目的 通过比较不同月龄小鼠Sca-1+心脏干细胞(cardiac stem cells,CSCs)移植治疗心肌梗死(myocardial infarction,MI)的疗效,以求发现不同月龄Sca-1+CSCs表观遗传学功能是否存在差异;继之利用基因测序技术筛选不同月龄小鼠Sca-1+CSCs功能差异的关键靶基因及调控相关miRNA.方法(1)采用免疫磁珠分选法急性分离不同月龄(2d、3m、6m、9m、12m)C57BL/6J小鼠Sca-1+CSCs.(2)建立小鼠(8周龄,雄性)急性MI模型,于心梗边缘区注射PBS和Sca-1+CSCs悬液(实验分组:sham组、MI+PBS组、MI+2d组、MI+3m组、MI+6m组、MI+9m组、MI+12m组);分别于术后 1w、4w行超声心动图检测心功能,术后4w心重/体重比(HW/BW)用于评价不同处理组对MI后心脏结构的影响.(3)生物信息学分析:将急性分选的不同月龄小鼠Sca-1+CSCs样品进行全基因组测序;利用stem软件对转录组基因的表达水平进行聚类;利用kobas软件对筛选出的基因进行GO富集分析,并通过评分确定出在regulation of developmental process 上富集的基因类型;用靶基因预测软件筛选调控目的基因的miRNA.(4)qRT-PCR进一步验证不同月龄Sca-1+CSCs中目的基因及miRNA的表达情况.
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