检索结果-内蒙古大学图书馆

中国水稻科学 2019年第3期33卷 235-240页

作者：何婧刘寒郭留明李静张恒木浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/省部共建植物有害生物国家重点实验室培育基地杭州310021

【目的】在前期克隆了一个水稻小热休克蛋白(OsHSP20)的基础上,进一步分析该蛋白多克隆抗体的免疫反应特性和应用范围,为深入鉴定该类基因的功能奠定基础。【方法】利用合成多肽和其原核表达产物分别免疫家兔制备了相应的多克隆抗体;ACP... 详细信息

【目的】在前期克隆了一个水稻小热休克蛋白(OsHSP20)的基础上,进一步分析该蛋白多克隆抗体的免疫反应特性和应用范围,为深入鉴定该类基因的功能奠定基础。【方法】利用合成多肽和其原核表达产物分别免疫家兔制备了相应的多克隆抗体;ACP(Antigen-coated plate)-ELISA和dot-ELISA用于分析比较多克隆抗体效价和灵敏度;Western blot用于鉴定多克隆抗体的特异性和应用范围。【结果】Western blot分析显示,利用重组OsHSP20蛋白及其合成多肽所制备的多克隆抗体均可以在原核表达OsSHSP样品中特异性检测到1条大小与预期一致(37kD)的条带,表明两种方法获得的多克隆抗体都具有高度的特异性;ACP(Antigen-coated plate)-ELISA和dot-ELISA分析表明,利用重组蛋白制备的多克隆抗体效价和灵敏度均高于利用多肽制备的抗体。进一步的Westernblot分析显示该抗体可用于多种植物小热休克蛋白(SHSP)的检测。【结论】制备了OsHSP20蛋白质抗体,且具有高度的特异性和较高的效价和灵敏度,可广泛地用于多种单、双子叶植物HSP20蛋白的表达分析,有助于OsHSP20及其他植物同源蛋白的功能鉴定。

关键词：小热休克蛋白多克隆抗体蛋白质印迹法

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水稻黑条矮缩病毒基因组全序列测定及其结构分析

水稻黑条矮缩病毒基因组全序列测定及其结构分析

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中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会

作者：张恒木陈剑平浙江省农业科学院病毒室浙江省农业科学院病毒室

以浙江省的水稻黑条矮缩病、河北省的小麦绿矮病和湖北省的玉米粗缩病的病毒分离物为材料进行了系列比较研究。3个分离物粒子大小形态相似,且在血清学上密切相关;三者的介体、寄主相同,并引起相同的症状。应用RT-PCR扩增、克隆并测定浙... 详细信息

以浙江省的水稻黑条矮缩病、河北省的小麦绿矮病和湖北省的玉米粗缩病的病毒分离物为材料进行了系列比较研究。3个分离物粒子大小形态相似,且在血清学上密切相关;三者的介体、寄主相同,并引起相同的症状。应用RT-PCR扩增、克隆并测定浙江分离物S7-S10片段,河北分离物S7-S10片段和湖北分离物S9-510片段全序列,并与同类病毒比较,结果表明我国3个病毒分离物之间的同源性最高（核苷酸同源性94.0%9.0%,氨基酸同源性96.3%00%）,与日本水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）的同源性次之(核苷酸同源性90.0%4.9%,

关键词：水稻黑条矮缩病毒玉米粗缩病 RBSDV 基因组全序列分离物

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烟草抗烟草花叶病毒基因N的研究

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浙江农业学报 2001年第2期13卷 55-60页

作者：张恒木陈剑平程晔浙江大学农业与生物技术学院浙江杭州310029 浙江省农业科学院病毒研究室浙江杭州310021

烟草的N基因是一个较为理想的抗烟草花叶病毒 )tobaccomosaicvirus,TMV)基因 ,它和TMV之间的互作是植物和病毒互作领域里一个经典的系统。烟草N基因已经分离 ,TMV基因组结构和功能已经研究得很清楚 ,这为进一步研究两者的互作奠定了基... 详细信息

烟草的N基因是一个较为理想的抗烟草花叶病毒 )tobaccomosaicvirus,TMV)基因 ,它和TMV之间的互作是植物和病毒互作领域里一个经典的系统。烟草N基因已经分离 ,TMV基因组结构和功能已经研究得很清楚 ,这为进一步研究两者的互作奠定了基础。本文介绍了这一领域取得的最新进展和存在的问题。

关键词： N基因烟草烟草花叶病毒抗性基因结构基因表达互作抗病反应信号传导

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一个植物半胱氨酸蛋白酶多克隆抗体的制备及其应用

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浙江农业学报 2018年第6期30卷 881-885页

作者：彭琪琪羊健廖乾生张恒木浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省农业科学院病毒与生物技术研究所浙江杭州310021

半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,Cys P)是一类重要的蛋白酶家族,广泛参与植物多种生理过程。为了分析植物Cys P的特性,本实验首先通过RT-PCR技术从本氏烟中扩增获得了一个编码Cys P的基因(NbCys P)序列并连接至p EASYTM-T5 Zero载... 详细信息

半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,Cys P)是一类重要的蛋白酶家族,广泛参与植物多种生理过程。为了分析植物Cys P的特性,本实验首先通过RT-PCR技术从本氏烟中扩增获得了一个编码Cys P的基因(NbCys P)序列并连接至p EASYTM-T5 Zero载体,测序验证后亚克隆至原核表达载体p GEX-6P1,命名为p GEXNb Cys P;将其导入大肠埃希菌BL21plys S中诱导表达;重组表达的Nb Cys P融合蛋白经过亲和层析纯化,免疫兔子制备多克隆抗体,Western印迹分析显示,该抗体能和重组Nb Cys P蛋白发生强烈的免疫学反应且条带单一,表明所获得的Cys P抗体具有良好的特异性。上述结果为进一步鉴定植物Cys P的功能特性奠定了基础。

关键词：半胱氨酸蛋白酶原核表达多克隆抗体

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水稻条纹病毒分子生物学研究进展

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植物保护学报 2007年第4期34卷 436-440页

作者：张恒木孙焕然王华弟陈剑平浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021 浙江省植物保护检疫局杭州310020

水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)是最重要的水稻病毒之一,给水稻生产造成了严重损失。它隶属于纤细病毒属,是该属的典型成员。其基因组由4条单链负义RNA基因组片段组成,根据序列分析和试验证据推测共可编码7个病毒蛋白。围绕近年... 详细信息

水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)是最重要的水稻病毒之一,给水稻生产造成了严重损失。它隶属于纤细病毒属,是该属的典型成员。其基因组由4条单链负义RNA基因组片段组成,根据序列分析和试验证据推测共可编码7个病毒蛋白。围绕近年来国内外有关RSV粒子特点、基因组和病毒蛋白的研究进展作一简要综述,并提出了RSV研究过程中涉及到的一些问题。

关键词：水稻条纹病毒病毒基因组病毒蛋白

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水稻黑条矮缩病毒p8蛋白的原核表达、抗血清制备及其特性

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植物保护学报 2007年第3期34卷 252-256页

作者：羊健张恒木陈剑平戴良英湖南农业大学生物科技安全学院长沙410128 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物病毒重点开放实验室杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)p8蛋白由其基因组片段S8编码,根据RBSDV浙江分离物S8序列(AJ297431)设计特异性引物扩增编码p8蛋白N端部分的片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a+,然后以大肠杆菌BL21plysS为宿主菌进行高水平地表达,利用纯化的p... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)p8蛋白由其基因组片段S8编码,根据RBSDV浙江分离物S8序列(AJ297431)设计特异性引物扩增编码p8蛋白N端部分的片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a+,然后以大肠杆菌BL21plysS为宿主菌进行高水平地表达,利用纯化的p8蛋白免疫小鼠,制备了p8蛋白的特异性抗血清。Western blot分析表明,p8蛋白在水稻病株中含量较为丰富,易于检测,而且p8蛋白参与病毒粒子的组成,表明p8是一个病毒结构蛋白。ELISA检测显示p8蛋白的抗血清可与不同来源的水稻、小麦、玉米病汁液发生强烈的血清学反应,表明该抗血清适用于RBSDV田间病株的快速诊断。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 p8蛋白原核表达抗血清

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小麦TaeEF1β基因的克隆、同源性及表达分析

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浙江农业学报 2019年第1期31卷 98-103页

作者：陈炫张天烨羊健张恒木陈剑平浙江农林大学林业与生物技术学院浙江杭州311300 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021

真核翻译延伸因子(eukaryotic translation elongation factor,e EFs)是一种重要的多功能调控蛋白,eEF1β是eEF1的组成部分,在蛋白质生物合成过程中发挥着重要的作用。本文通过RT-PCR扩增克隆小麦(Triticum aestivum L.)的e EF1β基因,... 详细信息

真核翻译延伸因子(eukaryotic translation elongation factor,e EFs)是一种重要的多功能调控蛋白,eEF1β是eEF1的组成部分,在蛋白质生物合成过程中发挥着重要的作用。本文通过RT-PCR扩增克隆小麦(Triticum aestivum L.)的e EF1β基因,并命名为TaeEF1β。氨基酸同源性分析发现,TaeEF1β具有高度保守性,且其保守结构域位于137～226 aa处。q RT-PCR结果表明,中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)侵染小麦植株后,可以诱导TaeEF1β基因转录水平的上调表达。另外,本文也进一步分析了TaeEF1β基因在小麦根、茎、叶的表达水平和CWMV侵染不同时间点的表达情况。

关键词：真核翻译延伸因子中国小麦花叶病毒同源性分析

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水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测

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中国水稻科学 2012年第1期26卷 9-15页

作者：吕明芳羊健张恒木陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL2... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。

关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白原核表达

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与水稻黑条矮缩病毒p5b互作的水稻基因片段筛选

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中国水稻科学 2012年第5期26卷 537-541页

作者：陆颖羊健张恒木陈剑平南京农业大学植物保护学院江苏南京210095 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植保生物技术重点开放实验室浙江杭州310021

由水稻黑条矮缩病毒基因组S5片段第2个开放阅读框(ORF)编码的p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白。构建了酵母双杂交体系的含水稻cDNA表达文库的pGADT7载体,同时将p5b基因构建到诱饵质粒pGBKT7上(pGBK-p5b),Western Blot和自激活实验结... 详细信息

由水稻黑条矮缩病毒基因组S5片段第2个开放阅读框(ORF)编码的p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白。构建了酵母双杂交体系的含水稻cDNA表达文库的pGADT7载体,同时将p5b基因构建到诱饵质粒pGBKT7上(pGBK-p5b),Western Blot和自激活实验结果显示p5b可在酵母中正确表达且无自激活活性。进一步利用p5b蛋白作为诱饵用酵母双杂交筛选水稻cDNA表达文库,鉴定出一些参与光合作用、呼吸作用等重要代谢过程的关键酶基因片段,这些酶可能与p5b蛋白之间存在相互作用,推测这些互作在病株症状发展过程中起作用。

关键词：水稻黑条矮缩病毒互作蛋白酵母双杂交

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一种引起禾谷类作物矮缩病病原的鉴定

一种引起禾谷类作物矮缩病病原的鉴定

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中国植物病理学会2004年学术年会

作者：张恒木沈嘉乐陈剑平浙江农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江农业科学院病毒学与生物技术研究所

＜正＞20世纪90年代来,我国华东、华中、华北、西北等地在水稻、玉米、小麦、高粱等禾谷类作物上大面积流行着一种矮缩病,并引起了水稻、玉米等作物产量发生严重损失。我们从浙江、河北、湖北分别采集了具有典型矮缩症状的水稻、小麦、... 详细信息

＜正＞20世纪90年代来,我国华东、华中、华北、西北等地在水稻、玉米、小麦、高粱等禾谷类作物上大面积流行着一种矮缩病,并引起了水稻、玉米等作物产量发生严重损失。我们从浙江、河北、湖北分别采集了具有典型矮缩症状的水稻、小麦、玉米病株并以这些病毒分离物为材料,对其病原进行了较为系统的比较研究。我们发现这3个病毒分离物粒子大小形态相似,均为直径约60nm的球形病毒;在血清学上这3个病毒分离物密切相关;三

关键词：矮缩病病原鉴定血清学基因编码

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