检索结果-内蒙古大学图书馆

新型甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

新型甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：秦智锋曾少灵陈书琨廖立珊花群义张彩虹孙洁刘建利卢体康阮周曦林庆燕吕建强曹琛福深圳出入境检验检疫局，广东，深圳市，518001 深圳市检验检疫科学研究院，广东，深圳市，518001 深圳市外来有害生物质检测技术研发重点实验室，广东深圳，518045 深圳出入境检验检疫局，广东，深圳市，518001 深圳出入境检验检疫局，广东，深圳市，518001 深圳市检验检疫科学研究院，广东，深圳市，518001 深圳出入境检验检疫局，广东，深圳市，518001 深圳市外来有害生物质检测技术研发重点实验室，广东深圳，518045

为了自新型甲型H1N1(2009)于2009年在世界多个国家暴发流行后，许多国家的猪群中也检测到该病毒的存在。猪作为流感病毒的”基因混合器”能够产生具有潜在危害的毒株。WHO、OIE和FAO联合要求加大对猪群中新型甲型H1N1(2009)的检测和监... 详细信息

为了自新型甲型H1N1(2009)于2009年在世界多个国家暴发流行后，许多国家的猪群中也检测到该病毒的存在。猪作为流感病毒的”基因混合器”能够产生具有潜在危害的毒株。WHO、OIE和FAO联合要求加大对猪群中新型甲型H1N1(2009)的检测和监测，因此建立快速准确的新型甲型H1Nl检测方法成为迫切需求。本研究借助普遍使用的rRT-PcR技术，针对新型甲型H1N1(2009)病毒NA基因设计特异性引物和探针，建立新型甲型H1N1(2009)病毒特异性rRT-PCR快速检测方法。并将该方法与WHO推荐美国CDC建立的检测方法和美国农业部推荐的检测方法进行比较。通过田间实验验证该方法在实际应用中的效果。本研究中所建立的方法对检测甲型H1N1流感裂解疫苗的灵敏度可以达到10-6，与WHO推荐的A型流感实时荧光PCR检测方法的灵敏度一致，并且高于美国农业部推荐方法的检测灵敏度(10-5);本研究中所建立的方法特异性强，与经典型H1N1和其他亚型流感毒株无任何交叉反应。与香港兽医化验所进行了检测比对，检测灵敏度和特异性完全一致。近3 800份的田间试验表明，所建立的方法准确可靠。本研究中所建立检测方法快速灵敏，检测结果准确可靠，适合用于新型甲型H1N1(2009)流感病毒的分子生物学检测和监测。

关键词：新型甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR 病毒检测性能评价

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5亚型禽流感病毒荧光检测试纸条的研制

引用

中国兽医杂志 2019年第6期55卷 32-35,I0004页

作者：孙洁陈雨吴峰王津津陈兵郑晓聪陶虹刘建利陈书琨林庆燕秦智锋深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳市检验检疫科学研究院广东深圳518045 大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023 清华大学深圳研究生院广东深圳518001

为了对引起家禽重大经济损失和具有公共卫生意义的 H5 亚型禽流感病毒(AIV)进行快速超敏检测,本研究研制了针对HA蛋白的4株单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞株,通过MAb的两两配对试验,以荧光量子点作为抗体标记生物材料,基于夹心法原理建立了... 详细信息

为了对引起家禽重大经济损失和具有公共卫生意义的 H5 亚型禽流感病毒(AIV)进行快速超敏检测,本研究研制了针对HA蛋白的4株单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞株,通过MAb的两两配对试验,以荧光量子点作为抗体标记生物材料,基于夹心法原理建立了H5 亚型AIV荧光免疫层析检测试纸条。结果显示,该方法能够特异性检测出 H5N1、H5N2等H5亚型AIV,而与H1N1、H3N2、H7N9、H9N2、NDV等其他病原无交叉反应;对标准检测抗原 H5N1(Re-6)的最低检测量为1ng/Ml,比市售H5亚型AIV胶体金检测试纸条灵敏度高100倍;该方法的变异系数(CV)值在10%以内,与商品化的试剂盒检测结果符合率达99.8%。本文建立的H5亚型AIV荧光检测试纸条快速、敏感,检测结果准确可靠,为 H5 亚型禽流感的流行病学调查和快速诊断提供了基础。

关键词： H5亚型禽流感病毒荧光量子点检测试纸条快速检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

水疱性口炎病毒免提取核酸荧光定量PCR鉴别检测方法的建立

引用

动物医学进展 2018年第11期39卷 25-29页

作者：张彩虹林彦星杨俊兴曹琛福吕建强黄超华祁振强林庆燕花群义深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳市宝舜泰生物医药股份有限公司广东深圳518101

为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应... 详细信息

为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应条件的优化,建立了直接从样品中鉴别VSV-IND和VSV-NJ的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行分析。结果显示,该直扩荧光定量PCR能准确鉴别VSV-IND和VSV-NJ,两者没有交叉反应现象,对其他几种相似病原的灭活抗原,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪水疱病病毒(SVDV)、蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等检测均呈阴性。对10倍系列稀释的水疱性口炎灭活病毒液的检测敏感性可达10-5,与传统的荧光定量PCR的检测敏感性相当。该方法无需提取核酸,可在2h内完成对样品的检测,结果准确、快速、灵敏,为印第安纳型和新泽西型水疱性口炎病毒的特异性鉴别提供了一种切实可行的方法。

关键词：水疱性口炎病毒直扩荧光定量PCR 鉴别检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

引用

病毒学报 2006年第2期22卷 131-136页

作者：秦智锋吕建强肖性龙钟安清林镜中黄运生林庆燕陈书琨金显忠林苗刘胜利深圳出入境检验检疫局深圳518045 深圳太太基因工程有限公司深圳518057

为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个... 详细信息

为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象。同时敏感性高,检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 0001、000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型。所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%。用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%。

关键词：禽流感 H5亚型 H7亚型 H9亚型实时荧光RT PCR 多重实时检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

四种常见禁用兽药残留的流式液相芯片的研制

四种常见禁用兽药残留的流式液相芯片的研制

引用

作者：曲海峰陈书琨秦智锋卢体康花群义詹爱军孙洁曾少灵彭池方辛焕发陈泽华曹琛福陈兵林庆燕陶虹深圳出入境检验检疫局

1)该项目来源于深圳市2006年科技计划课题“六种常见禁用兽药残留的流式液相芯片的研制”，课题编号：SY20060911034A。2)技术原理及性能指标：该项目的研究成果可用于食品安全领域的中国禁用兽药的残留检测。其原理是应用不同荧光编码... 详细信息

标准号: 1200161432

1)该项目来源于深圳市2006年科技计划课题“六种常见禁用兽药残留的流式液相芯片的研制”，课题编号：SY20060911034A。2)技术原理及性能指标：该项目的研究成果可用于食品安全领域的中国禁用兽药的残留检测。其原理是应用不同荧光编码的微球作载体分别与不同的禁用药物分子偶联，在反应体系中加入生物素标记的相应的单克隆抗体后就会与各自对应的药物分子(抗原)结合；若加入反应体系的样品中存在一种或者几种禁用兽药残留，它(们)就会与载体微球上的抗原竞争性地与生物素标记的相应的单克隆抗体结合，从而导致载体微球上的抗原结合生物素标记的单克隆抗体的数量减少，也就造成了亲和素标记的澡红蛋白与之结合的数量减少，结果澡红蛋白的荧光强度减弱。根据荧光强度减弱的大小就可计算出样品中一种或者几种禁用兽药残留的浓度。与现行检测方法相比，达到了如下技术指标：①高通量，通过一次检测达到同时检测四种禁用兽药残留的目标；②准确，所建立的液相芯片检测方法灵敏度高，不存在假阴行现象；③快速，由原先需要用四种ELISA检测试剂盒进行为期2天的检测，降低为30分钟一次同时检测四种禁用兽药残留，检测周期缩短为原来的1/24；④低成本，成本约降低50%。3)技术的创造性与先进性：与国内外同类技术比较，尙未见到应用液相芯片技术同时检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、己烯雌酚和氯霉素的报道。根据查新结果，该项目首次将荧光编码微球直接与兽药残留小分子偶联，成功地建立了四种禁用兽药残留的快速、高通量、定量的液相芯片检测方法。4)技术的成熟程度，适应范围和安全性：已基本成熟，适用于食品安全的禁用兽药残留检测。

关键词：禁用兽药残留液相芯片快速高通量定量检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

非洲猪瘟预警系统与快速检测技术

非洲猪瘟预警系统与快速检测技术

引用

作者：花群义徐自忠周晓黎秦智锋吕建强董俊杨建明杨云庆詹爱军林庆燕曾少灵阮周曦陈兵陶虹深圳出入境检验检疫局

该课题研究已按照合同规定的研究内容和考核指标,完成了项目的主要研究任务,达到了预期目标： 1、根据Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列,人工合成的VP73全基因克隆至pMD 18-T克隆载体质粒中,再进行亚克隆插入pBAD/Thio表达载体,成功... 详细信息

标准号: gkls006059

该课题研究已按照合同规定的研究内容和考核指标,完成了项目的主要研究任务,达到了预期目标： 1、根据Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列,人工合成的VP73全基因克隆至pMD 18-T克隆载体质粒中,再进行亚克隆插入pBAD/Thio表达载体,成功构建了非洲猪瘟病毒VP73基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP73蛋白抗原。Western blotting和ELISA检测表明,表达的融合蛋白能与非洲猪瘟阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物为非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白,且具有良好的反应原性,这为应用该表达蛋白抗原制备ASFV免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。 2、建立了快速检测非洲猪瘟病毒的荧光定量TaqMan PCR技术。按照VP73基因中高度保守的区域,设计了特异性引物和FAM、TAMRA标记的TaqMan探针,将设计合成的多对引物和探针进行最佳配对筛选实验后,初步确定候选引物和探针,经过大量的反应条件优选、对比试验和验证试验,从候选引物和探针中确定最佳引物和探针,经各反应条件的优化和特异性、敏感性、重复性试验,与常规的PCR对比,建立了实时荧光定量PCR检测ASFV方法。 3、本课题研究建立了应用重组抗原VP73检测非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法。利用已构建的ASFV VP73基因表达质粒载体,经L-阿拉伯糖(L-Arabinose)诱导表达 VP73重组蛋白,使用proBond TM protein 纯化试剂盒纯化VP73重组蛋白抗原。以其为包被抗原,通过制备鼠抗ASFV重组VP73蛋白IgG多克隆抗体,经各组分最适工作浓度和最佳试验条件的筛选,并用从英国进行的ASFV阳性血清进行验证,建立了以重组VP73蛋白为抗原检测ASFV抗体的间接酶联免疫吸附试验。本方法的特异性强,敏感性高。用间接ELISA检测血清中的抗VP73蛋白抗体特异性强、灵敏度高、简便快速,有广泛应用价值。 4、研制了非洲猪瘟病毒PCR检测方法和试剂盒。该方法采用聚合酶链反应技术,根据基因库中非洲猪瘟病毒(ASFV)VP73的基因序列,设计、筛选获得了一对特异性检测引物,经PCR扩增及反应条件的优化,结果得到与设计相符合的目的基因特异性条带。具有操作简单、特异性高、敏感性强的特点。 5、完成了非洲猪瘟及其风险分析。全面收集、整理国外非洲猪瘟流行情况、流行病学资料和研究动态。出版了《重大动物疫病及其风险分析》(由科学出版社出版发行,书号：ISBN7-03-014117-2)中的“非洲猪瘟及其风险分析”。根据中国动物卫生法律法规及相关规定,参照OIE《国际动物卫生法典》(2002)关于进口风险分析的规定,结合非洲猪瘟的流行特点,对中国进口猪、猪胚胎/卵和精液、猪产品及其他商品传播非洲猪瘟的风险进行评估,依据风险管理的原则,提出从非洲猪瘟国家或地区进口有关商品的风险管理措施。 6、在国内外核心刊物上发表了该课题的研究成果科研论文3篇,1项研究成果申报了专利。因此,如将初步研制的上述快速检测试剂盒进一步组装成适用于检验检疫部门和各基层兽医诊断单位实验室的试剂盒,不仅具有广泛的使用价值,而且具有重要的直接或间接效益和社会效益。

关键词：非洲猪瘟预警系统快速检测技术

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

非洲猪瘟病毒p30蛋白真核表达载体的构建及表达

引用

上海畜牧兽医通讯 2016年第4期 6-9页

作者：廖立珊孙洁刘建利花群义唐金明林彦星阮周曦张彩虹陶虹吕建强杨俊兴秦智锋林庆燕曾少灵深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045

本文设计特异性引物扩增全长p30基因,得到585bp的目的片段,克隆至杆状病毒Bac-To-Bac表达载体pFastBac/NT-TOPO中,转化大肠杆菌DH10Bac进行同源重组,成功构建了含有p30基因的真核表达载体。转染Sf9细胞,回收得到重组杆状病毒。SDS-PAGE... 详细信息

本文设计特异性引物扩增全长p30基因,得到585bp的目的片段,克隆至杆状病毒Bac-To-Bac表达载体pFastBac/NT-TOPO中,转化大肠杆菌DH10Bac进行同源重组,成功构建了含有p30基因的真核表达载体。转染Sf9细胞,回收得到重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,表达产物20kDa,与预期大小一致,能与AFSV阳性血清产生特异性反应。

关键词： ASFV 杆状病毒表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

蓝舌病快速检测试剂盒的研制

蓝舌病快速检测试剂盒的研制

引用

作者：陶虹杨俊兴花群义卢体康吕建强曹琛福张彩虹秦智锋阮周曦林庆燕刘建利廖立珊深圳出入境检验检疫局等

该研究利用重组表达的BTV VP7蛋白作为包被抗原，用抗BTV VP7蛋白的单克隆抗体作为竞争抗体，建立了BTV抗体c-ELISA 检测方法.通过蓝舌病病毒结构蛋白VP7基因工程表达抗原制备与纯化，VP7蛋白单克隆抗体的制备，获得高特异性、高亲和力... 详细信息

标准号: 1500152204

该研究利用重组表达的BTV VP7蛋白作为包被抗原，用抗BTV VP7蛋白的单克隆抗体作为竞争抗体，建立了BTV抗体c-ELISA 检测方法.通过蓝舌病病毒结构蛋白VP7基因工程表达抗原制备与纯化，VP7蛋白单克隆抗体的制备，获得高特异性、高亲和力和高纯度的抗原和单克隆抗体.进而研制开发基于基因工程抗原和单克隆抗体的鉴别蓝舌病c-ELISA试剂盒.具体内容如下: 1.蓝舌病病毒VP7基因的克隆与表达应用RT-PCR 技术成功扩增和克隆了BTV VP7基因，并且构建了BTV VP7蛋白基因工程表达载体-pBAD-BTV VP7，进行了高效表达，表达的VP7蛋白抗原可与BTV 抗血清产生特异性反应. 2.制备了抗BTV VP7蛋白的单克隆抗体用BTV-ELISA、BTV VP7-ELISA和BHK-ELISA对融合细细胞进行筛选，并对筛选到的阳性细胞进行3次亚克隆，最终建立3株(1F5、4E5 和6A1)可以分泌抗BTV VP7 蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株.3株单克隆抗体的ELISA 效价均达1:128000以上.用纯化的BTV-1与弗氏佐剂乳化后，免疫6周龄BALB/c小鼠.分离免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合，经BTV-ELISA、BTV VP7-ELISA 和BHK-ELISA 筛选，得到了3株(1F5、4E5和6A1)可以稳定分泌抗BTV VP7特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株.3株单克隆抗体与其它病毒无交叉反应，3株单克隆抗体(腹水)的ELISA效价分别为1:512000、1:128000和1:512000，亲和常数分别为5.1*108L/mol、8.6*108L/mol和1.4*109L/mol.3.建立了用于检测BTV抗体的c-ELISA用重组表达的BTV VP7蛋白作为包被抗原，用抗BTV VP7蛋白的单克隆抗体作为竞争抗体，建立了BTV抗体c-ELISA检测方法.通过对BTV阳性血清样品、其它病毒阳性血清样品及临床样品的检测，表明此方法均具有良好的特异性和敏感性.重复性试验结果表明，用同一批建立的c-ELISA，检测5份阳性样品和5份阴性样品，计算PI值间的变异系数为1.12%~8.29%，表明c-ELISA批内检测重复性良好.取5个不同批次建立的ELISA检测5份阳性样品和5份阴性样品，计算PI值间的变异系数1.29%~9.72%，表明c-ELISA批间检测重复性良好.用建立的c-ELISA和进口的c-ELISA试剂盒同时检测临床样品366份，其中c-ELISA检测63份阳性样品，303份为阴性;进口的c-ELISA试剂盒检测62份为阳性，304份为阴性.58份两种方法检测均为阳性，299份两种方法检测均为阴性.计算得出c-ELISA的特异性和敏感性分别为98.4%和93.5%;两种方法检测结果的符合率为97.5%，总之，该研究建立的BTV抗体c-ELISA检测方法具有良好的特异性和敏感性.由于国内还没有关于BTV抗体c-ELISA检测方法的报道，也没有商品化的c-ELISA试剂盒用于临床样品检测和血清流行病学调查.因此，该研究建立的c-ELISA方法可以代替进口的c-ELISA试剂盒，用于中国反刍动物BTV抗体检测和BTV血清流行病学调查.

关键词：蓝舌病检测试剂盒流行病学调查

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

供港猪群流感病毒的分离鉴定及流行病学调查

引用

中国预防兽医学报 2007年第11期29卷 900-904页

作者：秦智锋陈丽詹爱军陈书琨曾少灵吕建强曹琛福林庆燕阮周曦范万红毕英佐深圳出入境检验检疫局广东深圳518001 华南农业大学动物科学学院广东广州518642

为了对供港猪群中的猪流感流行情况进行分析,从华南地区供港猪群中用无菌棉拭子采集鼻腔粘液样品,采用鸡胚接种方法,从供港猪群中分离出了2株不同亚型的猪流感病毒株,经国家流感中心鉴定分别为H1N1和H3N2亚型。本研究设计了猪流感常见... 详细信息

为了对供港猪群中的猪流感流行情况进行分析,从华南地区供港猪群中用无菌棉拭子采集鼻腔粘液样品,采用鸡胚接种方法,从供港猪群中分离出了2株不同亚型的猪流感病毒株,经国家流感中心鉴定分别为H1N1和H3N2亚型。本研究设计了猪流感常见亚型的HA和NA分型特异性引物,建立了猪流感型特异性RT-PCR检测方法;对分离鉴定的2株猪流感病毒和禽流感H5N1 HI检测抗原进行了RT-PCR检测,并对其部分HA和NA基因进行克隆测序分析。对供港猪群的血清检测结果表明:供港猪群中H1N1和H3N2亚型抗体阳性率分别为26.87%、38.26%,禽流感H5N1和H9N2亚型抗体阳性率均为0%。

关键词：猪流感 RT-PCR 抗体阳性率

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PRRSV云南A06株ORF5和ORF7基因的克隆与序列分析

引用

动物医学进展 2010年第3期31卷 12-17页

作者：曾少灵林庆燕花群义张彩虹阮周曦杨俊兴孙洁秦智锋曹琛福陈兵吕建强深圳出入境检验检疫局动植中心广东深圳518010

设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332... 详细信息

设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332和7株中国分离的美洲型毒株相应基因进行核苷酸和氨基酸序列比对分析。结果显示,A06株属于美洲型,其ORF5和ORF7基因及推断氨基酸与我国2006年分离的4株HP-PRRSV代表株的相似性高达98%～99%,与欧洲型代表株LV的相似性只有56%～64%。分别构建了以上毒株ORF5和ORF7基因的亲缘关系图谱,反映了A06株ORF5和ORF7基因的进化位置,完成2个基因的遗传变异分析。

关键词： PRRSV ORF5基因 ORF7基因亲缘关系图谱

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：