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1 篇 干细胞
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6 篇 中国医科大学
6 篇 解放军总医院
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作者

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6 篇 施萍
6 篇 庞希宁
5 篇 余家阔
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4 篇 肖丽玲
4 篇 解慧琪
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4 篇 蒋青
4 篇 江东
4 篇 赵峰
4 篇 王钰莹
4 篇 顾晓松
4 篇 廖选
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3 篇 李朦
3 篇 肖苒
3 篇 戴进
3 篇 余丽梅

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75 篇 中文

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OCT4诱导人毛囊间充质干细胞向红细胞分化

OCT4诱导人毛囊间充质干细胞向红细胞分化

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：刘志晶李玉林全成实孙连坤吉林大学基础医学院 130021

目的：研究OCT4诱导人毛囊间充质干细胞(hHFMSCs)向红细胞分化的作用方法：(1)用携带OCT4的慢病毒转导hHFMSC,用RT-qPCR及Western Blot鉴定转导结果;(2) OCT4转导后的hHFMSC形态改变及造血标志物的表达;(3)造血相关的细胞因子诱导hHFMSC...

目的：研究OCT4诱导人毛囊间充质干细胞(hHFMSCs)向红细胞分化的作用方法：(1)用携带OCT4的慢病毒转导hHFMSC,用RT-qPCR及Western Blot鉴定转导结果;(2) OCT4转导后的hHFMSC形态改变及造血标志物的表达;(3)造血相关的细胞因子诱导hHFMSCOCT4向红细胞分化：利用Wright-Giemsa染色观察细胞形态改变,细胞免疫荧光和流式细胞术检测红细胞特异性标志物;(4) RT-qPCR检测OCT4靶基因.结果：(1)携带OCT4慢病毒转导hHFMSC及鉴定：转导后的hHFMSCs中EGFP阳性细胞占88.92％,OCT4的mRNA和总蛋白表达明显上调.(2) OCT4转导后的hHFMSC形态改变及造血标志物的表达：①转导后细胞由大变小,由长梭形变成类圆形,14d后出现易悬浮的细胞亚群,呈克隆样生长;②OCT4转导后hHFMSCs中CD45阳性细胞占1.5％,悬浮的hHFMSCs中CD34阳性细胞占2.19％.(3)转导OCT4的hHFMSCs向红细胞分化：①光镜下观察,造血诱导第7d开始出现造血集落,10-20d先后出现红系爆炸式集落及红系集落形成单位;②Wright-Giemsa染色显示,第7d开始先后出现早幼红、中幼红和晚幼红细胞,第20d晚幼红细胞数量不再增加.③造血诱导第7-20d的细胞表达红系祖细胞标志CD71和CD235a,同时表达血型蛋白A和B;诱导第23d红细胞完成脱核,80％以上红细胞表达成人型β血红蛋白;④hHFMSC向红细胞分化中细胞直径及核质比逐渐减小,血红蛋白化逐渐增加.(4) hHFMSCs向红细胞分化中OCT4靶基因的表达：OCT4转导后,多潜能相关的靶基因OCT4、NANOG、SEMA3A和LEFTY2和造血相关的靶基因FLI1、TAL1、HBG1和CA2表达均上调.造血诱导21d后,多潜能相关的靶基因LEFTY2及OCT4显著下调,而造血相关的靶基因TAL1、HBG1和RHD表达显著上调.结论：(1)转录因子OCT4可以诱导hHFMSC向红细胞分化;(2)由hHFMSC分化的红细胞表达成人型血红蛋白;(3)转录因子OCT4通过调控造血相关靶基因的表达促使hHFMSC向红细胞分化.

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低能量激光照射对脂肪源性干细胞临床治疗潜能影响的实验研究

低能量激光照射对脂肪源性干细胞临床治疗潜能影响的实验研究

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：廖选李升红陈媛雯谢光辉肖丽玲谢波刘宏伟暨南大学附属第一医院整形外科再生医学教育部重点实验室

背景：脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction /stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔的应用...

背景：脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction /stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔的应用前景.但如何提高其临床治疗效果是目前干细胞临床转化应用研究中的热点问题.目的：本实验通过观察镓铝砷激光(GaAIAs laser)对ADSC增殖、细胞因子分泌及成脂分化能力的影响,探讨临床治疗过程中提高ADSC治疗效果安全、有效的方法.方法：取来自腹部脂肪抽吸术女性患者的脂肪组织,分离ADSCs,建立hADSCs培养体系;用波长650nmGaAIAs激光2J/cm2,4J/cm2,8J/cm2对ADSC进行照射.利用XTT法检测ADSC的增殖能力;ELISA法检测ADSC的分泌功能;实时定量PCR法检测细胞表型的变化;油红染色检测激光照射对ADSC成脂分化能力的影响.结果：研究使用细胞为2-3代,经波长650nm不同能量GaAIAs激光(2 J/cm2,4 J/cm2,8 J/cm2)照射,MTT法检测结果显示：第4、6天能量为2J/ cm2时照射组吸光度与对照组吸光度无明显差异(p＞0.05);能量为4J/ cm2、8J/ cm2时照射组吸光度与对照组吸光度差异显著(p＜0.05);其中照射能量为4J/ cm2时吸光度差异最为明显.ELISA法检测结果显示：能量为4J/m2的GaAIAs激光照组hADSC的细胞上清液中VEGF、PDGF、TGF-β的蛋白含量分别为287.451±15.188、35.988±0.696、292.571±10.535;空白对照组蛋白含量分别为145.294±21.613、26.672±0.583、130.579±6.007,两者之间相比较差别明显(p＜0.05).根据荧光定量PCR检测结果显示：经4 J/cm2照射后hADSCs中细胞表型CD13、CD29、CD44、CD90 mRNA相对表达量分别为对照组的1.19、22.05、4.38、7.22倍,两组间差异显著(P＜0.05).油红染色显示经GaAIAs照射处理后hADSCs的成脂分化能力明显高于空白对照组.结论：低能量激光治疗可增强ADSC的增殖、分泌及成脂分化能力,这也许有助于提高脂肪千细胞临床转化应用的治疗效果,是一种简便、安全、有效的方法.

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羊膜联合水凝胶及hAMSCs对大鼠腓总神经损伤的修复作用

羊膜联合水凝胶及hAMSCs对大鼠腓总神经损伤的修复作用

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：杨进范振海魏再荣王钰莹方宁孙广峰刘燕飞余丽梅遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室(贵州省细胞工程中心) 贵州遵义563003 遵义医学院附属医院烧伤整形外科贵州遵义563003

目的：研究羊膜联合水凝胶及人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠腓总神经损伤的修复作用。方法：机械分离和二酶消化、差速贴壁法培养hAMSCs,观察细胞形态与生长,流式细胞术鉴定细胞表型。制作新鲜羊膜片,BeaverNano？水凝胶与hAMSCs组装...

目的：研究羊膜联合水凝胶及人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠腓总神经损伤的修复作用。方法：机械分离和二酶消化、差速贴壁法培养hAMSCs,观察细胞形态与生长,流式细胞术鉴定细胞表型。制作新鲜羊膜片,BeaverNano？水凝胶与hAMSCs组装,神经切除制备腓总神经损伤,观测大鼠行走、趾展情况和神经传到速度(NCV),计算趾展功能(TSF),FB逆向轴浆运输荧光染色,称量胫骨前肌湿重,计算肌肉恢复率,病理组织学检查肌肉组织变化,定量PCR测定脊髓组织基因转录水平。结果：(1)传代培养第3-5代hAMSCs形态、生长方式和免疫表型符合以往所述鉴定标准。(2)术后3和7d,除空白组外,其余大鼠右后肢均出现跛行或足不触地,足展距离较窄,TSF降低;第14d,羊膜片组与缝合组大鼠足印和趾展距离均大于模型组,TSF由高至低依次为：羊膜片组、空白组＞缝合组＞模型组、HG-AMP组、羊膜+hAMSCs+水凝胶(HG-hAMSCs-AMP组);28d,各组足印和趾展距离均有不同程度的进一步恢复;不同时间点TSF比较,羊膜片组于术后第7和14d TSF恢复速度最快,缝合组TSF则于14、28d逐渐恢复。(3)术后28d,与模型组比较,其他4组NCV增高,依次为空白组＞羊膜片组、HG-AMP组、HG-hAMSCs-AMP组。(4)胫骨前肌肌肉恢复率由高至低依次为空白组＞羊膜片组＞缝合组＞ HG-AMP和HG-hAMSCs组。空白组肌肉组织结构完整、清晰,羊膜片组最接近空白组,且炎细胞浸润较少;缝合组可见轻微的肌肉萎缩性改变,模型组肌肉萎缩明显,炎细胞浸润较多;HG-AMP组肌肉萎缩较HG-hAMSCs-AMP组和缝合组明显。(5)除模型组外,其余各组均可见一定量FB蓝色荧光物质,空白组最多。(6)模型组脊髓中BDNF、CRMP-2、GAP-43、Lingo-1、NGF mRNA水平高于空白组,而GDNF mRNA水平降低;羊膜片组除Lingo-1和GDNF mRNA表达与模型组无显著差异外,其余4种基因mRNA表达水平均与空白组相当。结论：新鲜人羊膜可及早促进离断后缝合的腓总神经功能恢复,减轻所支配肌肉萎缩,提高TSF,疗效优于单纯缝合术。各组脊髓组织中BDNF、CRMP-2、GAP-43、Lingo-1、NGF和GDVF mRNA表达的变化进一步确证了人羊膜应用的效应。

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京尼平交联猪小肠黏膜下层的制备及评价

京尼平交联猪小肠黏膜下层的制备及评价

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王昱龚梅陈曦李胜富解慧琪四川大学华西医院干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的：猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)已成功应用于多种组织器官的损伤修复,但由于SIS主要由胶原蛋白构成,在酸性及酶解环境中易降解,因此限制了其在消化道黏膜修复中的应用.本研究使用京尼平(genipin,GP)对SIS进行交...

目的：猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)已成功应用于多种组织器官的损伤修复,但由于SIS主要由胶原蛋白构成,在酸性及酶解环境中易降解,因此限制了其在消化道黏膜修复中的应用.本研究使用京尼平(genipin,GP)对SIS进行交联,在保持SIS良好的生物相容性及生物活性的前提下提高其抗酸、抗酶解性能,研究其在胃黏膜缺损修复中的可能应用.方法：本实验通过交联指数的测定及初步的抗酸、抗酶解实验对京尼平交联猪小肠黏膜下层(GP-crosslinked SIS)的制备条件进行筛选.通过溶胀率和红外吸收光谱对GP-crosslinked SIS的交联效率及分子结构进行分析.采用扫描电镜对材料的亚显微结构进行观察.我们将未交联的SIS及GP-crosslinked SIS浸泡在模拟胃液中,测定材料的剩余质量百分比;在力学性能评价中,通过单轴拉伸实验对模拟胃液处理后GP-crosslinked SIS的最大载荷和刚度进行测定.通过酶联免疫吸附实验比较SIS及0.5％GP-crosslinked SIS中生长因子VEGF和TGF-β1在14天内的释放情况.通过直接细胞毒性和间接细胞毒性实验对材料的细胞相容性和细胞毒性进行评价.在组织相容性研究中,将SIS及GP-crosslinked SIS植入大鼠皮下,进行组织学评价.结果：确定了GP-crosslinked SIS的制备条件,即在37℃条件下采用浓度为0.05％、0.1％、0.3％和0.5％的GP与SIS交联24 h.溶胀率结果显示,GP与SIS交联反应效率较高;红外光谱分析结果显示,GP通过与SIS中的氨基发生反应进行高效交联.扫描电镜结果显示,GP交联后SIS保持了其多孔结构,有利于细胞粘附.模拟胃液处理GP-crosslinked SIS 8周后,材料的降解率小于10％,且保持了一定的最大载荷和刚度.直接细胞毒性和间接细胞毒性实验结果显示, GES-1在GP-crosslinked SIS上呈明显延展态;且GES-1在GP-crosslinked SIS浸提液中的增殖率大于100％.ELISA检测结果显示,0.5％ GP-crosslinked SIS中VEGF和TGF-β1在14天内累计释放量分别达到了72.4±9.6 pg和59.1±3.4 pg.将GP-crosslinked SIS植入大鼠皮下8周,炎性反应较轻,无明显降解出现.结论：京尼平交联后SIS的抗酸、抗酶解性能显著提高,且保持了一定的力学性能及生物活性,细胞毒性低、组织相容性好,有望应用于促进胃黏膜损伤的修复.

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轻微升高的血糖通过刺激糖尿病大鼠β细胞复制从而促进β细胞再生,治疗糖尿病的研究

轻微升高的血糖通过刺激糖尿病大鼠β细胞复制从而促进β细胞再生...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：程愈郝好杰申晶母义明韩为东解放军总医院基础研究所 100083 解放军总医院内分泌科 100083 解放军总医院基础研究所 100083 解放军第309医院 100094 解放军总医院内分泌科 100083

目的：寻找简便易行的方法促进β细胞再生将会为糖尿病治疗带来福音.葡萄糖长久以来被认为是调控β细胞复制的关键因子.大量体内,体外研究表明轻微升高的β糖可以有效促进β细胞的复制,并且不影响β细胞的存活.然而,并未有研究将轻微升...

目的：寻找简便易行的方法促进β细胞再生将会为糖尿病治疗带来福音.葡萄糖长久以来被认为是调控β细胞复制的关键因子.大量体内,体外研究表明轻微升高的β糖可以有效促进β细胞的复制,并且不影响β细胞的存活.然而,并未有研究将轻微升高的血糖应用于糖尿病模型中,观察其对抗糖尿病的效应.因此,我们的研究旨在观察将糖尿病模型血糖控制在轻微升高的范畴后,β细胞复制,再生以及糖尿病的恢复情况.方法：空腹12h,给予8周龄SD雄性大鼠单次大剂量STZ(60mg/kg)注射,48小时后将糖尿病大鼠分为三组：高糖组,不给予任何处理;稍高血糖组,每日给予甘精胰岛素控制血糖15～18mmol/L;正常血糖组,每日给予甘精胰岛素控制血糖≤11.1mmol/L.观察期三个月.定期监测动物血糖、血清胰岛素的变化,观察期末各组大鼠行腹腔糖耐量实验.在一定时间点取各组胰腺组织行连续冰冻切片,分离胰岛行PCR及western实验.观察各组动物β细胞复制,数量及存活.结果：(1)稍高血糖组所需胰岛素用量逐渐减少,一月左右可撤离胰岛素,血糖即可维持15～18mmol/L,胰岛素撤离后随机血糖继续改善,观察期末基本恢复正常(9～14mmol/L),空腹胰岛素水平恢复正常.腹腔糖耐量试验提示糖清除和糖刺激胰岛素的分泌均接近正常.正常血糖组所需胰岛素用量缓慢增加,撤离后血糖反弹至约27mmol/L,空腹胰岛素水平接近正常,但糖刺激后胰岛素分泌只有轻微的升高.(2)高糖组动物β细胞数量逐步减少.轻微升高的血糖促进了胰岛再生及结构的重塑,β细胞数量恢复至正常水平50％左右.正常血糖仅可抑制β细胞数量的进一步减少,β细胞数量保持在正常水平10％左右.(3)轻微升高的血糖显著刺激了β细胞的复制,此效应在正常血糖组大大削减.(4)高糖组β细胞凋亡轻微增加,其余两组与正常对照相比无区别.结论：轻微升高的血糖刺激了胰岛素缺乏的糖尿病大鼠中β细胞的复制,从而促进了β细胞的再生,恢复了胰岛的功能,有效控制血糖,并且未影响新生β细胞的存活.本研究的完成提供了一个简便易行的促进β细胞再生的方法,为糖尿病的治疗开启一扇新的大门.

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用动物固定装置观察负压封闭敷料对小型猪全层皮肤缺损创面修复的影响

用动物固定装置观察负压封闭敷料对小型猪全层皮肤缺损创面修复的...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：周文芳黎君友孙同柱吴志谷付小兵解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的：负压封闭敷料已在临床创面修复广泛应用,并获得较好的愈合效果,但对其作用机理我们还不甚了解,本文通过自制动物固定装置,观察武汉维斯第牌负压封闭引流材料(VDS)对小型猪全层皮肤缺损创面修复作用的影响.方法：动物固定装置：由...

目的：负压封闭敷料已在临床创面修复广泛应用,并获得较好的愈合效果,但对其作用机理我们还不甚了解,本文通过自制动物固定装置,观察武汉维斯第牌负压封闭引流材料(VDS)对小型猪全层皮肤缺损创面修复作用的影响.方法：动物固定装置：由不锈钢材料构成,包括可自由移动架、两用悬吊棒、悬吊制式服装、接大小便托盘和可放置负压吸引机和吸引罐的悬挂篮组成.动物模型制备：将4月龄小型猪全麻、备皮、消毒后于脊柱两侧各制一个全层皮肤缺损创面(4.5cm×4.5cm).实验分组：A组对照组,凡士林油纱布和4层无菌纱布覆盖包扎;B组125mmHg持续负压24h,至伤后24d.伤后分别将小型猪悬挂于动物固定装置上,单笼喂养,自由饮食.通过大体观察、皮下血流监测和细菌学判断负压封闭敷料对小型猪全层皮肤缺损创面的修复作用.结果：伤后早期大体观察显示两组创面新鲜,均无脓性分泌物.A组创面渗出物较B组多,B组创面无明显分泌物、无水肿.伤后7d,两组创面上皮生长较明显,其上皮化率均能达40％～60％;两组创面有不同程度的肉芽组织生长,A组肉芽填充率＜30％较B组差,B组能达50％以上.伤后14d,两组创面基本长平,A组肉芽填充率低于90％,B组可达到90％以上.伤后21d,A组上皮化率较B组差,B组能达到80％以上.伤后24d两组创面基本愈合.皮下血流监测,伤后4d B组血流灌注量较A高.伤后7d～21d两组血流灌注量均有所下降,但B组仍高于A组.伤后28d B组血流灌注量恢复到伤前水平,A组较高.细菌监测,伤后4d和7d大多创面细菌明显增多,A组细菌量较B组高.10d～21 d两组创面细菌均逐步下降,A组略高于B组.结论：动物固定装置能满足负压封闭引流材料实验研究的需要.在28d的实验中能保证小型猪固定良好,方便更换敷料.在固定状态下小型猪能自由饮水,进食和排便;同时能保证激光多普勒成像仪和其他相关指标的正常检测.负压封闭引流下创面血流量很快增加,能够有效除去创面的渗透液,减轻创面与创周的组织水肿,促进大量新生肉芽组织形成,为上皮爬行提供了基础,负压可促进创面引流的畅通,将存留于创面局部的坏死组织、细菌、分泌物等吸出,减少了创面局部细菌的繁殖.通过连续治疗后使用负压引流的方法创面愈合效果明显较对照组好.

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兔异体骨髓间充质干细胞抑制增生性瘢痕形成的实验研究

兔异体骨髓间充质干细胞抑制增生性瘢痕形成的实验研究

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王达利魏在荣李修权邓呈亮章涛遵义医学院附属医院

目的：初步探讨异体骨髓间充质干细胞对活体动物增生性瘢痕形成的影响,为进一步将异体间充质千细胞用于增生性瘢痕的防治提供基础研究资料.方法：以成年6只健康雄性新西兰白兔为实验动物,于新西兰白兔双耳腹侧分别建立大小为6mm圆形增...

目的：初步探讨异体骨髓间充质干细胞对活体动物增生性瘢痕形成的影响,为进一步将异体间充质千细胞用于增生性瘢痕的防治提供基础研究资料.方法：以成年6只健康雄性新西兰白兔为实验动物,于新西兰白兔双耳腹侧分别建立大小为6mm圆形增生性瘢痕模型,每只兔耳分别建立6个增生性瘢痕模型.随机选择6只兔左耳为实验组(共36个创面),右耳为对照组(共36个创面)：实验组分别于上皮化完成后第2日(模型建立20天左右)和上皮化完成后第10日(模型建立30天左右),取第5代经BrdU标记后生长良好的异体BMSCs0.2ml(5×105/ml)于增生性瘢痕软骨膜上层进行环形注射.对照组在上述相应时间点注射相同剂量的PBS缓冲液;实验组与对照组分别于模型建立37天(第2次细胞移植后6天左右)取材.记录各实验组增生性瘢痕的大体外观,HE及VG染色观察其组织学变化,实验组行免疫荧光染色对移植的干细胞进行示踪.实时荧光-聚合酶链式反应(Real Time-PCR, RT-PCR)检测两组增生性瘢痕组织中核心蛋白多糖(decorn,DCN)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达变化情况,酶联免疫吸附试验(Elisa)检测增生性瘢痕组织中DCN、TGF-β1、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的蛋白表达情况.结果：术后37天对照组瘢痕增生明显,色红质硬,突出于皮面;实验组瘢痕组织体积缩小,变平变软,色泽轻度变浅.与对照组比较,HE、VG染色显示实验组成纤维细胞及炎性细胞数量减少,胶原排列较规则,胶原之间的间隙增大.对照组胶原纤维排列紧密、紊乱或成旋涡状.免疫荧光染色观察到移植细胞在组织中能够存活.RT-PCR结果显示实验组TGF-β1mRNA表达量较对照组显著降低,DCNmRNA表达量显著升高,结果均有统计学意义(P＜0.01).Elisa结果显示实验组TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量较对照组明显下调,DCN蛋白表达量较对照组明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论：兔耳创面在上皮化形成后移植异体BMSCs移植,能够通过下调TGF-β1及上调DCN的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,促进胶原排列有序等生物学效应,发挥抑制瘢痕增生提高创面愈合质量的作用.

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基质金属蛋白酶处理猪脱细胞真皮基质移植后组织学观察及其血管化评价

基质金属蛋白酶处理猪脱细胞真皮基质移植后组织学观察及其血管化...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：王芳石文邵阳马印东贾军辛乃军吴秋合宋国栋 250013 济南山东大学附属济南市中心医院烧伤科

目的：观察评价基质金属蛋白酶-7 (matrix metalloproteinase 7,MMP-7)处理的猪脱细胞真皮基质(porcine acellular dermal matrix,P-ADM) (P-ADM-pm)大鼠体内移植后组织学变化及其血管化过程.方法：取家猪网织层真皮62块,随机分为P-ADM...

目的：观察评价基质金属蛋白酶-7 (matrix metalloproteinase 7,MMP-7)处理的猪脱细胞真皮基质(porcine acellular dermal matrix,P-ADM) (P-ADM-pm)大鼠体内移植后组织学变化及其血管化过程.方法：取家猪网织层真皮62块,随机分为P-ADM组(A组)和P-ADM-pm组(B组),每组31块;随机取P-ADM、P-ADM-pm各1块行抽样检测(微生物检测、HE染色及免疫组织化学染色).取成年雄性Wistar大鼠30只,每只大鼠背部皮下左侧植入P-ADM(A组)、右侧植入P-ADM-pm(B组)各1块.分别于移植术后3、7、14、21、28 d随机取6只大鼠,行大体、HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色和扫描电镜观察,分析比较移植物宿主细胞、血管浸润及组织学变化.结果：抽样检测示P-ADM毛囊内毛发、上皮根鞘、细胞核、细胞碎片样结构及波形蛋白(Vimentin)、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白仍有少量残留,而在P-ADM-pm中被基本去除,胶原纤维束及胶原纤维之间间隙较P-ADM增大.移植术后7d,肉眼观察两组移植物表面均形成一层布有少量微血管的纤维薄膜,随术后时间延长微血管增加、变粗并浸润移植物,B组较A组明显,术后21 d两组纤维薄膜微血管减少、增粗,B组移植物整体呈粉红色表现.移植术后各时间点,A组移植物呈现较重炎性反应,14 d后宿主炎性细胞浸润之处胶原纤维形态结构出现裂解等破坏性改变;B组炎性反应轻,宿主细胞尤其是成纤维细胞、微血管长入的数量均较A组明显(P＜0.05),移植物胶原纤维形态结构基本保持正常.B组浅层成纤维细胞、微血管长入分别出现于移植术后3、7d,并分别于14、21 d时贯穿移植物全层;A组成纤维细胞、微血管分别出现于术后3、14d,至21d时均未贯穿移植物全层.14d扫描电镜观察B组移植物内长入较多成纤维细胞并可见其分泌的胶原原纤维构象.结论：宿主对P-ADM-pm的反应类似于正常创伤愈合过程,P-ADM-pm作为植入性支架材料具有良好的模板引导作用.

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干细胞活性因子鞘内注射治疗新生儿中-重度/重度缺氧缺血性脑病研究

干细胞活性因子鞘内注射治疗新生儿中-重度/重度缺氧缺血性脑病研...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：栾佐刘芳彭小明王琨刘卫鹏杨印祥王凤中国人民解放军海军总医院儿科北京100036 中国人民解放军白求恩国际和平医院河北石家庄050000 湖南省儿童医院新生儿四科长沙410007 中国人民解放军252医院河北保定071000

目的：探讨干细胞活性因子鞘内注射治疗新生儿中-重度/重度缺氧缺血性脑病(HIE)的可行性.对象及方法：参考2005年版《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准》、2006年中国亚低温多中心协作组亚低温临床试验、NICHD亚低温临床试验研究入组标准,2...

目的：探讨干细胞活性因子鞘内注射治疗新生儿中-重度/重度缺氧缺血性脑病(HIE)的可行性.对象及方法：参考2005年版《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准》、2006年中国亚低温多中心协作组亚低温临床试验、NICHD亚低温临床试验研究入组标准,2013年10月至2014年09月收治的新生儿缺氧缺血性脑病患儿17例,中-重度9例(53),重度8例(47％).所有患儿入组时完善脑电图、影像学检查(颅脑超声或头颅MRI).在常规治疗基础上,以体外培养的干细胞,适度传代后进行干细胞活性因子提取、富集,并行活性因子含量测定.以3×107个干细胞提取的活性因子为1个单位,在生后12小时、24小时、48小时内3次鞘内注射干细胞活性因子,每次1个单位.在生后7、28天、6个月、12个月、18个月复查脑电图、复查头颅MRI,进行新生儿神经行为测定(NBNA)、Bayley婴幼儿发展量表及Peabody运动发育量表进行评定,整体病人随访周期5个月-1岁.结果：(1) NBNA评分随访患儿中14天NBNA评分≥35分共6例,其中重度组患儿1例(25％),中-重度患儿5例(55.6％).28天NBNA评分≥35分的9例,重度患儿2例(50％),中-重度7例(77.8％).与对照组相比,治疗组患儿28天NBNA评分改善具有统计学意义.(2)随访情况17例患儿中存活16例(94.1％),死亡1例(5.9％),存活患儿中放弃治疗失访3例(18.7％).重度组死亡1例(12.5％),存活7例(87.5％),放弃治疗失访3例.智力、运动发育接近正常2例(50％),随访至6个月运动发育迟缓1例(25％),脑瘫1例(25％)(该例患儿6个月时复查头颅核磁提示原有软化灶面积缩小,脑容积明显增加).中-重度组患儿均存活(100％),运动及智力发育正常8例(88.9％);运动协调障碍1例(11.1％).(3)不良反应5例患儿出现注射后兴奋症状(29.4％),以上症状在8小时内缓解,未见其他不良反应.结论：中(重)度、重度HIE导致儿童死亡/严重神经发育障碍的比率高达55-73％,本研究初步结果提示千细胞活性因子鞘内注射治疗有望降低HIE死亡率及致残率、减轻中-重度及重度HIE患儿致残程度,同时,在一例重度缺氧缺血性脑病患儿脑软化后出现脑组织的再生,提示干细胞因子可能改善脑内环境,利于损伤后神经细胞再生.所有病例均未见严重并发症或不良反应,本组研究为进一步扩大样本和对照研究奠定了可行性和科学性的基础.

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含特异性结合胶原的重组干扰素A的生物材料

含特异性结合胶原的重组干扰素A的生物材料

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：胡骏亘皮晋魁解慧琪四川大学华西医院干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的：在临床上,干扰素A (IFNA)用于治疗多种肿瘤,通常采用皮下、肌内、静脉给药.IFNA的副反应是剂量相关的,降低全身药物浓度,维持局部浓度能减少副反应,达到更好的治疗效果.目前已有一些研究运用了多种方法来控释、缓释IFNA.这些方法...

目的：在临床上,干扰素A (IFNA)用于治疗多种肿瘤,通常采用皮下、肌内、静脉给药.IFNA的副反应是剂量相关的,降低全身药物浓度,维持局部浓度能减少副反应,达到更好的治疗效果.目前已有一些研究运用了多种方法来控释、缓释IFNA.这些方法有各自的优缺点.组织工程的原理和方法提示,可以将生物因子与生物材料相结合,以达到缓释、定植生物因子的目的.胶原是一种常见的生物源性的材料,已有许多关于胶原作为药物载体和作为组织工程材料的研究.将IFNA与胶原材料简单复合,仍然存在IFNA易随体液扩散流失的问题.胶原结合域(CBD)是来源于胶原酶的多肽,具有特异性结合胶原的能力.我们设想,将IFNA与CBD进行融合重组,产生IFNA-CBD,提高IFNA对胶原的结合能力,将胶原支架作为IFNA-CBD的载体.通过体内、体外实验研究重组融合的IFNA-CBD的活性、含IFNA-CBD胶原材料的活性,以期构建出一种具有应用潜力的含特异性结合胶原的重组IFNA的生物材料.方法：我们设计、构建了含CBD的IFNA的质粒(pET-28a(+)-IFNA-CBD+).作为对照,我们构建了不含CBD的IFNA的质粒(pET-28a(+)-IFNA-CBD-).用大肠杆菌诱导表达出IFNA-CBD+和IFNA-CBD-目的蛋白.通过对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的CCK-8实验,研究IFNA-CBD+蛋白的抗肿瘤活性.通过对胶原结合的ELISA实验,研究IFNA-CBD+蛋白结合胶原的能力.将IFNA-CBD+或IFNA-CBD-蛋白与胶原溶液混合制成胶原水凝胶(CH-IFNA-CBD+、CH-IFNA-CBD-),通过ELISA实验研究CH-IFNA-CBD+、CH-IFNA-CBD-的蛋白释放特性.用MCF-7细胞在裸鼠皮下成瘤构建动物模型,在成瘤部位注射CH-IFNA-CBD+和CH-IFNA-CBD-,并以注射PBS和胶原水凝胶为对照组,通过比较裸鼠荷瘤体积和生存时间,初步评价CH-IFNA-CBD+的抗肿瘤活性.结果：MCF-7的CCK-8实验表明,IFNA-CBD+、IFNA-CBD-蛋白有相同的抗肿瘤活性.结合胶原的ELISA实验表明,IFNA-CBD+蛋白结合胶原的能力高于IFNA-CBD-蛋白.CH-IFNA-CBD+较CH-IFNA-CBD-更具有蛋白缓释的特性.动物体内实验表明, CH-IFNA-CBD+组的裸鼠肿瘤体积总体较小,且在治疗后的前7天肿瘤体积出现了明显缩小的情况,CH-IFNA-CBD+组的总体生存期较长,表明CH-IFNA-CBD+有一定的抗肿瘤活性.结论：我们设计了一种含IFNA-CBD+蛋白的胶原水凝胶材料. IFNA-CBD+蛋白既具有抗肿瘤的活性,又具有特异性结合胶原的能力.CH-IFNA-CBD+具有缓释IFNA-CBD+的特性.动物体内实验表明CH-IFNA-CBD+具有一定的抗肿瘤能力.有必要对材料进一步改性以提高应用潜能.

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