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99株表皮葡萄球菌早孕宫颈拭子与外环境分离株耐药性及SCCmec分型研究

中华微生物学和免疫学杂志 2019年第3期39卷 185-191页

作者：宋衍燕肖文静杨琳郝民邵希凤王恒伟王海滨孙灵利北京市朝阳区疾病预防控制中心 100013 北京市朝阳区妇幼保健院 100013

目的了解2015—2016年从北京市朝阳区早孕宫颈拭子和外环境中分离的99株表皮葡萄球菌的耐药性与耐药基因携带情况以及SCCmec型别。方法对99株表皮葡萄球菌,采用K-B法对头孢西丁、微量肉汤稀释法对万古霉素、达托霉素、青霉素、红霉素、... 详细信息

目的了解2015—2016年从北京市朝阳区早孕宫颈拭子和外环境中分离的99株表皮葡萄球菌的耐药性与耐药基因携带情况以及SCCmec型别。方法对99株表皮葡萄球菌,采用K-B法对头孢西丁、微量肉汤稀释法对万古霉素、达托霉素、青霉素、红霉素、复方新诺明、四环素、环丙沙星、克林霉素、庆大霉素、氯霉素进行药敏试验,采用PCR法对ermA、ermB、ermC、msrA、norA1、norA2、sul1、sul2、sul3、aac(6′)/aph(2″)、ant(4′,4″)、ant(6)、tetM耐药基因和SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa、Ⅳb、Ⅳc、Ⅳd、Ⅴ型别基因进行检测,毛细管凝胶电泳法进行结果确认,SPSS进行数据分析。结果99株mecA阳性表皮葡萄球菌对万古霉素100%敏感、对达托霉素93.94%敏感,对青霉素、红霉素、头孢西丁、复方新诺明、四环素、环丙沙星、克林霉素、庆大霉素、氯霉素耐药率依次为97.98%、85.86%、79.80%、52.54%、27.27%、43.43%、36.36%、23.23%、11.11%;norA1、norA2、ermA、ermB、ermC、msrA、sul1、sul2、sul3、aac(6′)/aph(2″)、ant(4′,4″)、ant(6)、tetM携带率分别为100%、93.94%、0.00%、3.03%、17.17%、57.58%、50.51%、12.12%、4.04%、30.30%、8.08%、4.04%、25.26%;99株mecA阳性表葡葡萄球菌SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa、Ⅳb、Ⅳc、Ⅳd、Ⅴ分离率分别为5.05%、0.00%、43.43%、10.10%、0.00%、3.03%、3.03%、19.19%,并有4.04%(4/99)的菌株携带两种SCCmec型别,12.12%(12/99)菌株未分型。结论99株mecA阳性表皮葡萄球菌中未发现万古霉素耐药菌株。mecA阳性表皮葡萄球菌多重耐药基因携带率为89.90%。菌株大环内酯类、磺胺类、氨基糖苷类抗菌药物耐药机制以携带msrA、sul1、aac(6′)/aph(2″)耐药基因为主。SCCmec分型以SCCmecⅢ型为主。SCCmecⅢ型和未分型菌株的多重耐药基因携带率分别为88.37%和75%,其他SCCmec型菌株均100%携带多重耐药基因。

关键词：表皮葡萄球菌 mecA MSSE MRSE 耐药基因 SCCmec

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柠檬酸杆菌属基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱库的扩展及效果评价

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食品安全质量检测学报 2021年第9期12卷 3476-3483页

作者：王恒伟孔凡旭郝民田甜邵希凤宋衍燕北京市朝阳区疾病预防控制中心北京100021 河北省疾病预防控制中心石家庄050021

目的扩展基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)中柠檬酸杆菌属数据库。方法采用PCR方法扩增并测序管家基因leuS进行系统发育分析鉴定菌种;采用平行对照实验优化菌株培养和样品制备条件;按照自建库方法手动采集优化培养后的菌株谱图,构建实验室内部数据库,并进行灵敏度与特异度评价。结果经系统发育分析,有7个种共66株柠檬酸杆菌。最佳培养条件为哥伦比亚血平板做培养基、转种1次、培养24 h,甲酸溶液体积25μL。新增沃克曼氏柠檬酸杆菌和巴氏柠檬酸杆菌2个菌种谱图,补充中国株弗氏、布氏、吉氏、杨氏、无丙二酸柠檬酸杆菌等5个菌种本地区谱图。结论leuS基因可以有效区分柠檬酸杆菌属菌种,MALDI-TOF图谱库的扩展提升了质谱对本地区柠檬酸杆菌属菌种鉴定准确性。

关键词：柠檬酸杆菌 leuS 系统发育分析基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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幽门螺杆菌感染后人胃腺癌上皮细胞微量磷酸化蛋白质差异分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第5期29卷 449-453页

作者：肖迪宋衍燕赵飞何利华孟凡亮张慧芳张建中中国疾病预防控制中心传染病预防控制所诊断室北京102206 北京市朝阳区疾病预防控制中心 100021

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）作用后人胃腺癌上皮细胞（AGS）中微量磷酸化蛋白的变化情况。方法采用金属离子亲和吸附富集技术富集幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用以及AGS细胞的磷酸化蛋白，除盐纯化后利用二维凝胶电泳技术... 详细信息

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）作用后人胃腺癌上皮细胞（AGS）中微量磷酸化蛋白的变化情况。方法采用金属离子亲和吸附富集技术富集幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用以及AGS细胞的磷酸化蛋白，除盐纯化后利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋白，MALDI—TOF／TOF质谱鉴定确认蛋白。结果幽门螺杆菌作用后AGS细胞有21种蛋白出现差异表达，其中15种蛋白表达量下调，4种蛋白出现新表达，1种蛋白表达量上调，1种蛋白不表达。差异表达蛋白涉及细胞的钙离子调节、转录、翻译、蛋白折叠与运输、核糖体的装配、中心体复制、染色体稳定、细胞结构形态、细胞增殖与凋亡等。结论幽门螺杆菌能引起广泛的胃腺癌黏膜上皮细胞蛋白磷酸化特征的变化，这种变化谱特征对进一步全面认识幽门螺杆菌的致病作用有重要意义。

关键词：亲和吸附磷酸化蛋白二维凝胶电泳致病机制

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酶促重组酶扩增-侧流层析快速检测沙门菌的方法研究

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预防医学 2023年第12期35卷 1102-1104页

作者：聂艳妮闫梅英宋衍燕内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014040 北京市朝阳区疾病预防控制中心微生物检验科北京100020 中国疾病预防控制中心北京102206

目的建立一种酶促重组酶扩增(ERA)和侧流层析技术(LF)相结合的沙门菌快速检测方法,为沙门菌现场检测提供技术支持。方法根据沙门菌属高度保守的鞭毛基因fimY设计特异性ERA引物,采用毛细管电泳筛选合适的引物,再设计探针,对扩增温度和时... 详细信息

目的建立一种酶促重组酶扩增(ERA)和侧流层析技术(LF)相结合的沙门菌快速检测方法,为沙门菌现场检测提供技术支持。方法根据沙门菌属高度保守的鞭毛基因fimY设计特异性ERA引物,采用毛细管电泳筛选合适的引物,再设计探针,对扩增温度和时间进行优化,建立ERA-LF检测体系对菌株DNA进行扩增,采用侧向流试纸条检测产物。采用鼠伤寒沙门菌标准菌株检验方法的灵敏度,采用10种其他肠道感染标准菌株检验特异度,采用实际分离到的沙门菌验证对实际样本检测能力。结果经过毛细管电泳筛选获得沙门菌特异性引物,在扩增温度为37℃、反应时间为20 min的条件下,最低检测浓度为5 copies/μL。本方法对沙门菌核酸扩增结果为阳性,10株其他肠道感染菌核酸扩增结果均为阴性,特异度较好。对100株(包含10种血清型)沙门菌进行检测,结果均显示阳性。结论本研究建立的ERA-LF方法可用于沙门菌的现场即时检测。

关键词：酶促重组酶扩增侧流层析沙门菌即时检测

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丙型肝炎病毒MHC-Ⅱ类抗原表位预测

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慢性病学杂志 2013年第5期13卷 339-342页

作者：王海滨曾照丽宋衍燕赵剑虹雷娜张晓曦北京市朝阳区疾病预防控制中心北京100021

目的预测各型丙型肝炎病毒(HCV)的MHC-Ⅱ类抗原表位,为HCV的疫苗研发提供理论依据。方法从NCBI数据库中检索出10条包含6种基因型的HCV完整氨基酸序列,使用在线MHC-Ⅱ类抗原表位分析工具NetMHCⅡpan-2.1 Server,从MHC-Ⅱ类抗原表位在6种... 详细信息

目的预测各型丙型肝炎病毒(HCV)的MHC-Ⅱ类抗原表位,为HCV的疫苗研发提供理论依据。方法从NCBI数据库中检索出10条包含6种基因型的HCV完整氨基酸序列,使用在线MHC-Ⅱ类抗原表位分析工具NetMHCⅡpan-2.1 Server,从MHC-Ⅱ类抗原表位在6种HCV型别之间的保守性及与MHC-Ⅱ类分子亲和力两方面评价HCV携带的潜在MHC-Ⅱ类抗原表位。结果位于NS3和NS5B蛋白的3段表位核心序列具有较好的保守性,其中尤以NS3蛋白携带的表位核心序列保守性最好;高亲和力的MHC-Ⅱ类抗原表位主要位于E2、NS5A、NS4A和NS5B蛋白,其中E2和NS5A蛋白携带的高亲和力抗原表位较为丰富。结论 NS5B蛋白所携带的MHC-Ⅱ类抗原表位兼顾了各个HCV基因型之间的保守性及与MHC-Ⅱ类分子的高亲和力,具有较好的疫苗应用前景;NS3、E2、NS5A和NS4A蛋白有可能成为HCV多表位肽疫苗的备选组分。

关键词：丙型肝炎病毒表位预测

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CagA对AGS细胞Ca^(2+)相关蛋白磷酸化的影响

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世界华人消化杂志 2008年第32期16卷 3610-3615页

作者：肖迪赵飞宋衍燕孟凡亮何利华张慧芳张建中中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京市102206

目的:分析幽门螺杆菌(Hpylori)细胞毒素相关蛋白A(CagA)对人胃腺癌黏膜上皮细胞(AGS)Ca2+相关蛋白磷酸化的影响,进一步揭示Hpylori的致病机制.方法:采用金属离子亲和吸附富集技术富集Hpylori、Hpylori CagA缺失株(Hpylori△CagA)与AGS... 详细信息

目的:分析幽门螺杆菌(Hpylori)细胞毒素相关蛋白A(CagA)对人胃腺癌黏膜上皮细胞(AGS)Ca2+相关蛋白磷酸化的影响,进一步揭示Hpylori的致病机制.方法:采用金属离子亲和吸附富集技术富集Hpylori、Hpylori CagA缺失株(Hpylori△CagA)与AGS细胞相互作用4h,以及培养相同时间的AGS细胞的磷酸化蛋白,利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋白,ImageMaster 2D分析软件识别差异蛋白,MALDI-TOF/TOF质谱鉴定确认蛋白.结果:Hpylori△CagA作用的AGS细胞,与培养相同时间的AGS细胞比较表达量不变,而Hpylori△CagA作用的AGS细胞表达量发生了明显变化,表明此蛋白的变化是单纯由CagA引起的;此类蛋白点共鉴定出19个,其中3个蛋白点与Ca2+相关.钙离子结合蛋白(nucleobindin-2 precursor,CALNUC)在AGS细胞以及Hpylori△CagA与AGS相互作用的2-D胶中表达量接近,而Hpylori与AGS相互作用后该蛋白表达量明显降低.结论:Hpylori CagA进入AGS细胞可能会影响内质网、线粒体及高尔基体的钙稳态,诱发内质网、线粒体、高尔基体凋亡或增殖途径,而成为胃炎、胃溃疡、胃癌发生的诱因之一.

关键词：细胞毒素相关蛋白A 磷酸化蛋白质钙离子通道致病机制

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人胃上皮细胞中幽门螺杆菌CagA相关未知磷酸化蛋白和磷酸化位点分析

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胃肠病学 2009年第1期14卷 22-26页

作者：肖迪赵飞孟几亮何利华宋衍燕王海滨张建中中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 102206

背景：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）是Ⅰ型幽门螺杆菌（***）的主要毒力因子。***胃癌、胃炎相关株和CagA缺失（△CagA）株的蛋白质组学研究尚未发现CagA相关生物标记蛋白。目的：分析***阳性株和△CagA株作用后人胃上皮细胞中差异表... 详细信息

背景：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）是Ⅰ型幽门螺杆菌（***）的主要毒力因子。***胃癌、胃炎相关株和CagA缺失（△CagA）株的蛋白质组学研究尚未发现CagA相关生物标记蛋白。目的：分析***阳性株和△CagA株作用后人胃上皮细胞中差异表达的未知磷酸化蛋白和磷酸化位点,为研究CagA的致病机制提供线索。方法：以金属离子亲和吸附富集技术富集经***标准株和△CagA株作用4h的人胃腺癌细胞株AGS的磷酸化蛋白,双向电泳（2-DE）分离蛋白,飞行时间质谱（TOF-MS）技术鉴定差异蛋白点。结果：***标准株作用后,AGS细胞FAM50A蛋白276位丝氨酸发生磷酸化,PQBP1蛋白227～251序列中有磷酸化位点。与***标准株相比,△CagA株作用于AGS细胞可引起至少13种未知磷酸化蛋白的变化,其质谱图中均出现中性丢失峰,其中2种表达量增加,4种表达量降低,6种消失,1种新发生磷酸化。结论：CagA阳性***感染可致AGS细胞FAM50A和PQBP1蛋白发生磷酸化。所发现的13种未知磷酸化蛋白为揭示CagA的致病机制提供了线索。

关键词：螺杆菌,幽门毒力因子类细胞毒素相关基因A蛋白磷酸化蛋白磷酸化位点蛋白质组学

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幽门螺杆菌与胃上皮细胞不同作用时间点蛋白质组的差异分析

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世界华人消化杂志 2008年第12期16卷 1260-1265页

作者：宋衍燕赵飞肖迪马广源孟凡亮何丽华张建中中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京市102206

目的:分析幽门螺杆菌(Hpylori)与人胃腺癌上皮细胞(humangastric adenocarcinoma epithelial,AGS)的相互作用蛋白质组学差异.方法:采用双向凝胶电泳分离Hpylori26695株与AGS细胞相互作用0.5、2、4h时间点的细胞和黏附菌的全蛋白样品,考... 详细信息

目的:分析幽门螺杆菌(Hpylori)与人胃腺癌上皮细胞(humangastric adenocarcinoma epithelial,AGS)的相互作用蛋白质组学差异.方法:采用双向凝胶电泳分离Hpylori26695株与AGS细胞相互作用0.5、2、4h时间点的细胞和黏附菌的全蛋白样品,考马斯亮兰染色,ImageMster2D图像分析软件比较分析,识别差异蛋白,将差异蛋白点进行胶内酶解,经基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),通过搜寻蛋白质数据库完成对差异蛋白的鉴定.结果:对0.5、2、4h时间点图谱差异蛋白点分析共发现主要差异蛋白点66个,对其中34个(共对应16种蛋白)最终完成准确鉴定,2h后8种蛋白开始上调,其中2种是细胞来源,6种Hpylori来源;4h时4种细胞来源蛋白下调,并有4种新的蛋白开始被观察到.在共感染的早期,细胞的琥珀酸脱氢酶、Hpylori的抗氧化酶类、黏附素以及HSP60表达上调.感染晚期主要是细胞来源的亲环素A、新生多肽相关复合物α多肽开始表达,Hpylori来源的尿素酶、非血红素铁蛋白等蛋白明显出现在黏附菌成分中.结论:Hpylori与AGS细胞相互作用过程中,细菌和细胞蛋白表达均存在明显时序性变化,早期相互作用则主要表现为以与黏附等有关的蛋白表达变化,后期向有利细菌存活和增殖的方向发展,并呈现出与免疫逃逸和病理损伤相关的变化.

关键词：幽门螺杆菌人胃腺癌上皮细胞共培养蛋白质组

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一种可拆卸多单元水质反应器

一种可拆卸多单元水质反应器

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作者：田甜宋衍燕 100000 北京市朝阳区华威里25号

本实用新型公开一种可拆卸多单元水质反应器，包括水质采样瓶；水质采样瓶瓶口处插接有可拆卸的瓶塞；瓶塞上连接有输出管；输出管一端与水质采样瓶连通，另一端连通有负压管；负压管远离输出管一端连接有负压发生装置；负压管上连接有... 详细信息

标准号: CN210894332U

本实用新型公开一种可拆卸多单元水质反应器，包括水质采样瓶；水质采样瓶瓶口处插接有可拆卸的瓶塞；瓶塞上连接有输出管；输出管一端与水质采样瓶连通，另一端连通有负压管；负压管远离输出管一端连接有负压发生装置；负压管上连接有若干个可拆卸的试验管；负压管上设有用于控制水体流量的封闭装置；能够通过气压发生装置将待检测水质从水质采样瓶内吸入负压管内，由负压管内流入试验管内，通过封闭装置控制进入试验管的水量，达到定量检测，多个试验管并排设置，直接进行取水检测，省时省力提高检测效率，增强对比效果；同时可拆卸的试验管、连接头和负压管使用后可清洗消毒重复使用，节省资源。

关键词：负压管试验管水质采样瓶可拆卸的输出管瓶塞封闭装置检测连通负压发生装置气压发生装置本实用新型水质并排设置定量检测对比效果节省资源水体流量一端连接反应器多单元可拆卸可清洗连接头瓶口处插接取水省力省时吸入消毒

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PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

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中国食物与营养 2015年第2期21卷 17-19页

作者：顾琳黄平宋衍燕高艳邵希凤韩晓瑄韩庆华王军波北京大学医学部公共卫生学院北京100191 北京市朝阳区疾病预防控制中心北京100021

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析... 详细信息

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果:食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论:在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。

关键词：食品金黄色葡萄球菌肠毒素类基因 PCR检测

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