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作者

9 篇 顾为望
7 篇 代解杰
5 篇 孙晓梅
5 篇 陈召威
4 篇 连雪科
4 篇 钟浩
4 篇 刘运忠
4 篇 陈华
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3 篇 陈正
3 篇 李德胜
3 篇 卜泉
3 篇 匡德宣
3 篇 曾养志
3 篇 霍金龙
3 篇 高家红
3 篇 陆彩霞
3 篇 李光辉
3 篇 饶军华
3 篇 马俊杰

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猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定

猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：叶小丽吕茂民颜奇坡郭逸吴健敏田克恭马玉媛章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京 100850 广西兽医研究所广西南宁 530001 中国动物疫病预防控制中心北京 100094

目的：构建猪内源性反转录病毒(Porcine endogenousretrovirus,PERV)囊膜基因绷v的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法：用RT-PCR方法扩增五指山猪(WuZhiShanminiatuer Digs,WZS)来源PERV的env基因,将其插入pGEM-TEasy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM.T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoR I酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的无内毒素的质粒pHCMV-env,转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况。结果：成功扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建pHCMV—env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后鉴定该细胞系中有目的基因的整合和转录。结论：成功构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为深入研究PERV的细胞嗜性合宿主范围奠定了基础。

关键词：猪内源性反转录病毒 env基因真核表达质粒质粒构建质粒鉴定

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版纳微型猪近交系AQP3克隆、序列分析及组织表达研究

版纳微型猪近交系AQP3克隆、序列分析及组织表达研究

引用

2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：王配霍金龙李莲军邹芬曾养志云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆明 650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明 650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明 650201 云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆 650201

目的：克隆版纳微型猪近交系aquaporin 3(AQP3)基因,并利用生物信息学方法分析其序列特征,研究其在猪各组织中的表达情况。方法：从版纳微型猪近交系脾脏中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增猪AQP3编码区序列,将纯化的片段与pMDl8-T载体连接... 详细信息

目的：克隆版纳微型猪近交系aquaporin 3(AQP3)基因,并利用生物信息学方法分析其序列特征,研究其在猪各组织中的表达情况。方法：从版纳微型猪近交系脾脏中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增猪AQP3编码区序列,将纯化的片段与pMDl8-T载体连接,转化宿主菌DH 5a,筛选阳性克隆进行测序。并采用半定量RT-PCR方法分析版纳微型猪近交系不同组织中AQP3基因的表达情况。结果成功克隆出AQP3基因编码区全长873 bp的序列,GenBank登录号为HQ888860,其编码290个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,与牛的AQP3基因同源性最大,达99%。多组织半定量RT-PCR研究表明AQP3 mRNA在BMI猪的脾脏、肾脏、肺、小肠中均有表达,其中脾脏中表达最高。结论成功克隆出了版纳微型猪近交系AQP3基因全长编码区,并对其编码的蛋白质功能进行了预测,为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词：生物信息学方法水通道蛋白3基因序列特征组织表达

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中老年食蟹猴糖尿病相关基因高能量膳食诱导前后的差异表达

中老年食蟹猴糖尿病相关基因高能量膳食诱导前后的差异表达

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：张秀娟季芳靳丽莎孙云霄李学家周彤饶军华刘晓明彭白露广东省昆虫研究所广东广州510260 广东蓝岛生物技术有限公司广东广州510555 广东蓝岛生物技术有限公司广东广州510555 南方医科大学广东广州510515

本研究选择63只血生化指标正常的中老年食蟹猴，高能量膳食诱导6个月，按空腹血糖值(FPG)将其分为正常血糖组和诱高血糖组;全自动血液生化仪检测诱导前后5个血生化指标的水平变化;采用荧光定量PCR分析37个糖尿病相关基因在外周血白细胞... 详细信息

本研究选择63只血生化指标正常的中老年食蟹猴，高能量膳食诱导6个月，按空腹血糖值(FPG)将其分为正常血糖组和诱高血糖组;全自动血液生化仪检测诱导前后5个血生化指标的水平变化;采用荧光定量PCR分析37个糖尿病相关基因在外周血白细胞中的mRNA差异表达。结果表明，高能量膳食诱导后，中老年食蟹猴群中95.24%的个体FPG均升高，且诱高血糖组FPG显著高于正常血糖组(P＜0.05)，但TCHO、HDL-C、LDL-C和。TG与实验分组无显著相关性(P＞0.05);在诱高血糖组外周血白细胞中G6PD、HMOX1、NSF、RAB4A、SNAP23、STX4、VAPA7个基因的tuRNA表达水平存在显著差异(P＜0.05)，其中SNAP23和STX4基因适合作为2型糖尿病的早期风险预警的候选基因。

关键词：动物模型 2型糖尿病外周血白细胞基因表达

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巴马香猪Toll样受体4基因cDNA的克隆及生物信息学分析

巴马香猪Toll样受体4基因cDNA的克隆及生物信息学分析

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：巨向红徐汉进雍艳红安立龙效梅许英梅广东海洋大学动物医学系湛江 524088 广东海洋大学动物科学系湛江 524088

目的：研究TLR4在猪自然免疫中的作用及机制,为猪的抗病育种及免疫佐剂的开发提供依据。方法：利用NCBI公布的TLR4基因序列设计引物,RT-PCR技术克隆巴马香猪TLR4基因。结果：所得基因序列提交GenBank,登录号：GQ304754。经序列分析,发... 详细信息

目的：研究TLR4在猪自然免疫中的作用及机制,为猪的抗病育种及免疫佐剂的开发提供依据。方法：利用NCBI公布的TLR4基因序列设计引物,RT-PCR技术克隆巴马香猪TLR4基因。结果：所得基因序列提交GenBank,登录号：GQ304754。经序列分析,发现巴马香猪TLR4基因开放阅读框长2526 bp,编码841个氨基酸,该蛋白等电点为6.58,分子量为96.4×103;与普通猪比对发现巴马香猪TLR4基因有5个碱基发生突变;与小鼠、狗、鸡、牛、羊和人的同源性分别为71.9%、81.5%、54.2%、86.4%、85.5%和81.9%：TLR4膜外区蛋白为背侧多个a螺旋和内侧多个β折叠平行交替排列构成一个弯曲状螺旋结构：N末端存在信号肽,且可能在23～24位氨基酸处存在裂解位点;胞外区有13个明显的LRR,分别位于第53～74、77～100、101～124、149～173、174～192、201～225、372～393、398～429、446～469、470～494、495～518、519～541、543～566位氨基酸区;膜外区含8个N连接的糖基化位点。结论：本研究成功克隆巴马香猪TLR4基因,为进一步研究该基因的功能和蛋白质的特性奠定了基础。

关键词：巴马香猪 TLR4基因基因克隆 Toll样受体生物信息学分析

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版纳微型猪近交系TNF-α基因mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

版纳微型猪近交系TNF-α基因mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：霍金龙李颖赵跃潘伟荣刘丽仙霍海龙曾养志云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆明 650201 昆明医学院第二附属医院整形外科昆明 650101 云南农业职业技术学院畜牧兽医系昆明 650212

目的：快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因THF-α的表达情况,构建THF-α基因及内参GAPDH基因荧光定量PCR质粒标准品。方法：利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪建立动物模型,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-... 详细信息

目的：快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因THF-α的表达情况,构建THF-α基因及内参GAPDH基因荧光定量PCR质粒标准品。方法：利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪建立动物模型,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-PCR扩增。纯化目的片段与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5a,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR,生成标准曲线。结果：建立的THF-α基因和GAPDH内参基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法灵敏度分别可达103和105拷贝,线性范围分别为103-109和105～109拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在的线性关系R2分别为0.993和0.999,扩增效率E分别为111.073%和95.948%。结论：成功的构建了版纳微型猪近交系THF-α基因质粒标准品和标准曲线,并用内参基因GAPDH进行校正,此方法可为探讨THF-α基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。

关键词：动物临床疾病 THF-α基因 GAPDH基因实时荧光定量基因表达

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SPIO、CM-DiI和EGEP标记西藏小型猪骨髓间充质干细胞优缺点的比较

SPIO、CM-DiI和EGEP标记西藏小型猪骨髓间充质干细胞优缺点的比较

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：艾威陈正马俊杰方佳丽李光辉李德胜潘光辉广州医学院第二附属医院肾移植科广东广州 510260

目的：比较SPIO、CM-DiI及EGFP标记西藏小型猪骨髓间充质干细胞的优缺点,为进一步研究MSCs移植后在动物体内示踪提供实验依据。方法：利用密度梯度分离法、贴壁培养西藏小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)。分别用SPIO、CM-DiI及EGFP标记第3... 详细信息

目的：比较SPIO、CM-DiI及EGFP标记西藏小型猪骨髓间充质干细胞的优缺点,为进一步研究MSCs移植后在动物体内示踪提供实验依据。方法：利用密度梯度分离法、贴壁培养西藏小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)。分别用SPIO、CM-DiI及EGFP标记第3代MSCs,显微镜下观察标记后的形态,以及对细胞生物特性的影响;荧光显微镜及流式细胞仪检测传代前后不同代细胞标记率的变化。结果：25ug/ml铁浓度的SPIO标记第三代MSCs,经普鲁士蓝染色,细胞质内可见分布不同密度蓝色铁颗粒。随着培养时间延长,铁颗粒明显减少;CM-DiI在体外标记骨髓间充质干细胞荧光显微镜下呈红色,流式细胞检测标记效率98.0%,传代后P1、P2标记效率为分别为43%、18%,荧光强度也有一定程度降低,未见染料对细胞形态和生长产生明显影响：携带EGFP基因的慢病毒感染MSCs96h后,荧光显微镜下呈绿色,约84.5%细胞表达绿色荧光,体外培养传代培养,至第1、2代EGFP阳性细胞率为86%、86%,荧光强度基本保持不变,细胞生长不受病毒转染的影响。结论：SPIO、荧光染料CM-DiI及携带EGFP基因的慢病毒在体外均可标记西藏小型猪MSCs;三种标记方法在体外相比较,CM-DiI标记效率高,但稳定性较差,携带EGFP慢病毒感染标记相对稳定。

关键词：骨髓间充质干细胞超顺磁纳米氧化铁颗粒标记荧光标记技术转基因技术

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内关穴位埋针对心肌缺血小型猪心肌组织TGF-β3 mRNA和蛋白表达的影响

内关穴位埋针对心肌缺血小型猪心肌组织TGF-β3 mRNA和蛋白表达的...

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：杨孝芳崔瑾刘小雨张小珊冯麟王兴桂钱宁贵阳中医学院针推系贵阳中医学院动物研究所贵阳550002 同济大学附属第十人民医院中医科上海200072

目的：从基因、蛋白水平研究“内关”穴位埋针对缺血损伤小型猪心肌TGF-β3mRNA和蛋白表达的影响。方法：32只小型猪随机分为4组,分别为假手术组、模型组、内关组和膈俞组,采用左冠状动脉前降支结扎建立心肌缺血模型,假手术组穿线不结扎... 详细信息

目的：从基因、蛋白水平研究“内关”穴位埋针对缺血损伤小型猪心肌TGF-β3mRNA和蛋白表达的影响。方法：32只小型猪随机分为4组,分别为假手术组、模型组、内关组和膈俞组,采用左冠状动脉前降支结扎建立心肌缺血模型,假手术组穿线不结扎,内关组和膈俞组分别在模型组基础上进行内关、膈俞穴埋针治疗,用real time PCR和Westem blot方法检测TGF-β3mRNA和蛋白表达水平。结果：假手术组有少量TGF-β3mRNA和蛋白表达,模型、内关、膈俞组TGF-β3mRNA和蛋白表达量均比假手术组高(P<0.05,<0.01),内关穴位埋针治疗可上调TGF-β3mRNA和蛋白表达量,与模型组比差异均非常显著(P<0.01);膈俞组有上调TGF-β3mRNA表达量的趋势,但与模型组比无显著性差异(P>0.05);膈俞穴位埋针可上调TGF—β3蛋白表达量,与模型组比均差异非常显著(P<0.01),且在上调TGF-B3蛋白表达量方面内关优于膈俞(P<0.05)。结论：内关穴位埋针可能更能通过上调TGF-β3mRNA和蛋白表达,刺激内皮细胞增殖,通过直接和间接的作用促使新生血管形成,增加毛细血管密度,促进侧枝循环建立,增加缺血心肌血流,实现对心肌组织的保护作用。

关键词：动物模型心肌缺血内关穴位埋针针灸疗法

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人工饲养条件下不同年龄自然死亡实验恒河猴的肝脏病变谱分析

人工饲养条件下不同年龄自然死亡实验恒河猴的肝脏病变谱分析

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：赵玺龙李学锋陈玥宋蜀伶李锋蔡琳杨举伦解放军昆明总医院病理科实验动物病理检测中心昆明 650032 云南省灵长类实验动物有限公司昆明 650216

目的：观察人工饲养条件下实验恒河猴肝脏病理改变，探讨实验猴肝脏疾病分布规律和病理改变特点，丰富实验猴自发病变基本研究资料。方法：对1998～2008年云南地区饲养的自然死亡的155只恒河猴(年龄2～20岁)的肝脏进行病理检查，按年龄... 详细信息

目的：观察人工饲养条件下实验恒河猴肝脏病理改变，探讨实验猴肝脏疾病分布规律和病理改变特点，丰富实验猴自发病变基本研究资料。方法：对1998～2008年云南地区饲养的自然死亡的155只恒河猴(年龄2～20岁)的肝脏进行病理检查，按年龄分为幼年组、成年组、老年组，并对观察结果进行统计学分析。结果：155例恒河猴中88例检出肝脏病变，有肝细胞变性、肝细胞坏死、炎细胞浸润、吞噬细胞增生、肝淤血、纤维组织增生、肝脓肿、寄生虫共八种主要病变t出现率最高的为肝细胞水样变性(34.19%)。除肝脓肿外，幼年组、成年组、老年组八种病变均有检出·卡方检验显示：肝细胞水样变性成年组病变率明显高于幼年组：肝细胞脂肪变性老年组明显高于成年组和幼年组;轻度炎细胞浸润病变老年组明显高于成年组;纤维组织增生老年组明显高于幼年组(P＜0.05)。结论：人工饲养条件下死亡实验猴肝脏病变检出率较高，实验猴肝脏病理改变随年龄增长而病变加重，提示在进行实验猴肝脏研究时，应注意对自发性病变的判别，药物安全性评价实验应避免选择老年猴做为研究对象。死亡实验猴肝脏病变谱研究，对实验猴的质量控制和相关动物实验有重要指导价值。

关键词：人工饲养实验恒河猴肝脏疾病分布规律病理改变特点

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滇南小耳猪与云南野猪SLA-DQA基因的多态性比较

滇南小耳猪与云南野猪SLA-DQA基因的多态性比较

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：刘荣辉卢丽仪陶璇于辉李华佛山科学技术学院动物科学系南海 528231 四川农业大学动物科技学院雅安 625014 开县畜牧兽医局重庆 400000 佛山科学技术学院动物科学系南海 528231 佛山科学技术学院动物科学系南海 528231 四川农业大学动物科技学院雅安 625014

目的：分析滇南小耳猪与云南野猪(***)SLA-DQA基因不同酶切位点的基因型多态性以及等位基因的多态性，检验这些酶切位点上的基因频率是否达到Hardy-Weinberg平衡。方法：采用EcoR I和Alu I两种限制性内切酶对滇南小耳猪和云南野猪SLA-DQ... 详细信息

目的：分析滇南小耳猪与云南野猪(***)SLA-DQA基因不同酶切位点的基因型多态性以及等位基因的多态性，检验这些酶切位点上的基因频率是否达到Hardy-Weinberg平衡。方法：采用EcoR I和Alu I两种限制性内切酶对滇南小耳猪和云南野猪SLA-DQA第1和第2内含子部分序列以及完整的外显子2进行PCR-RFLP分析。结果：在EeoR I与Alu I酶切位点上均得到3种基因型，在这两个酶切位点上版纳系有9种组合基因型，明光系有8种组合基因型，而野猪仅发现4种组合基因型。经X2适合性检验表明：滇南小耳猪SLA-DQA外显子2在EcoR I与Alu I酶切位点上均未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P＜0.05)，但明光系和云南野猪在两酶切位点均达到了平衡状态(p＞0.05)。结论：滇南小耳猪SLA-DQA在EcDR I与Alu I酶切位点均表现为中度多态，云南野猪在EcoR I为中度多态，在Alu I酶切位点则为低度多态;滇南小耳猪的Hardy-Weinberg不平衡主要来自版纳系小耳猪。

关键词：滇南小耳猪云南野猪 SLA-DQA基因遗传特性

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猕猴艾滋病模型EKM基因治疗效果观察

猕猴艾滋病模型EKM基因治疗效果观察

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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会

作者：陆彩霞高家红江勤芳孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的：明确体外导入EKM基因的实验猕猴感染SHIV-KB9后,病毒复制和免疫反应情况,为基因治疗AIDS提供实验依据。方法：用血清学方法筛选出无SIV、S17LV、SRV/D和B病毒感染的猕猴7只,实验当天一边回输自体储备血75 ml,一边采集猴外周血75 m... 详细信息

目的：明确体外导入EKM基因的实验猕猴感染SHIV-KB9后,病毒复制和免疫反应情况,为基因治疗AIDS提供实验依据。方法：用血清学方法筛选出无SIV、S17LV、SRV/D和B病毒感染的猕猴7只,实验当天一边回输自体储备血75 ml,一边采集猴外周血75 ml进行CIM+T细胞分离培养,并导入EKM基因,培养结束后收获细胞,静脉回输猴体后再进行SHIV-KB9感染。采用流式细胞术、血常规检测、病毒栽量检测和基因拷贝数检测的方法确定导入基因后的实验猕猴感染SHIV-KB9后体内病毒复制和免疫损伤情况。结果：导入基因和回输细胞的实验猕猴其血浆病毒载量峰值都与已报道的推迟14 d出现,比模型对照组推迟11 d出现,血浆病毒载量峰值均比模型对照组峰值低。流式细胞术结果表明其CD4+T细胞计数也稳定在一定水平,CD4/CD8比值未出现明显倒置。实验组猕猴在试验结束时均未发展为猴AJDS。结论：自体回输导入EKM基因的CIM+T细胞的猕猴AIDS模型其血浆病毒载量峰值与模型对照组峰值比较有迟后作用,且低于模型对照组峰值,与回输细胞的实验对照组没有明显区别,其更确定的效果还有待进一步的研究。

关键词：实验猕猴艾滋病 EKM基因基因治疗

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