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mcroiRNA-149通过调控人角质形成细胞中IL-6的表达而促进皮肤无瘢痕愈合

mcroiRNA-149通过调控人角质形成细胞中IL-6的表达而促进皮肤无瘢...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：郎宏鑫施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室千细胞与再生医学研究室沈阳110122 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110122

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过...

目的：胎儿皮肤的创伤愈合以无炎症反应、无瘢痕愈合为特点.目前关于无瘢痕愈合的机制有多种观点,本研究致力于探讨microRNA-149调控人角质形成细胞中IL-6的RNA和分mRNAs作microRNAs成纤维细胞而促进无瘢痕愈合的机理.方法：我们通过对孕中期和孕晚期胎儿皮肤角质形成细胞总RNA进行mRNAs和microRNAs第二代测序分析,得到孕中期胎儿皮肤中呈现高表达的microRNAs,我们发现microRNA-149在孕中期呈高表达,并通过实时荧光定量PCR对其相对表达情况进行验证.通过生物信息学分析与双荧光素酶报告基因验证mcroiRNA-149的靶基因.用Lipo2000将microRNA-149的mimic转染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),设置阴性对照组和空白对照组,通过Elisa检测细胞培养液中IL-6的表达改变.并通过Transwell实验和MTS实验检测microRNA-149mimic对HaCaT的迁移和增殖情况.并且通过Transwell将转染microRNA-149mimic的HaCaT与人真皮成纤维细胞进行共培养,检测转染microRNA-149mimic的HaCaT对人真皮成纤维细胞的迁移影响,并检测人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况.结果：实时荧光定量PCR检测到mcroiRNA-149在孕中期的表达高于孕晚期,提示可能参与胎儿皮肤无瘢痕愈合过程.通过***和TargetScan分析确定microRNA-149的靶基因为IL-6,并经过双荧光素酶报告基因实验进行验证.将microRNA-149的mimic转染HaCaT后,Elisa检测到转染后的培养液中IL-6表达明显下调,结果有统计学意义(P＜0.05).microRNA-149mimic对HaCaT的增殖无明显影响;而可以促进HaCaT的迁移,差异有统计学意义(P＜0.05).转染microRNA-149mimic的HaCaT对与其共培养的人真皮成纤维细胞的影响以及人真皮成纤维细胞中无瘢痕愈合相关因子的表达情况结果还有待于进一步探讨研究.

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汗腺细胞与Matrigel基质在裸鼠皮下培养重建汗腺三维结构过程中CK7、CK14和α-SMA抗原表达的动态变化

汗腺细胞与Matrigel基质在裸鼠皮下培养重建汗腺三维结构过程中CK...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：李雪雪李海红张冰娜张明君付小兵汕头大学医学院第二附属医院烧伤整形科广东汕头515041 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

目的：讨Matrigel基底膜基质对人外泌汗腺细胞的分化作用.方法：取手外科手术患者自愿捐赠的正常手指全层皮肤,经Ⅱ型胶原酶消化分离出汗腺组织,贴壁培养,待原代细胞达80％融合后,收集细胞,部分细胞制成爬片行二维细胞免疫荧光检测CK7、...

目的：讨Matrigel基底膜基质对人外泌汗腺细胞的分化作用.方法：取手外科手术患者自愿捐赠的正常手指全层皮肤,经Ⅱ型胶原酶消化分离出汗腺组织,贴壁培养,待原代细胞达80％融合后,收集细胞,部分细胞制成爬片行二维细胞免疫荧光检测CK7、CK14和α-SMA抗原表达.原代汗腺细胞(2×106)与1ml浓缩型Matrigel基底膜基质混匀后注射至裸鼠腹股沟皮下,共24只裸鼠,每个时间点3只裸鼠,于注射后1d、2d、4d、6d、10d、14d、21d和28d取材,行石蜡切片,HE染色观察细胞形态结构,免疫荧光染色检测CK7、CK14和α-SMA的抗原表达.结果：汗腺二维细胞免疫荧光检测示：CK7和CK14表达呈阳性,α-SMA呈阴性表达.汗腺细胞与Matrigel基质在裸鼠皮下培养的HE染色示：2d时观察到细胞团形成,6d时细胞团块中央开始出现腔的结构,随着培养时间的延长细胞团块不断增大,中央腔的直径也随之增长.免疫荧光染色示：1d、2d、4d、6d、10d和14d的汗腺细胞0K14表达均呈阳性,CK7和α-SMA呈阴性;当培养至21d时,CK7和α-SMA呈弱阳性表达,CK14仍呈强阳性;培养至28d时,CK7和α-SMA表达逐渐增强,α-SMA表达在大部分细胞团的周边并呈环形分布,CK7表达在部分细胞团的中央,部分细胞团中央的细胞CK14表达减弱,甚至消失,表达部位类似于α-SMA.结论：汗腺细胞与Matrigel基质的混合物在裸鼠皮下培养,不仅能产生具有中央腔的类管状的三维结构,而且抗原的表达呈动态变化,类似于人类汗腺发育过程中抗原的表达时序.这为我们体外研究汗腺的发育、创伤修复提供了很好的模型.

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雪旺细胞复合PFTBA纤维蛋白水凝胶促进周围神经再生的效能及机制研究

雪旺细胞复合PFTBA纤维蛋白水凝胶促进周围神经再生的效能及机制...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：马腾黄景辉罗卓荆第四军医大学西京医院骨科陕西西安 710032 中国

背景：应用组织工程神经导管结合雪旺细胞来修复周围神经缺损,被认为是替代自体神经移植治疗和克服自体神经移植缺陷的最有效方法。然而,由于组织损伤后局部血管损伤造成的缺血、缺氧,神经导管内部的低氧环境很大程度上限制了雪旺细胞...

背景：应用组织工程神经导管结合雪旺细胞来修复周围神经缺损,被认为是替代自体神经移植治疗和克服自体神经移植缺陷的最有效方法。然而,由于组织损伤后局部血管损伤造成的缺血、缺氧,神经导管内部的低氧环境很大程度上限制了雪旺细胞的活性,从而影响了其修复神经缺损效能的发挥。因此,应用含有增氧剂全氟三丁胺(perfluorotributylamine,PFTBA)的水凝胶作为雪旺细胞的载体,使其与神经导管复合,可能是一种更加有效和方便的解决方案,有望明显改善支架内部早期的缺氧环境,促进雪旺细胞的存活以及功能的发挥,从而促进外周受损神经的再生和功能恢复。目的：探讨PFTBA对体外雪旺细胞缺氧模型的保护作用,研究PFTBA水凝胶有机结合雪旺细胞,复合神经导管促进神经再生的效能和机制。方法：首先,我们基于PFTBA,制备一种富含PFTBA的纤维蛋白水凝胶,使其作用于培养在缺氧环境或者正常氧环境中的雪旺细胞,应用血气分析,CCK-8以及流式周期检测,确定含有不同浓度PFTBA的纤维蛋白水凝胶对雪旺细胞活性和功能的影响,同时,应用Transwell小室实验和RT-PCR对雪旺细胞的迁移和分泌功能进行评估。其次,我们将最适浓度的PFTBA水凝胶作为雪旺细胞的载体,与胶原-壳聚糖神经导管有机结合,制成神经导管修复材料,修复大鼠15mm坐骨神经缺损,通过行为学分析、神经电生理检测、荧光金逆行示踪、靶器官及再生神经远端的形态学分析(Masson染色、甲苯胺蓝染色、免疫荧光染色、透射电镜等)等方法评价神经再生和功能恢复情况。结果：在缺氧环境中,含有不同浓度PFTBA的纤维蛋白水凝胶早期放氧量不同,其中,浓度为10％的PFTBA水凝胶其放氧量可达到顶峰。同时,在缺氧早期,PFTBA对雪旺细胞的增值、分化、迁移、分泌等都有明显的保护作用。当应用含有最适浓度PFTBA水凝胶修复长节段大鼠坐骨神经缺损时,虽然自体神经的修复效果仍然最好,但是复合PFTBA水凝胶的神经导管与没有复合PFTBA水凝胶的神经导管相比,其种子细胞(雪旺细胞)的存活率明显提升。因此,复合有最优浓度的PFTBA水凝胶可以有效促进植入雪旺细胞的存活,使其生物活性得到发挥,从而为神经生长提供良好再生微环境,促进神经有效生长和功能恢复。结论：PFTBA水凝胶可以明显改善神经导管内部早期的缺氧环境,促进雪旺细胞的存活以及功能的发挥,促进周围神经的再生和功能恢复。

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多Z与多W成形术在面部直线瘢痕修复中的应用

多Z与多W成形术在面部直线瘢痕修复中的应用

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：眭云鹏简雪平廖怀伟马丽徐桂珍刘燕平文辉才南昌大学第一附属医院整形美容科 330006

目的：探讨多Z和多W成形术在面部直线型瘢痕修复中的临床效果。方法：对我科2009年7月～2015年5月收治的26例面部直线型瘢痕患者,根据瘢痕的部位、形状、周围皮肤松动情况,分别应用多Z或多W成形术进行修复。多Z成形术的适用范围：①对...

目的：探讨多Z和多W成形术在面部直线型瘢痕修复中的临床效果。方法：对我科2009年7月～2015年5月收治的26例面部直线型瘢痕患者,根据瘢痕的部位、形状、周围皮肤松动情况,分别应用多Z或多W成形术进行修复。多Z成形术的适用范围：①对于跨面部分区的瘢痕及器官分界区的瘢痕及鼻冀缘、唇红缘、内外眦处的瘢痕;②线状增生性瘢痕挛缩;③组织错位的修复,适用于眼、口、唇、鼻、耳组织错位时的复位;④鼻腔、耳道的环形狭窄;⑥小口畸形的整复。多W成形术的适用范围：①瘢痕无明显挛缩、稍宽、形状不规则;②瘢痕两侧针孔较明显;③顺皮纹的线性瘢痕;④不顺皮纹的梭形瘢痕;⑤局部皮肤张力较小的瘢痕。多Z成形术：沿标线切开皮肤及皮下组织,切除瘢痕组织,潜行分离,切缘的小三角皮瓣,在无张力的情况下使三角瓣相互交叉移位,将各皮瓣相互推进相嵌后用5-0可吸收线先作皮下减张缝合和真皮深层间断密切对合缝合,然后再用7-0美容线缝合最外层。多W成形术：沿标线切开皮肤及皮下组织,形成多个顶角端方向相反的带蒂三角形皮瓣,切除瘢痕组织,并充分松解瘢痕基底部的组织粘连,潜行分离切缘两侧的三角瓣,将三角瓣推进相互嵌插,保证切口无张力,用5-0可吸收线先作皮下减张缝合和真皮深层间断密切对合缝合,然后再用7-0美容线缝合最外层。结果术后随访6个月～1年,26例患者创面均Ⅰ期愈合,修复组织与创面周围皮肤组织在色泽、质地、轮廓等方面相似,切口线相对隐蔽、切口瘢痕平整、弹性好,面部外形轮廓及视觉效果良好,均获得理想美容效果。结论：多Z成形术与多W成形术适用于面部直线型瘢痕切除,具有创面修复后不影响面部形态结构特征;不引起解剖性标志的移位或畸形;切口线隐蔽;修复后创面组织的颜色、质地、及结构特征与周围皮肤相协调;面部无继发损伤、操作简便等优点,通过局部皮瓣转移与医学美学原理相结合的方法达到最佳的重建效果,具有良好的应用价值。

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低能量激光照射对脂肪源性干细胞临床治疗潜能影响的实验研究

低能量激光照射对脂肪源性干细胞临床治疗潜能影响的实验研究

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：廖选李升红陈媛雯谢光辉肖丽玲谢波刘宏伟暨南大学附属第一医院整形外科再生医学教育部重点实验室

背景：脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction /stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔的应用...

背景：脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction /stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔的应用前景.但如何提高其临床治疗效果是目前干细胞临床转化应用研究中的热点问题.目的：本实验通过观察镓铝砷激光(GaAIAs laser)对ADSC增殖、细胞因子分泌及成脂分化能力的影响,探讨临床治疗过程中提高ADSC治疗效果安全、有效的方法.方法：取来自腹部脂肪抽吸术女性患者的脂肪组织,分离ADSCs,建立hADSCs培养体系;用波长650nmGaAIAs激光2J/cm2,4J/cm2,8J/cm2对ADSC进行照射.利用XTT法检测ADSC的增殖能力;ELISA法检测ADSC的分泌功能;实时定量PCR法检测细胞表型的变化;油红染色检测激光照射对ADSC成脂分化能力的影响.结果：研究使用细胞为2-3代,经波长650nm不同能量GaAIAs激光(2 J/cm2,4 J/cm2,8 J/cm2)照射,MTT法检测结果显示：第4、6天能量为2J/ cm2时照射组吸光度与对照组吸光度无明显差异(p＞0.05);能量为4J/ cm2、8J/ cm2时照射组吸光度与对照组吸光度差异显著(p＜0.05);其中照射能量为4J/ cm2时吸光度差异最为明显.ELISA法检测结果显示：能量为4J/m2的GaAIAs激光照组hADSC的细胞上清液中VEGF、PDGF、TGF-β的蛋白含量分别为287.451±15.188、35.988±0.696、292.571±10.535;空白对照组蛋白含量分别为145.294±21.613、26.672±0.583、130.579±6.007,两者之间相比较差别明显(p＜0.05).根据荧光定量PCR检测结果显示：经4 J/cm2照射后hADSCs中细胞表型CD13、CD29、CD44、CD90 mRNA相对表达量分别为对照组的1.19、22.05、4.38、7.22倍,两组间差异显著(P＜0.05).油红染色显示经GaAIAs照射处理后hADSCs的成脂分化能力明显高于空白对照组.结论：低能量激光治疗可增强ADSC的增殖、分泌及成脂分化能力,这也许有助于提高脂肪千细胞临床转化应用的治疗效果,是一种简便、安全、有效的方法.

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提高PRP制备质量的方法改进及其对慢性创面促愈效果的临床观察

提高PRP制备质量的方法改进及其对慢性创面促愈效果的临床观察

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：廖选李升红谢姗卢金强张志丹谢波肖丽玲刘宏伟暨南大学附属第一医院整形外科再生医学教育部重点实验室广州市黄埔大道西613号

背景：富含血小板的血浆(Platelet-Rich Plasma,PRP)已被报道用于慢性难愈创面的修复,以改善创面愈合的结局.但如何提高制备时血小板含量和提高临床疗效仍有待进一步阐明.目的：摸索PRP制备过程中提高其血小板收集量的最佳条件,并探讨PR...

背景：富含血小板的血浆(Platelet-Rich Plasma,PRP)已被报道用于慢性难愈创面的修复,以改善创面愈合的结局.但如何提高制备时血小板含量和提高临床疗效仍有待进一步阐明.目的：摸索PRP制备过程中提高其血小板收集量的最佳条件,并探讨PRP改善慢性创面愈合的方法和临床疗效.方法：1.探索第一次离心条件(全血)：离心力分别选取200g、300g、400g、500g,离心时间5min、10min、15min,离心后收集血浆层进行血小板计数,计算血小板分离率=血浆血小板浓度×血浆总量/(全血血小板浓度×全血总量)×100％.2.探索第二次离心条件(血浆)：离心力选取800g、1000g、1200g、1600g,离心时间10min、15min、20min,离心后弃除部分上清,剩余血小板沉淀重悬,进行血小板计数,计算血小板分离率.3.2013年3月-2015年11月期间对9例慢性难愈创面患者实施PRP局部注射治疗,其中糖尿溃疡创面3例,动脉缺血性溃疡创面2例,烧伤创面2例.每例患者均根据创面情况治疗2-4次,每次间隔4-7天使用一次.治疗前后通过肉眼观察创面情况及客观测量创面等指标评价临床疗效.结果：第一次离心400g,10min,第二次离心1000g,10min条件下血小板分离率最高,为PRP制备最佳的条件.通过本方法获取的PRP,并用于处理慢性难愈创面的患者,治疗9例患者均得到不同程度改善,表现创面肉芽鲜红,触之易出血,炎性渗出减少,创面边缘及移植皮片上皮爬行加速,每例患者均根据创面情况间隔4-7天使用一次.结论：PRP分离时采用两次离心的方法,即：第一次离心400g,10min,第二次离心1000g,10min可提高PRP制备时血小板收集效率,是PRP制备的较理想的技术参数.PRP创面局部注射或创面外用可作为慢性创面治疗的辅助方法可明显改善创面的愈合,有较好临床疗效,是值得推荐的有效、安全、经济、简便的辅助治疗手段.

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聚乳酸-羟基乙酸与量子点共混用于静电纺丝制备生物支架

聚乳酸-羟基乙酸与量子点共混用于静电纺丝制备生物支架

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：褚君豪刘洋沈丽明刘晶大连医科大学附属第一医院中英再生医学应用研究中心 116061

目的：三维多孔生物支架可为疾病、损伤、先天性缺陷而破坏的细胞提供生长所需的基体。该支架必须具备生物相容性和高孔隙率,以便细胞黏附、迁移以及增殖。常用的扫描电镜只能观察支架表面细胞的生长和迁移情况[1],为了观察三维支架内...

目的：三维多孔生物支架可为疾病、损伤、先天性缺陷而破坏的细胞提供生长所需的基体。该支架必须具备生物相容性和高孔隙率,以便细胞黏附、迁移以及增殖。常用的扫描电镜只能观察支架表面细胞的生长和迁移情况[1],为了观察三维支架内部的状态,需要破坏其结构才能实现。在此,我们提出以量子点标记生物支架,在共聚焦显微镜下无损实时观测体外和体内的生物支架上细胞的生长和迁移情况。方法：六氟异丙醇溶解聚乳酸-羟基乙酸(85∶15,分子量约100 K),37 ℃孵育过夜。上述溶液与量子点充分机械混匀后,进行静电纺丝。全面地探索了静电纺丝的加工参数,确定了最优条件后,考察了三种表面配体(油酸、TOPO、烷基胺)修饰的油溶性CdSe/ZnS量子点对聚乳酸-羟基乙酸的标记效果。同时,我们还尝试了添加表面活性剂(阳离子型CTAB、阴离子型SDS以及非离子型Tween-20),以减少量子点的团聚。结果与讨论：共聚焦显微镜下观察不同条件下制备的静电纺丝形貌和标记效果,比较发现TOPO修饰的量子点与聚乳酸-羟基乙酸共混静电纺丝效果好。此外,添加了非离子型表面活性剂Tween-20的体系制得的纺丝中量子点团聚现象减少,在显微镜下观察到静电纺丝纤维发射均匀的荧光,标记效果明显优于离子型表面活性剂。共混标记静电纺丝纤维的方法操作简便[2],量子点标记效果较好。为进一步加强标记效果,我们将通过化学改性聚乳酸-羟基乙酸,在每个聚乳酸-羟基乙酸分子链上都偶联一个量子点。化学改性的方法制备的复合物稳定性更好,而且量子点的标记效果也将更优[3]。我们将比较共混和化学改性的聚乳酸-羟基乙酸静电纺丝纤维的机械性能、荧光强度和生物相容性等,并进一步将其用于体外和体内,观察细胞在发光三维支架内的生长情况。

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适用于内镜修复食管溃疡的可注射水凝胶补片

适用于内镜修复食管溃疡的可注射水凝胶补片

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：龚梅笪琳萃袁奇娟解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室?干细胞与组织工程研究室成都 610041 四川大学华西医院再生医学研究中心·干细胞与组织工程研究室成都 610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室?干细胞与组织工程研究室成都 610041 四川大学华西医院再生医学研究中心·干细胞与组织工程研究室成都 610041

目的：内镜下粘膜剥离术(Endoscopic mucosal dissection,ESD)是治疗早期食管癌的首选方案,然而对于其术后出现的多种并发症,如大而深的溃疡导致的穿孔、创面出血、术后疼痛、狭窄等尚无有效的治疗手段.若能在ESD术后即时采用胃镜微创...

目的：内镜下粘膜剥离术(Endoscopic mucosal dissection,ESD)是治疗早期食管癌的首选方案,然而对于其术后出现的多种并发症,如大而深的溃疡导致的穿孔、创面出血、术后疼痛、狭窄等尚无有效的治疗手段.若能在ESD术后即时采用胃镜微创手术对创面进行有效修复,将极大减轻病人的痛苦,避免二次手术.猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)具有良好的生物相容性.本实验将SIS与聚氨酯(polyurethane,PU)复合,制备可注射型水凝胶,经胃镜植入食管粘膜溃疡面,达到修复目的.方法：通过自乳化法制备两种PU胶体,分别带有正负电荷.将SIS预先包被于阳离子PU胶束中,在体内离子凝胶化形成水凝胶补片.采用傅里叶变换红外光谱仪(fourier transform infrared spectrometer,FTIR)对PU材料进行结构分析.采用CCK-8法测定人胃黏膜上皮细胞(Human gastric mucosal epithelial cell line GES-1)的生长增殖情况.采用Calcein-AM/PI双染观察细胞形态及生长粘附情况.将可注射型水凝胶植入大鼠皮下,分别在2周、4周和8周取材,进行组织学观察.构建比格犬食管溃疡模型,大体观察可注射水凝胶植入食管溃疡面后在创面修复过程中的粘附情况.结果：本实验成功合成了两种带有不同电荷的PU胶体,并与SIS复合制备出可注射水凝胶.CCK-8检测结果显示,可注射水凝胶促进GES-1的生长增殖能力与空白对照组相当.Calcein-AM/PI双染结果显示,GES-1细胞以绿染的活细胞为主.皮下植入结果显示,可注射水凝胶植入后炎性细胞侵润较轻,有较多新生毛细血管长入,材料的降解速率较快,2M基本已经降解完毕.可注射水凝胶植入比格犬食管溃疡面后与创面黏附紧密.结论：SIS与聚氨酯的复合,能显著改善其植入困难、降解时间过快、遇水变形等问题.细胞实验及动物实验表明可注射水胶材料具有良好的细胞相容性与生物相容性,为内镜下治疗ESD术后食管溃疡和预防并发症奠定材料学基础.

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兔异体骨髓间充质干细胞抑制增生性瘢痕形成的实验研究

兔异体骨髓间充质干细胞抑制增生性瘢痕形成的实验研究

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王达利魏在荣李修权邓呈亮章涛遵义医学院附属医院

目的：初步探讨异体骨髓间充质干细胞对活体动物增生性瘢痕形成的影响,为进一步将异体间充质千细胞用于增生性瘢痕的防治提供基础研究资料.方法：以成年6只健康雄性新西兰白兔为实验动物,于新西兰白兔双耳腹侧分别建立大小为6mm圆形增...

目的：初步探讨异体骨髓间充质干细胞对活体动物增生性瘢痕形成的影响,为进一步将异体间充质千细胞用于增生性瘢痕的防治提供基础研究资料.方法：以成年6只健康雄性新西兰白兔为实验动物,于新西兰白兔双耳腹侧分别建立大小为6mm圆形增生性瘢痕模型,每只兔耳分别建立6个增生性瘢痕模型.随机选择6只兔左耳为实验组(共36个创面),右耳为对照组(共36个创面)：实验组分别于上皮化完成后第2日(模型建立20天左右)和上皮化完成后第10日(模型建立30天左右),取第5代经BrdU标记后生长良好的异体BMSCs0.2ml(5×105/ml)于增生性瘢痕软骨膜上层进行环形注射.对照组在上述相应时间点注射相同剂量的PBS缓冲液;实验组与对照组分别于模型建立37天(第2次细胞移植后6天左右)取材.记录各实验组增生性瘢痕的大体外观,HE及VG染色观察其组织学变化,实验组行免疫荧光染色对移植的干细胞进行示踪.实时荧光-聚合酶链式反应(Real Time-PCR, RT-PCR)检测两组增生性瘢痕组织中核心蛋白多糖(decorn,DCN)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达变化情况,酶联免疫吸附试验(Elisa)检测增生性瘢痕组织中DCN、TGF-β1、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的蛋白表达情况.结果：术后37天对照组瘢痕增生明显,色红质硬,突出于皮面;实验组瘢痕组织体积缩小,变平变软,色泽轻度变浅.与对照组比较,HE、VG染色显示实验组成纤维细胞及炎性细胞数量减少,胶原排列较规则,胶原之间的间隙增大.对照组胶原纤维排列紧密、紊乱或成旋涡状.免疫荧光染色观察到移植细胞在组织中能够存活.RT-PCR结果显示实验组TGF-β1mRNA表达量较对照组显著降低,DCNmRNA表达量显著升高,结果均有统计学意义(P＜0.01).Elisa结果显示实验组TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量较对照组明显下调,DCN蛋白表达量较对照组明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论：兔耳创面在上皮化形成后移植异体BMSCs移植,能够通过下调TGF-β1及上调DCN的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,促进胶原排列有序等生物学效应,发挥抑制瘢痕增生提高创面愈合质量的作用.

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基质金属蛋白酶处理猪脱细胞真皮基质移植后组织学观察及其血管化评价

基质金属蛋白酶处理猪脱细胞真皮基质移植后组织学观察及其血管化...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王芳石文邵阳马印东贾军辛乃军吴秋合宋国栋 250013 济南山东大学附属济南市中心医院烧伤科

目的：观察评价基质金属蛋白酶-7 (matrix metalloproteinase 7,MMP-7)处理的猪脱细胞真皮基质(porcine acellular dermal matrix,P-ADM) (P-ADM-pm)大鼠体内移植后组织学变化及其血管化过程.方法：取家猪网织层真皮62块,随机分为P-ADM...

目的：观察评价基质金属蛋白酶-7 (matrix metalloproteinase 7,MMP-7)处理的猪脱细胞真皮基质(porcine acellular dermal matrix,P-ADM) (P-ADM-pm)大鼠体内移植后组织学变化及其血管化过程.方法：取家猪网织层真皮62块,随机分为P-ADM组(A组)和P-ADM-pm组(B组),每组31块;随机取P-ADM、P-ADM-pm各1块行抽样检测(微生物检测、HE染色及免疫组织化学染色).取成年雄性Wistar大鼠30只,每只大鼠背部皮下左侧植入P-ADM(A组)、右侧植入P-ADM-pm(B组)各1块.分别于移植术后3、7、14、21、28 d随机取6只大鼠,行大体、HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色和扫描电镜观察,分析比较移植物宿主细胞、血管浸润及组织学变化.结果：抽样检测示P-ADM毛囊内毛发、上皮根鞘、细胞核、细胞碎片样结构及波形蛋白(Vimentin)、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白仍有少量残留,而在P-ADM-pm中被基本去除,胶原纤维束及胶原纤维之间间隙较P-ADM增大.移植术后7d,肉眼观察两组移植物表面均形成一层布有少量微血管的纤维薄膜,随术后时间延长微血管增加、变粗并浸润移植物,B组较A组明显,术后21 d两组纤维薄膜微血管减少、增粗,B组移植物整体呈粉红色表现.移植术后各时间点,A组移植物呈现较重炎性反应,14 d后宿主炎性细胞浸润之处胶原纤维形态结构出现裂解等破坏性改变;B组炎性反应轻,宿主细胞尤其是成纤维细胞、微血管长入的数量均较A组明显(P＜0.05),移植物胶原纤维形态结构基本保持正常.B组浅层成纤维细胞、微血管长入分别出现于移植术后3、7d,并分别于14、21 d时贯穿移植物全层;A组成纤维细胞、微血管分别出现于术后3、14d,至21d时均未贯穿移植物全层.14d扫描电镜观察B组移植物内长入较多成纤维细胞并可见其分泌的胶原原纤维构象.结论：宿主对P-ADM-pm的反应类似于正常创伤愈合过程,P-ADM-pm作为植入性支架材料具有良好的模板引导作用.

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