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主题

1 篇 异种肝移植
1 篇 规律成簇间隔短回...
1 篇 去唾液酸糖蛋白受...
1 篇 基因敲除猪
1 篇 体细胞核移植

机构

19 篇 南方医科大学
17 篇 广州中医药大学
6 篇 广东省实验动物监...
4 篇 贵阳中医学院
4 篇 中山大学
4 篇 中国农业科学院北...
3 篇 暨南大学
3 篇 梅州市第二中医医...
3 篇 华南农业大学
3 篇 广东省实验动物重...
2 篇 广东省实验动物监...
2 篇 暨南大学附属第一...
2 篇 东莞松山湖明珠实...
2 篇 广州军区广州总医...
2 篇 澳门大学
2 篇 四川农业大学
2 篇 中山大学附属第一...
2 篇 佛山科学技术学院
2 篇 浙江中医药大学
1 篇 中国食品药品检定...

作者

16 篇 顾为望
12 篇 王萧
7 篇 梁旺
6 篇 杨丰华
6 篇 黄韧
6 篇 张永斌
5 篇 余传辛
5 篇 谭伟江
4 篇 曾玲玉
4 篇 仇珍珍
4 篇 潘金春
4 篇 肖东
4 篇 潘登科
4 篇 袁进
4 篇 刘军
4 篇 石宁宁
4 篇 李红卫
4 篇 高秀秀
3 篇 龚宝勇
3 篇 陈嘉

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73 篇 中文

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分泌表达牛病毒性腹泻病毒E0蛋白MDBK细胞的建立及其稳定性分析

分泌表达牛病毒性腹泻病毒E0蛋白MDBK细胞的建立及其稳定性分析

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：刘军仇珍珍李红卫顾为望南方医科大学实验动物中心广东广州510515 南方医科大学生物技术学院广东广州510515 南方医科大学生物技术学院广东广州510515 南方医科大学实验动物中心广东广州510515

为构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E0蛋白MDBK细胞系,并探究其传代和冻存稳定性,本研究采用实验室制备的BVDVE0基因重组慢病毒感染MDBK细胞,荧光观察并收集MDBK细胞培养上清进行western blot分析,结果表明IgK信号肽组和预测信号肽...

为构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E0蛋白MDBK细胞系,并探究其传代和冻存稳定性,本研究采用实验室制备的BVDVE0基因重组慢病毒感染MDBK细胞,荧光观察并收集MDBK细胞培养上清进行western blot分析,结果表明IgK信号肽组和预测信号肽组均分泌表达E0蛋白.通过Oligo6.0软件设计BVDV E0基因SYBR Green I染料法荧光定量PCR检测引物,经过条件优化,未出现非特异性扩增,检测下线为20拷贝/μL.通过建立的荧光定量PCR和流式分析对两组细胞系进行稳定性分析,传代稳定性分析结果表明,两组细胞系在第12代之后荧光率显著下降,15代之后E0基因拷贝数显著下降.两组细胞冻存前后荧光率未发现显著变化,因此本实验构建了稳定分泌表达BVDV E0蛋白的MDBK细胞系,建立了BVDV E0基因定量检测方法,为研究E0蛋白的生物学功能、探索BVDV的防控措施以及开发基因工程诊断抗原和基因工程亚单位疫苗的奠定了基础.

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2型糖尿病合并肾性高血压模型的建立及评价

2型糖尿病合并肾性高血压模型的建立及评价

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：万斌韩永权顾为望南方医科大学实验动物中心广东广州510515 东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司广东东莞523808

制备一种发病过程类似于人类2型糖尿病合并肾性高血压疾病的大鼠模型.大鼠高脂高糖膳食4周后,予快速腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液28mg/kg,制作成2型糖尿病模型.2周后,连续3天均测得空腹血糖(FBG) ≥7.8mmoL/L或随机血糖(RBG) ≥16.7 mmo...

制备一种发病过程类似于人类2型糖尿病合并肾性高血压疾病的大鼠模型.大鼠高脂高糖膳食4周后,予快速腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液28mg/kg,制作成2型糖尿病模型.2周后,连续3天均测得空腹血糖(FBG) ≥7.8mmoL/L或随机血糖(RBG) ≥16.7 mmol/L,为2型糖尿病成模标准.待血糖稳定后,再用改良的“两肾一夹法”结扎肾动脉,造成一侧肾动脉狭窄,形成肾性高血压.2周后,连续3天均测得大鼠收缩压(SBP)≥140mmHg,同时FBG＞7.8mmol/L或RBG＞16.7 mmol/L,确定为2型糖尿病合并肾性高血压模型制作成功.4周后,模型大鼠血糖、血压稳定.与空白·对照组相比,复合模型组大鼠出现体重减轻、空腹血糖升高、糖化血红蛋白值升高(P＜0.01),血压升高(P＜0.01);与糖尿病组和假手术组相比,复合模型组大鼠血肌酐,尿素氮变化不明显(P＞0.05),但血压明显升高(P＜0.01);同时,彩超结果显示：复合模型组大鼠左侧肾脏、肾动脉直径均变小,血流速增快.大鼠高脂高糖膳食后,予低剂量链脲佐菌素(STZ)溶液腹腔注射,再用改良的“二肾一夹”法制备的2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型,在一定程度上较好地模拟出该疾病的发病特点,可为2型糖尿病合并肾性高血压后的临床及实验研究提供一个稳定,实用,有效地新模型.

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新西兰兔心衰模型心肌损伤与一氧化氮的关系探讨

新西兰兔心衰模型心肌损伤与一氧化氮的关系探讨

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：王萧林传权许庆文付云刘金元广州中医药大学实验动物中心广东广州510405 广州中医药大学临床药理所广东广州510405 广州中医药大学测试中心广东广州510405

为研究导管术致超容量负荷型实验性心衰兔模型随时间推移的损伤变化及其与NO的关系,应用导管术造成兔的超容量负荷型心衰模型,分别于造模后24h和造模后7d处死动物,取心脏组织做光镜检查,NO试剂盒检测血清NO含量,通过流式细胞仪检测心肌...

为研究导管术致超容量负荷型实验性心衰兔模型随时间推移的损伤变化及其与NO的关系,应用导管术造成兔的超容量负荷型心衰模型,分别于造模后24h和造模后7d处死动物,取心脏组织做光镜检查,NO试剂盒检测血清NO含量,通过流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,Western blot检测caspase-3蛋白水平的表达.结果表明,①光镜下,正常组心肌细胞无损伤表现,造模24h组及7d组均有心肌细胞损伤表现,造模7d组损伤更为广泛且严重.②NO试剂盒检测结果表明,造模24h组含量(3.33±1.30)μmol/L和造模7d组NO含量(2.81±0.77)μmol/L高于正常组(2.09±0.22)μmol/L,且造模24h高于造模7d.③AnnexinV联合PI染色结果表明,正常组凋亡率较低(3.72±1.92)％,随着时间推移,凋亡细胞所占比例呈上升趋势,造模7 d(10.73±2.26)％明显高于造模24h(7.62±1.70)％.④Western blot检测结果表明,正常组基本检测不到激活的caspase-3蛋白酶,在造模后24h和造模后7dcaspase-3蛋白酶均有明显表达,但造模7d有所下降.因此我们认为,超容量负荷型心衰兔模型心肌随时间推移,凋亡率增加、心肌损伤加重;NO在本心衰模型的主要作用以抗心肌细胞凋亡效应作用为主.

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HBV转基因小鼠尿液中乙肝病毒相关指标的分析

HBV转基因小鼠尿液中乙肝病毒相关指标的分析

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：杨阳刘光泽李秀梅孔祥平顾为望南方医科大学比较医学研究所暨实验动物中心广州510515 解放军第458医院全军肝病中心广州510602 解放军第458医院全军肝病中心广州510602 南方医科大学比较医学研究所暨实验动物中心广州510515

目的检测分析HBV转基因小鼠尿液中HBV相关指标表达情况,进一步认识转基因小鼠的生物学特性;并通过多种实验方法确定尿液中HBV相关指标的组织来源.方法使用酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量PCR (Real-time PCR)检测转基因小鼠尿液中HB...

目的检测分析HBV转基因小鼠尿液中HBV相关指标表达情况,进一步认识转基因小鼠的生物学特性;并通过多种实验方法确定尿液中HBV相关指标的组织来源.方法使用酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量PCR (Real-time PCR)检测转基因小鼠尿液中HBV相关指标;并通过水动力转染的小鼠实验、RNA干扰方法抑制HBV表达转基因鼠实验、乙肝患者HBV阳性血清感染正常小鼠实验等多种实验方法确定其复制表达组织来源.结果 HBV转基因小鼠尿液中存在HBsAg、HBeAg、及HBV-DNA表达,其中HBsAg的表达水平较高(6674±619.8 IU/mL),但低于血清中HBsAg的表达水平(16470±2704 IU/mL),尿液HBsAg雄性小鼠的表达水平高于雌性小鼠;而尿液HBeAg表达水平较低,且尿液中HBeAg的阳性率高于血液,HBeAg的表达水平个体间和性别间有明显差异;尿液中存在HBV-DNA含量达到103～105copy/ml;未检测到相关抗体表达.通过水动力转染等实验表明转基因鼠尿液中的HBV相关指标来源于肾脏的复制表达,而不是由肝脏分泌进入血液循环以尿液排出,肾脏是HBV独立的表达场所.结论转基因小鼠尿液中存在HBV相关指标的表达,并随月龄长期表达,其中HBsAg及HBV-DNA表达水平较高且比较稳定,雄性小鼠尿液HBsAg的滴度高于雌性小鼠;HBeAg雄性鼠表达水平相对雌性鼠较高且比较稳定;尿液中无各类抗体表达;肾脏也是HBV独立的复制表达场所.

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西尼罗病毒病研究进展

西尼罗病毒病研究进展

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

西尼罗病毒病(West Nile virus disease)是由西尼罗病毒感染引起的一种人畜共患的急性传染病。该病毒最早于1937年从乌干达西尼罗地区一名发热妇女的血液中分离,因此得名。鸟类是WNV的贮存宿主,研究发现该病的地理分部及传播与鸟类的迁...

西尼罗病毒病(West Nile virus disease)是由西尼罗病毒感染引起的一种人畜共患的急性传染病。该病毒最早于1937年从乌干达西尼罗地区一名发热妇女的血液中分离,因此得名。鸟类是WNV的贮存宿主,研究发现该病的地理分部及传播与鸟类的迁徙密切相关,人及哺乳动物是偶然宿主,蚊子是该病毒的主要传播媒介,例如：伊蚊、按蚊等。除蚊虫叮咬之外,WNV也可经器官移植、输血以及母婴传播。人感染WNV后临床上主要表现为发热、恶心、呕吐等,严重者会出现WNV性脑炎症状。目前,WNV病广泛分布于非洲、中东、欧洲的部分地区,以及前苏联、印度、印度尼西亚和亚洲的热带地区等。随着该病在人和动物中暴发流行频率增加,该病在美国的流行区域不断扩大,近年来WNV病频繁暴发,给发病国家和地区造成了极大的健康威胁和经济损失,引起全球的广泛关注。研究表明疫苗免疫是预防该病的有效途径,预防WNV的疫苗大多都处于研发状态,美国农业部认可的WNV灭活苗与活病毒载体疫苗仅能用于马的WNV的预防,随着研究的不断深入,活病毒载体疫苗与基因疫苗有望成为预防人感染WNV的候选疫苗。目前我国尚未出现WNV感染的病例报道,对于WNV病原学和疫苗的研究也相对滞后,而我国是日本乙型脑炎的流行区域,该病毒已被我国纳入常规免疫程序。日本乙型脑炎病毒与WNV在人类中是否具有交叉保护作用和东亚地区候鸟是否不易感染或携带WNV,在研究WNV病防治方面,这些都是值得探讨的问题。

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广东小鼠腺病毒血清学调查及病毒和抗体在人工感染小鼠体内消长规律研究

广东小鼠腺病毒血清学调查及病毒和抗体在人工感染小鼠体内消长规...

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：罗银珠张钰潘金春王静袁文何丽芳吴瑞可黄碧洪郭鹏举黄韧广东省实验动物监测所广东广州510663 广东省实验动物重点实验室广东广州510663

目的了解我省小鼠腺病毒(Mad)自然感染情况及探究人工感染Mad小鼠体内各脏器组织中病毒分布规律及血清抗体变化.方法依据国家标准对2007年和2015年饲养于普通环境小鼠血清及2013年～2015年广东省12家监督单位和32家委托单位SPF级小鼠...

目的了解我省小鼠腺病毒(Mad)自然感染情况及探究人工感染Mad小鼠体内各脏器组织中病毒分布规律及血清抗体变化.方法依据国家标准对2007年和2015年饲养于普通环境小鼠血清及2013年～2015年广东省12家监督单位和32家委托单位SPF级小鼠血清进行病毒抗体检测.利用腹腔注射方法感染36只3周龄BALB/c小鼠,0.2ml/只,浓度为4.5×106 copies/μL,每天观察动物临床表现,并于攻毒前第0d和攻毒后第3、7、10、15、18、21、30、37、44、51、60d剖检小鼠(各3只),取组织标本(心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、盲肠内容物)及血清,应用实时荧光定量PCR (QPCR)方法检测组织病毒核酸,ELISA方法检测血清抗体水平.结果普通饲养小鼠抗体阳性率为24.44％～84.15％,其中以Mad-2型K87株血清型为主.SPF级小鼠Mad血清抗体阳性率均为0％.所有攻毒小鼠均呈隐性感染,无临床表现.攻毒后第3d及7d小鼠各组织病毒核酸检测阳性率均为100％(3/3),其中以脾脏100％阳性率维持时间最长(60d).除肝脏外,小鼠各组织病毒含量均在攻毒后7d达到高峰,其中以脾脏病毒含量最高(5.5×105copies/μL),其次是心脏(3.4× 105copies/μL)、盲肠内容物(2.6× 105copies/μL)和胃(2.6×105copies/μL),脑为0.8×105copies/μL.攻毒后15d可测出血清抗体,在37d达到峰值,此后至60d一直维持高水平.结论 SPF级小鼠Mad感染率低,普通环境饲养小鼠Mad感染率高.人工感染小鼠脾脏病毒含量最高,阳性率维持时间最长,说明病毒可以在脾脏内长期复制,感染后第7d为组织病毒核酸最佳检测时间点.血清抗体在感染后15d～60d内均可以作为监测指标.

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超声生物显微镜对心脏肥厚预适应小鼠模型稳定建立的作用

超声生物显微镜对心脏肥厚预适应小鼠模型稳定建立的作用

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：黄家园吴剑杨丰华王时俊游洁云叶勇丁志文马雷雷郭俊杰杨春杰苑洁卜丽萍葛均波邹云增复旦大学附属中山医院上海市心血管病研究所上海200032 广东省实验动物监测所广州510663

目的新近在实验小鼠身上首次发现,机体存在心肌肥厚预适应(myocardial hypertrophic preconditioning,HP)的现象,即预置的压力超负荷撤离后,心肌对再次压力超负荷起抗肥厚作用.然而,行常规主动脉缩窄术缩窄小鼠主动脉后,不同小鼠间缩...

目的新近在实验小鼠身上首次发现,机体存在心肌肥厚预适应(myocardial hypertrophic preconditioning,HP)的现象,即预置的压力超负荷撤离后,心肌对再次压力超负荷起抗肥厚作用.然而,行常规主动脉缩窄术缩窄小鼠主动脉后,不同小鼠间缩窄程度存在一定变异,会导致心脏肥大程度出现变异,造成实验误差.在小鼠HP模型中,尚缺少稳定有效的手段对同一小鼠的缩窄-去缩窄-再缩窄进行在体反复观察,以确保模型的稳定建立.我们以前曾报道使用超生生物显微镜(ultrasound biomicroscopy, UBM)可以在早期无创地预测主动脉缩窄程度和压力超负荷水平.在本课题中,我们设想能否用UBM来连续预测HP心脏的负荷状态.方法随机将雄性C57BL/6J小鼠(10-12周大)随机分为假手术组(Sham),主动脉缩窄4周组(transverse aortic constriction,TAC 4W)和主动脉再缩窄4周组(Re-TAC 4W).使用UBM来测量主动脉狭窄处血流速度峰值(peak flow velocity at aortic banding site,PVb).用微型测压导管插管测量左室收缩期末压(left ventricular end-systolic pressure,LVESP).用UBM和病理组织学来评估心肌肥厚程度.结果成功用UBM持续评估了Re-TAC小鼠在主动脉缩窄,去缩窄和再缩窄后的***和左室收缩期末压成正相关(R2=0.6280,P＜0.01).与假手术组相比,Re-TAC小鼠PVb和LVESP在主动脉缩窄后显著升高,去缩窄后降低,并在再缩窄后再次升高.主动脉再缩窄后第4周,PVb≥3.5 m/s视为主动脉缩窄成功.而Re-TAC小鼠跟TAC 4W小鼠相比,心肌肥厚程度较轻.结论 UBM指标PVb可以早期、无创、量化地筛选出构建成功的小鼠HP模型,为利用该模型进行机理研究和药物干预提供了可靠的评价手段.

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神经干细胞介导P25、P35蛋白表达促进缺血缺氧性脑病新生大鼠神经功能恢复

神经干细胞介导P25、P35蛋白表达促进缺血缺氧性脑病新生大鼠神经...

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：田雨光庞炜魏伟顾为望岳敏南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所广州510515 广东省脐带血造血干细胞库广州510000

目的：探究神经干细胞对缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)新生大鼠的治疗作用及其对P25、P35蛋白表达变化的影响.方法：60只新生7天SD大鼠随机分为3组.SHAM组(假手术组),HIE+PBS组(模型组),HIE+NSC组(治疗组)每组...

目的：探究神经干细胞对缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)新生大鼠的治疗作用及其对P25、P35蛋白表达变化的影响.方法：60只新生7天SD大鼠随机分为3组.SHAM组(假手术组),HIE+PBS组(模型组),HIE+NSC组(治疗组)每组各20只.干细胞治疗后第5、7、14、21天进行神经行为学检测(Rotarod Test旋转实验和Morris水迷宫测试).21天后处死大鼠HE染色观察大鼠病理变化,Western blot检测P35、P25蛋白的表达.结果：Rotarod Test旋转实验结果显示造模后第5天模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);造模后第7、14、21天,模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间明显升高且治疗组升高趋势明显高于缺血组(P＜0.05),第21天模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间比较差异有统计学意义(P＜0.05).Morris水迷宫结果显示3组大鼠的逃避潜伏期随训练天数增加而逐渐缩短,前5天的总体学习成绩的组间差异有统计学意义(P＜0.01).第7天开始治疗组时间逐渐缩短,第21天治疗组与缺血组大鼠的逃避潜伏期在各个时间点的差异均有统计学意义(P＜0.05).模型组大鼠出现海马区神经元水肿、核染色质结构不清、空泡形成等病理变化,治疗组病理损伤明显减轻.Western blot结果显示与对照组相比缺血组P35表达减少,P25表达增加(P＜0.05),而治疗组与缺血组相比较P35表达增多,P25表达减少(P＜0.05).结论：神经干细胞可促进大鼠缺血脑损伤后神经功能恢复,可能通过上调P35蛋白表达,下调P25蛋白表达,对脑缺血损伤起保护作用.

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痰瘀互结证慢性心肌缺血小型猪模型的建立

痰瘀互结证慢性心肌缺血小型猪模型的建立

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：潘永明陈亮徐孝平朱科燕徐剑钦陈民利浙江中医药大学动物实验研究中心/比较医学研究中心杭州310053

目的采用高脂、静脉注射维生素VD3和异丙肾上腺素建立痰瘀互结证慢性心肌缺血小型猪模型.方法 15只雄性巴马小型猪随机分成正常对照(Ctr)组、高脂(HFC)组和痰瘀互结证心肌缺血模型(CMI)组,每组5只,Ctr组饲喂普通饲料,HFC组饲喂高脂饲料...

目的采用高脂、静脉注射维生素VD3和异丙肾上腺素建立痰瘀互结证慢性心肌缺血小型猪模型.方法 15只雄性巴马小型猪随机分成正常对照(Ctr)组、高脂(HFC)组和痰瘀互结证心肌缺血模型(CMI)组,每组5只,Ctr组饲喂普通饲料,HFC组饲喂高脂饲料,CMI组采用高脂饮食、静脉注射VD3和异丙肾上腺素联合建立痰瘀证慢性心肌缺血模型,连续造模24周,分别通过测定动物体重、心电图、活动、血脂、心肌酶、血液流变学、炎症、心脏指数和心肌缺血面积(MIS)来评价模型的建立及痰瘀互结证的病理进程.结果与Ctr组,HFC组体重、心率、TC、LDL-C、HDL-C、LDL-C/HDL-C、低、中、高切全血粘度和还原粘度、红细胞电泳时间、hs-CRP和IL-6水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01);CMI组体重、心率、∑ST、ST_average、活动度、TC、TG、LDL-C、HDL-C、LDL-C/HDL-C、CK、LDH、cTn-1、低、中、高切全血粘度和还原粘度、红细胞电泳时间、卡松粘度、hs-CRP、IL-6、心脏指数和MIS均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),且APN水平则显著降低(P＜0.05);与HFC组比,CMI组LDL-C/HDL-C、cK、LDH、cTn-1、低、中、高切全血粘度、红细胞电泳时间、心脏指数和MIS均明显高于HFC组(P＜0.05,P＜0.01),且APN水平则显著低于HFC组(P＜0.05).相关分析显示,MIS与TC、LDL-C、LDL-C/HDL-C、CK、LDH、cTn-1、APN、高、中、低切全血粘度、红细胞电泳时间、卡松粘度、hs-CRP和IL-6有关(P＜0.05,P＜0.01),同时线性回归分析显示,痰瘀与TC、LDL-C、LDL-C/HDL-C、CK、LDH、cTn-1、APN、红细胞电泳时间、卡松粘度、hs-CRP和IL-6有关(P＜0.01),进一步线性逐步回归分析显示痰瘀衍变与TC、CK和IL-6密切相关(P＜0.01).结论高脂喂养和注射VD3和异丙肾上腺素能成功建立痰瘀互结证慢性心肌缺血小型猪模型,且脂质代谢、血液流变学、心肌酶代谢和炎症可作为痰瘀互结证的客观生化物质基础,这些变化可反映了中医理论“痰瘀互结、瘀毒致变”的相关生物学基础.

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GTKO五指山小型猪SLA单倍型分型及异种移植效果比较

GTKO五指山小型猪SLA单倍型分型及异种移植效果比较

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2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：高景波蒋应弟石宁宁潘登科中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

随着敲除α-1,3半乳糖基转移酶基因猪的诞生(GTKO),异种移植引起的超急性免疫排斥反应已基本解决.然而,猪主要组织相容性复合体(Swine leukocyte antigens,SLA)作为异种抗原的存在,仍是制约异种移植发展的主要障碍之一.目的本研究对连...

随着敲除α-1,3半乳糖基转移酶基因猪的诞生(GTKO),异种移植引起的超急性免疫排斥反应已基本解决.然而,猪主要组织相容性复合体(Swine leukocyte antigens,SLA)作为异种抗原的存在,仍是制约异种移植发展的主要障碍之一.目的本研究对连续3代共35头GTKO五指山小型猪的SLA单倍型进行分析,并探究了SLA单倍型类型与异种免疫排斥强弱的相关性,为异种器官移植研究供体的选择提供依据.方法采集6头祖代GTKO五指山小型猪耳组织,利用RT-PCR对SLAⅠ类基因(SLA-1、SLA-3、SLA-2)和SLA Ⅱ类基因(SLA-DRB1、SLA-DQB1)基因座扩增、克隆及测序,获得GTKO五指山小型猪SLA经典Ⅰ类以及SLA Ⅱ类5个基因的完整CDs区序列,经BLAST分析,同时依据紧密连锁遗传规律,连续追踪3代35头猪,完成GTKO五指山小型猪SLA单倍型分型.选择群体中不同单倍型的个体,分离外周血单核细胞PBMC,与人灭活的血清进行补体依赖的细胞毒试验CDC,流式细胞术检测细胞死亡率.结果测序分析共获得6条等位基因序列,其中4条为已公布的等位基因(SLA-1 *0703、SLA-2*1102、SLA-3*0401、SLA-3*0403),2条为新等位基因(SLA-1 *0401wz01、SLA-2* 11 wz01).本研究群体中新发现了3个SLA Ⅰ类和2个SLAⅡ类单倍型,被ISAG命名委员会依次命名为：Hp-75.00(SLA-1*0401wz01,SLA-3*0403, SLA-2*11wz01);Hp-76b.00(SLA-1*0703, SLA-3*0401, SLA-2*11wz01);Hp-76a.00(SLA-1 *0703,SLA-3*0401,SLA-2*1102);Hp-00.27(SLA-DRB1 *0901,SLA-DQB1*0901);Hp-00.41(SLA-DRB1 *0401,SLA-DQB1 *0501).杂合单倍型Hp-75a.27/ 76a.41个体和纯合单倍型Hp-76a.41/76a.41、Hp-75.27/75.27个体PBMC分别与灭活的人、猴血清反应.人血清与不同单倍型PBMC反应后,细胞死亡率差异显著(P＜0.05),杂合单倍型Hp-75a.27/76a.41、纯合单倍型Hp-76a.41/76a.41细胞死亡率明显高于纯合单倍型Hp-75.27/75.27.然而,猴血清与不同单倍型PBMC反应后差异不显著.结论本研究系统地完成了GTKO五指山小型猪封闭群SLA Ⅰ类以及SLA Ⅱ类单倍型分型,获得Hp-76a.41、Hp-75.27两种纯合单倍型家系.体外初步研究发现Hp-75.27/75.27纯合单倍型GTKO五指山小型猪PBMC与人血清反应后细胞死亡率相对较低.

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