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362 篇 会议

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362 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

312 篇 农学
- 294 篇 兽医学
- 19 篇 畜牧学
- 1 篇 林学
18 篇 医学
- 9 篇 临床医学
- 8 篇 基础医学(可授医学...
- 4 篇 公共卫生与预防医...
- 3 篇 药学(可授医学、理...
- 2 篇 医学技术（可授医学...
- 1 篇 中西医结合
- 1 篇 中药学(可授医学、...
9 篇 历史学
- 9 篇 中国史
4 篇 工学
- 1 篇 计算机科学与技术...
- 1 篇 化学工程与技术
- 1 篇 食品科学与工程（可...
- 1 篇 软件工程
- 1 篇 生物工程
2 篇 理学
- 2 篇 生物学
1 篇 教育学
- 1 篇 教育学
1 篇 管理学
- 1 篇 公共管理

主题

26 篇 病理学诊断
15 篇 蛋白表达
14 篇 动物医学
13 篇 病理组织学
11 篇 犬疾病
11 篇 生物学特性
9 篇 基因克隆
8 篇 原核表达
8 篇 临床症状
8 篇 病理诊断
8 篇 临床诊断
7 篇 致病机制
7 篇 基因表达
7 篇 细胞凋亡
6 篇 组织病理学观察
6 篇 组织病理学
6 篇 布鲁氏菌
6 篇 病理形态学
6 篇 免疫抑制
6 篇 病例分析

机构

71 篇 中国农业大学
29 篇 河南科技大学
23 篇 四川农业大学
19 篇 山东农业大学
17 篇 内蒙古农业大学
17 篇 东北农业大学
15 篇 华中农业大学
14 篇 甘肃农业大学
13 篇 西北农林科技大学
10 篇 贵州大学
9 篇 南京农业大学
9 篇 吉林大学
8 篇 石河子大学
8 篇 农业部动物临床诊...
8 篇 中国农业科学院哈...
7 篇 新疆石河子大学
7 篇 新乡学院
7 篇 贵州省动物疫病研...
6 篇 中国畜牧兽医学会...
5 篇 河南科技学院

作者

32 篇 赵德明
27 篇 龙塔
24 篇 周向梅
22 篇 佘锐萍
21 篇 程相朝
15 篇 陈创夫
15 篇 程国富
15 篇 毛晶晶
14 篇 谷长勤
14 篇 彭西
13 篇 赵战勤
13 篇 胡薛英
13 篇 马龙欢
13 篇 杨利峰
12 篇 杨涛
12 篇 崔恒敏
12 篇 张万坡
12 篇 方静
12 篇 刘淑英
12 篇 孙恩成

语言

343 篇 中文
19 篇 英文

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排序：

宠物犬戊型肝炎的分子流行病学调查

宠物犬戊型肝炎的分子流行病学调查

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：马龙欢佘锐萍毛晶晶杨依霏郭兆杰夏兆飞中国农业大学动物医学院病理与公共卫生研究室北京100193

目的：通过RT-PCR的方法对宠物狗血清中HEV RNA进行检测，并结合血清生化指标，了解HEV在宠物犬中的流行情况，为临床预防戊型肝炎在人—犬间进行传播提供参考资料。方法：共采集了50份犬血清，均来自于中国农业大学动物医院临床化验室... 详细信息

目的：通过RT-PCR的方法对宠物狗血清中HEV RNA进行检测，并结合血清生化指标，了解HEV在宠物犬中的流行情况，为临床预防戊型肝炎在人—犬间进行传播提供参考资料。方法：共采集了50份犬血清，均来自于中国农业大学动物医院临床化验室病例样品。对采集的血清样品进行HEV RT-PCR检测及测序，并对HEV阳性血清样品进行生化指标测定。结果：通过HEV RT-PCR检测，在50份血清样本中共检出HEV RNA阳性样本4份，阳性检出率为8％。对4份阳性样品进行测序，测序结果表明不同分离株之间具有较高的同源性，4株分离株核苷酸序列之间的同源性为95.47%。分离株与不同基因型HEV进行核苷酸序列比较，结果显示:与基因1型同源性为75%～76%，与基因2型同源性为74%，与基因3型同源性为78%～80%，与基因4型同源性为74%～76%，与兔型同源性为87%～88%。通过对阳性样本生化指标的统计观察发现四例阳性血清AST/ALT值相对参照值有显著降低，其中有两例血清样本ALT值相对参照值有显著升高。结论：本次试验分离的样品毒株与兔型HEV具有较高的同源性，一方面说明宠物犬感染的HEV可能来源于兔子，另一方面说明分离毒株存在可感染兔类或其他动物的可能性。生化指标表明:犬类感染戊型肝炎病毒会破坏谷草转氨酶与谷丙转氨酶相对稳定的状态，相对值偏小说明感染动物处于初级感染期。本次实验证实了戊型肝炎病毒可以感染犬类动物，为预防戊型肝炎跨种传播敲响了警钟，具有重要的公共卫生学意义。通过阳性样本血清生化指标的统计观察，为临床诊断动物戊型肝炎疾病提供了参考。

关键词：宠物犬戊型肝炎分子流行病学血清生化指标

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苦马豆素诱导山羊黄体细胞凋亡的信号转导通路研究

苦马豆素诱导山羊黄体细胞凋亡的信号转导通路研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：赵晓民李伟黄勇童德文西北农林科技大学杨凌712100

目的:建立一株能保持原代山羊黄体细胞主要生物学特征和功能的永生化黄体细胞系,以该细胞系为受体细胞,探索苦马豆素(SW)对山羊黄体细胞分泌孕酮的影响以及SW 诱导山羊黄体细胞凋亡的信号转导通路,以期揭示SW 引起妊娠母畜流产的分子机... 详细信息

目的:建立一株能保持原代山羊黄体细胞主要生物学特征和功能的永生化黄体细胞系,以该细胞系为受体细胞,探索苦马豆素(SW)对山羊黄体细胞分泌孕酮的影响以及SW 诱导山羊黄体细胞凋亡的信号转导通路,以期揭示SW 引起妊娠母畜流产的分子机制,也为进一步解决严重危害中国西部草原畜牧业的家畜疯草中毒问题奠定基础.方法:用胶原酶消化法和组织培养法分离培养原代山羊黄体细胞,通过脂质体把hTERT 基因转染到原代黄体细胞中,经G418筛选、免疫细胞磁珠纯化后,培养50 代,3β-HSD 染色鉴定、RT-PCR对关键基因的检测、生长曲线检测、核型分析、裸鼠致瘤性试验、软琼脂悬浮生长检测和放射免疫检测孕酮浓度确定为永生化黄体细胞.进一步检测了SW 处理后黄体细胞的分泌孕酮的浓度、细胞周期、合成孕酮的关键基因及凋亡相关蛋白分子的表达.结果:建立了一株保持原代黄体细胞的主要生物学功能和特征的永生化山羊黄体细胞系,低浓度SW 能上调该细胞中2个调控孕酮合成的酶P450scc和3β-HSD的表达而促进孕酮的分泌,高浓度SW通过下调cyclin E、cyclin D1和CDK2的表达而上调p21的表达,使山羊黄体细胞周期阻滞在G0/G1期.SW通过上调Bax 和下调Bcl-2的表达,促进Bax向线粒体转位,激活线粒体通路,诱导山羊黄体细胞凋亡,进而降低孕酮的分泌.结论:本研究建立了一株能保持原代黄体细胞主要生物学功能和特征的永生化黄体细胞系.SW通过激活线粒体通路诱导山羊黄体细胞凋亡,从而调控细胞分泌孕酮.

关键词：苦马豆素山羊黄体细胞孕酮分泌信号转导通路

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圈养灵长类动物粪便HEV检测及病死动物肝脏和肾脏病理学观察

圈养灵长类动物粪便HEV检测及病死动物肝脏和肾脏病理学观察

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：石蕊寒佘锐萍闫鹤张成林王铜铜刘金鹏丁晓毛晶晶张金国中国农业大学北京100193

目的:了解戊型肝炎病毒(HEV)在北京动物园灵长类动物种群中的流行情况,进而对灵长类动物戊型肝炎疾病的防控和治疗提供一定的参考资料。方法:收集了北京动物园32种灵长类动物粪便样本共计196份,针对HEV RNA的ORF2与ORF3重叠区域137 bp... 详细信息

目的:了解戊型肝炎病毒(HEV)在北京动物园灵长类动物种群中的流行情况,进而对灵长类动物戊型肝炎疾病的防控和治疗提供一定的参考资料。方法:收集了北京动物园32种灵长类动物粪便样本共计196份,针对HEV RNA的ORF2与ORF3重叠区域137 bp大小的片段设计引物,应用巢式RT－PCR方法检测样本的HEV阳性率;另外,收集了北京动物园中10例病死灵长类动物肝脏及肾脏组织,进行H.E染色和Mallory三色染色,观察组织病理学变化,同时进行了HEV免疫组织化学染色,检测肝脏和肾脏组织中HEV ORF2抗原的阳性信号分布。结果:在采集的32种圈养野生灵长类动物的196份粪便样本中,针对HEV RNA的ORF2与ORF3重叠区域137bp大小的片段设计引物进行扩增结果,检测到1例金丝猴粪便样本为HEV阳性,产物经测序后登陆GENBANK比对,证明为戊型肝炎病毒。粪便HEV阳性检出率为0.51％(1/196).10例肝脏组织进行HEV免疫组织化学染色,4例为阳性,检出率为40％(4/10).在4例肝脏HEV免疫组化阳性病例中有3例肾脏组织免疫组化染色也均为阳性。组织病理学观察发现,10例病死灵长类动物肝脏组织均表现出不同程度的病理变化,包括肝脏水肿,淤血,肝细胞变性坏死,炎性细胞浸润等。HEV免疫组化染色阳性的肝脏病理变化主要表现为:肝细胞变性坏死,以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,汇管区胆管增生以及不同程度的纤维结缔组织增生等。肾脏组织病理学观察发现,3例HEV免疫组化阳性的肾脏组织表现出不同程度的炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞变性坏死,肾小管内出现蛋白管型等。Mallory三色染色观察发现,10例肝脏中40％(4/10)发生纤维结缔组织增生;HEV组化阳性肝脏组织中50％(2/4)表现出纤维结缔组织增生。结论:圈养野生灵长类动物中存在HEV感染。本研究为灵长类动物戊型肝炎疾病的防控提供了一定的科学参考资料。

关键词：灵长类动物戊型肝炎病毒检测病理诊断

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绵羊肺腺瘤逆转录病毒env基因截短表达及其多克隆抗体的制备

绵羊肺腺瘤逆转录病毒env基因截短表达及其多克隆抗体的制备

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英内蒙古农业大学呼和浩特010018

以本实验室构建好的pCDNA3.1-exJSRV-env质粒为模板，PCR扩增env基因1 320bp片段，对应的exJSRV全长基因位置为5498～6529bp。定向克隆到pET32a(+)表达载体中，通过PCR,酶切，测序，鉴定筛选出阳性克隆菌并提质粒转化到Transetta(DE3)... 详细信息

以本实验室构建好的pCDNA3.1-exJSRV-env质粒为模板，PCR扩增env基因1 320bp片段，对应的exJSRV全长基因位置为5498～6529bp。定向克隆到pET32a(+)表达载体中，通过PCR,酶切，测序，鉴定筛选出阳性克隆菌并提质粒转化到Transetta(DE3)表达菌中，用终浓度为1mmol/L的IPTG , 37℃诱导6h后取1mL菌液，取菌体超声后离心，分别取上清和沉淀进行SDS-PAGE检测目的蛋白表达。改变IPTG浓度，诱导的时间和温度，确定最佳诱导表达条件。经western-blot鉴定重组蛋白后用镍柱亲和层析的方法纯化重组蛋白。测定纯化的重组蛋白浓度后，免疫新西兰大耳白兔制备抗血清，用间接ELISA,western-blot法检测抗血清效价，用感染JSRV绵羊的肺脏做免疫组化检测抗血清的特异性。结果表明，成功构建了ex-JSRV-env基因的截短原核表达质粒，并成功的表达了带有His标签的重组融合蛋白。重组蛋白主要以包涵体形式表达，最佳表达条件是终浓度为1mmol/L的IPTG，在37℃诱导6h，重组蛋白可达到最高表达量，诱导6h后再延长诱导时间，重组蛋白的表达量不会随时间延长而增加。在变性的条件下用镍柱亲和层析的方法纯化重组蛋白，经缓慢透析去除尿素使蛋白复性，用超滤离心法浓缩透析后的重组蛋白，用BCA法测定蛋白浓度为0.9 mg/mL，免疫新西兰大耳白兔制备的抗血清效价为1:25 600,western效价为1:2000,感染JSRV的绵羊肺脏免疫组化的阳性信号主要在肺泡Ⅱ型细胞和肺泡侵润的淋巴细胞中，说明表达的重组蛋白具有良好的抗原性，免疫原性和特异性，可用于JSRV诊断试剂的研究。

关键词：绵羊肺腺瘤逆转录病毒基因表达抗体制备

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西尼罗病毒NS1基因重组腺病毒的构建

西尼罗病毒NS1基因重组腺病毒的构建

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：刘二战孙恩成杨涛徐青元吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

目的:主要通过对WNV-NS1基因重组腺病毒的构建,对西尼罗病毒病的预防进行探索性的研究.方法:pMD18-NS1(AY842931.3)重组质粒由本实验室保存;AdEasyTM Adenoviral Vector System试剂盒(携带腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183 感... 详细信息

目的:主要通过对WNV-NS1基因重组腺病毒的构建,对西尼罗病毒病的预防进行探索性的研究.方法:pMD18-NS1(AY842931.3)重组质粒由本实验室保存;AdEasyTM Adenoviral Vector System试剂盒(携带腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183 感受态菌)、腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV以及Ad-293细胞由哈尔滨兽医研究所猪病研究室仇化吉研究员惠赠.应用重组腺病毒构建系统,以细菌内质粒间同源重组法构建复制缺陷型腺病毒.以pMD18-NS1重组质粒为模板,应用PCR技术,克隆目的基因,经酶切连接到pShuttle-CMV穿梭载体,经PmeⅠ酶切线性化后,电转入含有腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞中,同源重组,利用卡那霉素平板筛选阳性质粒,经酶切鉴定后,重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,经脂质体Lipofectamine2000转染人胚肾细胞(AD293细胞),用IFA、Western blot检测WNV-NS1 蛋白在AD293细胞内的表达,连续传五代,用PCR 检测目的基因,并测定其病毒滴度.结果:重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定,获得特异性的目的片段,转染AD293细胞后有明显的细胞病变效应,利用IFA、Western blot检测及PCR鉴定,WNV-NS1基因重组到腺病毒的因组中,并随着病毒的复制而表达.第四代重组腺病毒TCID50为:10-7.64/0.1ml.结论:西尼罗病毒NS1蛋白在病毒复制以及免疫保护方面发挥着重要作用,本实验成功的构建出了携带WNV-NS1基因的重组腺病毒,为NS1蛋白的功能研究以及西尼罗亚单位疫苗研制奠定基础.

关键词：西尼罗病毒蛋白表达基因重组腺病毒

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蓝舌病病毒4型VP5蛋白单克隆抗体的制备

蓝舌病病毒4型VP5蛋白单克隆抗体的制备

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：孙亮孙恩成徐青元杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

目的：对中国BTV4型VP5蛋白制备型特异性单克隆抗体(MAbs)，为BTV4的型特异性检测方法的建立以及VP5蛋白功能研究奠定基础。方法:提取BTV4的RNA，设计特异性引物对目的基因SS进行反转录-PCR;利用pMAL-c4、原核表达系统和Bac-to-Bac真核... 详细信息

目的：对中国BTV4型VP5蛋白制备型特异性单克隆抗体(MAbs)，为BTV4的型特异性检测方法的建立以及VP5蛋白功能研究奠定基础。方法:提取BTV4的RNA，设计特异性引物对目的基因SS进行反转录-PCR;利用pMAL-c4、原核表达系统和Bac-to-Bac真核表达系统对VPS蛋白进行表达，纯化以及生物学特性鉴定;利用传统杂交瘤细胞融合技术制备BTV4 VP5蛋白的MAbs并且对其进行特性鉴定。结果:成功获得具有良好生物学活性的BTV4 VP5蛋白;制备出6株针对BTV4 VP5蛋白的MAbs, Western-blot结果显示每株MAb均可以与重组VPS蛋白和天然VP5蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光(IFA)结果表明6株MAbs均可以与BTV4感染的BHK-21细胞呈现特异性反应;IFA系统鉴定表明:MAb 1B6只能与BTV4呈现特异性的反应;其余5株MAb、与其它23个血清型BTV反应谱系不同，而6株MAbs均不与茨城病病毒(IBAV)和中山病病毒(CV)发生反应。结论:在本研究中，最初试图表达全长BTV4 VP5蛋白，但无论是真核表达还是原核表达，VP5蛋白表达量都很低。经查文献查阅发现，VP5蛋白N端前41个氨基酸形成两个亲水亲脂的双螺旋结构，对细胞膜具有穿透作用，因此对细胞具有毒性进而影响VP5蛋白的有效表达。为解决这一问题，把VP5蛋白N端41个氨基酸缺失表达，结果其真核表达和原核表达表达量都很大，并且保持良好的生物学活性，能够被BTV4羊阳性血清所识别。

关键词：动物医学蓝舌病蛋白表达单克隆抗体

来源：评论

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A型多杀性巴氏杆菌生物学特性研究

A型多杀性巴氏杆菌生物学特性研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：张营龙塔席晓建赵战勤史斌刘敏申亚阳程相朝河南科技大学动物科技学院洛阳471000

目的：对四株A型多杀性巴氏杆菌(PM-31、PM-34、PM-41、PM-45)的生物学特性进行研究。为猪源多杀性巴氏杆菌的致病机理研究，以及该病快速诊断试剂及高效疫苗的研制提供了研究和参考资料。方法:首先选择在加有5％犊牛血清的TSA上对4株A... 详细信息

目的：对四株A型多杀性巴氏杆菌(PM-31、PM-34、PM-41、PM-45)的生物学特性进行研究。为猪源多杀性巴氏杆菌的致病机理研究，以及该病快速诊断试剂及高效疫苗的研制提供了研究和参考资料。方法:首先选择在加有5％犊牛血清的TSA上对4株A型多杀性巴氏杆菌进行复苏、纯化培养。对纯化后的细菌做革兰氏染色，经显微镜观察细菌形态、与多杀性巴氏杆菌标准菌对比。将纯化后的菌株进行PCR鉴定。通过PCR仪用特异性引物Kmtl-Kmt2对Kmt基因进进行扩增，然后用琼脂糖凝胶进行电泳。电泳结果用凝胶成像分析系统进行拍照。挑单个A型多杀性巴氏杆菌到加有5%犊牛血清的TSB培养基中，培养每2h，对菌液进行计数，根据计数结果绘制生长曲线。最后挑单个多杀性巴氏杆菌菌落在加有5%犊牛血清的TSA上纯化培养，加PBS洗板进行药敏实验。结果与结论:本试验中纯化后的细菌长成淡灰白色、边缘整齐、表面光滑、闪光的露珠状小菌落。对纯化细菌所做的革兰氏染色鉴定，镜检时，大部分为短杆状红色菌，两极有浓染现象，通过查阅资料并与标准菌对比，可以确定都是多杀性巴氏杆菌。PCR是检测猪源多杀性巴氏杆菌的良好方法。本次试验对4株细菌进行PCR鉴定，根据特异性引物扩增出的片段，确定所培养的细菌为A型多杀性巴氏杆菌。生长曲线是研究细菌生长特性的基础，典型的微生物生长曲线包括四个时期:调整期、对数期、稳定期、衰亡期。本次研究生长曲线显示，A型多杀性巴氏杆菌在10 h-12 h达到生长最大值。通过对4株巴氏杆菌在庆大霉素、环丙沙星、大观霉素等药物下抑菌圈直径的测量，结果表明4株细菌对药物敏感性有明显差别。

关键词：动物医学 A型多杀性巴氏杆菌生物学特性致病机理

来源：评论

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Adrenocarcinoma of Modified Sweat Glands and Meibomian Glands in the Eyelid of Canine

Adrenocarcinoma of Modified Sweat Glands and Meibomian Gland...

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者： YUAN Dongwei ZHENG KyuShik SUN Bin FAN Chunling GUO Donghua Heilongjiang Bayi Agricultural University Korea

A 4-year-old female beagle with progressive exophthalmos and which had a neoplastic mass which diameter was 1.4 cm in the left lower ocular adnexa. Histologically,the mass was composed of hyperplastic lobules and tubular structures which separated by fibrous septum. Well differentiated sebaceous gland forming various sized lobules,and infiltration of mast cells and mononuclear inflammatory cells. Apical decapitation secretion of these tubular structures with basophilic materials in their lumen and some of them showed mild sebaceous gland metaplasia. The primary tumor was diagnosed as adenocarcinoma,probably originating from modified sweat gland and meibomian gland of the eyelid,and the infiltrating intraocular neoplasm was diagnosed as a malignant mixed tumor.

关键词： adenocarcinoma dog eyelid modified sweat gland mebomian gland

来源：评论

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PCV2对体外培养仔猪肺泡巨噬细胞TLRs基因表达的影响

PCV2对体外培养仔猪肺泡巨噬细胞TLRs基因表达的影响

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：张亚群韩俊源段滇宁郭华张书霞南京农业大学南京210095

本实验主要就PCV2感染后仔猪肺泡巨噬细胞病毒相关TLR mRNA表达量的变化进行检测，旨在探讨PCV2感染后TLR的激活过程。本实验选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测PCV2和PRRSV血清抗体和抗原双阴性的普通断奶仔猪，无菌分离肺泡巨噬细... 详细信息

本实验主要就PCV2感染后仔猪肺泡巨噬细胞病毒相关TLR mRNA表达量的变化进行检测，旨在探讨PCV2感染后TLR的激活过程。本实验选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测PCV2和PRRSV血清抗体和抗原双阴性的普通断奶仔猪，无菌分离肺泡巨噬细胞，分为对照组和PCV2感染组，分别在培养0、6、12、24和48h收集各组巨噬细胞。间接免疫荧光定位检测PCV2感染巨噬细胞情况;半定量RT-PCR的方法检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表达量的变化。结果表明，TLR2 mRNA的表达量在攻毒后6h和24 h时均极显著高于对照组(P<0.0l，在12h时显著高于对照组(P<0.O5);TLR3 mRNA的表达量在攻毒后6h和12h时均显著高于对照组(P<0.O5);TLR4 mRNA的表达量在攻毒后12h和24 h时显著高于对照组(P<0.05);TLR7mRNA的表达量在攻毒后12h时极显著高于对照组(P<0.04)，在6h显著高于对照组(P<0.O5);TLR8mRNA的表达量在攻毒后12 h时极显著高于对照组(P<0.04)，在6 h显著高于对照组(P<0.05);TLR9mRNA的表达量在攻毒后6h,12h时，均极显著高于对照组(P<0.O1)。结果表明，PCV2可显著影响体外培养仔猪淋巴细胞TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达，其变化均呈现出先上升后下降的趋势。推断肺泡巨噬细胞对PCV2的天然免疫功能在感染后快速发生变化，但随着PCV2感染时间增加巨噬细胞的天然免疫功能渐渐下降，无法及时有效地清除病毒，这有利于PCV2在肺泡巨噬细胞中的存活和复制。

关键词：猪圆环病毒2型感染病理机制肺泡巨噬细胞基因表达

来源：评论

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荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1 mRNA方法的建立

荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1 mRNA方法的建立

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：王选年岳锋朱艳平张艳芳孙国鹏李鹏银梅杨媛新乡学院新乡453003

目的:本研究为建立荧光定量RT-PCR检测猪PD-1及其配体PD-L1mRNA的方法。方法:根据GenBank中猪PD-1和PD-L1的基因序列，分别设计2对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收与pMD18-T连接后转化DHScx，提取重组质粒，作为标准品，制备标... 详细信息

目的:本研究为建立荧光定量RT-PCR检测猪PD-1及其配体PD-L1mRNA的方法。方法:根据GenBank中猪PD-1和PD-L1的基因序列，分别设计2对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收与pMD18-T连接后转化DHScx，提取重组质粒，作为标准品，制备标准曲线，并进行特异性、重复性和应用性检测。结果:标准曲线PD-1和PD-L1两个样品相关系数Rz分别为0.997和0.998，均大于0.99，线性关系好，扩增效率分别为86.03％和102.40%;溶解曲线出现狭窄单一峰，荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，出现单一目的条带，无引物二聚体，特异性强;检测PD-1和PD-Ll组间的变异系数分别为0.592%和0.847%，重复性好;应用性结果表明，正常猪外周血单核细胞中PD-1和PD-Ll的基因表达水平稳定，该检测方法的稳定性好。结论:本试验建立了实时荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-Ll基因表达量的方法。荧光定量PCR技术以敏感性高、特异性强、操作简便以及定量准确被广泛应用，SYBR Green Ⅰ染料法由于成本相对较低，多用于基因的相对定量，SYBR Green Ⅰ与扩增片段双链DNA结合，发出强荧光信号，被仪器捕获，也可以与引物二聚体结合，影响特异性，该方法对引物的要求高，引物间和引物自身都不能形成二聚体。本试验中3对引物的溶解曲线出现狭窄单一峰，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，出现单一目的条带，无引物二聚体，说明建立的方法特异性高。本研究建立的荧光定量RT- PCR检测PD-1和PD-Ll的基因表达模式，为进一步研究猪免疫抑制性传染病如CSF,PRRS感染后，PD-1和PD-L1的表达模式奠定基础.从而进一步丰富猪免疫抑制性传染病引起的免疫抑制机理。

关键词：猪免疫学程序性死亡分子1 基因序列荧光定量检测

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