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文献类型

73 篇 会议

馆藏范围

73 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

主题

1 篇 异种肝移植
1 篇 规律成簇间隔短回...
1 篇 去唾液酸糖蛋白受...
1 篇 基因敲除猪
1 篇 体细胞核移植

机构

19 篇 南方医科大学
17 篇 广州中医药大学
6 篇 广东省实验动物监...
4 篇 贵阳中医学院
4 篇 中山大学
4 篇 中国农业科学院北...
3 篇 暨南大学
3 篇 梅州市第二中医医...
3 篇 华南农业大学
3 篇 广东省实验动物重...
2 篇 广东省实验动物监...
2 篇 暨南大学附属第一...
2 篇 东莞松山湖明珠实...
2 篇 广州军区广州总医...
2 篇 澳门大学
2 篇 四川农业大学
2 篇 中山大学附属第一...
2 篇 佛山科学技术学院
2 篇 浙江中医药大学
1 篇 中国食品药品检定...

作者

16 篇 顾为望
12 篇 王萧
7 篇 梁旺
6 篇 杨丰华
6 篇 黄韧
6 篇 张永斌
5 篇 余传辛
5 篇 谭伟江
4 篇 曾玲玉
4 篇 仇珍珍
4 篇 潘金春
4 篇 肖东
4 篇 潘登科
4 篇 袁进
4 篇 刘军
4 篇 石宁宁
4 篇 李红卫
4 篇 高秀秀
3 篇 龚宝勇
3 篇 陈嘉

语言

73 篇 中文

检索条件"任意字段=2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会"

共 73 条记录，以下是71-80 订阅

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排序：

表达hCD47小型猪创建及其在异种移植中抗吞噬研究

表达hCD47小型猪创建及其在异种移植中抗吞噬研究

引用

2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：龙川石宁宁曾国敏冯冲潘登科中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

猪是人类异种器官移植的理想供体.然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白(signal regulatory protein α,SIRPα)不能识别异种细胞表面的整合素相关蛋白CD47,导致移植物细胞被受...

猪是人类异种器官移植的理想供体.然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白(signal regulatory protein α,SIRPα)不能识别异种细胞表面的整合素相关蛋白CD47,导致移植物细胞被受体内的巨噬细胞吞噬并清除.目的本研究在敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltrans ferase knockout,GTKO)的巴马小型猪基础上,转入人CD47 (hCD47)基因,创建GTKO/hCD47巴马小型猪,可避免超急性排斥反应并减弱受体巨噬细胞对移植物细胞的吞噬.GTKO/hCD47猪的骨髓可用于诱导免疫耐受,减弱移植受体对异种供体组织或器官的排斥反应.方法构建广泛性表达启动子(CAG)调控表达hCD47基因的载体pCAGGS-hCD47-Neo,转染GTKO巴马小型猪的耳成纤维细胞,筛选出阳性细胞克隆,通过体细胞克隆技术制备转基因克隆猪.利用PCR对克隆仔猪进行鉴定,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫组化分析hCD47在转基因猪各组织中的表达.分离转基因猪的外周血单核细胞PBMC并使用CFSE标记,通过流式细胞术检测猪PBMC与人巨噬细胞体外共孵育后的剩余率,以检测hCD47基因在抗巨噬细胞吞噬中的效果.GTKO/hCD47猪性成熟后进行配种繁育,扩繁F1代转基因猪.结果通过体细胞核移植获得重构胚,移植647枚胚胎到4头受体母猪.4头受体均妊娠至终期产仔13头,PCR鉴定显示13头仔猪均为阳性.qRT-PCR结果显示hCD47基因在各器官中的表达量由高至低依次为胰腺、肝脏、肺脏、肾脏和心脏.免疫组化证实hCD47基因在各组织中都有蛋白表达.通过流式细胞术检测转hCD47基因猪PBMC中hCD47的表达,结果显示PBMC明显表达***-1来源的人巨噬细胞与猪PBMC细胞体外共孵育,结果显示表达hCD47基因的猪PBMC细胞在THP-1来源的人巨噬细胞中的存活率显著高于不表达hCD47基因的猪PBMC细胞(p＜0.05).2头GTKO/hCD47母猪与GTKO公猪配种后产下11头活的仔猪,其中5头为hCD47阳性猪.结论本研究在国内首次成功建立了表达hCD47的GTKO巴马小型猪,明确了hCD47在主要组织和细胞中的表达,初步验证了hCD47具有抗人巨噬细胞吞噬的作用.GTKO/hCD47猪繁育正常,遗传稳定,获得F1代GTKO/hCD47猪.

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一例真间性猪的研究

一例真间性猪的研究

引用

2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：周怡赵海全刘玉清于辉帅素容李华四川农业大学动物遗传育种研究所四川雅安625014 佛山科学技术学院动物科学系广东佛山528231 佛山科学技术学院动物科学系广东佛山528231 四川农业大学动物遗传育种研究所四川雅安625014

目的为探讨间性猪的生殖遗传发育基础和优化猪的种质资源,对一例间性猪进行了外部形态、细胞遗传、性激素、解剖以及组织病理学的研究.方法 5月龄间性大白猪为试验组,以与试验组同窝的正常公母猪为对照组,分别进行内外生殖器官检察;PC...

目的为探讨间性猪的生殖遗传发育基础和优化猪的种质资源,对一例间性猪进行了外部形态、细胞遗传、性激素、解剖以及组织病理学的研究.方法 5月龄间性大白猪为试验组,以与试验组同窝的正常公母猪为对照组,分别进行内外生殖器官检察;PCR检测SRY基因;染色体组型和带型分析,取外周血进行常规短期淋巴细胞培养,获取中期细胞分裂相,制成染色体标本,G显带和C显带处理;放射免疫法测定静脉血睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体素(luteinizing hormone,LH)、促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)、孕酮(progesterone,PRG)和催乳素(prolactin, PRL)含量;生殖腺病理切片制做及观察,取2cm×2 cm大小生殖腺组织,10％甲醛固定后进行常规石蜡切片制作,苏木(Hematoxylin)与伊红(Eosin)染色(H.E.染色),镜检并显微照相;下丘脑和垂体电镜切片制做及观察,取2 mm×2 mm大小脑部组织,2.5％戊二醛固定后进行常规电镜切片制作,透射电镜观察并拍摄.结果结果表明,间性猪外生殖器为雌性表型,外阴位于肛门下方,阴蒂肿大突出于阴门之外,左侧可见睾丸,右侧隐睾,阴囊发育良好.间性猪和正常母猪染色体组型为38,XX,SRY阴性,核型组成为10sm+4st+ 12m+ 12t,G带带型没有差异,C带的显带基本相似,1、3、4、6、8、9、10、13、14和16号染色体均不同程度显带,以圆形带为主.试验组和对照组各号染色体的相对长度及臂比值差异均不显著(P＞0.05).睾酮和雌二醇水平均介于正常公、母猪之间,促黄体素、促卵泡素、孕酮和催乳素水平均高于正常母猪,LH/FSH比值明显低于正常母猪.剖检发现间性猪有雌雄两性生殖腺,有两个卵睾体,左侧有附睾,子宫体、子宫角和阴道明显退化,阴蒂中隐藏有假阴茎.病理组织镜检发现卵睾体为睾丸和卵巢混合组织,柱状上皮细胞退化,有正常莱氏细胞,无精原细胞或其残留物存在;附睾假复层纤毛柱状上皮细胞正常,内腔无精细胞或其残留物;子宫内膜有较低程度退化,部分内膜腺正常.试验组下丘脑和垂体分泌细胞较对照组发达,促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)神经元核大且饱满,细胞器增多并融合;垂体以促性腺激素细胞为主,细胞数量明显增多,分泌颗粒大小不均;催乳素细胞数量较正常母猪多,分泌颗粒电子密度也较大.结论该间性猪为真间性,无染色体易位现象,性性激素紊乱,无种用价值.

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CRISPR/Cas9介导的敲除ASGR1基因五指山小型猪

CRISPR/Cas9介导的敲除ASGR1基因五指山小型猪

引用

2016华南实验动物科学国际研讨会、第三届实验小型猪国际论坛暨广东·九州实验动物学术交流会

作者：石宁宁李西睿龙川冯冲潘登科中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

猪内皮细胞的去唾液酸糖蛋白受体1 (asialoglycoprotein receptor 1,ASGR1)是诱发异种肝移植后受体发生血小板减少症的主要诱因之一.本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除的五指山小型猪基础上,... 详细信息

猪内皮细胞的去唾液酸糖蛋白受体1 (asialoglycoprotein receptor 1,ASGR1)是诱发异种肝移植后受体发生血小板减少症的主要诱因之一.本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除的五指山小型猪基础上,利用规律成簇间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)结合体细胞核移植技术制备ASGR1基因敲除猪,针对猪ASGR1基因设计并构建了靶向表达载体单链导向RNA1 (single guide RNA1,sgRNA1),将sgRNA1与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒共同电转染GGTA1基因敲除猪耳成纤维细胞,流式细胞术富集筛选绿色荧光的细胞后培养单细胞克隆.PCR测序检测培养获得的41个单细胞克隆,37个克隆发生基因突变,ASGR1基因突变效率90％,其中双等位基因敲除的细胞克隆30个,效率高达73％.选择4个ASGR1基因敲除类型不同的细胞为核供体进行核移植,将早期重构胚移植到4头受体猪,2头妊娠至终期产仔猪6头,Western blot显示ASGR1基因敲除仔猪的肝脏中没有ASGR1的表达.对sgRNA1的13个潜在脱靶位点,分别设计引物进行PCR扩增和测序,结果显示没有脱靶现象.总之,本研究利用CRISPR/Cas9结合体细胞核移植技术快速高效地制备了GGTA1/ASGR1基因敲除五指山小型猪模型,有望解决异种肝移植后出现的血小板减少症,为临床过渡肝的应用研究提供了良好的研究材料.

关键词：规律成簇间隔短回文重复(CRISPR/Cas9) 去唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1) 异种肝移植体细胞核移植基因敲除猪

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