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文献类型

125 篇 会议
8 篇 期刊文献

馆藏范围

133 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

81 篇 农学
- 80 篇 兽医学
- 1 篇 畜牧学
68 篇 医学
- 36 篇 公共卫生与预防医...
- 25 篇 基础医学(可授医学...
- 21 篇 药学(可授医学、理...
- 9 篇 临床医学
- 1 篇 护理学（可授医学、...
3 篇 理学
- 2 篇 生物学
- 1 篇 化学
3 篇 工学
- 1 篇 建筑学
- 1 篇 土木工程
- 1 篇 化学工程与技术
- 1 篇 石油与天然气工程
- 1 篇 交通运输工程
2 篇 管理学
- 2 篇 公共管理

主题

15 篇 狂犬病
10 篇 狂犬病病毒
6 篇 弓形虫
5 篇 人兽共患病
4 篇 jev
4 篇 流行特征
4 篇 流行病学
3 篇 免疫原性
3 篇 分析
3 篇 三带喙库蚊
3 篇 原核表达
3 篇 血吸虫病
3 篇 监测
3 篇 布病
3 篇 乙脑病毒
3 篇 禽流感病毒
3 篇 库蚊黄病毒
3 篇 狂犬病毒
3 篇 疫情
2 篇 狂犬病疫苗

机构

13 篇 中国疾病预防控制...
10 篇 吉林农业大学
9 篇 中国农业科学院上...
8 篇 军事医学科学院军...
6 篇 中国疾病预防控制...
6 篇 吉林大学
5 篇 四川农业大学
5 篇 中国农业大学
4 篇 华中农业大学
3 篇 中国食品药品检定...
3 篇 云南省地方病防治...
3 篇 山东省疾病预防控...
3 篇 前郭尔罗斯蒙古族...
3 篇 农业部兽用药物与...
3 篇 延边大学
3 篇 中国疾病预防控制...
3 篇 中国科学院微生物...
2 篇 吉林省地方病防治...
2 篇 剑桥大学
2 篇 安徽农业大学

作者

16 篇 梁国栋
12 篇 付士红
9 篇 王环宇
7 篇 李浩
5 篇 陶晓燕
5 篇 曹玉玺
4 篇 马志永
4 篇 王力华
4 篇 曹三杰
4 篇 何英
4 篇 唐青
4 篇 文心田
4 篇 刘文军
4 篇 仇旭升
4 篇 涂长春
4 篇 张海林
4 篇 刘全
4 篇 高晓艳
4 篇 丁铲
3 篇 雷晓思

语言

133 篇 中文

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日本乙型脑炎病毒Pr MΔE与tPA信号肽融合基因DNA疫苗的研究

日本乙型脑炎病毒Pr MΔE与tPA信号肽融合基因DNA疫苗的研究

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：刘凯孟丽军张亮黄小波文心田曹三杰四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站

本研究构建了日本乙型脑炎病毒(JEV)PrMΔE基因与人组织纤溶酶原激活剂(tPA)信号肽序列融合表达真核质粒pVAX-tPA-PrMΔE,并对构建的DNA疫苗进行了初步免疫试验研究。采用RT-PCR方法和重叠PCR方法分别扩增出日本乙型脑炎病毒PrMΔE基因... 详细信息

本研究构建了日本乙型脑炎病毒(JEV)PrMΔE基因与人组织纤溶酶原激活剂(tPA)信号肽序列融合表达真核质粒pVAX-tPA-PrMΔE,并对构建的DNA疫苗进行了初步免疫试验研究。采用RT-PCR方法和重叠PCR方法分别扩增出日本乙型脑炎病毒PrMΔE基因和tPA信号肽序列,并分别将其克隆至pMD 19-T载体,经鉴定正确后亚克隆至真核表达载体pVAX1,构建重组质粒pVAX-tPA-PrMΔE,对构建的重组质粒经鉴定正确后转染COS-7细胞,并利用间接免疫荧光试验检测质粒在细胞中的瞬时表达情况,同时利用制备的质粒免疫昆明小鼠,检测其JEV特异性血清IgG抗体水平、促脾淋巴细胞增长率,并以JEV CZ1株进行小鼠模型下的攻毒保护试验,进行DNA疫苗的攻毒保护率研究。结果显示,以RT-PCR方法和重叠PCR方法分别成功扩增出目的片段,通过对构建的重组质粒进行质粒PCR、酶切及测序鉴定,表明真核表达质粒pVAX-tPA-PrMΔE构建成功;间接免疫荧光试验结果显示重组质粒pVAX-tPA-PrMΔE在COS-7细胞中的表达产物可与鼠抗日本乙型脑炎病毒单克隆抗体发生特异性反应,显示出较好的反应原性;JEV特异性血清IgG结果显示,tPA信号肽序列的加入能明显增强PrMΔE基因DNA疫苗的特异性血清Ig G水平,且在42d后差异极显著(p<0.01);小鼠脾T淋巴细胞特异性增殖试验结果显示p VAX-tPA-PrMΔE组与空质粒对照组相、空白对照组相比差异极显著(p<0.01);攻毒试验结果显示本研究构建的重组DNA疫苗具有较好的攻毒保护率,能强有力的抵抗强毒株CZ-1的攻击。本研究成功构建了日本乙型脑炎病毒PrMΔE基因与tPA信号肽序列融合基因DNA疫苗(pVAX-tPA-PrMΔE),为日本乙型脑炎病毒基因工程疫苗的进一步研究及应用奠定了基础。

关键词：日本乙型脑炎病毒 PrMΔE基因 tPA信号肽序列 DNA疫苗免疫原性

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中国乙型脑炎参比实验室网络

中国乙型脑炎参比实验室网络

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：王环宇李艺星付士红曹玉玺高晓艳何英尹遵栋梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国疾病预防控制中心免疫规划中心

流行性乙型脑炎(Japaneseencephalitis,JE)简称乙脑,是由于蚊虫叮咬引起的人类严重中枢神经系统急性传染病,其病原体为流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)。我国于1951年将乙脑纳入传染病报告系统,属于法定报告乙类... 详细信息

流行性乙型脑炎(Japaneseencephalitis,JE)简称乙脑,是由于蚊虫叮咬引起的人类严重中枢神经系统急性传染病,其病原体为流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)。我国于1951年将乙脑纳入传染病报告系统,属于法定报告乙类传染病。2008年,乙脑纳入我国计划免疫后,乙脑报告病例显著下降,但每年仍有3千例左右,报告的乙脑病例仍以临床诊断病例为主。随着乙脑疫苗的广泛使用,乙脑的流行地域、流行趋势、年龄构成均发生了一定的变化。真实掌握我国乙脑发病的情况,急需提高乙脑报告病例的实验室诊断率,建立中国乙脑参比实验室网络势在必行。2011年11月由中国疾病预防控制中心发文正式组建以国家乙脑实验室为核心,涵盖贵州、四川、河南、上海、山东、浙江、广东、重庆、广西、云南,共10个省、市、自治区的乙脑实验室的中国乙型脑炎参比实验室网络。在2年的运行中,通过电话会议和实验室网络年度工作会议,逐步完善网络运行;通过实验室手把手培训、质控考核、标本复核检测等强化质量控制,标准化实验室检测方法,提高实验室检测质量及检测能力;通过现场评估与考核,进一步促进各省级乙脑参比实验室工作。目前,中国乙脑参比实验室网络建立并开始良性运转,乙脑报告病例的实验室检测率得到大幅提升,总体在85%以上。各省质控考核正确率和标本复核检测一致率均达到100%。中国乙脑参比实验室网络已经在乙脑报告病例的实验室检测率、质控考核正确率、标本复核检测一致率等等上升到新的水平。下一步重点是建立省内乙脑参比实验室网络,加强对各地、市、州级实验室培训,将乙脑检测工作推广到基层实验室,实验室检测工作前移从而提高乙脑报告病例标本采集率和实验室检测率。同时,通过考核评估后逐步纳入其他省级乙脑参比实验室进入网络,全面提高我国乙脑防控工作。

关键词：乙型脑炎参比实验室网络

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旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达及细胞因子水平的影响

旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达及细胞因子...

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：刘畅韩彩霞李巍路义鑫李晓云宋铭忻东北农业大学动物医学学院

旋毛虫是一种常见的重要人畜共患线虫,主要由于生食或半生食含有旋毛虫幼虫包囊的猪肉或者其他温血动物肉类而感染。经胃液和肠液的消化幼虫逸出,发育成的成虫所产生的新生幼虫随血液和淋巴循环迁移,最终侵入宿主肌细胞形成包囊,完成寄... 详细信息

旋毛虫是一种常见的重要人畜共患线虫,主要由于生食或半生食含有旋毛虫幼虫包囊的猪肉或者其他温血动物肉类而感染。经胃液和肠液的消化幼虫逸出,发育成的成虫所产生的新生幼虫随血液和淋巴循环迁移,最终侵入宿主肌细胞形成包囊,完成寄生的生活史。旋毛虫在肌细胞中的寄生过程中,排泄分泌抗原(ES)通过与免疫活性细胞如树突状细胞相互作用,不断刺激、调控宿主免疫系统来适应宿主环境。目的研究旋毛虫ES抗原对小鼠树突状细胞表面受体TOLL样受体家族的TLR4、转录因子家族的NF-κB和AP-1m RNA表达水平以及细胞因子IL-6、IL-10、IL-12、NO和TNF-α分泌情况的影响,为进一步探讨ES抗原调整树突状细胞免疫状态的分子机制建立基础。方法以细胞系DC2.4为研究对象,旋毛虫ES抗原和TLR4阳性刺激剂LPS为作用物质,分别设立以下组别:PBS组(空白对照组);LPS组;ES抗原组、ES抗原+LPS/ES抗原组和LPS+LPS/ES抗原组。在建立Gapdh(管家基因)、TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA荧光定量PCR检测方法基础上,采用实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)技术检测DC2.4 TLR4、NF-κB和AP-1基因m RNA相对表达水平变化,同时用ELISA方法检测细胞上清液中IL-6、IL-10、IL-12、NO和TNF-α分泌情况变化。结果成功建立Gapdh、TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA荧光定量PCR检测方法(染料法),ES抗原和LPS预作用组的TLR4、NF-κB和AP-1 m RNA表达水平较ES抗原和LPS单作用组均降低,且差异显著(P﹤0.05);IL-6、IL-10、IL-12、NO和TNF-α分泌水平分别较ES和LPS单作用组均降低,且差异显著(P﹤0.05)。结论实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达水平以及IL-6、IL-10、IL-12、NO和TNF-α分泌水平的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受。

关键词：旋毛虫ES抗原 TLR4 转录因子细胞因子实时荧光定量PCR

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我国分离到基因V型乙脑病毒

我国分离到基因V型乙脑病毒

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：李铭华付士红王环宇曹玉玺梁国栋中国疾病预防中心病毒病预防控制所病毒性脑炎室

乙脑病毒(Japanese Encephalitis virus, JEV)属于黄病毒科黄病毒属,为单股正链的RNA病毒。利用乙脑病毒E基因区段的1500 nt对JEV进行基因分型,将JEV分为基因Ⅰ～Ⅴ型,使JEV基因型的分布更具地域性和准确性,并得到广泛应用。我国JEV基... 详细信息

乙脑病毒(Japanese Encephalitis virus, JEV)属于黄病毒科黄病毒属,为单股正链的RNA病毒。利用乙脑病毒E基因区段的1500 nt对JEV进行基因分型,将JEV分为基因Ⅰ～Ⅴ型,使JEV基因型的分布更具地域性和准确性,并得到广泛应用。我国JEV基因型年代分布研究表明,在近30年间我国JEV发生了从基因Ⅲ型到基因Ⅰ型的演变。基因Ⅴ型JEV (Maur株)于1952年首次分离自马来西亚的脑炎病人标本。2009年8月在西藏自治区墨脱县采集的三带喙库蚊中分离到1株病毒(XZ0934株),经过血清学和分子生物学试验鉴定为基因V型乙脑病毒,这是时隔57年后该基因型JEV的再次出现。至此,在中国大陆至少有3个基因型(I, III, V型)JEV的循环。对XZ0934株的分子生物学特征分析表明,该病毒基因组全长为10983nt,从第96-10397位是一个单一开放读码框(ORF),长度为10302nt,编码3433个氨基酸。XZ0934病毒株与G I-G IV乙脑病毒全基因组核苷酸同源性为78.4%(G I KV1899)-79.7%(G III CC27-L1),差异达20.3%-21.6%;氨基酸同源性为90.0%(GIKV1899)-91.8%(GIIIK87P39),差异达8.2%-10.0%。与目前已知的4个基因型别乙脑病毒全序相比,XZ0934株在开放读码框NS4a区段比其他JEV都要多3个核苷酸(AGC),相应地多编码1个氨基酸(丝氨酸)。XZ0934病毒株3’UTR区较其他基因型JEV在终止密码子下游插入多个核苷酸。XZ0934病毒在E基因区段的3个功能结构域存在多个氨基酸变异,因此研究这些差异位点对病毒生物学和对机体免疫应答方面的反应以及现有疫苗对基因V型JEV的保护等是急需开展的研究课题。2010年韩国在采集的蚊虫中也检测到基因Ⅴ型JEV的核酸。时隔50多年后在中国和韩国再次分离和检测到基因Ⅴ型JEV,提示该病毒已经开始在世界重新流行。由于Muar株JEV首先分离自病毒性脑炎病例患者标本,提示该病毒具有较强致病力,因此该基因型病毒感染所引起的疾病负担是值得十分关注的课题。

关键词：乙脑病毒基因型核苷酸 JEV

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蚊虫中坦布苏病毒的分离及病毒全基因组序列分析

蚊虫中坦布苏病毒的分离及病毒全基因组序列分析

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：雷雯雯郭晓芳付士红周红宁梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所云南省寄生虫病预防控制所

2012年在云南省南部中老缅边境地区采集三带喙库蚊标本中分离到两株病毒(YN12115和YN12193),病毒可以引起蚊虫细胞和哺乳动物细胞规律病变,通过病毒分子生物学方法,和生物信息学等对这两株病毒基因组进行核苷酸序列测定和分析,结果显示... 详细信息

2012年在云南省南部中老缅边境地区采集三带喙库蚊标本中分离到两株病毒(YN12115和YN12193),病毒可以引起蚊虫细胞和哺乳动物细胞规律病变,通过病毒分子生物学方法,和生物信息学等对这两株病毒基因组进行核苷酸序列测定和分析,结果显示,这两株病毒属于坦布苏病毒(Tembusuvirus,TMUV)。负染电镜观察显示,病毒粒子直径为50nm。YN12115和YN12193病毒基因组编码区全长均为10278nt,含有一个开放阅读框,编码3425aa,两株病毒间核苷酸同源性为94%,推导氨基酸同源性为98.2%。基因组编码区和病毒E基因序列分析显示,YN12115和YN12193株与东南亚(马来西亚、泰国)TMUV分离株核苷酸和推导氨基酸同源性最高。其中,YN12115与1955年分离自马来西亚的TMUV原型株MM1775株的编码区同源性最高,核苷酸同源性为91.8%,氨基酸为98.4%;YN12193与MM1775株的编码区氨基酸同源性最高,为97.5%。YN12115、YN12193与泰国分离的蚊媒TMUV(Thai-MLO305株、Thai-JSL385株、ThCar105/92株)和禽源TMUV(AFRIMS-D129-014/157株、AFRIMS-D099-014/161株、AFRIMS-D119-014/150株)间的E基因同源性最高,核苷酸同源性均在95%以上,氨基酸同源性均在97.4%以上。编码区和E基因系统进化分析结果表明,YN12115和YN12193株与2010年以前分离的东南亚(马来西亚、泰国)TMUV同处一个进化分支,而2010年以后分离的中国禽源和蚊媒TMUV共同构成一个进化分支。本研究结果首次证明了TMUV分为两个进化分支,一个为TMUV中国大陆分支,一个为TMUV东南亚分支。该研究结果对TMUV的遗传进化及跨物种传播机制的理解具有重要意义。

关键词：坦布苏病毒三带喙库蚊基因组进化分析

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空间流行病学在流感病毒防控中的应用

空间流行病学在流感病毒防控中的应用

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：武专昌马志永中国农业科学院上海兽医研究所

流感病毒的传播与病毒变异、生态系统、养殖模式、人群因素、环境变化等因素密切相关,近年来不断有新型流感病毒的出现与感染人致死的报道,及时评估新型流感的风险、预测流行趋势并采取适当的防控措施尤为重要。空间流行病学能利用地理... 详细信息

流感病毒的传播与病毒变异、生态系统、养殖模式、人群因素、环境变化等因素密切相关,近年来不断有新型流感病毒的出现与感染人致死的报道,及时评估新型流感的风险、预测流行趋势并采取适当的防控措施尤为重要。空间流行病学能利用地理信息系统、遥感技术和空间分析技术,描述和分析人群疾病、健康和卫生事件的空间分布特点及发展变化规律,探索影响流感传播的决定因素,为流感防控和公共卫生服务提供策略和措施。HPAIV H5N1在基于不同地区、农业生态系统、空间模型研究和时空传播模式的风险因素模型分析表明,影响H5N1暴发的共同因素是家养水禽密度、人口密度等人为因素和地表水分布。而我国的H5N1的风险监测与水禽密度、人群密度和地表水覆盖面积相关,临床疾病发生主要与鸡群密度、人群密度和低海拔相关。2004-2006年越南HPAI的流行的潜在风险因素与稻田面积,水鸟和鸡群密度密切相关,包括红河和湄公河三角洲地区的水禽养殖和水稻生产在内的农业畜牧养殖业对流感的传播与维持非常重要。2004年加拿大马尼托巴省H3N2猪流感暴发的空间流行病学分析将风险指向猪的高密度养殖。通过对欧美的323种野生迁徙鸟类的禽流感检测,发现了在不同野鸟中禽流感流行的时空变异特征可能与迁徙模式、宿主生态学相关。在中国,分析发现H7N9流行的主要因素是活禽市场及70km内活禽市场的密度,水域覆盖区域也有影响。活禽市场对H5N1的持续性和地方流行性可能非常关键,使人群易暴露于H5N1和H7N9。空间流行病学与分子进化流行病学的整合可以在微观基因水平和宏观地理空间水平综合去评估流感病毒的进化、传播和潜在的风险,弥补了对变异速度较快的病毒单纯从基因序列上构建亲缘关系的偏差。流感病毒变异速度快、亚型多、感染宿主种类繁多及野鸟的季节性迁徙、流感监测和报道信息的全面性和真实性等复杂因素对流感的空间流行病学的应用带来了极大的挑战。如何理解流感病毒、宿主、地理环境、人和社会因素的复杂关系将是空间流行病学在评估、预测和防控流感流行的重要课题。

关键词：流感病毒空间流行病学疾病防控

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快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系的改进及应用

快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系的改进及应用

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：孙思才管利东李曼宋修庆侯继峰中国食品药品检定研究院

RFFIT是WHO推荐的检测狂犬病病毒中和抗体的标准方法,美国疾病预防控制中心狂犬病实验室、法国巴斯德研究所狂犬病实验室等国际知名狂犬病研究机构广泛应用,作为法定的狂犬病病毒中和抗体检测法被欧洲药典和我国药典收载。RFFIT主要应... 详细信息

RFFIT是WHO推荐的检测狂犬病病毒中和抗体的标准方法,美国疾病预防控制中心狂犬病实验室、法国巴斯德研究所狂犬病实验室等国际知名狂犬病研究机构广泛应用,作为法定的狂犬病病毒中和抗体检测法被欧洲药典和我国药典收载。RFFIT主要应用于狂犬病疫苗的免疫学效果评估,是狂犬病疫苗及中和抗体诊断试剂评价的关键技术。狂犬病病毒中和抗体效价是狂犬病人免疫球蛋白的关键指标,属于确认实验。在应用药典法检测狂犬病人免疫球蛋白狂犬病病毒中和抗体效价时发现:该法准确度及精密度不高,且人为因素影响大。我们参考我国药典及美国疾病预防控制中心和法国巴斯德研究所的实验方案,建立了准确度及精密度均较高的RFFIT检测体系,为准确测定狂犬病病毒中和抗体效价提供了可靠的技术支持。目的:建立准确度、精密度及灵敏度高的狂犬病病毒中和抗体效价的快速荧光灶抑制试验(RFFIT),并用于人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)中和抗体效价的测定(确认)。方法:将待测血清及标准品分别进行2、3及5倍系列稀释,攻击毒分别选择100、50、25及12.5FFD50。将各稀释度样品分别转移至96孔板,每稀释度4孔平行,加入等量攻击病毒混合后,37℃体外中和1h,接种BSR细胞,培养20小时后2-8℃固定,各孔加入荧光标记抗体染色,荧光显微镜以4×10倍下照相,并将照片平均分为40个格,计数阳性格数并计数百分比,格内含有1个或1个以上荧光灶为阳性格。结果:(1)以不同攻击毒分别以2、3及5倍系列稀释测定样品效价分别为:23.81、25.70及26.34IU/ml,2倍稀释为低,以2倍稀释12.5FFD50攻击毒最低为21.19IU/ml,以2倍稀释12.5FFD50攻击毒检测抗体效价其灵敏度可达6m IU/ml;(2)分别以100、50、25及12.5FFD50攻击毒测定样品效价分别为:28.92、25.91、23.71和22.57IU/ml,以12.5FFD50攻击毒为最低;(3)选择2倍孔外稀释、8孔平行以12.5FFD50攻击毒检测体系其CV%为批内3.61%、批间4.58%,而药典法为19.95%和23.97%;(4)操作中固定后干燥不宜控制,荧光不均匀且亮度低,而加水保湿荧光亮度强且均匀。结论:RFFIT采用2倍孔外稀释、以12.5FFD50攻击毒体系,每稀释度不少于4孔平行,用4×10倍下照相,并将照片平均分为40个格计数阳性格数,检测样品狂犬病病毒中和抗体效价准确度及精密度均较高,灵敏度可达6m IU/ml,结果客观准确,人为因素影响小,原始资料可永久保存,便于回顾性研究,可作为狂犬病病毒中和抗体效价的确认方法实验成立的条件为病毒回滴8-20FFD50范围内。

关键词：中和抗体效价狂犬病人免疫球蛋白精密度狂犬病病毒 RFFIT 免疫荧光美国疾病预防控制中心 FFD 稀释度抑制试验

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我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究

我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究

引用

第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：陈柠俞永新徐宏山刘欣玉王志伟杨立宏岳广智贾丽丽董关木李玉华中国食品药品检定研究院

目的对我国云南登革4型病毒分离株（Ban18）及其减毒株（Ban18 HK20和Ban18HK30）病毒的生物学特性进行研究,并将减毒株的二个代次病毒进行空斑纯化以获得毒力更低的病毒克隆;测定母株和减毒株病毒的全基因组序列并进行比对,分析与毒力... 详细信息

目的对我国云南登革4型病毒分离株（Ban18）及其减毒株（Ban18 HK20和Ban18HK30）病毒的生物学特性进行研究,并将减毒株的二个代次病毒进行空斑纯化以获得毒力更低的病毒克隆;测定母株和减毒株病毒的全基因组序列并进行比对,分析与毒力相关的位点。方法将减毒株及其母株在Vero细胞传代后进行空斑形态、毒力和免疫原性的比较研究;将病毒脑内接种9～11g小鼠和2～4日龄乳鼠进行毒力比较;将三株病毒以10～5PFU腹腔免疫小鼠,两周后以H241株进行脑内攻击实验,比较三株病毒的免疫原性;用空斑纯化方法挑选减毒株的单克隆并进行小鼠脑内致病力的比较;提取病毒的基因组RNA,RT-PCR方法分段扩增其全基因组序列并测序,采用DNAStar软件包进行序列比对分析。结果 Ban18 HK20和Ban18HK30病毒在Vero细胞上形成的空斑形态较其母株稍大但模糊。两个代次减毒株对9～11g小鼠脑内接种均不致死,log（PFU/LD50）均>4.5,而Ban18株的LD50高达4.9log,log(PFU/LD)为0.4,二者对2～4日龄乳鼠的致病力也明显低于其母株Ban18株。在免疫原性试验中,Ban18母株和Ban18 HK20病毒免疫的小鼠表现出很强保护作用,而Ban18 HK30病毒未显示保护作用。空斑克隆实验结果表明,Ban18HK20的9个克隆株中,3株对乳鼠脑内毒力低于其它克隆株,Ban18 HK30的5个克隆株则无明显差别。比较Ban18株及其减毒株的全基因组序列,结果显示减毒株的二个代次病毒与其母株存在3个氨基酸（C111,A→V;E155,I→T;E369,I→L）和一个核苷酸（3’UTR-219,G→A）的共同差异。结论通过原代地鼠肾细胞传代的两个代次（HK20和HK30）病毒对小鼠的脑内毒力明显减弱,其中Ban18HK20免疫原性较好,并从中空斑克隆筛选出3株毒力较Ban18HK20更低的克隆株;全基因组序列比对结果表明C111、E155、E369和3’UTR219突变与毒力减弱密切相关。

关键词：登革4型Ban18病毒减毒株毒力免疫原性空斑纯化全长测序

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H7N9禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

H7N9禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：罗思思谢芝勋刘加波邓显文谢志勤庞耀珊谢丽基范晴广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室

自2013年2月以来,华东地区上海市、安徽省、江苏省、浙江省先后发生不明原因重症肺炎病例,经病原体分离鉴定后,于3月31日将其确诊为人感染H7N9禽流感病毒,这是首次发现H7N9感染人的病例。为了建立一种H7N9禽流感病毒(Avian Influenza Vi... 详细信息

自2013年2月以来,华东地区上海市、安徽省、江苏省、浙江省先后发生不明原因重症肺炎病例,经病原体分离鉴定后,于3月31日将其确诊为人感染H7N9禽流感病毒,这是首次发现H7N9感染人的病例。为了建立一种H7N9禽流感病毒(Avian Influenza Virus, AIV)的快速检测方法,本研究根据H7亚型AIV HA基因、N9亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计了3对特异性引物,将其组合在一起,构成三重RT-PCR反应体系,对RT-PCR引物浓度、反应温度、时间及循环次数等反应条件进行优化,成功建立了H7N9 AIV三重RT-PCR检测方法。用其他H和N亚型以及常见禽病病原体对该法进行特异性验证,用梯度稀释的克隆质粒对该法进行敏感性检验。结果显示,RT-PCR中H7引物的最佳工作终浓度为0.4uM,N9和M基因引物最佳工作终浓度为0.2uM,PCR的最佳反应模式是94℃预变性5min,然后进入94℃变性30s,51℃退火30s,72℃延伸40s,共进行35个循环,最后再经72℃延伸10min后,于10℃结束反应。该法对H7N9 AIV进行扩增,得到330bp(H7亚型AIV)、207bp(N9亚型AIV)、632bp(AIV M基因)的三条特异性条带;含有H7或N9亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为330 bp和632 bp、207 bp和632 bp;含有其它亚型AIV的模板只出现一条M基因检测的特异性条带,大小为632bp;对其他常见禽病病原体的检测均无条带。敏感性试验结果表明,该法最低能检出H7和N9亚型AIV均为10～3copies/uL,通用检测AIV M基因敏感性下限为10～5copies/uL。本研究建立的H7N9 AIV三重RT-PCR检测方法,一管检测既可确定是否为H7N9 AIV感染,还可确定单一H7亚型AIV、N9亚型AIV和其他亚型AIV感染,具有快速、特异和敏感的优点,适用于H7N9 AIV的临床检测,对有效防控H7N9 AIV提供技术支持。

关键词：禽流感病毒 H7N9 三重RT-PCR

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流感病毒引起宿主过度炎症反应的研究进展

流感病毒引起宿主过度炎症反应的研究进展

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：杨逸凡马志永中国农业科学院上海兽医研究所

A型流感病毒引起的流行性感冒能够感染多种动物和人类,并且具有较高的致病率和死亡率。给养殖业带来巨大损失的同时,而且不断发现动物源性流感病毒发生跨种间传播感染人类,并且有致死的病例。如1997年香港地区发生N5N1亚型禽源流感病毒... 详细信息

A型流感病毒引起的流行性感冒能够感染多种动物和人类,并且具有较高的致病率和死亡率。给养殖业带来巨大损失的同时,而且不断发现动物源性流感病毒发生跨种间传播感染人类,并且有致死的病例。如1997年香港地区发生N5N1亚型禽源流感病毒感染18人并造成6人死亡;2009年H1N1亚型猪源流感病毒在全球范围内流行造成28.4万人死亡;2012年在美国发现变异的H3N2亚型流感病毒由猪可传染人,并造成309例感染并造成个别患者的死亡;2013年H7N9亚型禽源流感病毒在我国部分地区流行感染131人并造成37人死亡。对公共卫生安全带来极大的隐患。有研究表明,高致病性流感病毒引起的感染和死亡与流感病毒感染引起宿主过度的炎症反应,在短期内迅速产生大量的多种细胞因子和趋化因子而发展为"细胞因子风暴"有着密切的联系。高致病性H5N1禽流感最重要的免疫发病机理是细胞因子风暴的发生,即促炎性细胞因子不受节制的产生和释放。导致致命的临诊症状如广泛的肺水肿、急性支气管肺炎、肺泡出血、反应性血球吞噬、组织损伤和坏死、急性呼吸窘迫综合征。高致病流感病毒感染能引起动物和人类迅速产生大量的多种细胞因子如TNF-?、IFN-?/β、IFN-γ、IL-6、MIP-1、MCP-1、MIG、IP-10、RANTES、IL-8等,巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞是产生上述细胞因子的主要细胞。TNF-?、IFN-γ以及IL-6是主要的致病性细胞因子。并且有研究表明NS1、PB2、HA和NA的突变与细胞因子风暴的产生有关,上述突变可能增加病毒的复制速度,增加组织能量消耗,促进病毒入侵全身系统以及抵抗宿主的抗病毒反应。NS1蛋白第92位谷氨酸残基及149位丙氨酸残基的突变以及羧基端ESEV/EPEV基序决定了H5N1禽流感的毒力;并且,PB2第627位赖氨酸突变,HA多聚蛋白切割区域的多碱性氨基酸突变,HA和NA蛋白糖基化和唾液酸化突变都发现能够使高致病性H5N1病毒引起的免疫病理更为严重。实验小鼠模型显示抗炎症反应药物与抗病毒药物协同使用能够降低免疫介导的组织损伤,提高小鼠在高致病流感感染过程中的存活率。说明过度炎症反应在流感病毒感染过程中造成的免疫损伤是造成流感高死亡率的重要原因之一,同时也为在治疗过程中有效控制炎症反应的进行能够提高治愈效果提供了数据。

关键词： A型流感病毒公共卫生安全炎症反应细胞因子风暴

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