(1)对影响龙眼ISSR-PCR扩增反应的各个参数进行优化,建立适合龙眼的ISSR反应佛系:PCR反应体积为20μL,其中模板DNA25ng,引物0.2μmol/L,dNTP100μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,MgCl<,2>2.5m mol/L,10×PCR缓冲液2.0μL:扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,51—53℃(同引物退火温度有所不同)退火1min,72℃延伸90s,40个循环:72℃延伸7min。龙眼ISSR反应体系的建立为进行龙眼种质资源研究、分子育种等创造条件。(2)ISSR分析龙眼51份样品的传多样性和亲缘关系。筛选来自University of British Columbia BiotechnologyLab(UBCBL)的100个引物,获得12条多态性明显的引物:以这12条引物进行ISSR扩增,共产生155条扩增带,平均每个引物产生的条带数为12.9,不同引物获得的扩增带从10条～16条不等,其中最多的UBC873,为16条,最少的是UBC840产生10条酶带,DNA扩增酶带的多态性为95.4％。根据ED法计算51份样品间的遗传相似系数,采用UPGMA法进行龙眼亲缘关系分析,建立亲缘关系聚类树状图。以结合距离D=0.55为界,可以将51份龙眼遗传资源分为中国龙眼和泰国龙眼两大类型以D=0.27为界时,把供试的46份中国龙眼遗传资源分为8组。(3)龙眼焦核性状分子标记研究。福建省各地陆续发现一些龙眼'焦核'和'白核'单株,收集前发现10个'焦核'单株和3个'白核'单株,应用ISSR分子标记分析了这些单株与福建各地主要品种间的亲缘关系以及单株音的亲缘关系,有助于了解变异单株的来源和进一步的应用。同时,采用集团分离分析(Bulked SegregantAnalysis,BSA)方法,运用ISSR技术进行了龙眼焦核性状的分子标记研究。等量混合焦单株的DNA构建焦核池Pc,等量混合非焦核单株的DNA,构建非焦核池Ps,从12个多态性高的引物中筛选到引物UBC842在焦核池中扩增出特异的约666bp DNA条,在8个焦核单株和8个非焦核品种间的扩增进一步证实666bp DNA条带只存在于焦核单株中,而在非焦核品种中没有该片段,从而初步认为ISSR标记UBC842<,666>与龙眼焦核性状相连锁。
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