系统鉴定发现其中32株为库蚊黄病毒,3株为辽宁病毒,其中武威蚊虫的病毒阳性检出率最高。库蚊黄病毒主要分离自淡色库蚊,少量分离自三带喙库蚊,辽宁病毒2株分离自淡色库蚊,1株分离自伊蚊。通过2年连续调查,发现甘肃省河西走廊地区8月份的优势蚊种为淡色库蚊和刺扰伊蚊。研究发现当地蚊虫中存在库蚊黄病毒、盖塔病毒和辽宁病毒等虫媒病毒。本研究还首次从当地蠓标本中分离到库蚊黄病毒。

关键词：虫媒病毒蚊虫库蚊黄病毒盖塔病毒辽宁病毒

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牛γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

牛γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：黄健黄大卢邹海涛杭柏林邵红霞叶建强钱琨金文杰秦爱建扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室扬州大学动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心

IFN-γ是由NK细胞和T细胞在一些诱导剂诱导作用下分泌产生的细胞因子,具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节的作用,由此,γ-干扰素一直成为生物科学关注的热点,至今用于预防和控制人类疾病的γ-干扰素主要是利用基因工程技术生产的,并且人γ-... 详细信息

IFN-γ是由NK细胞和T细胞在一些诱导剂诱导作用下分泌产生的细胞因子,具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节的作用,由此,γ-干扰素一直成为生物科学关注的热点,至今用于预防和控制人类疾病的γ-干扰素主要是利用基因工程技术生产的,并且人γ-干扰素比动物γ-干扰素得到更多的关注。但从1986年Cerretti报道牛IFN-γ基因后,就陆续有学者对其进行相关方面的研究。二十世纪九十年代,Wood等通过对IFN-γ的诊断建立了一种快速诊断牛结核病的方法,即在体外用特异性的牛型结核菌素刺激全血,然后用抗牛IFN-γ的单抗通过免疫学的方法检测释放到全血上清中的INF-γ水平,以此来诊断牛结核病。目前牛γ-干扰素检测牛结核的商用ELISA试剂盒在澳大利亚和欧美一些国家得到了广泛的应用,其特异性好灵敏度高,已被广泛的认可。本研究应用2株抗牛γ-干扰素特异性单克隆抗体6E5和3E1研制了牛γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法,并对最佳工作浓度、最佳作用时间进行了摸索和优化。结果建立以3E1为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记的6E5为酶标抗体最佳组合的双抗体夹心ELISA检测方法;最佳包被浓度2.5μg/ml;最佳酶标抗体工作浓度0.09μg/ml;样本和酶标抗体孵育时间均为60min。特异性良好,只与天然牛γ-干扰素和原核表达的His-BoIFN-γ反应。灵敏性较高,检测原核表达的His-BoIFN-γ的下限可达1.5ng/ml。包被酶标板批内重复系数和批间重复系数均小于10%,在允许的范围内。临床样本检测,与进口试剂盒符合率达96%,表明该方法能够有效地检测牛结核病,为我国牛结核病的检疫和根除提供一种实用、快速、有效的检测方法,具有重大的公共卫生意义。

关键词：牛结核牛γ-干扰素双夹心ELISA

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弓形虫酰基COA结合蛋白ACBP1和ACBP2的分析与原核表达

弓形虫酰基COA结合蛋白ACBP1和ACBP2的分析与原核表达

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：傅勇刘晶刘群中国农业大学动物医学院

酰基COA结合蛋白(Acyl-CoA-binding protein,ACBP)是一类高度保守的胞浆蛋白,广泛地存在于真核生物中,能够高特异性、高亲和力地结合不同长度的长链脂酰COA,发挥多种功能。本研究利用生物信息学在线分析工具对弓形虫ACBP1和ACBP2的氨基... 详细信息

酰基COA结合蛋白(Acyl-CoA-binding protein,ACBP)是一类高度保守的胞浆蛋白,广泛地存在于真核生物中,能够高特异性、高亲和力地结合不同长度的长链脂酰COA,发挥多种功能。本研究利用生物信息学在线分析工具对弓形虫ACBP1和ACBP2的氨基酸理化性质、信号肽、跨膜区、结构域、二级结构、三级结构等进行分析预测。结果显示,ACBP1编码区全长288bp,编码95个氨基酸;ACBP1蛋白亲水性较强,等电点7.78,不含有信号肽与跨膜区,二级结构中主要含有52.63%的α螺旋,29.47%的无规卷曲。ACBP2编码区全长936bp,编码311个氨基酸;ACBP2蛋白疏水性较强,等电点5.12,含有信号肽,不含跨膜区,二级结构中α螺旋占44.37%,无规卷曲占30.55%。ACBP1与ACBP2均含有一个结合脂酰COA的ACBP结构域,ACBP2还含有一个锚蛋白重复序列结构域,可能参与蛋白质之间的相互作用。利用同源建模的方式获得的ACBP1以及ACBP2的三级结构,显示ACBP1以及ACBP2的ACBP结构域均由4个α螺旋簇构成。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-ACBP1以及p GEX-6P-1-ACBP2。SDS-PAGE分析显示融合蛋白GST-ACBP1大小为36kD左右,GST-ACBP2大小为60kD左右,与预期分子量大小一致。以弓形虫RH株c DNA为模板,扩增ACBP1和ACBP2的编码序列,分别连接原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ACBP1和pGEX-6P-1-ACBP2,转化大肠杆菌感受太细胞Transetta(DE3),进行诱导表达,获得纯化重组蛋白ACBP1和ACBP2,为进一步研究ACBP蛋白家族的生物学功能奠定基础。

关键词：弓形虫 ACBP 脂肪酸代谢

来源：评论

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ncRNARli87基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境应激的影响

ncRNARli87基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境应激的影响

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：谢堃乔军孟庆玲彭叶龙赵海龙宋雪梅陈创夫才学鹏石河子大学动物科技学院动物疾病防控兵团重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧胞内寄生菌。该菌广泛存在于自然界中,易污染各种食品(肉、奶、海产品及蔬菜等),对环境的耐受性强,可在高盐浓度(可高达40%Na C1)以及宽泛的pH值(p H 3-12)... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧胞内寄生菌。该菌广泛存在于自然界中,易污染各种食品(肉、奶、海产品及蔬菜等),对环境的耐受性强,可在高盐浓度(可高达40%Na C1)以及宽泛的pH值(p H 3-12)和温度范围(0～45℃)环境中生长,是一种重要的人畜共患病原菌和四大食源性致病菌之一。最近的研究发现,非编码RNAs (non-coding RNAs, ncRNAs)对LM毒力和环境应激也发挥着重要的调控作用。为了解ncRNArli87对单核细胞增生李斯特菌环境应激的影响,本实验将rli87基因进行敲除,并利用同源重组技术构建ncRNArli87缺失株,将该缺失株在不同条件下进行培养测定其对环境适应能力。用单菌落计数的方法通过人工模拟高温、低温、高渗透压、酒精、酸碱性和氧化环境等应激反应,对比rli87缺失株与SB5野毒株活菌量。结果发现,与野毒株相比,rli87基因缺失株在低温、高温和常温的环境下OD600有上升趋势,表明rli87基因在温度应激中有着重要作用;两株菌在酸性环境下出现生长停滞;当pH=7环境下培养时,前4h缺失株的活菌量高于野毒株,6h开始野毒株活菌量明显高于缺失株;而碱性环境培养中的缺失株活菌量在整个时间段均高于野毒株,表明rli87基因在碱性环境应激中有上调的作用;根据活菌量计数,在高渗环境中野毒株与缺失株的生长差异不显著;在氧化环境下,两株菌出现生长停滞,活菌量计数随着时间的变化出现下降;3.8%ethanol环境中培养的12h内,缺失株的活菌量计数多于野毒株,前8h明显,后4h无明显差异;rsbV、rsbW、hpt、clp P、ctsR等环境应激基因转录水平均升高。本实验结果提示,rli87基因在LM对环境应激反应中有着重要的调控作用。

关键词：单核细胞增生李斯特菌同源重组 ncRNArli87基因环境应激

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JEV入侵BHK-21细胞内吞途径的初步研究

JEV入侵BHK-21细胞内吞途径的初步研究

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：曹三杰黄恒刘凯石双艳黄小波文心田四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站

目的利用Real-timeRT-PCR检测技术,对乙型脑炎病毒入侵细胞的内吞途径进行初步研究。方法将BHK细胞接种于96孔细胞培养板,选用氯丙嗪、制霉菌素和细胞松弛素D3种药物分别处理细胞,以分别阻滞网格蛋白介导内吞途径、细胞膜穴样内陷途径... 详细信息

目的利用Real-timeRT-PCR检测技术,对乙型脑炎病毒入侵细胞的内吞途径进行初步研究。方法将BHK细胞接种于96孔细胞培养板,选用氯丙嗪、制霉菌素和细胞松弛素D3种药物分别处理细胞,以分别阻滞网格蛋白介导内吞途径、细胞膜穴样内陷途径和巨胞饮途径,然后进行JEV感染实验。将样品处理收集后,抽提总RNA,并反转录成c DNA。通过Real-time RT-PCR方法测定感染后1 h、12 h、24 h细胞内的病毒拷贝数。读取样品c DNA模板的Ct值,然后通过标准曲线公式Y=-0.3007X+10.53计算出模板初始拷贝数。换算为样品模板拷贝数的平均对数值(log10 copies)后,所得数据用软件SPSS 13.0进行统计学分析。结果与仅实施感染实验、未进行药物处理的对照组比较,3种药物处理组的细胞内病毒拷贝数在感染后各时相点均呈现不同程度的下降,在感染1 h、12 h和24 h后,氯丙嗪处理组细胞内病毒拷贝数分别下降了59.58%,53.34%和61.35%;细胞松弛素D组细胞内病毒拷贝数分别下降了23.59%,30.77%和30.14%;制霉菌素组细胞内病毒拷贝数分别下降了35.56%,34.40%和34.40%,氯丙嗪+制霉素处理组分别下降了48.50%,68.56%,67.11%;氯丙嗪+细胞松弛D处理组分别下降了58.10%,60.30%,75.97%;制霉素+细胞松弛素D处理组分别下降了24.27%,51.20%,49.42%;氯丙嗪+制霉素+细胞松弛素D处理组分别下降了68.27%,73.00%,79.19%。结果显示:当3种药物单独作用时氯丙嗪处理的细胞测得病毒数量相比对照组下降最多;当两种药物组合作用时,含有氯丙嗪的药物组病毒数量下降最多;当三种药物组合作用时,测得病毒数量最少,对病毒入侵抑制效果最强。结论乙型脑炎病毒主要利用网格蛋白介导内吞途径进入BHK-21细胞,这与同属于黄病毒属的西尼罗病毒、登革热病毒进入宿主细胞的内吞方式一致。

关键词：乙型脑炎病毒实时荧光定量RT-PCR 内吞途径

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