检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：吴静赵敏重庆医科大学附属第一医院眼科重庆 400016

目的：研究整合素α9β1对小鼠角膜缝线术后新生淋巴管及血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VF GF-C)表达的影响并探讨其意义.方法：80只BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、缝线对照组、α9β1组、α9β1抑制组,每...

目的：研究整合素α9β1对小鼠角膜缝线术后新生淋巴管及血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VF GF-C)表达的影响并探讨其意义.方法：80只BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、缝线对照组、α9β1组、α9β1抑制组,每组20只.正常对照组不处理;缝线对照组、α9β1组、α9β1抑制组小鼠制作双眼角膜缝线模型,术后分另予以左氧氟沙星、左氧氟沙星+α9131、左氧氟沙星+α9β1单抗Y9A2点双眼.术后第3、5、7、14、21天分别随机取每组2只小鼠,角膜免疫荧光淋巴管染色、免疫组织化学染色观察新生淋巴管的动态变化并计数;RT-PCR、Western blotting法检测不同时间点角膜中促淋巴管生长因子VEGF-C的表达.结果：一、角膜免疫荧光淋巴管染色、免疫组织化学检测发现：正常对照组角膜无新生淋巴管;另3组小鼠缝线后有新生淋巴管由角膜缘发出,在第14天淋巴管计数(LVC)达峰值.缝线对照组术后第3天开始出现新生淋巴管,第14天LVC是3.27±0.25;与缝线对照组比较,在各观察时间点时α9β1组LVC均增多,第14天LVC4.93±0.38 (P＜0.05),α9β1抑制组角膜LVC明显降低,第14天为2.25±0.34 (P＜0.05).二、RT-PCR和Western blotting检测结果示,正常对照组仅少量VEGF-C表达,缝线对照组VEGF-C表达较正常对照组显著增多且在第14天达峰值(P＜0.05);与缝线对照组比较,α9β1组VEGF-C表达增高(P＜0.05),而α9β1抑制组VEGF-C表达降低(P＜0.05).结论：整合素α9β1可促进角膜新生淋巴管发生;通过Y9A2抑制整合素α9β1可下调VEGF-C的表达和显著减少角膜新生淋巴管.

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体外培养不同代角膜缘干细胞特性分析

体外培养不同代角膜缘干细胞特性分析

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第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会

作者：李翠霞洪晶北京大学第三医院眼科

目的：探讨兔角膜缘干细胞体外培养和鉴定的方法,比较原代与传代细胞的生物学特性的变化,以选择最佳细胞制备角膜上皮膜片.方法：组织块培养法体外培养兔角膜缘干细胞,通过光镜观察和HE染色对角膜缘干细胞原代和传代后细胞进行形态学的...

目的：探讨兔角膜缘干细胞体外培养和鉴定的方法,比较原代与传代细胞的生物学特性的变化,以选择最佳细胞制备角膜上皮膜片.方法：组织块培养法体外培养兔角膜缘干细胞,通过光镜观察和HE染色对角膜缘干细胞原代和传代后细胞进行形态学的比较;用细胞免疫荧光技术检测角膜缘干细胞CK3、ABCG2、P63单克隆抗体的表达量,检测细胞单克隆抗体MUC5AC的表达,排除结膜上皮的污染;流式细胞技术对不同代数角膜缘干细胞进行ABCG2单克隆抗体的定量检测;MTT比色法测定不同代角膜缘干细胞的增值活性.结果：倒置显微镜下可见48h后,有细胞从组织块边缘片状或个体迁移,贴壁生长,呈多边形,体积较小,72小时后细胞局部可见拉网样生长趋势,96小时时出现大片细胞,细胞呈现多边形或多角形,第7天时细胞几乎铺满整个培养板;随着传代代数的增加,CK3单克隆抗体表达阳性率逐渐增强;P63单克隆抗体P0和P1代表达阳性率无明显差别,P2表达量明显减弱;流式细胞检测显示P0及P1、 P2细胞ABCG2表达量分别为13.41％、 22.96％、4.43％;MTT结果显示随传代次数增加细胞增殖活性逐渐下降.结论：组织块体外培养角膜缘干细胞方法能够很好的保持细胞的原有的形态,但是随着传代次数的增多角膜缘干细胞在形态学,蛋白表达量及增殖活性上均不如原代细胞,因此应选择原代细胞制备组织工程角膜缘干细胞膜片.

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抗CD-154单克隆抗体抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应研究

抗CD-154单克隆抗体抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应研究

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第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会

作者：谭小波潘志强徐庆首都医科大学附属北京同仁北京同仁医院北京同仁眼科中心北京眼科学与视觉科学重点实验室北京100730

目的：探讨抗-CD 154单克隆抗体抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的机制.方法：建立小鼠角膜移植模型(C57 BL/6→ BALB/c).受体随机分为两组,分别于手术当天、术后第3天、第6天腹腔注射250μg抗-CD 154单克隆抗体或等量PBS,另设同型移植组(...

目的：探讨抗-CD 154单克隆抗体抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的机制.方法：建立小鼠角膜移植模型(C57 BL/6→ BALB/c).受体随机分为两组,分别于手术当天、术后第3天、第6天腹腔注射250μg抗-CD 154单克隆抗体或等量PBS,另设同型移植组(BALB/c→BALB/c).观察各组角膜植片存活情况至术后1个月.分别于术后第1、2、3、4周取同侧引流淋巴结及脾,流式细胞检测CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(regulatoryT cells,Tregs)及Tim-3、galectin-9在CD4+T细胞的表达情况.术后2周获取角膜植片进行组织病理染色及角膜浸润细胞流式检测,同时进行细胞内染色检测脾细胞中I4N-γ的产生情况.结果：PBS组角膜植片术后1周开始发生排斥反应,而抗体组推迟至术后2周且角膜植片存活时间明显延长(1S.0±3.02天.vs.9.8±2.15天,P=0.0012).组织病理染色显示抗体组角膜植片形态结构正常,有少量炎细胞浸润,流式细胞检测显示浸润细胞中CD4+T细胞及Tregs的百分比约为对照组的50％.抗体组脾及淋巴结中Treg术后1周降低,术后两周降至最低点随后缓慢回复,PBS组术后1周则明显升高,虽在术后两周迅速降低但仍高于抗体组,此后则与抗体组没有明显差异.术后两周抗体组Tim-3及galectin-9的表达也少于PBS组.以上各CD4+T细胞亚群变化在脾及淋巴结虽均有变化但在脾尤为明显.抗体组脾细胞中产生IFN-γ的CD4+T细胞百分比较PBS组明显减少(P=0.0145).结论：抗-CD154单克隆抗体能够延长角膜植片存活时间,其作用可能仍是一个系统性抑制反应,Tregs及其所代表的免疫耐受作用并不参与其中.

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组织工程角膜内皮细胞膜片的制备及评价

组织工程角膜内皮细胞膜片的制备及评价

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第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会

作者：孙艺倩洪晶北京大学第三医院眼科 100191

目的：体外培养并筛选生物学特性接近生理状态的兔角膜内皮细胞,以异种(猪)去细胞后弹力层组织为载体构建组织工程角膜内皮细胞膜片并对其进行评价.方法：胰蛋白酶消化法原代培养兔角膜内皮细胞(CECs),分别从形态学、基因水平和蛋白质...

目的：体外培养并筛选生物学特性接近生理状态的兔角膜内皮细胞,以异种(猪)去细胞后弹力层组织为载体构建组织工程角膜内皮细胞膜片并对其进行评价.方法：胰蛋白酶消化法原代培养兔角膜内皮细胞(CECs),分别从形态学、基因水平和蛋白质水平鉴定细胞：茜素红染色法观察细胞形态,与新鲜角膜角膜组织的CECs进行对比;RT-PCR法检测IVα2型胶原(COL4A2)、血管内皮生长因子受体2(FLK1)、Na+-K+ATP酶ATP1A1)、水通道蛋白1 (AQPI)、电压依从性阴离子通道(VDACs)等相对特异性基因;免疫细胞化学法观察神经元特异性烯醇化酶(NSE)、Na+-K+ATP酶及紧密连接蛋白ZO-1的表达.采用MTT比色法测定传代后CECs的增殖活性变化,采用超微量ATP酶试剂盒及免疫荧光法分别测定传代后细胞Na+-K+ATP酶活性及其表达量的变化,以筛选状态最佳的种子细胞.中性蛋白酶消化并刮除猪CECs后,以其后弹力层组织为载体,接种兔CECs,光镜下观察细胞的生长状态.以新鲜角膜组织为对照,HE染色及茜素红染色观察细胞形态,扫描电镜观察细胞间连接的形成情况,透射电镜观察细胞超微结构及其与载体的贴附情况.Live/Dead荧光探针检测膜片上细胞的活性.免疫荧光法检测膜片上细胞Na+-K+ATP酶等功能蛋白的表达情况.结果：原代培养的兔CECs多在24 h内贴壁,2～3 d达融合,形态呈六边形.随着传代代数的增加,细胞形态逐渐发生改变,第2代、第3代细胞可见空泡样变.原代培养的细胞茜素红染色可见清晰的细胞轮廓,与在体的CECs形态相似.RT-PCR检测到COL4A2、FLK1、ATP1A1、AQP1、VDACs等基因在培养细胞中的表达.免疫荧光染色结果显示NSE、Na+-K+-ATP酶、ZO-I在培养细胞中呈阳性表达.MTT结果显示传代后细胞增生活性逐渐下降,尤其第2、第3代细胞下降明显.定量检测结果显示随着传代代数的增加,兔CECs的Na+-K+ATP酶活性逐渐降低,各代细胞的Na+-KATP酶活性总体比较差异有统计学意义(F=77.174,P=0.000).以异种后弹力层为载体构建细胞膜片后,HE染色可见形成单层细胞,茜素红染色可见其形态类似六边形,电镜结果显示细胞间形成紧密连接,细胞与后弹力层紧密贴附.荧光探针示细胞活性良好,可见Na+-K-ATP酶的阳性表达.结论：经生物学特性检测,原代培养的CECs最适宜作为组织工程种子细胞;以异种后弹力层组织为载体构建细胞膜片后,经形态、功能及超微结构检测,与新鲜角膜组织类似.

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滴眼液常用防腐剂苯扎氯铵体外抗眼科致病真菌活性的研究

滴眼液常用防腐剂苯扎氯铵体外抗眼科致病真菌活性的研究

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第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会

作者：徐岩庞广仁高传文孙声桃周路坦河南省眼科研究所河南省角膜病重点实验室郑州 450003

目的：评估滴眼液常用防腐剂苯扎氯铵对眼科致病真菌的体外抗菌活性,探讨其在真菌性角膜炎防治中应用的可能性.方法：参照美国临床和实验室标准化委员会制定的用于产孢丝状真菌的体外药物敏感性实验方案,用微量液基稀释法对261株(15属29...

目的：评估滴眼液常用防腐剂苯扎氯铵对眼科致病真菌的体外抗菌活性,探讨其在真菌性角膜炎防治中应用的可能性.方法：参照美国临床和实验室标准化委员会制定的用于产孢丝状真菌的体外药物敏感性实验方案,用微量液基稀释法对261株(15属29种)眼部分离真菌进行苯扎氯铵体外抗真菌活性研究,并与那他霉素、两性霉素B及氟康唑的抗菌活性对比.苯扎氯铵、那他霉素和两性霉素B取100％的真菌生长抑制为最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),氟康唑取75％的真菌生长抑制为MIC.应用SPSS13.0统计学软件对数据进行处理,计算4种药物对实验菌的MIC50及MIC90.结果：苯扎氯铵对镰孢菌属的MIC50及MIC90分别为16、32μg/ml,对曲霉菌属的MIC50及MIC90均为32μg/ml,对互隔交链孢霉的MIC50及MIC90分别为8、16μg/ml,对罕见眼部致病菌的MIC50及MIC90分别为4、8μg/nl.那他霉素对镰孢菌属的MIC50及MIC90分别为4、8μg/ml,对曲霉菌属的MIC50及MIC90均为32μg/ml,对互隔交链孢霉的MIC50及MIC90均为4μg/ml,对罕见眼部致病菌的MIC50及MIC90分别为2、4μg/ml.两性霉素B对镰孢菌属及曲霉菌属的MIC50及MIC90均分别为1、2μg/ml,对互隔交链孢霉的MIC50及MIC90分别为0.125、1μg/ml,对罕见眼部致病菌的MIC50及MIC90分别为0.25、1μg,/ml.氟康唑对镰孢菌属的MIC50及MIC90均为512μ g/ml,对曲霉菌属的MIC50及MIC90分别为128、256μg/ml,对互隔交链孢霉的MIC50及MIC90分别为16、128μg/ml,对罕见眼部致病菌的MIC50及MIC90分别为32、256μg/ml.结论：苯扎氯铵对眼部分离真菌的抗菌活性较弱,提示苯扎氯铵以滴眼剂防腐剂的浓度对真菌性角膜炎可能无防治作用.

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第11届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第二届全国角膜屈光手术大会报名