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游离皮瓣在四肢修复重建中的临床应用

游离皮瓣在四肢修复重建中的临床应用

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：韩力宫可同天津医院手显微外科

目的：探讨游离传统和穿支皮瓣在四肢修复重建中的临床应用和疗效.方法：穿支皮瓣仅以管径细小的皮肤穿支血管(穿动脉和穿静脉)供血的轴型皮瓣.穿支皮瓣的直接供血血管为穿支血管,带或不带上级源血管仅由临床实际需要(如血管蒂的长度、...

目的：探讨游离传统和穿支皮瓣在四肢修复重建中的临床应用和疗效.方法：穿支皮瓣仅以管径细小的皮肤穿支血管(穿动脉和穿静脉)供血的轴型皮瓣.穿支皮瓣的直接供血血管为穿支血管,带或不带上级源血管仅由临床实际需要(如血管蒂的长度、受区吻合血管的口径等)的切取方式而定.穿动脉直径在0.5mm～0.8mm之间.传统轴型皮瓣必须先显露深部起源动脉,且必须携带上级源动脉.穿支类型包括肌间隔穿支和肌皮穿支两种.其优点是供受区损伤小,一般能直接缝合;受区修复外形好;重建功能好;设计灵活.分为血流桥接穿支皮瓣,超薄穿支皮瓣,联体穿支皮瓣,分叶穿支皮瓣和嵌合穿支皮瓣5种特殊类型.201 4年5月至201 5年1月,采用穿支皮瓣游离移植修复四肢皮肤软组织缺损11例,皮瓣面积最小6×4cm,最大27×14cm.结果：术后随访1-6个月(平均3个月),术后1例出现静脉危象,再次探查证实为静脉血栓形成,后出现皮肤坏死,嵌合的肌瓣成活,经再次植皮后成活.其余10例皮瓣成活,皮瓣颜色正常、质地薄而柔软,外形不臃肿.供区愈合良好,股四头肌肌力及膝关节屈伸活动正常.结论：穿支皮瓣以其小型化、精细化、微创化为其优势,可以达到以最小的供区损害,获得最佳的受区修复效果. "个性化"的皮瓣筛选和改进以及更优化的皮瓣设计使得穿支皮瓣近年来得到了广泛的应用和发展.临床皮瓣移植以安全成活为第一要求,许多部位的修复实际应用中仍以传统轴型皮瓣为主流,不仅简单方便,临床安全而且效果良好.

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滑膜间充质干细胞来源的细胞膜片改善自身骨软骨移植质量的

滑膜间充质干细胞来源的细胞膜片改善自身骨软骨移植质量的

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：徐兴全史冬泉谌业帅徐志宏戴进陈东阳滕华建蒋青南京大学医学院附属鼓楼医院运动医学与成人重建外科 210008

目的：移植物和周围正常软骨组织之间的较差愈合限制了自身骨软骨移植术在全层软骨损伤修复中的应用.本项研究的目的为观察滑膜间充质干细胞来源的细胞膜片是否能够通过改善侧方结合来提高自身骨软骨移植术修复全层软骨损伤的质量.滑膜...

目的：移植物和周围正常软骨组织之间的较差愈合限制了自身骨软骨移植术在全层软骨损伤修复中的应用.本项研究的目的为观察滑膜间充质干细胞来源的细胞膜片是否能够通过改善侧方结合来提高自身骨软骨移植术修复全层软骨损伤的质量.滑膜间充质干细胞来源的细胞膜片可以改善自身骨软骨移植术的质量.方法：我们使用从膝关节滑膜组织分离得到的间充质干细胞来制作细胞膜片.滑膜间充质干细胞在60mm培养皿中生长融合后,继续添加20ug/ml的维生素C培养两周以得到细胞膜片.使用直径为3.5mm的骨软骨移植装置,在新西兰大白兔双侧膝关节股骨滑车获取长度为3mm的骨软骨条.实验动物的左腿设为实验组,右腿设为对照组.在对照组,骨软骨条直接移植回缺损原位.在实验组,骨软骨条包裹上三层细胞膜片后移植回软骨缺损处.分别在术后4周和8周处死实验动物,对于修复质量分别进行大体评估和组织学评估.使用非配对T检验进行统计学分析,P＜0.05为具有统计学意义.结果：在术后4周和8周,大体观察,HE染色、番红0染色和甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色揭示实验组比对照组有更好的边缘整合及更小的软骨退变.另外,术后8周,对照组在组织学上可见大量的细胞簇集现象;细胞外基质染色很淡.组织学评分,实验组得分明显高于对照组,既包括总分(P=0.003)和除组织性质外其他各项目.结论：滑膜间充质干细胞来源的细胞膜片可以提高自身骨软骨移植的质量.

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聚氨酯/猪小肠粘膜下层软组织修复材料的制备及评价

聚氨酯/猪小肠粘膜下层软组织修复材料的制备及评价

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：笪琳萃龚梅袁奇娟解慧琪四川大学华西医院干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的：猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)具有良好的生物相容性.但是,单纯的SIS材料尚不能满足临床上对回弹性和降解性能有特殊要求的组织修复需要.本研究将SIS与聚氨酯(polyurethane,PU)复合,在保持SIS优点的前提下改善...

目的：猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)具有良好的生物相容性.但是,单纯的SIS材料尚不能满足临床上对回弹性和降解性能有特殊要求的组织修复需要.本研究将SIS与聚氨酯(polyurethane,PU)复合,在保持SIS优点的前提下改善其降解性能和力学性能,进一步评价PU/SIS复合材料理化性能及生物相容性,研究其在软组织修复中可能的应用.方法：通过自乳化法制备PU乳液并与SIS物理共混后冻干成型,碳二亚胺交联得到PU/SIS复合材料.采用傅里叶变换红外光谱仪(fourier transform infrared spectrometer,FTIR)对PU与PU/SIS复合材料的分子结构进行分析.万能材料试验机测定PU和PU/SIS复合材料的回弹性.将PU/SIS复合材料浸泡在PBS溶液和3％ H202溶液中,测定材料的剩余质量百分比;采用CCK-8法评价人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)的生长增殖情况.采用Calcein-AM/PI双染观察细胞形态及生长粘附情况.将PU及PU/ SIS复合材料植入大鼠皮下,分别在2周、4周和8周取材,进行组织学观察.结果：FTIR结果表明,实验成功合成了PU且PU/SIS复合材料中的两种组分发生了交联反应.力学性能评价结果表明PU/SIS复合材料具有回弹性,力学性能更符合设计要求.降解液处理60天,PU/SIS复合材料的质量残留均大于90％.CCK-8检测结果显示,PU/SIS复合材料浸提液促进HUVECs的生长增殖能力与空白对照组相当.Calcein-AM/PI双染结果显示,HUVECs细胞与复合材料粘附紧密,且以绿染的活细胞为主.皮下植入结果显示,与PU组相比,PU/SIS复合材料的炎性细胞侵润较轻,有较多新生毛细血管长入,材料的降解速率较慢.结论：PU/SIS复合材料同时具有PU和SIS的优良性能,有望作为乳房重建假体支撑材料或盆底修复材料应用于组织修复.

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缓释胸腺素β4的组织工程材料复合间充质干细胞对糖尿病难愈合创面皮内神经再构筑的影响

缓释胸腺素β4的组织工程材料复合间充质干细胞对糖尿病难愈合创...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：邓子辉郝好杰韩为东付小兵解放军总医院基础医学研究所北京100853

目的：糖尿病难愈合创面皮内神经的再生修复已成为再生医学领域研究的重点与难点.本研究旨在探讨新型复合组织工程支架材料对糖尿病难愈合创面中神经损伤的修复与再生作用.方法：优化制备复合间充质干细胞(MSC)及缓释胸腺素β4的胶原蛋...

目的：糖尿病难愈合创面皮内神经的再生修复已成为再生医学领域研究的重点与难点.本研究旨在探讨新型复合组织工程支架材料对糖尿病难愈合创面中神经损伤的修复与再生作用.方法：优化制备复合间充质干细胞(MSC)及缓释胸腺素β4的胶原蛋白-壳聚糖支架材料,并应用于糖尿病小鼠背部全层皮肤缺损创面,通过创面大体观察、HE染色、马松染色、牛和小鼠胶原蛋白免疫荧光共定位、皮内神经纤维标志物PGP9.5免疫荧光染色等,观察新型复合材料对糖尿病难愈合创面以及皮内神经再构筑的影响,并进一步在体外通过划痕实验及CCK8细胞增殖实验观察复合材料条件培养基对成纤维细胞迁移和增殖能力的影响.结果：首先,我们制备的胶原蛋白-壳聚糖支架材料外观呈海绵状,电镜分析可见其内部孔隙直径约50-120um,结构均匀.MSC种植培养5天后荧光染色可见MSC生长状态较好,死亡细胞约占总细胞数的1.6％;应用于糖尿病小鼠创面后,能显著减小创面面积(单纯支架材料组：80.803±9.813;复合材料组：27.684±2.823;p＜0.01),增加创缘血管的密度(单纯支架材料组：44±5.568;复合材料组：121±11.533,p＜0.01);病理学分析可见,复合材料组小鼠皮内结构规则、胶原蛋白沉积显著减少,并且材料中牛胶原蛋白能够很好的和新生的鼠胶原蛋白融合;同时,PGP9.5荧光染色可见,复合材料能显著促进真皮层神经的修复与再生并向上延伸至表皮层;体外研究发现,复合材料条件培养基能够显著促进成纤维细胞的迁移(单纯材料组：15.8±1.483;复合材料组9.2±1.304,p＜0.05),但是对成纤维细胞增殖无显著影响.结论：复合MSC及缓释胸腺素β4的胶原蛋白-壳聚糖支架材料具有优良的生物相容性,能显著促进糖尿病难愈合创面的愈合,并能够促进皮内神经的再生与修复,是一种潜在的治疗难愈合创面的新型组织工程材料.

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人羊膜间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的修复作用

人羊膜间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的修复作用

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王钰莹粟旭刘娟刘波遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室遵义医学院药学院遵义医学院临床医学研究所遵义医学院教育部基础药理学重点实验室遵义563003

目的：通过脑立体定位仪原位移植人羊膜间充质干细胞(hAMSCs),观察移植细胞对脑梗死大鼠的治疗效应,及hAMSCs在大鼠脑梗死区域的存活、定植和分化情况.方法：用机械法和胰酶—胶原酶二酶消化法,分离得到hAMSCs,用流式细胞术(FCM)鉴定其...

目的：通过脑立体定位仪原位移植人羊膜间充质干细胞(hAMSCs),观察移植细胞对脑梗死大鼠的治疗效应,及hAMSCs在大鼠脑梗死区域的存活、定植和分化情况.方法：用机械法和胰酶—胶原酶二酶消化法,分离得到hAMSCs,用流式细胞术(FCM)鉴定其表型.雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组及hAMSCs移植组.线栓法制备MCAO模型,造模24h后移植hAMSCs,移植后连续1w监测体重并进行神经缺损严重程度评分,在移植后2w取材,行TTC染色观察脑梗死面积,HE染色观察组织病理学变化,免疫荧光染色和RT-PCR检测移植大鼠大脑神经细胞标志物(神经元特异核蛋白、神经胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶)的表达.结果：分离、培养的第3代hAMSCs高表达CD44、CD29、CD73,低表达或不表达CD45、CD34、HLA-DR;hAMSCs移植后大鼠体重下降减缓、神经功能评分降低、梗死面积缩小,大脑皮质缺血损伤区明显减轻.免疫荧光染色显示,移植hAMSCs 1w和2w后,大鼠脑组织中均可见较多的MAB1281阳性细胞,2w后可见少量NeuN阳性细胞.hAMSCs移植组GFAP、NSE mRNA水平明显高于模型组(P＜0.01、P＜0.05),但NeuN mRNA水平,hAMSCs移植组与模型组比较表达上调,但差异不明显(P＞0.05).结论：移植hAMSCs能改善中动脉闭塞所致脑梗死大鼠的缺血再灌注损伤,hAMSCs原位移植后能在大鼠脑梗死区域定植、存活,且在原位能分化为神经样细胞.

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体外不同方案诱导分化间充质干细胞用于组织工程半月板的可行性研究

体外不同方案诱导分化间充质干细胞用于组织工程半月板的可行性研...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：张正政余家阔江东北京大学第三医院运动医学研究所 100191

目的：筛选不同方案对体外分离并扩增的兔骨髓间充质干细胞进行刺激和诱导作用,为组织工程半月板提供可行的种子细胞诱导方案.方法：分离并经体外传代培养扩增兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem ceils,MSCs),种植复合于脱钙松质骨支...

目的：筛选不同方案对体外分离并扩增的兔骨髓间充质干细胞进行刺激和诱导作用,为组织工程半月板提供可行的种子细胞诱导方案.方法：分离并经体外传代培养扩增兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem ceils,MSCs),种植复合于脱钙松质骨支架上.分别用结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF),碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor-basic, FGF-b),转化生长因子β3 (transforming growth factor, TGF-β3)及成软骨诱导培养液刺激后,分别于刺激后1周、2周、4周用CCK-8法检测细胞增殖活性,检测DNA相对含量,检测氨基葡聚糖(glycosaminoglycan,GAG)相对含量,实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-Time PCR)的方法从分子水平检测COL-1,COL-2,AGC等基因表达.结果：分离并传代的间充质干细胞生长良好.细胞增殖活性方面： FGF-b组和成软骨诱导培养液组较对照组明显增高(P＜0.05).DNA相对含量方面：各实验组均较对照组明显增高(P＜0.05),其中FGF-b组和成软骨诱导培养液组共培养1周、2周、4周都有明显增高(P＜0.05).GAG相对含量方面：成软骨诱导培养液组明显增高(P＜0.05).mRNA相对表达量方面：COL-1相对表达FGF-b组明显增高(P＜0.05),COL-2相对表达成软骨诱导培养液组明显增高(P＜0.05),AGC相对表达成软骨诱导培养液组明显增高(P＜0.05).单纯CTGF组和TGF-β3组的mRNA相对表达没有明显提高(P＞0.05).结论：FGF-b和成软骨诱导液分别能够刺激复合支架上的MSCs增殖并表达不同的细胞外基质,为半月板组织工程重建提供了可靠来源的种子细胞.

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低温粉碎的去细胞羊膜微粒能够有效促进糖尿病难愈合创面的愈合

低温粉碎的去细胞羊膜微粒能够有效促进糖尿病难愈合创面的愈合

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：李建华郝好杰韩为东付小兵中国人民解放军总医院基础医学研究所生化室北京100853

目的：羊膜因其特殊的组织结构,富含Ⅳ胶、生长因子和细胞因子等成份备受临床和基础研究者的关注.我们这篇研究通过采用低温粉碎的方法制备羊膜微粒,将其应用到糖尿病难愈合性创面,观察其对创面愈合的影响,并进一步探究其潜在的机制.方...

目的：羊膜因其特殊的组织结构,富含Ⅳ胶、生长因子和细胞因子等成份备受临床和基础研究者的关注.我们这篇研究通过采用低温粉碎的方法制备羊膜微粒,将其应用到糖尿病难愈合性创面,观察其对创面愈合的影响,并进一步探究其潜在的机制.方法：实验采用0.25％胰酶联合DNA酶处理的方法对收集的羊膜组织进行脱细胞处理,并进一步利用低温星球式研磨机(液氮制冷)QM-DY2将冷冻干燥的羊膜进行粉碎以获得大量的去细胞羊膜微粒.并应用于糖尿病小鼠背部全层皮肤缺损创面,通过创面大体观察、HE染色、马松染色、人和小鼠Ⅳ胶原蛋白免疫荧光共定位等,观察去细胞羊膜微粒对糖尿病难愈合创面的影响.结果：首先,低温粉碎的羊膜微粒大小在5-30um之间,进一步通过CBA磁珠定量的方法发现正常羊膜微粒和去细胞羊膜微粒浸提液中VEGF、Basic FGF、TGF-β1、MCP-1等生长因子含量并未明显降低.应用于糖尿病小鼠创面后,第14天观察发现能显著减小创面面积(完整羊膜微粒组：27.325±2.813;去细胞羊膜微粒组：25.327±3.142;空白对照组：52.218±7.138,p＜0.01),增加创缘血管的密度(去细胞羊膜微粒组：1 12±10.512;完整羊膜微粒组：102±9.435;空白对照组：52±4.268,p＜0.01);病理学分析可见,完整羊膜微粒组和去细胞羊膜微粒组小鼠皮内结构规则、胶原蛋白沉积显著减少,并且微粒人胶原蛋白能够很好的和新生的鼠胶原蛋白融合.结论：低温粉碎的去细胞羊膜微粒富含多种促愈合生长因子和细胞因子成分,能够显著促进糖尿病难愈合创面的愈合,可以作为一种潜在的治疗难愈合创面的新型生物工程材料.

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生物反应器对组织工程软骨再生的影响

生物反应器对组织工程软骨再生的影响

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：余晓明孟昊业袁雪凌王玉郭全义彭江汪爱媛卢世璧中国人民解放军总医院北京市海淀区复兴路28号100853

目的：软骨组织工程已被广泛用来实现体外软骨组织再生,并用来修复软骨缺损。软骨组织工程主要由软骨细胞、软骨支架和体外培养环境三部分组成。通过研究体外模拟体内关节软骨生长环境,为进一步提高组织工程软骨的仿生性及更好地修复损...

目的：软骨组织工程已被广泛用来实现体外软骨组织再生,并用来修复软骨缺损。软骨组织工程主要由软骨细胞、软骨支架和体外培养环境三部分组成。通过研究体外模拟体内关节软骨生长环境,为进一步提高组织工程软骨的仿生性及更好地修复损伤软骨提供理论实验依据。方法：2月龄新西兰大白兔,用于分离培养膝关节软骨细胞,取第二代细胞以1 ×106个/mL密度,接种于猪去细胞软骨基质支架上制备细胞-支架复合物。实验分为实验组和对照组,对照组单纯细胞支架复合静态培养,实验组于Instron生物反应器中培养,加以力学刺激(力学加载参数为3h/天,1Hz,压缩量为10％),两组分别以7天、14天、21天、28天四个时间点取材,行大体观察、力学检测、组织学检测及实时荧光定量PCR检测。结果：实验组细胞-支架复合物厚度、弹性模量及最大负荷均显著高于对照组,并且实验组与时间呈正相关。实验组组织切片HE染色均可见软骨细胞增殖及软骨陷窝形成,番红0染色见细胞-支架复合物的细胞外基质中有大量蛋白聚糖(GAG)形成,并与GAGs试剂盒检测结果相符。免疫组化 Ⅱ型胶原染色显示实验组均多余对照组,且实验组中21天时阳性最高。实时荧光定量PCR检测示,实验组COL Ⅱ表达均高于对照组,且实验组中21天时表达最高;COL Ⅰ表达实验组高于对照组,且实验组中呈递增趋势。结论：细胞-支架复合物通过生物反应器的力学加载,可以产生更多的胶原和GAG等细胞外基质成分,并增强其力学特性,使其更加复合人体软骨生长环境,并提高其与正常软骨的仿生性,从而使细胞支架复合物能更好的修复损伤软骨。

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不同保存方法对"临床即用型"脂肪源性干细胞活性影响的评估

不同保存方法对"临床即用型"脂肪源性干细胞活性影响的评估

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：李朦陈苑雯王婧薷刘宏伟暨南大学附属第一医院整形外科再生医学教育部重点实验室

背景：脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction cells/stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔...

背景：脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction cells/stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔的应用前景,并作为一种新的细胞产品或新技术用于整形美容外科的临床治疗,取得可喜效果.由于临床治疗的特点和需要,作为细胞产品从制备完毕到治疗使用前的这一时间段(包括细胞产品的运输)如何保持细胞产品仍处于活力最佳状态或进入人体后能发挥较好的治疗效果,保存的方法是一个值得高度关注的问题.目的：通过观察比较几种符合临床使用规范的保存液、不同储存温度和时间对ADSCs增殖、凋亡及分化能力的影响.探讨在临床应用过程中,ADSCs细胞被提取后即将使用前或运输过程中的短时间内能够维持细胞最佳生物学活性的保存方法,以确保细胞在用于人体治疗之前处于最佳状态.方法：从临床抽脂病人获取的脂肪组织提ADSCs,培养纯化至第二代,以每组1-3×105cell/2ml的密度分别悬浮于PBS、0.9％生理盐水、10％人血清溶液、10％富血小板血浆(PRP)溶液中,并分别于4℃、室温(25-28℃)中保存2、4、6小时后,通过cck8细胞增殖实验观察增殖能力,通过流式细胞仪观察细胞周期、凋亡,通过诱导成脂实验观察细胞分化能力.结果：同样时间条件下,4℃保存明显优于室温(25-28℃)下保存;而随保存时间的增长ADSCs的存活率及增殖能力呈递减趋势,其中保存6小时后差异最为明显.4℃ 10％人血清溶液组在细胞存活率最高,而细胞增殖实验中4℃10％PRP溶液组最佳.结论：ADSCs被提取后即将使用前或运输过程中的短时间采用10％人血清、在4℃条件下保存符合临床规范,且能较好保持细胞活性.已制备的"临床即用型"细胞产品最好能在4小时前使用.

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人骨髓间充质干细胞转分化为汗腺样细胞的DNA甲基化调控机制

人骨髓间充质干细胞转分化为汗腺样细胞的DNA甲基化调控机制

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：赵焕军赵宏良张翠萍付小兵解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的：筛选与人骨髓间充质干细胞(MSCs)转分化为汗腺样细胞过程密切相关基因启动子位点,探索DNA甲基化调控MSCs的转分化机制.方法：热休克汗腺诱导MSCs共培养10d,免疫组化检测MSCs转分化后KRT19和CEA标志,诱导MSCs分化0d、5d和10d用RT-...

目的：筛选与人骨髓间充质干细胞(MSCs)转分化为汗腺样细胞过程密切相关基因启动子位点,探索DNA甲基化调控MSCs的转分化机制.方法：热休克汗腺诱导MSCs共培养10d,免疫组化检测MSCs转分化后KRT19和CEA标志,诱导MSCs分化0d、5d和10d用RT-PCR和Western blots检测CEA基因和蛋白表达情况.芯片检测MSCs分化前后45万个基因位点DNA甲基化水平变化.从甲基化水平显著变化基因位点中,筛选出与MSCs转分化密切相关基因位点.用飞行质谱技术检测关键基因启动子的甲基化水平在诱导分化前后的水平变化;筛选出的关键基因构建质粒并转染MSCs并培养,培养基内加入10ng/μL5Azd,应用RT-PCR和Western blot检测转染5天CEA基因和蛋白表达.结果：MSC经共培养10d后KRT19和和CEA免疫荧光染色示阳性,对照组KRT19和CEA示阴性.芯片检测MSC诱导分化前后共有76个基因位点的DNA甲基化水平具有明显差异(0.169‰),甲基化水平明显降低51个位点,其中SLC12A7、ENKUR、LRWD1、Pax6和HDAC4等位点甲基化水平显著下降.甲基化水平明显升高25个位点,其中Hoxd11、ADARB2、ANGPT1、UNC84A和BMP6等位点DNA甲基化水平明显升高.提示MSC转分化过程中DNA甲基化水平以下调为主.经过比较分析,选择Pax6基因位点进行飞行质谱检测,结果提示该位点甲基化水平明显降低.质粒构建Pax6转染MSCs,培养5天CEA基因表达明显增高,CEA蛋白阳性表达.结论：DNA去甲基化在MSCs分化过程中起到重要的调控作用,Pax6基因与5azd协同作用可能调控CEA基因表达影响MSC转分化.

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