检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧杂志 2025年第1期61卷 30-35页

作者：任素碧张廷焕潘红梅郭宗义王勇胜西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 重庆市畜牧科学院重庆402460

外泌体是一种直径为30~100 nm的膜泡,由不同类型的细胞分泌到生物液中,外泌体存在于精液、附睾液、子宫液以及卵泡液中。与其他体液相比,精液中的外泌体含量十分丰富,存在于精液中的外泌体称为精浆外泌体(seminal plasma exosomes,spEXs... 详细信息

外泌体是一种直径为30~100 nm的膜泡,由不同类型的细胞分泌到生物液中,外泌体存在于精液、附睾液、子宫液以及卵泡液中。与其他体液相比,精液中的外泌体含量十分丰富,存在于精液中的外泌体称为精浆外泌体(seminal plasma exosomes,spEXs)。spEXs中含有大量的脂类、蛋白质、胆固醇、mRNA和一些非编码RNA(small non-coding RNAs,sncRNAs),这些分子在雄性生殖过程中都有潜在的作用,对精子发生、顶体反应和精子获能等过程有重要调控作用。本文主要阐述了spEXs的特征及其内包含的sncRNAs在雄性生殖中发挥的多种生物学功能,为spEXs的进一步研究提供参考。

关键词：精浆外泌体非编码RNA 生物学功能

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猪MITF基因转录调控区域克隆及活性分析

猪MITF基因转录调控区域克隆及活性分析

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作者：张廷焕四川农业大学

学位级别：硕士

本试验用基因克隆、测序、.双荧光素酶报告系统和干扰RNA等方法,研究了猪MITF-M基因的转录调控区域序列及其转录活性与功能,得到了如下结果：1、从藏猪基因组中调取了含有MITF基因的scarffords,将其作为参考序列设计了3对相互重叠的引物... 详细信息

本试验用基因克隆、测序、.双荧光素酶报告系统和干扰RNA等方法,研究了猪MITF-M基因的转录调控区域序列及其转录活性与功能,得到了如下结果：1、从藏猪基因组中调取了含有MITF基因的scarffords,将其作为参考序列设计了3对相互重叠的引物,通过PCR克隆测序,首次获得猪MITF-M转录调控区约7.8kb的序列。2、根据测序得到的MITF-M调控区序列设计引物,利用“巢式”PCR克隆转录调控区域片段,通过酶切、连接、转化,成功构建并验证了猪MITF-M基因转录调控区域的10段5’端缺失报告基因载体:PGL3-1140、PGL3-1397、PGL3-2470、PGL3-3487、 PGL3-3753、PGL3-5201、PGL3-5429、PGL3-6036、PGL3-6274、PGL3-6416。3、将所构建的10个载体转染到B16细胞,48小时后,利用双荧光素报告系统检测10个载体的荧光素酶活性,确定了MITF-M转录调控区存在两个重要核心区域,分别位于-2470-3487 bp的负调控区和-5429～-6036 bp的正调控区。4、利用转录因子预测软件JASPAR和干扰RNA法,发现并验证了-2470～-3487 bp区域的KLF4结合位点及KLF4对MITF-M的转录活性的双重调控作用。该研究结果为进一步研究猪MITF基因的表达机制奠定了基础,对深入研究猪MITF-M转录调控区域的活性和表达调控机理具有重要意义。

关键词： MITF 转录调控区转录因子转录活性 KLF4

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非洲猪瘟病毒对猪肺泡巨噬细胞mRNAs和microRNAs表达模式的影响

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华北农学报 2022年第S1期37卷 348-357页

作者：张廷焕柴捷陈力龙熙郭宗义重庆市畜牧科学院重庆荣昌402460 农业部养猪科学重点实验室重庆荣昌402460

旨在探究非洲猪瘟(ASFV)病毒感染猪肺泡巨噬细胞后在体内的作用方式。以感染ASFV的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的mRNAs和microRNAs测序数据为基础,利用生物信息学软件对数据进行处理,得到了一批差异表达基因;利用基因功能富集和对应蛋白互作... 详细信息

旨在探究非洲猪瘟(ASFV)病毒感染猪肺泡巨噬细胞后在体内的作用方式。以感染ASFV的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的mRNAs和microRNAs测序数据为基础,利用生物信息学软件对数据进行处理,得到了一批差异表达基因;利用基因功能富集和对应蛋白互作解析生物学通路;再利用mRNAs和microRNAs的互作方式确认重要的靶标关系。结果表明:ASFV改变了PAMs中1181个基因的表达量;主要调控宿主在能量代谢过程(如脂质分解、有机羟基化合物代谢、碳水化合物分解代谢、一元羧酸代谢),以及细胞周期过程(如有丝分裂细胞周期过程、细胞周期相变、细胞周期的正向调控);ASFV还引起了PAMs中25个microRNAs的差异表达,包括病毒相关的miR-27b-3p、miR-193a-3p、miR-132等;而miR-27b-3p作为表达丰度最高的差异microRNA,它与一些重要的差异基因(如PLK2、HSP90AA1等)存在着靶标关系,进而调控机体免疫和细胞周期相关通路。综上所述,ASFV感染PAMs后的作用方式包括破坏宿主在能量代谢和细胞周期方面的稳态,以及打破了机体microRNAs调节平衡;其中miR-27b-3p等小RNAs可以作为ASFV研究的靶向分子。

关键词：猪 ASFV 猪肺泡巨噬细胞 mRNAs microRNAs

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断奶应激对仔猪肌肉组织调控机制的影响

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中国畜牧杂志 2022年第12期58卷 265-271页

作者：张廷焕甘麦邻陈力潘红梅张利娟郭宗义重庆市畜牧科学院重庆402460 农业农村部养猪科学重点实验室重庆402460 四川农业大学动物科技学院四川成都610000

为探究断奶应激对仔猪肌肉组织调控机制的影响,本研究利用断奶7 d后高应激(体重减轻或停滞)组和低应激(体重增加)组的仔猪背最长肌组织构建测序文库,比较不同应激程度对仔猪肌肉组织mRNAs和microRNAs表达模式的影响。结果表明:断奶应激... 详细信息

为探究断奶应激对仔猪肌肉组织调控机制的影响,本研究利用断奶7 d后高应激(体重减轻或停滞)组和低应激(体重增加)组的仔猪背最长肌组织构建测序文库,比较不同应激程度对仔猪肌肉组织mRNAs和microRNAs表达模式的影响。结果表明:断奶应激改变了肌肉组织中381个基因的表达量,调控细胞外基质组成、肌肉收缩等相关的生物学过程,其中包括大量与胶原蛋白、肌动/肌球蛋白相关的基因;断奶应激还引起了肌肉组织中17个microRNAs的差异表达,包括miR-148a-3p、miR-199b-3p、miR-30e-5p等;而miR-148a-3p和miR-30e-5p作为表达丰度最高的差异microRNAs,它们与一些重要差异基因(如ACHE、ADAM12等)存在着靶标关系,进而调控肌肉组织的发育和能量代谢过程。综上所述,断奶应激的确改变了仔猪肌肉组织基因表达模式,影响了肌肉发育,其中筛选的一批重要microRNAs小分子可用于改善断奶应激。

关键词：断奶应激仔猪肌肉组织 mRNAs microRNAs

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猪STAB2基因启动子的克隆及转录活性分析

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华北农学报 2019年第S1期34卷 346-351页

作者：龙熙张廷焕郭宗义柴捷重庆市畜牧科学院重庆402460 农业部养猪科学重点实验室重庆402460

旨在克隆和分析猪STAB2基因启动子及其转录活性。利用基因克隆、双荧光素酶报告基因系统以及生物信息学分析等方法,克隆得到了STAB2基因转录起始位点上游1997 bp的候选启动子序列并对其序列特征进行了分析,同时,构建了不同长度的5′端... 详细信息

旨在克隆和分析猪STAB2基因启动子及其转录活性。利用基因克隆、双荧光素酶报告基因系统以及生物信息学分析等方法,克隆得到了STAB2基因转录起始位点上游1997 bp的候选启动子序列并对其序列特征进行了分析,同时,构建了不同长度的5′端缺失的重组载体并利用双荧光素酶报告基因系统分析了其荧光素酶活性,进而确定了STAB2基因的核心启动子区域及关键调控区域,并对关键调控区域内的转录因子及其结合位点进行了分析。结果表明:STAB2基因的候选启动子区域内包含4个核心启动子和1个CpG岛;-309--39 bp为STAB2基因的关键调控区域,-1045--309 bp可能存在一个正向调控元件,而-1506--1045 bp可能存在一个负向调控元件;STAB2基因的关键调控区域内包含72个转录因子结合位点,部分转录因子在这一区域具有多个结合位点,如Arnt∶∶Ahr、ZNF354C、Klf4和KLF5,并且,转录因子结合位点之间也存在重合区。为进一步研究猪STAB2基因的表达调控机制以及其在调控猪抗病和肌肉品质中的功能提供了理论依据。

关键词：猪 STAB2 启动子克隆转录活性

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猪MITF-M的转录调控分析

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畜牧兽医学报 2018年第11期49卷 2349-2358页

作者：张廷焕柴捷陈磊龙熙重庆市畜牧科学院重庆402460 农业部养猪科学重点实验室重庆402460

旨在研究猪MITF-M(microphthalmia associated transcription factor M)转录调控区域活性以及验证重要转录因子。以猪DNA为模板,利用PCR扩增获得MITF-M转录调控区,基因克隆得到5′端缺失重组载体,运用双荧光素酶报告基因试验进行转录活... 详细信息

旨在研究猪MITF-M(microphthalmia associated transcription factor M)转录调控区域活性以及验证重要转录因子。以猪DNA为模板,利用PCR扩增获得MITF-M转录调控区,基因克隆得到5′端缺失重组载体,运用双荧光素酶报告基因试验进行转录活性分析,再通过干扰RNA试验验证重要转录因子。本试验成功克隆得到MITF-M 6 414bp的转录调控区域;构建了9个调控区5′端缺失重组载体;鉴定出MITF-M转录调控区内3个转录活性显著变化区域(P<0.001),分别是位于-1 140～-1 397和-5 429～-6 036bp的正调控区域、-2 470～-3 753bp的负调控区域;发现了转录因子KLF4显著负向调控MITF-M的转录活性(P<0.01)。结果提示,转录因子KLF4抑制MITF-M的转录活性,调控黑色素细胞色素的合成与沉积,从而影响猪毛色的表型。本试验为进一步研究猪MITF-M基因的表达机制奠定了基础,对深入研究猪毛色变化的表达调控机理具有重要意义。

关键词：猪 MITF-M 转录活性 KLF4

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生猪无抗养殖研究进展

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畜禽业 2016年第4期27卷 28-29页

作者：张廷焕郭宗义重庆市畜牧科学院重庆市养猪工程中心农业部养猪科学重点实验室重庆荣昌402460

多年来,在规模化养猪生产过程中,使用抗生素类饲料添加剂是预防猪病和促进猪只生长的主要手段。但是,因抗生素的大量和长期使用而带来的药物残留问题、病原菌的耐药性问题以及猪肉安全问题等,越来越困扰着百姓的生活。2000年丹麦率先实... 详细信息

多年来,在规模化养猪生产过程中,使用抗生素类饲料添加剂是预防猪病和促进猪只生长的主要手段。但是,因抗生素的大量和长期使用而带来的药物残留问题、病原菌的耐药性问题以及猪肉安全问题等,越来越困扰着百姓的生活。2000年丹麦率先实施＂无抗养猪＂,顾名思义,即为不含抗生素的生猪养殖。养殖过程中以不含抗生素的饲料为原料,生猪屠宰时也检测不到抗生素,

关键词：生猪养殖抗生素类饲料添加剂规模化养猪生产过程残留问题安全问题养殖过程生猪屠宰

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miR-378促进脂质生成相关靶基因鉴定

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生物技术通报 2021年第2期37卷 80-87页

作者：张廷焕龙熙郭宗义柴捷重庆市畜牧科学院重庆402460 农业部养猪科学重点实验室重庆402460

旨为验证miR-378在脂肪细胞中的功能,及其脂质相关靶基因的筛选和鉴定。利用miR-378类似物转染3T3-L1细胞,验证miR-378在脂肪细胞中的功能;根据靶标位点的保守性以及促脂功能确定miR-378潜在靶基因;采用microRNA pulldown技术验证miR-37... 详细信息

旨为验证miR-378在脂肪细胞中的功能,及其脂质相关靶基因的筛选和鉴定。利用miR-378类似物转染3T3-L1细胞,验证miR-378在脂肪细胞中的功能;根据靶标位点的保守性以及促脂功能确定miR-378潜在靶基因;采用microRNA pulldown技术验证miR-378与靶基因的靶标关系;运用双荧光素报告基因实验确定miR-378与靶基因的结合位点。结果发现,miR-378可以通过增加脂质合成和减少脂质分解两条途经来促进脂肪细胞中脂质生成,确定了miR-378与Runx1t1、Galnt3、和RAB10的靶标关系以及结合的靶位点。

关键词： miR-378 脂质生成 microRNA pulldown 靶基因靶位点

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注射氯前列醇钠对荣昌母猪白天分娩的影响

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中国畜牧杂志 2021年第S1期57卷 231-235页

作者：柴捷王金勇张廷焕龙熙郭宗义陈力张亮潘红梅重庆市畜牧科学院重庆402460 农业农村部养猪科学重点实验室重庆402460

本实验旨在研究不同注射时间、不同剂量氯前列醇钠注射液对荣昌母猪白天产仔的影响,寻找荣昌母猪白天产仔的最佳注射时间及注射剂量,增加荣昌母猪白天产仔比例,提高生产成绩。使用573窝荣昌母猪(3~8胎)分两组(颈部肌肉注射1 mL和2 mL)进... 详细信息

本实验旨在研究不同注射时间、不同剂量氯前列醇钠注射液对荣昌母猪白天产仔的影响,寻找荣昌母猪白天产仔的最佳注射时间及注射剂量,增加荣昌母猪白天产仔比例,提高生产成绩。使用573窝荣昌母猪(3~8胎)分两组(颈部肌肉注射1 mL和2 mL)进行,每组分别在09:30、12:00、14:30注射氯前列醇钠注射液,其中1 mL组每个注射时间点95窝,2 mL组每个注射时间点96窝,分析其产仔时间及产仔性能等相关数据,同时与正常分娩3~8胎荣昌母猪(1122窝)产仔性能进行比较。结果显示:正常分娩荣昌母猪、注射1 mL组以及注射2 mL组的产子时长、初生窝重、个体初生重、产活仔数、健仔数、断奶仔猪数等指标无显著差异,在妊娠期113 d的14:30注射2 mL氯前列醇钠注射液能够将89.58%荣昌母猪控制在白天产仔,注射1 mL氯前列醇钠最多能将白天产子率控制在63.16%。本试验结果说明,对3~8胎妊娠荣昌母猪来说,在妊娠期113 d注射氯前列醇钠注射液不会影响其产仔性能,同时在妊娠期113 d的14:30注射2 mL氯前列醇钠注射液可以有效提高荣昌母猪白天分娩率。

关键词：荣昌母猪氯前列醇钠白天分娩产仔性能

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荣昌猪、长白猪先天免疫候选基因筛选

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华北农学报 2021年第S1期36卷 373-380页

作者：龙熙赵久刚柴捷潘红梅张亮张廷焕重庆市畜牧科学院重庆402460

旨在探究影响荣昌猪和长白猪机体先天免疫功能的候选基因。以新生荣昌猪、长白猪胸腺为研究对象,利用RNA-seq分析荣昌猪、长白猪胸腺组织中的差异表达基因,同时对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析,并通过qRT-PCR验证RNA-seq结果的准确... 详细信息

旨在探究影响荣昌猪和长白猪机体先天免疫功能的候选基因。以新生荣昌猪、长白猪胸腺为研究对象,利用RNA-seq分析荣昌猪、长白猪胸腺组织中的差异表达基因,同时对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析,并通过qRT-PCR验证RNA-seq结果的准确性。结果表明:在新生荣昌猪和长白猪胸腺中,差异倍数在2倍以上的基因共421个,其中,荣昌猪相对长白猪上调的有231个,下调的有190个。GO富集分析发现,这些差异表达基因主要富集在清道夫受体活性、G蛋白偶联受体结合、T细胞活化、细胞分泌调节、胞吐作用调节、SNARE复合物组装调节等生物学过程。KEGG通路分析发现,这些差异表达基因主要参与细胞因子-细胞因子受体互作、cAMP信号、代谢(磷脂酶D、半胱氨酸和蛋氨酸)及一些疾病(非洲锥形病、癌症)相关信号通路。6个差异表达基因的RT-qPCR结果表明,此次RNA-seq的结果准确可靠。综合差异表达基因、GO和KEGG信号通路结果发现,TMSB15A和STAB2、SAA1和HP分别是荣昌猪和长白猪胸腺先天免疫的候选基因。

关键词：猪先天免疫 RNA-seq 候选基因抗病

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