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肝螺杆菌感染引起VDR^(-/-)小鼠炎性肠病相关肠纤维化模型的建立及机制探讨

实验动物与比较医学 2025年第1期45卷 37-46页

作者：吴志浩曹舒扬周正宇苏州大学苏州医学院实验动物中心苏州215000 扬州大学兽医学院(比较医学研究院) 扬州225000

目的利用肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,***)致维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)缺陷小鼠肠纤维化,构建炎性肠病模型,初步探究其病理特征及发病机制。方法用2×10^(8)CFU的***菌液灌胃野生型和VDR^(-/-)雄性小鼠各5只(分别... 详细信息

目的利用肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,***)致维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)缺陷小鼠肠纤维化,构建炎性肠病模型,初步探究其病理特征及发病机制。方法用2×10^(8)CFU的***菌液灌胃野生型和VDR^(-/-)雄性小鼠各5只(分别命名为WT和VDR^(-/-)小鼠感染组),隔天1次,连续3次;同时设立未感染对照组,即野生型和VDR^(-/-)雄性小鼠各5只,灌胃等体积PBS。最后一次灌胃后第7天检测小鼠感染情况,确认感染后每周称量1次小鼠体重。于确认感染后第16周时剖检小鼠,采集并测量结肠组织长度,取粪便检测含水量;将结肠组织分成4份,一份做石蜡切片用于HE、阿尔辛蓝-过碘酸希夫(alcian blue-periodic acid Schiff,AB-PAS)、Masson和免疫组织化学染色,一份提取DNA后使用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR)检测***定植水平以判断感染效果,一份提取RNA后采用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法检测细胞因子表达情况,另一份提取蛋白后采用蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和白细胞介素(interleukin,IL)-33表达水平。结果所有感染组小鼠经灌胃3次后均成功感染***。与VDR^(-/-)小鼠未感染对照组相比,VDR^(-/-)小鼠感染*** 16周后体重明显减轻(P<0.05),并出现肠道出血情况,粪便含水量显著多于未感染对照组和WT小鼠感染组(P<0.05)。与WT小鼠感染组相比,VDR^(-/-)小鼠感染组的结肠组织经HE染色显示炎性细胞浸润,AB-PAS染色显示肠腺萎缩不规则、腺泡减少,Masson染色显示胶原面积增多。RT-PCR显示VDR^(-/-)小鼠感染组的结肠组织中IL-6、IL-33、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和α-SMA等炎症及纤维化相关基因的转录水平比WT小鼠感染组明显升高(P<0.0001);免疫组织化学法和蛋白质印迹结果显示IL-33和α-SMA蛋白表达水平也明显增多(P<0.001)。结论VDR^(-/-)小鼠感染***后表现为更严重的炎症反应,出现黏膜炎性浸润、黏膜组织功能受损、胶原沉积等病变,提示炎性肠病模型构建成功。进一步研究发现VDR缺陷可能通过影响IL-33表达加剧了炎性肠病相关的肠纤维化进程。

关键词：肝螺杆菌肠纤维化炎性肠病模型维生素D受体小鼠

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肝螺杆菌感染致BALB/c小鼠肝纤维化及其致病机制的初步探究

肝螺杆菌感染致BALB/c小鼠肝纤维化及其致病机制的初步探究

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作者：曹舒扬扬州大学

学位级别：硕士

肝纤维化是慢性肝损伤发展为肝硬化的病理过程,我国肝纤维化发病率高,严重危害国民健康。目前用于研究肝纤维化的动物模型主要通过化学药物来制备,而病原微生物感染模型方法甚少。据报道,肝螺杆菌感染可诱导小鼠慢性活动性肝炎、肝癌、... 详细信息

肝纤维化是慢性肝损伤发展为肝硬化的病理过程,我国肝纤维化发病率高,严重危害国民健康。目前用于研究肝纤维化的动物模型主要通过化学药物来制备,而病原微生物感染模型方法甚少。据报道,肝螺杆菌感染可诱导小鼠慢性活动性肝炎、肝癌、肝胆肿瘤,而对其中间过程肝纤维化报导较少。本课题通过BALB/c小鼠感染肝螺杆菌来建立肝纤维化动物模型,并着眼于其病理特征和致病机制的初步探究。鉴于肝螺杆菌引起肝纤维化的机制尚不清楚,本研究在建立肝纤维化动物模型的基础上,通过腺病毒载体介导的肝细胞IL-33表达沉默,探究IL-33在肝螺杆菌致小鼠肝纤维化中作用机制,从免疫学、组织病理学、分子生物学等多角度研究肝螺杆菌感染引起的肝脏损伤。1.肝螺杆菌感染BALB/c小鼠建立肝纤维化模型据文献报导,肝螺杆菌感染与慢性肝炎和肝癌有关。但其引起慢性肝炎向肝癌进展的分子机制仍不清楚,因此建立肝螺杆菌致BALB/c小鼠肝病模型,有利于了解肝疾病的发展进程。本研究中,分别于雄性BALB/c小鼠感染肝螺杆菌的8、12、16、20、24周,检测肝组织病理学、肝螺杆菌定植、信号通路蛋白和关键炎症因子的表达。结果表明感染肝螺杆菌7天便从小鼠粪便中检测出其DNA,而在感染8周以后肝脏中检测结果才呈阳性。HE染色和天狼星红染色显示肝螺杆菌引起的肝炎和肝纤维化随着感染时间延长而加重,感染24周时感染组小鼠肝病变发生坏死和硬化。肝螺杆菌感染可促使丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平升高。RT-PCR结果表明感染组小鼠肝白介素6、白介素1β、转化生长因子β和肿瘤坏死因子α的mRNA转录水平明显高于对照组小鼠。此外,STAT3、核因子κB(P65)、MAPK(Erk1/2和p38)和α-SMA蛋白可被肝螺杆菌激活。这些数据表明,肝螺杆菌感染雄性BALB/c小鼠可作为一个新的肝纤维化模型。2.干扰小鼠IL-33表达重组腺病毒载体的构建为探究IL33在肝螺杆菌感染致BALB/c小鼠肝纤维化中的作用,从NCBI基因库获得小鼠IL-33(mIL-33)基因序列并设计shRNA,腺病毒载体pDC316-ZsGreen1-shRNA经PstI和BamHI双酶切后与干扰RNA片段shIL-33连接构建腺病毒载体。将其与腺病毒骨架质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293 A细胞,10天后收集细胞液上清获得第一代病毒,再经纯化浓缩至病毒滴度为1×1010 PFU/mL。将其尾静脉注射BALB/c小鼠,于接种24周后剖检取肝脏,一份用于提取蛋白进行免疫印迹检测,一份用于制作切片进行免疫组化,验证腺病毒干扰效率。结果表明,重组腺病毒载体pDC316-ZsGreen1-shIL-33经酶切验证以及测序结果均正确,包装腺病毒可表达GFP荧光蛋白,计算病毒滴度并通过浓缩以达到实验用量。蛋白免疫印迹和免疫组化的结果显示,腺病毒注射组小鼠IL-33表达水平明显低于对照组,且肝细胞中IL-33表达量减少。结果显示成功构的建腺病毒载体包装成腺病毒能干扰小鼠肝细胞IL-33表达,为后续研究IL-33在肝纤维化中作用机制打下基础。3.肝螺杆菌感染通过IL-33/ST2信号通路促进BALB/c小鼠的肝纤维化IL-33是一种参与炎症和纤维化疾病的细胞因子,但其与肝螺杆菌感染导致小鼠肝纤维化的致病机制尚不清楚。通过肝螺杆菌感染小鼠8周后,再给予IL-33重组腺病毒干扰其表达。所有小鼠均于感染24周时处死,收集所有小鼠的血清和肝组织。检测肝组织病理学、肝螺杆菌定植水平、信号通路激活和关键炎症因子在肝脏中的表达。免疫组化检测IL-33和生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的组织定位和表达水平。结果显示肝螺杆菌感染组小鼠肝脏中IL-33的表达水平明显升高。免疫组织化学分析显示,由于感染肝螺杆菌,IL-33由细胞核转移到细胞质且表达量增多。荧光定量PCR及组织病理学评价显示,IL-33表达的下调可减轻肝螺杆菌引起的肝纤维化以及炎性因子的表达。此外,肝螺杆菌激活细胞表面受体ST2,ST2的活化又激活核因子κB(P65)、α-SMA、Erk1/2。其结果为肝螺杆菌引起的肝纤维化和肝炎发病机制提供新的见解。

关键词：肝螺杆菌肝炎肝纤维化重组腺病毒白介素33

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基于听觉理想二值掩模的言语可懂度机理研究

基于听觉理想二值掩模的言语可懂度机理研究

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作者：曹舒扬北京大学

学位级别：硕士

在嘈杂的室内环境中,听者对特定目标语音的加工会受到周围背景噪声和其他说话人语音的干扰。听觉系统如何从接收到的混合声波中有效地识别和理解目标语音至今尚未得到充分的解释,被称为“鸡尾酒会问题”。为此,很多学者开展了听觉场景分... 详细信息

在嘈杂的室内环境中,听者对特定目标语音的加工会受到周围背景噪声和其他说话人语音的干扰。听觉系统如何从接收到的混合声波中有效地识别和理解目标语音至今尚未得到充分的解释,被称为“鸡尾酒会问题”。为此,很多学者开展了听觉场景分析(Auditory Scene Analysis,ASA)及计算听觉场景分析(Computational Auditory Scene Analysis,CASA)的研究工作,并于近年来提出了理想二值掩模(Ideal Binary Mask,IdBM)方法。IdBM作为计算听觉场景分析努力的目标和方向,是研究计算听觉场景分析的一个重要手段,同时对研究言语可懂度也有着重要的作用。本文基于IdBM方法对言语可懂度机理开展了研究工作,具体内容包括以下四个方面:　　 1.研究了不同掩蔽条件下,IdBM方法对汉语语音可懂度的影响。实验结果发现,在汉语二说话人掩蔽条件下,利用IdBM方法处理后的语音可懂度的提高幅度最显著,英语二说话人掩蔽条件提高的幅度次之,语谱噪声掩模条件提高的幅度最小。　　 2.研究了在IdBM处理后语音中加入微小背景噪声方法对可懂度的影响。研究结果表明,加入背景噪声可以提高IdBM方法处理后语音的可懂度。在语谱噪声掩蔽条件下,可懂度提高的幅度为1.5 dB;在汉语单说话人掩蔽条件下,可懂度提高的幅度为3.3 dB;在汉语二说话人掩蔽条件下,可懂度提高的幅度为1.9dB。该方法有效地提高了IdBM方法作为计算听觉场景分析的理想方法所能达到的可懂度上限。　　 3.基于听觉系统的时间分辨率特点,研究了IdBM方法中时间分辨率对言语可懂度的影响。结果表明,基于多尺度的时间分析方法得到的言语可懂度要显著高于固定时间分析尺度的方法,进一步提高了IdBM方法所能达到的可懂度上限。　　 4.研究了IdBM方法中的LC(local SNR criterion)值确定问题。研究结果表明,在不同的掩蔽声类型和不同信噪比条件下,LC的最优取值有所不同。　　本研究对言语可懂度机理进行了更加深入的探索。同时,所取得的研究成果在自动语音识别、助听器设计及人工耳蜗植入等技术领域中也具有一定的借鉴意义。

关键词：理想二值掩模可懂度背景噪声时间分辨率听觉理想

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广播电视机房运行监控与管理系统设计与实现

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中国传媒科技 2017年第7期 79-81页

作者：曹舒扬国家新闻出版广电总局监管中心

为更好地对机房设备进行监控和管理,对数据中心机房及机房内所有设备、线缆进行三维可视化建模,采集机房网络、电力、环境、设备数据等信息,利用三维虚实联动、智能管控等技术设计及实现了机房运行监控与管理系统。

关键词：机房管理机房监控三维可视化虚实联动

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基于大数据的广播电视节目互联网舆情分析系统设计

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广播电视信息 2017年第12期24卷 67-70页

作者：曹舒扬吴波国家新闻出版广电总局监管中心

随着互联网数据的飞速增长,针对如何对互联网中广播电视节目影响的数据进行有效地采集和分析,本文提出了一种基于大数据的广播电视节目舆情分析系统。该系统利用大数据处理海量数据的能力,通过对数据的分析和预测,可以及时准确地反应互... 详细信息

随着互联网数据的飞速增长,针对如何对互联网中广播电视节目影响的数据进行有效地采集和分析,本文提出了一种基于大数据的广播电视节目舆情分析系统。该系统利用大数据处理海量数据的能力,通过对数据的分析和预测,可以及时准确地反应互联网上广播电视节目的舆情信息,为广播电视节目的监测监管提供数据和参考。

关键词：大数据舆情信息广播电视节目统计分析

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监测台综合指挥系统的设计与实现

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广播与电视技术 2016年第12期43卷 138-142页

作者：曹舒扬国家新闻出版广电总局监管中心北京100866

为更好地对各直属台进行实时、高效的指挥调度及协同工作,我们利用监管中心现有IP电话、视频会议等实时音视频通讯系统,结合GIS地图、通讯调度、三维可视化、智能集控等技术,设计及实现了监管中心直属台综合指挥系统。该系统可采集各直... 详细信息

为更好地对各直属台进行实时、高效的指挥调度及协同工作,我们利用监管中心现有IP电话、视频会议等实时音视频通讯系统,结合GIS地图、通讯调度、三维可视化、智能集控等技术,设计及实现了监管中心直属台综合指挥系统。该系统可采集各直属台网络、电力信息和遥控站点运行状态信息,进行集成网络管理、安全运行管理等。

关键词：指挥调度 GIS 三维可视化跨平台预警虚实联动

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肝螺杆菌感染引起VDR-/-小鼠炎性肠病相关肠纤维化的实验研究

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实验动物与比较医学 2024年

作者：吴志浩曹舒扬周正宇苏州大学苏州医学院实验动物中心扬州大学兽医学院

目的肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus,H. hepaticus）常用于炎性肠病（IBD）模型构建，利用H. hepaticus致VDR-/-小鼠肠纤维化，探究其病理特征及发病机制。方法以H. hepaticus 2×10～8 CFU菌液灌胃野生型（WT）和VDR-/-雄性小... 详细信息

目的肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus,H. hepaticus）常用于炎性肠病（IBD）模型构建，利用H. hepaticus致VDR-/-小鼠肠纤维化，探究其病理特征及发病机制。方法以H. hepaticus 2×10～8 CFU菌液灌胃野生型（WT）和VDR-/-雄性小鼠各5只，隔天一次，连续3次，同时设立相应对照组小鼠5只灌胃等体积PBS。定时检测小鼠感染情况，感染期间每周称量小鼠体重。于感染16周剖检小鼠，测量结肠组织长度，取粪便检测含水量;并将近端结肠组织分成四份，一份做石蜡切片，HE、AB-PAS、Masson、免疫组化染色，一份用于检测H. hepaticus定植水平，一份用于检测细胞因子表达情况，另一份提取蛋白测α-SMA和IL-33表达水平。结果所有感染组小鼠经灌胃3次后均成功感染H. hepaticus;VDR-/-小鼠感染H. hepaticus 16周后引起体重减轻，肠道出血、粪便含水量显著高于对照组和WT+H.h组；病理切片结果显示炎性细胞浸润，肠腺萎缩不规则，腺泡减少，胶原面积增多；RT-PCR结果显示，IL-6、IL-33、TNF-α、TGF-β、α-SMA等炎症及纤维化相关因子转录水平上升；Western blotting结果表明IL-33和α-SMA蛋白表达水平增多；免疫组化染色显示IL-33增多。结论成功构建H. hepaticus感染VDR-/-小鼠引起肠纤维化模型，可为IBD研究提供参考。

关键词：肝螺杆菌肠纤维化炎性肠病模型维生素D受体小鼠

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肝螺杆菌感染BALB/c小鼠肠道菌群结构分析

肝螺杆菌感染BALB/c小鼠肠道菌群结构分析

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第十六届中国实验动物科学年会

作者：冯洁张泉曹舒扬谢建云高崧高诚上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站扬州大学兽医学院

目的探讨肝螺杆菌感染小鼠后肠道菌群的结构差异。方法采用Illumina高通量测序技术测定肝螺杆菌感染小鼠肠道细菌16S rDNA基因V4-V5可变区序列,进行操作分类单元(OTUs)聚类、多样性、群落结构组成及差异性分析和代谢功能预测。结果实验... 详细信息

目的探讨肝螺杆菌感染小鼠后肠道菌群的结构差异。方法采用Illumina高通量测序技术测定肝螺杆菌感染小鼠肠道细菌16S rDNA基因V4-V5可变区序列,进行操作分类单元(OTUs)聚类、多样性、群落结构组成及差异性分析和代谢功能预测。结果实验组肠道菌群多样性显著低于对照组。实验组和对照组OTU数目分别为89和209,两组共有73个OTU。在门水平,两组菌群序列均分属于7个菌门,两组样本中拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)均为丰度最高的两个门。在属水平,两组样本共检测到74个属,实验组样本隶属45个属,对照组样本隶属64个属,两组共有35个属,实验组独有10个属,对照组独有29个属,实验组拟杆菌属、Muribaculaceae、毛螺菌属、布劳特菌属(Blautia)、Rumini clostridium等含量相对较高。有31个属存在显著性差异,实验组拟杆菌属、梭菌属、黄杆菌属、瘤胃球菌属、克雷伯菌属、肠球菌属和螺杆菌属等的丰度显著高于对照组,而毛螺菌科NK4A136group、颤螺旋菌属、普雷沃菌属、肠杆菌属、理研菌科RC9gutgroup丰度则显著低于对照组。结论肝螺杆菌感染可引起小鼠肠道菌群的群落丰富度和多样性明显降低,为揭示肝螺杆菌与宿主肠道菌群的调控机制提供依据。

关键词：肝螺杆菌肠道菌群高通量测序小鼠

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肝螺杆菌CdtB缺失株的构建与验证

肝螺杆菌CdtB缺失株的构建与验证

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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：朱宸曹舒扬吴志浩朱立麒张泉扬州大学兽医学院比较医学中心扬州225009 江苏省重大动物传染病和人畜共患病预防控制联合创新中心扬州225009

目的构建用于肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,***)同源重组交换基因敲除的片段,实现*** 内CdtB 基因的敲除,为研究CdtB 在*** 感染宿主的过程中的作用奠定基础.方法以质粒pCDNA 为骨架,在多克隆位点插入CdtB 基因上下游同源臂,中间...

目的构建用于肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,***)同源重组交换基因敲除的片段,实现*** 内CdtB 基因的敲除,为研究CdtB 在*** 感染宿主的过程中的作用奠定基础.方法以质粒pCDNA 为骨架,在多克隆位点插入CdtB 基因上下游同源臂,中间插入结肠弯曲菌氯霉素抗性基因,由此构建用于*** 同源重组基因敲除的质粒载体pCDNA-ΔCdtB .通过电击转化方法将重组质粒转入***,用氯霉素筛选转化子.将转化子与野生型进行生化试验、测序方面的比较,并计算生长曲线.结果以质粒pCDNA 构建同源重组敲除质粒pCDNA-ΔCdtB,用于转化的片段长度2.3kb,经电击转化***中,获得氯霉素阳性转化子,PCR 及测序验证基因敲除成功.转化子与野生型菌株在生长方面无太大差异.结论构建的基因敲除质粒pCDNA-ΔCdtB 实现了对*** 中目标基因的敲除,为*** 基因功能研究和致病因子的发掘提供了有效的基因操作工具.

关键词：

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防褥疮且便于转运的医用垫

防褥疮且便于转运的医用垫

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作者：曹舒扬 311200 浙江省杭州市萧山区新街街道盛中村

本申请公开了一种防褥疮且便于转运的医用垫，包括转运垫以及设置于所述转运垫的内部或上表面的褥疮垫，所述转运垫包括由下至上设置依次叠放的第一垫体和第二垫体，所述第一垫体和所述第二垫体的周边连接形成第一气室，所述第一气室为... 详细信息

标准号: CN112842758A

本申请公开了一种防褥疮且便于转运的医用垫，包括转运垫以及设置于所述转运垫的内部或上表面的褥疮垫，所述转运垫包括由下至上设置依次叠放的第一垫体和第二垫体，所述第一垫体和所述第二垫体的周边连接形成第一气室，所述第一气室为持续充气气室，所述第一垫体设有若干喷气孔，所述第一气室的气体通过所述喷气孔喷出，形成气悬浮结构。本发明提供的防褥疮且便于转运的医用垫，功能多样，既能防止长褥疮，又能方便搬运和转移。

关键词：垫体转运气室防褥疮喷气孔医用垫充气气室气体通过依次叠放周边连接气悬浮褥疮垫上表面褥疮喷出搬运申请

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