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双酚A致人前列腺上皮细胞增值作用机制探讨

双酚A致人前列腺上皮细胞增值作用机制探讨

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：吴建辉黄冬妍苏欣陈丽芬闫晗徐斯翀邵丛丛孙祖越上海市计划生育科学研究所中国生育调节药物毒理检测中心

目的:观察低剂量双酚A(BPA)对原代培养人前列腺上皮细胞作用并探讨其可能作用机制。方法:原代人前列腺上皮细胞复苏后,接种于24孔板加入RMPI-1640培养并对细胞进行形态学和免疫组织化学鉴定。获取的人前列腺上皮细胞分别接种于96孔板和2... 详细信息

目的:观察低剂量双酚A(BPA)对原代培养人前列腺上皮细胞作用并探讨其可能作用机制。方法:原代人前列腺上皮细胞复苏后,接种于24孔板加入RMPI-1640培养并对细胞进行形态学和免疫组织化学鉴定。获取的人前列腺上皮细胞分别接种于96孔板和24孔板培养12d后给予系列剂量BPA(10-11M-10-6M)处理72 h,利用CCK-8法检测前列腺上皮细胞存活率,并进一步通过Giemsa染色后观察细胞生长及形态变化。研究同时利用qRT-PCR技术分析了10-9M双酚A对人前列腺上皮细胞PCNA、AR、ER-α和NFKB1基因表达的影响。结果:细胞鉴定结果显示,细胞PSA表达阳性,获取的细胞具典型上皮细胞形态特征。CCK-8法检测结果显示,10-11M-10-6M BPA与前列腺上皮细胞孵育72h后,10-11M-10-9M BPA能够促进前列腺上皮细胞生长,且以10-9M BPA表现最为明显,进一步镜下观察结果显示,BPA未明显改变人前列腺上皮细胞形态。RT-PCR结果显示,10-9M BPA明显上调人前列腺上皮细胞PCNA(P<0.05)和AR(P<0.05)、ER-α(P<0.05)和NFKB1(P<0.05)基因水平表达。结论:环境暴露剂量BPA体外能促进人前列腺上皮细胞增殖,BPA对前列腺上皮细胞AR和ER基因表达影响可能介入该增殖过程。

关键词：双酚A 人前列腺上皮细胞 AR ER-α NFKB1 qRT-PCR

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应用于纺织品中的纳米铜皮肤刺激性和致敏性的研究

应用于纺织品中的纳米铜皮肤刺激性和致敏性的研究

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：齐丽娟谭壮生张维郑珊聂燕敏张楠冯颖李国君高珊北京市疾病预防控制中心/北京市预防医学研究中心食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室

目的:分别采用3D皮肤模型和皮肤致敏性替代法及传统动物实验方法研究纺织品中纳米铜的皮肤刺激性和致敏性。方法:采用EpiKutis 3D皮肤模型研究纳米铜的皮肤刺激性;采用皮肤致敏性替代法即小鼠局部淋巴结试验:LLNA:BrdU-ELISA法和LLNA:D... 详细信息

目的:分别采用3D皮肤模型和皮肤致敏性替代法及传统动物实验方法研究纺织品中纳米铜的皮肤刺激性和致敏性。方法:采用EpiKutis 3D皮肤模型研究纳米铜的皮肤刺激性;采用皮肤致敏性替代法即小鼠局部淋巴结试验:LLNA:BrdU-ELISA法和LLNA:DA法研究纳米铜的致敏性;同时根据GB/T 21604-2008和GB/T 21608-2008化学品急性皮肤刺激性和皮肤致敏试验方法研究纳米铜的皮肤刺激性和致敏性。结果:3D皮肤模型皮肤刺激性试验结果表明,6.9g/T纳米铜ET值为14.86h,刺激性属于非常温和;69mg/L纳米铜和17.2mg/L纳米铜ET值均大于24h,两者均无刺激性。小鼠局部淋巴结试验LLNA:BrdU试验结果表明:6.9g/L纳米铜小鼠耳肿胀、耳重、淋巴结重量、BrdU标记指数与对照组比较均无统计学差异（p>0.05）,刺激性为阴性;SI值为1.3,SI<1.6（阴性判定标准）,致敏性为阴性。LLNA:DA试验结果表明:6.9g/L纳米铜小鼠耳肿胀、耳重、淋巴结重量、ATP发光值与对照组比较均无统计学差异（p>0.05）,刺激性为阴性;SI值为1.3,SI<1.8（阴性判定标准）,致敏性为阴性。传统化学品急性皮肤刺激性和皮肤致敏试验结果表明,6.9g/L纳米铜为无刺激性。结论:新方法3D皮肤模型皮肤刺激性试验与传统化学品急性皮肤刺激性试验结果一致,6.9g/L纳米铜未见皮肤刺激性。皮肤致敏性替代法即小鼠局部淋巴结试验与传统化学品皮肤致敏试验结果一致,6.9g/L纳米铜未见皮肤致敏性。

关键词：纳米铜致敏性刺激性 3D皮肤模型小鼠局部淋巴结试验

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锌通过抑制内质网应激和凋亡减轻DBP暴露导致的睾丸支持细胞波形蛋白破坏

锌通过抑制内质网应激和凋亡减轻DBP暴露导致的睾丸支持细胞波形...

引用

2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：张玺王晓刚莫敏敖琳刘晋祎曹佳崔志鸿第三军医大学毒理学研究所

DBP是一种典型的环境内分泌干扰物,具有典型的雄性生殖毒性。我们以往的研究表明,DBP处理可致睾丸支持细胞波形蛋白骨架系统发生崩解,这种崩解一方面可使支持细胞形态发生改变,另一方面可使支持细胞-生精细胞间的桥粒结构破坏,从而导致... 详细信息

DBP是一种典型的环境内分泌干扰物,具有典型的雄性生殖毒性。我们以往的研究表明,DBP处理可致睾丸支持细胞波形蛋白骨架系统发生崩解,这种崩解一方面可使支持细胞形态发生改变,另一方面可使支持细胞-生精细胞间的桥粒结构破坏,从而导致未成熟的生精细胞提前释放入曲细精管管腔。而波形蛋白的过度磷酸化是导致波形蛋白骨架系统发生崩解的主要原因。我们的研究还发现,除导致波形蛋白过度磷酸化外,DBP还可诱导支持细胞发生内质网应激和凋亡。文献研究表明,Ga、Akt1和Zn与细胞的内质网应激、凋亡、波形蛋白磷酸化均有密切联系。本研究试图从Ga、Akt1和Zn等信号分子入手寻找使波形蛋白恢复其网状排列的途径。我们用Western blotting研究了可溶性波形蛋白、磷酸化波形蛋白、内质网应激标志蛋白HSP5、凋亡标志蛋白Bax、Bcl2的表达,用激光共聚焦研究了波形蛋白和HSP5在支持细胞中的分布和形态,用AnnexinV/PI染色结合流式细胞仪研究了细胞的凋亡水平。体外研究结果表明,Ga抑制剂BAPTA-AM可以显著抑制波形蛋白的磷酸化,但对支持细胞内质网应激和凋亡没有抑制作用,反而使内质网应激和凋亡显著增加,对波形蛋白骨架系统也没有保护作用。Akt1的抑制剂LY294002使支持细胞波形蛋白的磷酸化、内质网应激以及细胞凋亡水平均显著上升,说明Akt1的激活对支持细胞中具有保护作用。ZnSO的处理对支持细胞波形蛋白的磷酸化没有显著的降低作用,但可显著降低支持细胞的内质网应激和凋亡水平,同时使波形蛋白的分布趋于正常。动物实验证实了以上结果,ZnSO的处理可以显著降低DBP导致的睾丸损伤,睾丸细胞凋亡和内质网应激均恢复到正常水平,而且波形蛋白排列趋于正常,早熟生精细胞脱落显著降低。本研究提示,锌的补充对DBP诱导的雄性生殖毒性有显著的预防作用。

关键词：波形蛋白磷酸化睾丸支持细胞内质网应激 DBP

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医疗器械体外细胞毒性试验标准方法比较

医疗器械体外细胞毒性试验标准方法比较

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：黎砚书肖小华余华江西省医疗器械检测中心江西省药物研究所

背景:细胞毒性是医疗器械生物相容性评价的重要项目之一,包括浸提液法、直接接触法、间接接触法,其中浸提液法是检测中最常使用的方法,GB/T14233.2-2005给出了MTT法和显微镜观察法的SOP,目前国内广泛采用这两种方法对医疗器械进行细胞... 详细信息

背景:细胞毒性是医疗器械生物相容性评价的重要项目之一,包括浸提液法、直接接触法、间接接触法,其中浸提液法是检测中最常使用的方法,GB/T14233.2-2005给出了MTT法和显微镜观察法的SOP,目前国内广泛采用这两种方法对医疗器械进行细胞毒性评价。ISO 10993-5:2009较1999年版本详细给出了MTT法细胞毒性试验的SOP,该方法与GB/T14233.2-2005有较大不同。目的:探讨GB/T14233.2-2005中MTT法、显微镜观察法和ISO 10993-5:2009中MTT法在医疗器械细胞毒性评价中结果的差异。方法:本研究共选用10种医疗器械产品,包括表面接触器械(口罩、吸氧面罩、雾化器、吸痰管、止血海绵)和外部接入器械(输液器2种、引流管、留置针、注射器)。选用L929细胞,培养液为含10%胎牛血清的DMEM,其余步骤分别按GB/T14233.2-2005 MTT法、显微镜观察法和ISO10993-5:2009 MTT法标准中的SOP操作,按顺序分别定为方法一、方法二、方法三。三种方法最大的不同是细胞接种密度不一样(1×10～4、1×10～5个细胞/m1)和细胞检测时间终点不一样(72h、24h)。方法一细胞接种密度为1×10～4个细胞/ml,检测时间为72h;方法二细胞接种密度为1×10～5个细胞/ml,检测时间为72h;方法三细胞接种密度为1×10～5个细胞/ml,检测时间为24h。结果:1)上述3种方法中,方法一样品合格率为30%,方法二合格率为90%,方法三样品合格率为70%。2)3种方法均合格的为3种,三种均不合格的1种,一致率为40%。3)其余6种产品方法一均不合格,方法二均合格,方法三4种合格,2种不合格。结论:方法一因接种密度低,细胞尚未达到对数期对外界的刺激敏感致假阳性率增加;方法二因检测时间终点过长,当待检物对细胞只有抑制作用而非杀伤作用时,经过较长时间的培养后,细胞的增殖会赶上对照组,致假阴性率增加;方法三避免了其他2种方法的不足,从而能够得到更加客观的结果。

关键词：医疗器械细胞毒性试验

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纳米二氧化硅通过激活PERK和ATF6信号通路诱导自噬体合成的机制研究

纳米二氧化硅通过激活PERK和ATF6信号通路诱导自噬体合成的机制研...

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：王继段军超李艳博荆黎周显青孙志伟首都医科大学公共卫生学院卫生毒理与卫生化学学系

目的:自噬功能紊乱被认为是纳米材料的重要毒性机制,课题组前期研究发现纳米二氧化硅可引起自噬体的累积,但具体机制不清。本研究拟明确纳米二氧化硅对肝细胞自噬功能的影响并探讨其潜在分子机制。方法:以人正常肝细胞L-02为模型,在透... 详细信息

目的:自噬功能紊乱被认为是纳米材料的重要毒性机制,课题组前期研究发现纳米二氧化硅可引起自噬体的累积,但具体机制不清。本研究拟明确纳米二氧化硅对肝细胞自噬功能的影响并探讨其潜在分子机制。方法:以人正常肝细胞L-02为模型,在透射电镜下观察纳米二氧化硅的细胞摄取、细胞内分布和对亚细胞器的损伤;利用CCK8试剂盒检测纳米二氧化硅的细胞毒性;免疫荧光联合应用激光共聚焦显微镜观察自噬标志分子LC3B在胞浆内的分布状态,以及纳米二氧化硅在内质网的定位;Western blot检测自噬和内质网应激信号通路相关蛋白的表达情况;使用三质粒慢病毒包装系统制备针对ERstress信号通路的shRNA慢病毒,转导L-02细胞,实现PERK和ATF6的基因敲减;RNA提取和荧光定量PCR检测抑制ER stress信号通路后对自噬相关基因表达的影响。结果:纳米二氧化硅被细胞摄取后可产生细胞毒性,抑制L-02细胞增殖并存在剂量和时间效应;纳米二氧化硅促进自噬体的积累;低剂量纳米二氧化硅增强自噬流,促进自噬体的合成,高剂量的纳米二氧化硅阻断细胞自噬流,抑制自噬体的降解;纳米二氧化硅通过选择性激活PERK和ATF6信号通路诱导ER stress;活性氧清除剂NAC处理纳米二氧化硅暴露的细胞后,抑制了ROS产生,同时也抑制了ER stress和细胞自噬;ER stress抑制剂4-PBA处理后,抑制了纳米二氧化硅诱导的自噬;特异性敲减PERK和ATF6后,结果发现纳米二氧化硅诱导的细胞自噬被抑制。结论:纳米二氧化硅通过ROS激活ER stress下游的PERK和ATF6信号通路,诱导自噬的起始,促进自噬体合成,加剧自噬体积累,导致自噬功能紊乱,从而对细胞产生毒性。

关键词：纳米二氧化硅细胞自噬内质网应激自噬功能紊乱肝细胞

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EU-ToxRisk:towards mechanism-based in vitro/in silico toxicity testing for the assessment of chemical safety for humans

EU-ToxRisk:towards mechanism-based in vitro/in silico toxici...

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者： Erik Danen Division of Toxicology Acedemic Centre for Drug ResearchLeiden University

The EU-ToxRisk project aims to to evolve an adverse outcome pathway(AOP)mechanism-based toxicity testing integrating all relevant in vitro and in silico technologies required for the assessment of chemical safety for *** should promote the required paradigm shift in toxicology towards an animal-free safety *** project is focussed on the areas of repeated dose toxicity and developmental/reproductive *** resulting validated test and assessment strategy will fit the current regulatory framework and impact on the future development of safety sciences and regulatory risk *** overall EU-ToxRisk strategy will be discussed as well as recent advances in high throughput transcriptomics and high content microscopy-based screening approaches,adapted by EU-ToxRisk.

关键词： EU-ToxRisk:towards mechanism-based in vitro/in silico toxicity testing for the assessment of chemical safety for humans

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阿霉素重复给药对心肌细胞存活和SIRT1/PGC-1α通路的影响分析

阿霉素重复给药对心肌细胞存活和SIRT1/PGC-1α通路的影响分析

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：崔岚殷健郭家彬赵君彭双清解放军疾病预防控制所毒理学评价研究中心

目的:目前毒理学机制研究中体外实验多以单次暴露/急性暴露研究为主,而化学物的实际暴露通常呈长期低剂量暴露。本研究以临床常用的抗肿瘤药物阿霉素（Doxorubicin,DOX）为例,采用不同的重复给药方案,重点从细胞存活SIRT1/PGC-1α通路... 详细信息

目的:目前毒理学机制研究中体外实验多以单次暴露/急性暴露研究为主,而化学物的实际暴露通常呈长期低剂量暴露。本研究以临床常用的抗肿瘤药物阿霉素（Doxorubicin,DOX）为例,采用不同的重复给药方案,重点从细胞存活SIRT1/PGC-1α通路角度分析DOX的毒性作用特点,并与单次给药进行对比研究。方法:采用了CCK8细胞生存率检查、基准计量法（Benchmark Dose Method）、Western Blot等研究方法,利用人源永生化心肌细胞系AC16为实验模型对细胞毒性量-效曲线进行拟合,并求出细胞毒性表征参数BMDL值和IC50值进行比较;同时检测Sirt1/PGC-1α及其下游的线粒体新生通路相关分子的表达来论证相同DOX给药总量不同给药频率对SIRT1/PGC-1α信号途径的影响。结果:细胞重复给药3天造成细胞毒量效曲线右移,BMDL值和IC值较单次给药细胞显著升高;而细胞重复给药6天造成细胞毒量效曲线左移,BMDL值和IC值较单次给药细胞显著降低。WesternBlot结果发现,DOX重复给药组SIRT1、PGC-1α、NRF1、TFAM表达比单次给药组下降更多;而表征线粒体数量和活性的蛋白VDAC和CS则呈现相反趋势,单次给药组表达明显下降,而重复给药组蛋白表达非但没有下降反而出现轻微升高趋势。结论:当细胞在低剂量重复、长期给药于某种有害物质中时,最初会对该物质产生一定的适应性调整,从而使细胞对该有害物质损害的敏感性出现一定程度的降低,不会造成可检测的损伤:而当这种低剂量反复长期给药积累至超过某一限度,反而会变得对该有害物质更加敏感,原本不足以构成损伤的浓度,就可以造成比较严重的损伤。这一点可能与临床上的重复给药所导致的慢性/累积毒性有关。此外,总给药量相同、给药频率不同的细胞SIRT1/PGC-1α通路蛋白表达差异,说明给药方案不同不但能使相同通路呈现不同结果,还有可能涉及到与原通路完全不同的其他通路。本研究结果对体外实验重复给药进行了初步探索,为未来进一步深入研究重复给药作用机制提供了参考

关键词：阿霉素体外重复给药基准计量法 BMDL SIRT1

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间充质干细胞对大鼠芥子气损伤治疗作用的研究

间充质干细胞对大鼠芥子气损伤治疗作用的研究

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：闫夏贝赵增明束玉磊李漾赵君彭双清军事医学科学院疾病预防控制所毒理学评价研究中心

目的:间充质干细胞是可在体外贴壁培养的、长梭状的、具有多项分化潜能的成体干细胞,由于其免疫调节、旁分泌等的特性,在支持促进造血、创伤修复、组织功能再生与重建、缓解器官移植排斥作用等研究领域应用前景广阔。目前已有大量文献... 详细信息

目的:间充质干细胞是可在体外贴壁培养的、长梭状的、具有多项分化潜能的成体干细胞,由于其免疫调节、旁分泌等的特性,在支持促进造血、创伤修复、组织功能再生与重建、缓解器官移植排斥作用等研究领域应用前景广阔。目前已有大量文献报道将间充质干细胞应用于治疗中枢神经疾病或损伤、糖尿病、心肌疾病、放射性损伤等且效果显著。芥子气可直接引起细胞DNA损伤与氧化应激损伤,并由此引发一系列后续的损伤。由于其毒性机制复杂多样且、多种信号通路和生理过程交互影响,虽然对芥子气的中毒机制早有研究,但至今尚未完全阐释清楚,对其造成全身性损害的防护与治疗仍是一大难题。鉴于芥子气损伤在造血系统与胃肠消化系统方面与急性放射综合征(acute radiation syndrome,简称ARS)的相似性,间充质干细胞可能也会对芥子气引起的损伤有一定的治疗作用。本研究旨在研究间充质干细胞的组织修复功能和免疫调节作用对芥子气引起损伤的治疗作用。方法:建立芥子气经皮肤染毒的SD大鼠模型,染毒24h后,连续三天尾静脉注射间充质干细胞3.5×10～5个/只并补充体液;观察并记录大鼠的中毒症状、活动能力、体重变化、血细胞变化;处死大鼠并解剖,观察并记录肝脏和脾脏的脏器系数变化,取肝脏、脾脏、胸骨进行组织病理学观察差。结果:1.芥子气对SD大鼠的半数致死量约为2.71mg/kg,染毒后大鼠出现精神萎靡、严重腹泻、脱毛、便血、体重下降等症状;2.经间充质干细胞治疗的大鼠存活率(62.5%)较未治疗组(50%)存活率高,体重恢复较快,自发活动能力强;3.治疗后大鼠白细胞、淋巴细胞、血小板数量显著增高;4.治疗后大鼠脾脏重量高于未治疗组,后期红髓增生更显著;治疗后大鼠胸骨骨髓损伤较轻,有核细胞数量相较于未治疗组高。结论:间充质干细胞对芥子气引起的造血系统损伤具有一定的治疗作用,可促进髓外造血代偿功能。

关键词：芥子气间充质干细胞造血系统

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钍对蛋白核小球藻的水生态毒性研究

钍对蛋白核小球藻的水生态毒性研究

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：彭璨马宇辉丁雅韵何潇张鹏王东琪兰图张朝晖张智勇南华大学公共卫生学院中国科学院高能物理所中国科学院物理所

目的:钍是一种天然性放射金属元素,且用处广泛,但是对钍的研究还很少。本实验研究钍在水中的形态变化,以及钍对水中绿藻的毒性作用和钍对绿藻的生物效应进行评估。方法:以蛋白核小球藻为模式生物,参考OECD化学品生态毒理测试方法,以Th... 详细信息

目的:钍是一种天然性放射金属元素,且用处广泛,但是对钍的研究还很少。本实验研究钍在水中的形态变化,以及钍对水中绿藻的毒性作用和钍对绿藻的生物效应进行评估。方法:以蛋白核小球藻为模式生物,参考OECD化学品生态毒理测试方法,以Th（NO）.5HO为材料,研究钍（Th）的水生态毒性。将蛋白核小球藻培养在OECD201营养液中,用Th（NO）·5HO配制不同浓度溶液,选择对数期的小球藻并将其浓度调至2×10～6个/ml,温度为24±1℃,光照强度为3000±10%和转速为95±5 r/min的摇床中培养96小时。观察不同浓度钍（Th）在不同时间段对小球藻的毒性作用:测定蛋白核小球藻的生化参数（如数量,叶绿素含量及ROS）,模拟计算钍的形态变化,并观察小球藻的形态和结构变化。结果:1.在小球藻的生长抑制试验中可见:随着暴露浓度和时间的增加,小球藻的OD值降低,小球藻数量减少,在外观上,暴露浓度越高的小球藻越容易沉积于培养液底部,且颜色发黄。2.利用MEDUSA程序模拟计算Th的形态变化,计算结果发现随着pH的增大,可溶性的Th+减少,而形成不溶性的Th（OH）。3.荧光值的变化趋势与小球藻生长趋势保持一致,随着浓度的增加和时间的延长,钍对叶绿素的影响增加,叶绿素含量降低。4.低暴露浓度组的ROS并无显著影响,高暴露组的ROS明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）,随着浓度和时间的增加,ROS含量增高。***结果显示:与控制组相比,暴露组的小球藻出现聚齐,萎缩,且表面附着沉淀物,沉淀物的能谱结果显示有钍的存在。***结果显示:与控制组相比,暴露组出现明显质壁分离的现象,且细胞结构变得模糊,细胞质出现萎缩,细胞表面沉积着沉淀物,细胞内也有沉积物的存在,细胞结构遭到明显破坏。结论:1.钍在营养液中存在着平衡状态,在pH>6后,钍主要以Th（OH）的状态存在。2.钍对小球藻有毒性作用,影响小球藻的生长且可导致其生化指数的改变,导致其叶绿素含量降低和细胞内ROS含量升高。3.从SEM和TEM结果来看,钍对小球藻的外形和内部结构均有改变,这有可能也是钍的毒性机制之一。

关键词：蛋白核小球藻钍水生毒理学

来源：评论

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lncRNA对香烟提取物致16HBE恶变细胞的EMT和周期影响作用机制研究

lncRNA对香烟提取物致16HBE恶变细胞的EMT和周期影响作用机制研究

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2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

作者：刘振中刘安飞南阿若成莹戴欣陈丽剑张楠蒋义国广州医科大学公共卫生学院化学致癌研究所

目的:近年来,肺癌逐渐成为全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,吸烟是肺癌发生的重要环境暴露因素之一。中国是世界上烟草生产和消费大国,烟草造成的肺癌等疾病负担日益严峻。长链非编码RNA(lncRNA)作为非编码RNA中重要组成部分,主要... 详细信息

目的:近年来,肺癌逐渐成为全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,吸烟是肺癌发生的重要环境暴露因素之一。中国是世界上烟草生产和消费大国,烟草造成的肺癌等疾病负担日益严峻。长链非编码RNA(lncRNA)作为非编码RNA中重要组成部分,主要通过表观遗传学、转录及转录后水平调控基因的表达和翻译,参与对肿瘤生物调控功能。目前,lncRNA作为环境化学致癌物暴露标记以及其参与化学致癌过程的报道研究较少。本研究旨在寻找香烟烟雾暴露人群血清差异表达lncRNA,进一步探寻lncRNA在香烟烟雾致癌过程中作用功能和意义。方法:通过过生物信息分析预测、双荧光素酶基因报告、CCK-8、流式测定、平板克隆、软琼脂克隆、qPCR、RNAi技术、Western Blot、细胞免疫荧光和裸鼠成瘤和转移实验。从吸烟人群血清、肺癌组织中寻找差异表达的lncRNA,再验证lncRNA在CSE诱导16HBE细胞的EMT改变中的作用以及lncRNA在CSE致16HBE周期改变以及作用机制。结果:1通过人群香烟选择喜好确定受试香烟;从细胞大体外观、平板克隆、软琼脂克隆、划痕和裸鼠成瘤实验等指标,确认CSE具有对16HBE恶性转化能力。2初步证实linc00152在吸烟人群血清中高表达并且与吸烟量有关,且在肺癌组织样本表达明显增高。3 16HBE细胞在CSE诱导过程中发生了EMT改变,linc00152可能在CSE诱导16HBE细胞EMT改变过程中起促进作用。4 linc001 52在CSE-T细胞可能通过与miRNA的内源性竞争作用对cyclin D1进行调控;后者再从周期通路对细胞周期调控,继而对受试细胞增殖和裸鼠成瘤能力造成影响。结论:确定CSE具有使16HBE细胞恶性转化的能力,且建立的CSE-T细胞系可以作为香烟诱导呼吸道上皮细胞恶性转化的细胞模型。linc00152可以作为香烟暴露标志物,在CSE诱导16H-BE恶性转化的EMT过程有促进作用。linc00152可能通过与miRNA的ceRNA作用对cyclin D1进行调控。进一步通过下游调控通路对细胞周期产生影响,影响CSE-T的增殖能力。

关键词：香烟烟雾血清长链非编码RNA 肺癌恶性转化上皮细胞间质转化周期增殖

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