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机构

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3 篇 中国医学科学院北...
3 篇 军事医学科学院野...
3 篇 广东蓝岛生物技术...
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3 篇 云南农业大学
3 篇 中国医学科学院/北...
3 篇 广州医学院第二附...
2 篇 广东大华农动物保...
2 篇 广州医药工业研究...
2 篇 昆明医学院
2 篇 解放军昆明总医院
2 篇 华南农业大学
2 篇 广西大学
2 篇 上海市农业科学院...
2 篇 中国医学科学院/北...
2 篇 广州医学院第一附...
2 篇 广东省实验动物监...
2 篇 中国人民解放军总...
2 篇 解放军总医院

作者

9 篇 顾为望
7 篇 代解杰
5 篇 孙晓梅
5 篇 陈召威
4 篇 连雪科
4 篇 钟浩
4 篇 刘运忠
4 篇 陈华
3 篇 马玉媛
3 篇 陈正
3 篇 李德胜
3 篇 卜泉
3 篇 匡德宣
3 篇 曾养志
3 篇 霍金龙
3 篇 高家红
3 篇 陆彩霞
3 篇 李光辉
3 篇 饶军华
3 篇 马俊杰

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76 篇 中文
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西藏小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养和纯化

西藏小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养和纯化

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：杜阳春潘光辉陈正马俊杰李光辉易燕方佳丽徐璐李德胜艾威广州医学院第二附属医院移植科广州 510260 广州医学院第二附属医院移植科广州 10260

目的：西藏小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养和纯化技术探讨。方法：对西藏小型猪分别进行骨髓获取、骨髓间充质干细胞分离、接种、培养以及传代。并测定骨髓间充质干细胞的生长活力。结果：利用密度梯度离心分离的原代细胞呈圆形且透... 详细信息

目的：西藏小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养和纯化技术探讨。方法：对西藏小型猪分别进行骨髓获取、骨髓间充质干细胞分离、接种、培养以及传代。并测定骨髓间充质干细胞的生长活力。结果：利用密度梯度离心分离的原代细胞呈圆形且透明，接种后约fi小时开始贴壁，48-72小时开始变形，多数呈长梭形及多角形，且出现散在的集落样生长细胞，3-7d细胞数量迅速增多，部分呈漩涡状生长口第3代后细胞变得较为均质，到第10代细胞仍然生长状态良好。按照i：2-1：4传代，细胞密度大约为4x 104/cm2,可以5--7天传代一次，细胞生长快。MSCs复苏后进行台盼蓝染色，得到其复苏后存活率为85%;消化传代后(冻存前)MSCs进行台盼蓝染色，得其存活率为99%。说明冻存和复苏过程中，有部分细胞死亡，对细胞活力有一定影响。结论：本文获得的西藏小型猪MSCs复苏后的活力为85%，跟冻存前99%比较，有较大下降，说明冻存条件还有待改进。通过密度梯度离心法可以成功分离出西藏小型猪的MSCs;本方法获得的MSCs生长活力好，符合MSCs的基本生物学特性。

关键词：动物模型骨髓间充质干细胞分离培养密度梯度离心法

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成体西藏小型猪胰岛体外分离与纯化的研究

成体西藏小型猪胰岛体外分离与纯化的研究

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：汪亦男戚文军胡强唐华那顺巴雅尔肖明生顾为望东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司东莞 523808 东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司东莞 523808 南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所广州 510515 东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司东莞 23808

目的：确定成体西藏小型猪胰岛体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛。方法：对比不同质量浓度(1g/1,2g/1,3g/1,4g/1)和同一质量浓度条件下不同时间点(0min,l5min,30min,45min,60min,75min,90min)胶原酶分离... 详细信息

目的：确定成体西藏小型猪胰岛体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛。方法：对比不同质量浓度(1g/1,2g/1,3g/1,4g/1)和同一质量浓度条件下不同时间点(0min,l5min,30min,45min,60min,75min,90min)胶原酶分离获得胰岛的数量和效果。使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心、静置4种方法纯化分离胰岛悬液,比较最终收集到的胰岛数量和效果。结果：确定了不同质量浓度的胶原酶获取胰岛的最佳时间,胶原酶l g/l组为45rain,2g/1、3g/1和4g/1组为30min,各组在最佳时间点获得胰岛的数量最多的为1g/1组,各组在最佳时间点获得的胰岛形态完整,具有活性;4种纯化方法中,获得的胰岛数量由多到少依次为静置＞离心＞淋巴分离液离心＞ficoll400密度梯度离心,4种方法获得的胰岛均具有活性。结论：在组织块剪碎消化的情况下,胶原酶质量浓度1g/1、消化时间45min的分离条件可获得数量较多的胰岛,静置的纯化手段收集到的胰岛数量最多。

关键词：成体西藏小型猪胰岛素体外分离静置纯化糖尿病治疗

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中缅树鼩繁殖周期内生殖激素的初步研究

中缅树鼩繁殖周期内生殖激素的初步研究

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：黄璋琼叶尤松陆彩霞孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明 650118

目的：试图寻找树鼩发情鉴定、妊娠诊断、产仔日期的推测方法。方法：对4只雌性树鼩妊娠期血清中雌二醇、孕酮浓度进行了动态监测;分娩前后血清中孕酮含量进行比较;并研究分娩后雌二醇与阴道角化上皮细胞变化之间的关系。结果：树鼩妊娠... 详细信息

目的：试图寻找树鼩发情鉴定、妊娠诊断、产仔日期的推测方法。方法：对4只雌性树鼩妊娠期血清中雌二醇、孕酮浓度进行了动态监测;分娩前后血清中孕酮含量进行比较;并研究分娩后雌二醇与阴道角化上皮细胞变化之间的关系。结果：树鼩妊娠期E2大多维持在50.80±48.68 pg/ml此基础水平,生产前E2略有回升,产后开始下降;P在整个妊娠期维持较高水平10.62±1.59 ng/ml,生产前期P迅速下降至基础水平6.86±1.62ng/ml;分娩前第l天孕酮含量(6.86±1.62ng/m1)与分娩前第3天(9.81±1.34ng/ml)、分娩当天(3.97±0.32ng/ml)、分娩后第1天(3.82±0.64ng/ml)比较差异均显著(P<0.01或P<0.05);同一个动情周期内树鼩阴道上皮细胞平均角化率与血清中雌二醇浓度有显著的正相关关系。结论：为树鼩发情鉴定、妊娠诊断、产仔日期的推测以及为树鼩作为避孕药物筛选模型的研究,提供了基础资料。

关键词：试验用动物树鼩繁殖周期生殖激素孕酮含量

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五指山小型猪糖耐量试验及血脂分析

五指山小型猪糖耐量试验及血脂分析

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：潘金春闵凡贵袁文王希龙陈华陈瑞爱王凤国罗书明叶建聪广东省实验动物监测所广州 510260 中国人民解放军总医院北京 100853 广东大华农动物保健品股份有限公司云浮 527400

目的：确定五指山小型猪的正常糖耐量水平，并检测血脂，筛查糖、脂代谢异常小型猪。方法：选择未去势的五指山小型猪，禁食不禁水12 h后按1.2 ml/kg体重的剂量静脉注射50%葡萄糖注射液，并分别在注糖前、注糖后10、30、60、90和120 mi... 详细信息

目的：确定五指山小型猪的正常糖耐量水平，并检测血脂，筛查糖、脂代谢异常小型猪。方法：选择未去势的五指山小型猪，禁食不禁水12 h后按1.2 ml/kg体重的剂量静脉注射50%葡萄糖注射液，并分别在注糖前、注糖后10、30、60、90和120 min采血测定血糖值。同时采取空腹血清送实验室检测血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH)等生化指标。结果：五指山小型猪静脉注糖后血糖水平出现显著性波动，注糖后10 min内血糖水平达到峰值，随后逐渐下降，直至注糖后90 min恢复到给糖前水平。有7头小型猪的糖耐量部分血糖值超过95%置信度上线值，有12头小型猪部分相关的血清生化指标值超过95%置信度上线值。相关性分析发现GLU与TG、CHOL、HDL-CH、LDL-CH这4个指标都存在显著的相关性，多因素分析表明TG、HDL-CH与GLU显著相关。结论：筛选出糖代谢或脂代谢异常，以及糖耐量减低的小型猪。

关键词：动物实验五指山小型猪葡萄糖耐量试验血糖分析血脂分析

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西藏小型猪OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组融合蛋白制备

西藏小型猪OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组融合蛋白制备

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：吴丽红刘闻黄威郭日红袁进顾为望施振旦南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所广州 510515 东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司东莞 523808 南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所广州 510515 华南农业大学动物科学学院广州 510642

目的：克隆西藏小型猪OBR基因并原核表达ECD近跨膜区重组融合蛋白。方法：(1)根据猪OBR基因序列(GenBank号：AF092422.1)设计并合成5条特异性引物,以西藏小型猪肝脏组织总RNA为模板,经RT-PCR方法获得了OBR基因ECD(胞外域)和ICD(胞内域)... 详细信息

目的：克隆西藏小型猪OBR基因并原核表达ECD近跨膜区重组融合蛋白。方法：(1)根据猪OBR基因序列(GenBank号：AF092422.1)设计并合成5条特异性引物,以西藏小型猪肝脏组织总RNA为模板,经RT-PCR方法获得了OBR基因ECD(胞外域)和ICD(胞内域)片段;再以这两片段为模板,利用Overlap PCR法扩增OBR基因全cDNA序列,序列测定后与GenBank上报导的其它动物作同源性比较及亲缘进化树分析。(2)另设计1对带有BamHI和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR基因ECD近跨膜区(1705-2364bp),经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamH I和HindIII两酶切位点之间,构建重组表达质粒并在大肠杆菌***。2l(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物。结果：(1)同源性比较及亲缘进化树分析显示,与广西巴马小型猪、家猪的亲缘性最高(99.6%),其次奶牛(91.1%),再次犬(90.0%),人类为88.3%;(2)SDS-PAGE电泳分析和westernblotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量约27.6KDa左右的融合蛋白。结论：成功表达西藏小型猪ECD近跨膜区融合蛋白,为下一步研究OBR基因的功能、研究肥胖发病机制、探寻预防与控制肥胖方法奠定基础。

关键词：肥胖疾病西藏小型猪瘦素受体基因体外克隆重组融合蛋白原核表达

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Beagle犬大脑及小脑微血管的血管周围间隙形态计量

Beagle犬大脑及小脑微血管的血管周围间隙形态计量

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：钟子健徐勤徐谦马伟凤沈逸萍苏俊芳广州中医药大学基础医学院病理教研室广州 510405

目的：为掌握beagle犬大脑及小脑微血管的血管周围间隙形态组织学参数,为中枢神经损伤及相关疾病的病理诊断提供组织学判断依据。方法：以40只成年beagle犬为对象,雌雄各半, beagle犬在12月龄时处死。以10%中性福尔马林固定大脑及小脑... 详细信息

目的：为掌握beagle犬大脑及小脑微血管的血管周围间隙形态组织学参数,为中枢神经损伤及相关疾病的病理诊断提供组织学判断依据。方法：以40只成年beagle犬为对象,雌雄各半, beagle犬在12月龄时处死。以10%中性福尔马林固定大脑及小脑,石蜡包埋,5 pxn切片,HE染色。以SpotAdvanced图像分析软件测量beagle犬大脑及小脑微血管的血管周围间隙,同时比较大脑、小脑及雌雄性动物之间的区别。结果：显示beagle犬小腩微血管的血管周围间隙宽度均值为(8.936±1.898)μm,大脑微血管的血管周围间隙均值为(17.877±2.792)μm,其中雌性beagle犬大脑微血管的血管周围间隙宽度均值为(17.839±2.321)μm;雄性beagle犬大脑微血管的血管周围问隙宽度均值为(17.915±3.258)μm雌性beagle犬小脑微血管的血管周围间隙管径为(9.277±2.466)μm;雄性beagle犬小脑微血管的血管周围间隙管径为(8.595±1.033)μm,雌雄犬性别问差异无显著性。结论：雌雄性beagle犬大脑及小脑微血管的血管周围间隙宽度无显著差异(P＞0.005)。但大脑微血管的血管周围间隙宽度明显大于小脑微血管的血管周围间隙宽度(P＜0.001),两者间差异有显著性。

关键词：比格犬神经损伤血管周围间隙形态计量

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不同辐射剂量对西藏小型猪小肠线粒体的影响

不同辐射剂量对西藏小型猪小肠线粒体的影响

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：王玉珏陈驰吴少杰郭凯顾为望南方医科大学实验动物中心南方医科大学珠江医院血液科南方医科大学珠江医院泌尿外科广东广州 510515

目的：观察不同剂量x线全身照射对西藏小型猪小肠线粒体的影响及其变化特点。方法：将18头成年,健康,雄性西藏小型猪分为6组。实验组5组,对照组1组(n=3头/组)。分别接受2,5,8,11,14G.y全身X线照射。照射后72h麻醉处死并采集小肠组织分... 详细信息

目的：观察不同剂量x线全身照射对西藏小型猪小肠线粒体的影响及其变化特点。方法：将18头成年,健康,雄性西藏小型猪分为6组。实验组5组,对照组1组(n=3头/组)。分别接受2,5,8,11,14G.y全身X线照射。照射后72h麻醉处死并采集小肠组织分别检测线粒体相关基因的表达,线粒体呼吸链复合酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ活性,线粒体琥珀酸氧化呼吸链和NADH氧化呼吸链的功能及观察线粒体的超微结构。结果：8Gy以下剂量组的线粒体蛋白编码相关基因表达、呼吸链复合物活性及呼吸功能明显低于对照组且随放射剂量的增加而降低;而8Gy以上剂量组,上述指标虽仍明显低于对照组,但不再随放射剂量的增加而继续降低并维持于一较低水平。电镜下线粒体超微结构在2,5Gy时的改变主要表现为线粒体的扩张及轻微的电子密度降低。8Gy及其后的剂量组则观察到更为明显的电子密度降低及线粒体的空泡化,嵴与线粒体外膜的连接缺失等。结论：电离辐射导致的小肠线粒体损害在一定剂量范围内(8Gy以下)随放射剂量的增加而愈发明显：但接受更高强度的照射后,其损伤程度并不会随放射剂量的增加而继续增加。

关键词：动物模型西藏小型猪辐射剂量小肠线粒体辐射病

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猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：温和心蒋荣华王杰苏栋李世照盘宝进贵港出入境检验检疫局综合实验室贵港 537100 广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心南宁 530021

目的：建立一种能快速检测猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR方法。方法：以小肠结肠炎耶尔森氏菌耐热肠毒素基因的保守区为靶区域设计特异引物和探针,建立一种能快速检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的实时荧光PCR方法,并对方法的特异性、敏... 详细信息

目的：建立一种能快速检测猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR方法。方法：以小肠结肠炎耶尔森氏菌耐热肠毒素基因的保守区为靶区域设计特异引物和探针,建立一种能快速检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的实时荧光PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、线性相关性、重复性等因素进行试验。结果：建立的荧光PCR法对小肠结肠炎耶尔森氏菌具有特异的反应性,最低检出限为3.3×101 cfu/ml,菌液浓度在3_3×107cfu/ml至3-3×101cfu/ml时与Ct值有较好的线性关系,试验重复性良好。结论：建立的小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR检测方法适用于猴小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测。

关键词：人畜共患病病原猴小肠结肠炎耶尔森氏菌荧光PCR检测技术快速检测方法

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西藏小型猪Leptin及其受体胞外区片段的克隆及原核表达

西藏小型猪Leptin及其受体胞外区片段的克隆及原核表达

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：吴丽红范沛王丛莉刘玉鹏黄黎珍施振旦顾为望南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所广州 510515 华南农业大学动物科学学院广州 510642

目的：克隆及原核表达西藏小型猪瘦素(Leptin)成熟肽及瘦素受体胞外区片段。方法：根据西藏小型猪瘦素序列(GenBank号：GQ240885.1)和猪瘦素受体基因胞外域序列(GeIlBank号：AF167719.1)分别设计并合成两对引物扩增瘦素、瘦素受体基因... 详细信息

目的：克隆及原核表达西藏小型猪瘦素(Leptin)成熟肽及瘦素受体胞外区片段。方法：根据西藏小型猪瘦素序列(GenBank号：GQ240885.1)和猪瘦素受体基因胞外域序列(GeIlBank号：AF167719.1)分别设计并合成两对引物扩增瘦素、瘦素受体基因胞外域编码区1654—2319位片段,以西藏小型猪组织总RNA为模板,经反转录，聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片段。再以该两个特异性片段为模板,另外设计两对套式引物分别扩增瘦素64.504位(成熟肽编码区)和瘦素受体基因胞外域编码区1655-2314 bp的cDNA片段,将该两片段克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌***5a测序并永久保存。此两片段经酶切后克隆到表达载体pRSET A的BamH I和HindⅢ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-OB和pR-OBR-a并在大肠杆菌***21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。结果：在IPTG诱导下促使重组菌pR-OB表达了相对分子质量约18.0KDa左右的融合蛋白;重组菌pR-OBRo-a表达了相对分子质量约27KDa左右的融合蛋白。结论：说明重组质粒pR-OB、pR-OBR-a在大肠杆菌BL2 1(DE 3)中分别可表达西藏小型猪瘦素成熟肽、瘦素受体片段蛋白,为进一步研究瘦素、瘦素受体功能和应用提供了基础。

关键词：动物模型瘦素瘦素受体胞外区片段克隆原核表达

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猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：孙宇马玉媛罗佳章金刚军事医学科学院野战输血研究所解放军第305医院检验科军事医学科学院野战输血研究所广西大学兽医学院

目的：克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoproteiIl B mRNA editing cnzymc,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法：分离健康五指山猪外周血单个核细胞,TRIZO法提取... 详细信息

目的：克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoproteiIl B mRNA editing cnzymc,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法：分离健康五指山猪外周血单个核细胞,TRIZO法提取细胞总RNA,RT-PCR技术特异性扩增目的基因,目的基因插入真核表达载体pDSredl-N1及改造的pCDNA3-Flage载体构建表达质粒并在PK-15细胞中进行表达,通过激光共聚焦纤维镜及Western blot方法对目的基因的表达进行鉴定。结果：克隆的目的基因与公布的基因序列同源性达99%;激光共聚焦显微镜显示目的基因在PK-15细胞中实现了表达,且表达产物定位于细胞浆内：westem blot鉴定结果表明,表达的目的蛋白大小与预期相符。结论：成功构建了猪APOBEC3F真核表达载体,为研究猪APOBEC3F分子抗猪内源性反转录病毒机制及单克隆抗体的制备提供了实验基础。

关键词：猪APOBEC3F基因基因克隆真核表达载体体外表达体外鉴定

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