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机构

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6 篇 上海中医药大学附...
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5 篇 北京中医药大学
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作者

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10 篇 孙伟
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9 篇 王亿平
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7 篇 蒋戈利
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基于期刊糖尿病肾病证候及用药规律的数据挖掘研究

基于期刊糖尿病肾病证候及用药规律的数据挖掘研究

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首届世界中医药大会夏季峰会暨“一带一路”中医药发展国际研讨会

作者：文玉敏严美花李平申日友好医院临床医学研究所北京100029

目的：借助数据挖掘的方法对文献报道治疗糖尿病肾病的中医经验方药物组成及证候特点进行分析，研究证候的分布规律、药物配伍规律及二者的关联关系.方法：文献资料检索自建库至2013年12月的中国知网期刊数据库(CNKI)、维普数据库(VIP)... 详细信息

目的：借助数据挖掘的方法对文献报道治疗糖尿病肾病的中医经验方药物组成及证候特点进行分析，研究证候的分布规律、药物配伍规律及二者的关联关系.方法：文献资料检索自建库至2013年12月的中国知网期刊数据库(CNKI)、维普数据库(VIP)、万方数据库和PUBMED、Cochrane Library;同时，还对博士学位论文和国际会议论文进行检索.通过统一的检索式，利用NoteExpress2.0和Epidata3.1软件双人筛选、录入纳入文献信息，借助SPSS clementine12.0对清洗后的数据进行频数统计、关系网络模型、聚类分析、GRI关联规则算法等数据挖掘分析.结果：共纳入临床研究文献243篇，共计253首自拟方剂，涉及药物254味.通过研究我们发现七成以上的方剂是面向糖尿病肾病早期，说明中医同样重视对糖尿病肾病早期这一能通过药物、饮食干预的阶段.而对证候要素的统计，出现频率大于50％的有气虚、血瘀和阴虚三个要素，说明目前中医干预糖尿病肾病气阴两虚夹瘀证能获得较好的疗效，也从侧面反映出气阴两虚夹杂血瘀实证为糖尿病肾病的常见证候要素.结合对糖尿病肾病分期及证候要素聚类分析结果，我们发现两条证候演变规律线，一是自虚及实，二是虚证益甚.自虚及实指的是早期以气阴两虚为主，间或夹瘀至临床期和终末期血瘀和浊毒等实证普遍出现;虚证益甚则是从气阴两虚逐渐加重，发展至气阴阳俱虚.在对用药规律的研究中，有接近九成的经验方都应用了黄芪，且与许多药味均存在有很强的关联度，表明具有益气固表，利尿作用的黄芪是糖尿病肾病中医治疗的关键.而在出现频率＞30％的药物中，可按功效分为养阴(山茱萸、生地)，活血(丹参、川芎)，健脾益气(山药)和利水渗湿(茯苓)四大基本类型，正能应对糖尿病肾病气阴两虚，血瘀的基本病机.借助关系网络模型，我们发现作为治疗肾系疾病的重要方剂——六味地黄丸其药味组合在关联规则中多次出现，特别是"三补"——地黄、山茱萸和山药，而"三泻"中的茯苓、泽泻则与"三补"间或出现，存在一定关联，清热凉血的丹皮则被重在活血的丹参所代替，体现活血化瘀在糖尿病肾病治疗中的关键作用.糖尿病肾病不同分期和证候要素与用药之间的关联研究发现：早期以气阴两虚为主，或兼夹血瘀，用药则以益气养阴的黄芪、生地、山药为主，辅以丹参等活血的药物;临床期因正虚加重，补益药物使用逐渐增加，同时痰湿证素逐渐显现，有健脾益气，燥湿利水两方面功效的白术便在这个阶段被广泛使用;终末期实邪逐渐明显，在益气养阴温阳药物的基础上加用大黄、水蛭、益母草等药，可以有效的起到活血、降浊的功效.结论：应用多种数据挖掘方法，系统总结了目前文献中报道的糖尿病肾病证候及用药规律，为临床辨证论治和进一步的科学研究提供数据支撑.

关键词：糖尿病肾病证候配伍规律数据挖掘

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糖肾方改善2型糖尿病大鼠肾损害的作用及机制研究

糖肾方改善2型糖尿病大鼠肾损害的作用及机制研究

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首届世界中医药大会夏季峰会暨“一带一路”中医药发展国际研讨会

作者：赵婷婷孙斯凡李平中日友好医院北京市朝阳区樱花东路2号100029

目的：糖尿病肾病是糖尿病严重的微血管并发症,在我国已经成为导致老年终末期肾病的首要原因.其主要病理改变是肾小球基底膜增厚,系膜区细胞外基质进行性积聚,从而导致结节性或弥漫性肾小球与硬化,并伴有大量蛋白尿.目前糖尿病肾病仍然... 详细信息

目的：糖尿病肾病是糖尿病严重的微血管并发症,在我国已经成为导致老年终末期肾病的首要原因.其主要病理改变是肾小球基底膜增厚,系膜区细胞外基质进行性积聚,从而导致结节性或弥漫性肾小球与硬化,并伴有大量蛋白尿.目前糖尿病肾病仍然缺乏有效治疗措施.糖肾方是基于临床实践并吸取名老中医经验研制而成的复方中药,能够有效改善糖尿病肾病患者蛋白尿.为阐明其作用机制,本研究通过糖尿病肾病大鼠模型对其治疗作用及机制进行研究.方法：选用8周龄雄性Wistar大鼠30只,体重150-170g,采用高脂饲料喂养和小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射方法,建立2型糖尿病大鼠模型.实验分为正常对照组、糖尿病模型组和糖肾方治疗组.药物治疗20周,期间每4周监测尿蛋白和血糖,20周时,收集肾组织.采用PAS染色和免疫组化方法研究肾脏组织病理改变,并分别采用Real-time PCR方法和Western Blot方法研究炎症相关基因和蛋白的表达情况.结果：实验期间模型大鼠与正常大鼠相比,毛发发黄散乱,精神状态差,尿量明显增加,糖肾方治疗组大鼠状态明显好转.从造模后(实验0周)到实验20周,模型组大鼠空腹血糖水平均显著高于正常组,实验4周起至实验20周,DN模型组尿微量白蛋白水平显著高于正常组.糖肾方治疗组对大鼠血糖无显著影响,但是在实验8周、12周和20周时糖肾方治疗组尿白蛋白水平显著低于正常组.PAS染色结果显示,模型组大鼠肾小球基底膜明显增厚,细胞外基质增多,小管刷状缘脱落,出现空泡变性、坏死和蛋白管型,部分毛细血管扩张.糖肾方治疗后小球细胞外基质明显减少,系膜基质百分比显著降低;小管损伤明显改善.免疫组化结果显示,模型组大鼠肾脏Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原表达均显著升高,糖肾方治疗后Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原表达显著减少,同时药物能够有效减少模型大鼠肾脏炎症因子MCP-1、 IL-1β和TNF-α表达.Real-time PCR结果表明糖肾方能够降低上述分子的基因水平.Westem Blot结果表明,糖肾方能够有效上调IKBα表达并减少p65的磷酸化水平,从而抑制NF-κB介导的炎症通路的激活.结论：糖肾方能够有效减轻糖尿病肾病大鼠蛋白尿,减少肾脏病理损害,抑制NF-κB驱动的炎症反应是其重要作用机制.

关键词：糖尿病肾病糖肾方炎症

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电子转运黄素蛋白β下调参与糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡的作用及机制研究

电子转运黄素蛋白β下调参与糖尿病肾病肾小管上皮细胞凋亡的作用...

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首届世界中医药大会夏季峰会暨“一带一路”中医药发展国际研讨会

作者：王华张浩军赵婷婷李平中日友好医院北京协和医学院中日友好医院

糖尿病肾病是糖尿病严重的微血管并发症之一,一旦出现大量蛋白尿,肾功能将不可逆性进行性下降,最终发展为终末期肾病.由于其发病机制复杂,目前尚无理想的治疗方案.过去研究的重点聚焦在高血糖对糖尿病及其并发症的危害上,近些年人们认...

糖尿病肾病是糖尿病严重的微血管并发症之一,一旦出现大量蛋白尿,肾功能将不可逆性进行性下降,最终发展为终末期肾病.由于其发病机制复杂,目前尚无理想的治疗方案.过去研究的重点聚焦在高血糖对糖尿病及其并发症的危害上,近些年人们认为脂肪酸代谢障碍是糖尿病及其并发症的原发病理生理改变.其中血游离脂肪酸升高在非脂肪组织蓄积造成的损伤,即脂毒性,既是糖尿病患者发病的可能病因之一,也是促进疾病进展和加重的关键因素.在糖尿病肾病中,脂毒性已被证实是进展性肾小管损伤的重要病理机制之一,并和肾脏疾病预后密切相关.电子转运黄素蛋白(electron transfer flavoprotein,ETF)是脂肪酸β氧化中至少12种线粒体脱氢酶的电子接受体,由α和β亚单位组成,存在于生物体细胞线粒体内.本实验室前期通过糖尿病肾病大鼠肾皮质蛋白组学研究发现ETFβ在保守序列位点出现点突变,提示其可能在糖尿病肾病发生发展中发挥重要作用.本研究通过建立糖尿病肾病大鼠模型以观察ETFβ与糖尿病肾损伤之间的关系;通过体外实验探讨ETFβ在棕榈酸诱导的肾小管上皮细胞凋亡中所起的作用,为进一步深入认识糖尿病肾病发病机制提供新思路,同时为疾病治疗提供新的药物候选靶点.通过2型自发性糖尿病OLETF大鼠模型,观察肾病进展的不同阶段,用Westem blot和免疫组化方法检测ETFβ在正常及模型组大鼠肾皮质的分布和表达情况;固定肾组织通过PAS染色观察肾脏病理损伤,然后分析ETFβ的表达变化与糖尿病肾病发生发展之间的关系.体外通过敲降实验观察了ETFβ在低表达时对脂肪酸诱导的细胞凋亡的影响,检测ROS生成,BAX、Bcl-2和Cleaved caspase-3蛋白表达,通过流式检测线粒体膜电位和细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,比较脂肪酸诱导的细胞凋亡通路改变和凋亡率与敲降ETFβ合并脂肪酸刺激的差异,分析ETFβ对脂毒性凋亡的影响.在自发性2型糖尿病OLETF大鼠模型中,ETFβ只在56周龄重度糖尿病肾损伤大鼠肾组织中表达下降.棕榈酸刺激肾小管上皮细胞后,ROS生成增加,线粒体膜电位下降,BAX的表达升高,而Bcl-2表达下降,Cleaved caspase-3升高,流式及TUNEL均检测到细胞大量凋亡.ETFβ基因被敲除后,以上线粒体凋亡通路中指标的改变及细胞凋亡率均在PA刺激的基础上进一步加重,初步推测ETFβ的低表达促进了PA诱导的线粒体凋亡通路的激活.ETFβ表达随着糖尿病肾损伤进展在肾脏出现明显下降,提示ETFβ参与糖尿病肾病进展,同时ETFβ低表达加重脂肪酸诱导的肾小管凋亡.由此我们推测ETFβ的下调可能参与了糖尿病肾病肾小管上皮细胞的凋亡过程.

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中国汉族人群PPARγ2基因Pro12Ala多态性与糖尿病肾病相关性Meta分析

中国汉族人群PPARγ2基因Pro12Ala多态性与糖尿病肾病相关性Meta...

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首届世界中医药大会夏季峰会暨“一带一路”中医药发展国际研讨会

作者：曹煜隆赵海玲严美花张并璇李平中日友好医院临床医学研究所北京100029

目的：探讨中国汉族人群过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(Peroxisome Proliferator Activated Receptor-gamma2,PPARγ2)基因Pro12Ala多态性与糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)相关性的关系.方法：以"diabetic kidney disease"、"DKD"、"diabetic nephropathy"、"DN"、"peroxisome proliferator-activated receptor-gamma2"、"PPARγ2"、"polymorphism"、"Pro12Ala"为关键词,检索PubMed、EMBASE、Cochrane Library.以"糖尿病肾病"、"过氧化物酶体增殖物激活受体γ2"、"基因多态性"、"Pro12Ala"等为主题词或自由词,检索中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方全文数据库及维普中文科技期刊数据库(VIP),检索时间自建库至2015年3月,检索语言为英语和汉语,收集国内外有关中国汉族人群PPARγ2基因Pro 12Ala多态性与DKD相关性研究的相关文献(含硕士、博士学位论文),同时辅以文献追溯法检索上述文献,两位系统评价员分别独立按纳入与排除标准筛选文献,提取整理文献相关数据,同时由另一位系统评价员核实校对数据,并参考纽卡斯尔-渥太华量表(the Newcastle-Ottawa Scale,NOS)评价纳入研究的方法学质量后,对各研究的对照组基因型分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验,如不符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律则剔除该研究.整理出病例组和对照组Pro12Ala位点基因分型(PP、PA、AA)频数.由于纯合基因突变型AA在中国汉族人群中频率较低,故将AA型与PA型合并分析,在显性遗传模型(PA+AA) /PP和等位基因模型A/P下,用Stata12.0软件对数据进行整理和分析,病例组和对照组基因型的比较以OR值为效应指标.取α=0.05为异质性检验分界标,用Q检验和I2统计量进行异质性分析,如P＞0.05且I2＜50％则采用M-H固定效应模型;如P≤0.05或I2≥50％则采用D-L随机效应模型合并数据.按α=0.05水平计算合并OR值及95％ CI,并绘制森林图.如仍然存在较大异质性,采用敏感性分析,尽可能消除异质性.采用Begg秩相关法和Egger直线回归法评估发表偏倚,进一步寻找其异质性来源.敏感性分析比较依次排除各研究后的Meta分析结果,剔除潜在产生异质性的研究,判断被排除的研究对合并OR值的影响程度,从而判断结果的稳定性.结果：共纳入中国汉族人群PPARγ2基因Pro12Ala多态性与DKD相关性病例-对照研究文献8篇,其中英文文献2篇,中文文献6篇,共2352例样本,其中DKD组1439例、健康对照组913例.其中1项研究未提及HWE遗传平衡定律,经Stata HWE检验,PHWE＞0.05,说明群体基因遗传平衡,数据来自同一孟德尔群体.研究人群同质性较好,无显著发表偏倚(PBegg、PEgger＞0.05).Meta 分析结果提示,中国汉族人群中PPARγ2基因Pro12Ala多态性与DKD相关性有统计学意义,显性遗传模型(PA+AA) /PP：OR=0.55,95％CI：0.34-0.71,P＜0.05;等位基因模型A/P：OR=0.57,95％ CI：0.45-0.73,P＜0.05.结论：PPARγ2基因Pro12Ala多态性与中国汉族人群DKD存在相关性;A等位基因可能是糖尿病肾病的保护因子.

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二氢生物蝶呤还原酶基因启动子核心调控区域的定位及糖肾方复方中药干预其转录活性的研究

二氢生物蝶呤还原酶基因启动子核心调控区域的定位及糖肾方复方中...

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首届世界中医药大会夏季峰会暨“一带一路”中医药发展国际研讨会

作者：刘蓉蓉孙斯凡文玉敏赵海玲张浩军李平中日友好医院临床医学研究所北京100029 天津中医药大学天津300193 中日友好医院临床医学研究所北京100029

背景：糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病严重的微血管并发症之一.我国糖尿病患者DN患病率约33.6％,患者超过3800万.DN患者最终发展为终末期肾病的风险很高.DN的发病机制复杂,其中氧化应激作为各个因素的中间环节,对DN的发... 详细信息

背景：糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病严重的微血管并发症之一.我国糖尿病患者DN患病率约33.6％,患者超过3800万.DN患者最终发展为终末期肾病的风险很高.DN的发病机制复杂,其中氧化应激作为各个因素的中间环节,对DN的发生发展具有重要作用.二氢生物蝶呤还原酶(dihydropteridine reductase,QDPR)作为四氢生物蝶呤(Tetrahydrobiopterin,BH4)再循环过程中的重要辅酶,可以通过提高体内BH4的含量,防止氧化应激水平的加剧.本实验室在前期的研究中发现糖尿病肾病大鼠二氢生物蝶呤还原酶(dihydropteridine reductase,QDPR)能够通过抑制TGFβ1/Smad3信号传导通路而延缓糖尿病肾病发生发展.糖肾方是临床上治疗DN有效的中药复方,在前期的动物与临床试验中已证实了其疗效.目的：本研究通过构建QDPR基因启动子及其逐段缺失重组质粒,对其核心调控区定位,分析其转录调控功能,从分子生物学角度探索QDPR基因在DN发病过程中的作用机制.此外,我们将研究糖肾方复方中药其是否通过上调QDPR启动子活性进而发挥作用.从分子水平探讨药物的作用机理,为进一步筛选具有增强QDPR启动子活性的中药或提取物奠定基础.方法：***基因启动子核心调控区域的定位及研究构建含有大鼠QDPR基因起始密码子(ATG)上游约的重组质粒2kb/pGL3.利用生物信息学软件对QDOR启动子2000bp片段进行预测与分析,发现ATG上游区域-529～-116内富含多种转录因子结合位点(transcription factor binding site,TEBS).以2kb/pGL3为模板,构建保留-529～-1、缺失-529～-116片段的基因,将其插入萤光素酶报告基因载体pGL3-basic上,命名D5'/pGL3、D1-4/pGL3.软件进一步分析-529～-116启动子片段,显示存在四个特异性蛋白1(Specificity protein,Sp1)TEBS,与共有序列的吻合度较高.分别对四个Sp1 TEBS依次进行缺失,构建四个缺失突变重组质粒,命名为D1/pGL3、D2/pGL3、D3/pGL3、D4/pGL3.将质粒瞬时转染HEK293T细胞,转染48h后收集细胞,采用Dual-Luciferase⑩Reporter Assay试剂盒进行萤光素酶报告基因活性检测.读值采用spss统计软件进行数据分析.2.糖肾方复方中药水提物对QDPR基因启动子活性的影响及其药物作用的靶点预测QDPR启动子重组质粒转染入细胞后选择糖肾方复方中药水提物进行干预,从基因转录水平这一高起点分析药物干预可能的作用环节.步骤如下：制备糖肾方复方中药水提物,根据乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的实验结果确定中药干预的浓度范围为高中低三组浓度(8000ug/ml、500ug/ml、50ug/ml).转染构建好的各组重组质粒后给予不同的药物浓度刺激和设定不同的药物干预时间,收集细胞进行启动子活性检测.结果：***基因启动子核心调控区域的定位：结果表明,与启动子2KBDNA片段相比,缺失QDPR基因起始密码子ATG上游-529～-116序列的萤光素酶活性只有原来的1％(P＜0.01),而仅保留-529～-1序列的萤光素酶活性是原来的64％(P＜0.05).将QDPR基因上游-529～-116序列逐段缺失后发现,分别缺失-529～-429,-428～-250,-141～-116三段序列的萤光素酶活性都显著升高(P＜0.01),而缺失-249～-142序列的萤光素酶活性则显著下降(P＜0.05).2.糖肾方复方中药在QDPR基因启动子上药物作用靶点实验结果：糖肾方复方中药干预细胞实验的合理剂量为800 g/ml以下.高剂量的糖肾方复方中药(800 g/ml)在干预HEK293T细胞48h后能显著提高QDPR启动子2kb/pGL3的活性(p＜0.01).药物干预几组不同缺失重组质粒发现：糖肾方可以提高D5'/pGL3、D3/pGL3、D4/pGL3的活性(p＜0.05),但是对D1-4/pGL3、 D1/pGL3、D2/pGL3启动子重组质粒活性的影响与不给药组没有差异(p＞0.01).结论：大鼠QDPR基因的启动子核心调控区位于起始密码子上游-529～-116区域内,该区域内存在潜在的正性调控区和负性调控区,其中-141～-116可能存在潜在的Sp1转录因子结合位点抑制启动子的转录活性.糖肾方复方中药可以提高QDPR基因启动子的活性,其药物作用的靶点位于启动子-529～-250区域内.

关键词：糖尿病肾病二氢生物蝶呤还原酶启动子萤光素酶报告基因活性分析糖肾方药物靶点

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