目的本研究目的在于研究老化的小胶质细胞及病理状态下小胶质细胞对于神经干细胞的反应,同时明确脑老化及神经退行性疾病的病理机制及为寻求一种神经退行性疾病的新的治疗途径提供实验依据。方法分别从12-18个月的小鼠及怀孕12.5天的ICR鼠体内分离提取小胶质细胞和神经干细胞进行原代培养,并进行免疫组化染色鉴定。消化细胞后接种于6孔及96孔板,利用插入式共培养系统将小胶质细胞与神经干细胞(1:4)共培养,设置共培养组,刺激组,以单纯小胶质细胞组作为对照,利用MTT法对小胶质细胞的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)增殖能力进行检测,利用Western blotting研究小胶质细胞内ERK及p-ERK等信号通路丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKS)蛋白表达变化。结果原代培养的神经干细胞聚集成球状,悬浮生长,Nestin染色呈阳性。小胶质细胞贴壁生长,折光性强,大部分细胞有短的突起呈分支状,小胶质细胞特异性标记物IB4染色结果显示细胞纯度在80%以上。与单纯小胶质细胞对照组相比,共培养后的小胶质细胞的表达能力均增加。ERK的蛋白表达较对照组上调;LPS刺激引起小胶质细胞激活,表现为细胞的胞体增大,突起数目减少;MTT试验显示共培养组小胶质细胞增殖能力比对照组强。结论通过以上的实验研究,神经干细胞对促进老化小胶质细胞的存活有一定的作用,这种作用可能跟MAPKS通道的激活有关。
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