检索结果-内蒙古大学图书馆

氨基酸杂志 1990年第4期12卷 1-6页

作者：林殿海黄和蓉长春生物制品所中国科学院微生物研究所

以谷氨酸产生菌Corynebactelium SP·Hu7251为出发菌株,经NTG多次诱变,获得一株多标记突变株Am142—302(AHV^r,AHC^r、2-TA^r、Mef^-),可产9.6mg/mlL异亮氨酸。复将Am142-302经紫外线诱变和单菌落分离筛选,选得突变株Am1423—56。... 详细信息

以谷氨酸产生菌Corynebactelium SP·Hu7251为出发菌株,经NTG多次诱变,获得一株多标记突变株Am142—302(AHV^r,AHC^r、2-TA^r、Mef^-),可产9.6mg/mlL异亮氨酸。复将Am142-302经紫外线诱变和单菌落分离筛选,选得突变株Am1423—56。该菌在比较合适的摇瓶发酵条件下,可积累L-异亮氨酸达15.1mg/ml。发酵产物经提纯鉴定,确证是L-异亮氨酸。

关键词：产生菌异亮氨酸产物提纯选育

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贯彻GB7258《机动车运行安全技术条件》的经济效果评价

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新疆质量与标准化 1995年第5期 27-28页

作者：林殿海吴艳萍

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贯彻GB7258《机动车运行安全技术条件》的经济效果评价

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新疆质量与标准化 1993年第5期 27-28页

作者：林殿海吴艳萍等新疆重油开发公司技术监督中心

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分泌型重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子中试发酵工艺的研究

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中国生物制品学杂志 1997年第2期10卷 72-74页

作者：林殿海杨桂云迟春萍李健平赵丽欣张秀霞卫生部长春生物制品研究所长春130062

通过对GM－CSF工程菌W3100发酵条件的研究，优化了培养及表达条件，使工程菌W3100在30L发酵罐可表达分泌型GM－CSF1.5g／L左右，占菌体总蛋白的25％以上，纯化后的比活大于2．0×107。

关键词：发酵 GM-CSF 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子工艺

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白喉毒素突变体CRM197的应用研究进展

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生物技术世界 2015年第8期12卷 4-5页

作者：杨光辉杨善岩梁仁龙章敏林殿海安吉县食品药品检验检测中心浙江湖州313000 中国林业科学研究院松花粉研究开发中心浙江亚林生物科技股份有限公司浙江杭州311400 浙江优诺金生物工程有限公司浙江湖州313000

CRM197(cross reacting material 197)是一种无毒的白喉毒素突变体,主要用作疫苗蛋白载体及药物透过血脑屏障的载体,其在抗肿瘤方面也有一定的应用。

关键词：白喉毒素结合疫苗血脑屏障

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长链人胰岛素样生长因子-1的分离纯化

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 778-781页

作者：张文明洪静林殿海孙天玮梁军黄国团浙江优诺金生物工程有限公司浙江安吉313300

目的建立长链人胰岛素样生长因子-1(Long chain Arg3 human insulin-like growth factor-1,LR3IGF-1)的分离纯化方法。方法将LR3IGF-1毕赤酵母工程菌接种至30 L发酵罐进行高密度发酵,发酵液经离心、超滤浓缩后,采用SP Sepharose FF阳离... 详细信息

目的建立长链人胰岛素样生长因子-1(Long chain Arg3 human insulin-like growth factor-1,LR3IGF-1)的分离纯化方法。方法将LR3IGF-1毕赤酵母工程菌接种至30 L发酵罐进行高密度发酵,发酵液经离心、超滤浓缩后,采用SP Sepharose FF阳离子交换层析、Phenyl Sepharose FF疏水层析、S-100凝胶过滤层析和DEAE Sepharose FF层析对发酵上清液中的表达产物进行分离纯化,测定蛋白浓度,计算蛋白收率,并分析纯化样品的浓度。采用MTT法检测各步纯化样品促NIH-3T3细胞增殖的活性。结果纯化LR3IGF-1的蛋白总收率为28%,RP-HPLC纯度可达95%以上。随着纯化过程中样品纯度的增加,LR3IGF-1的活性也相应增强,各纯化步骤基本不影响LR3IGF-1的生物活性。结论初步建立了LR3IGF-1的分离纯化工艺,其简便有效,为LR3IGF-1的规模化生产奠定了基础。

关键词：长链人胰岛素样生长因子-1 阳离子交换层析疏水层析

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分泌性重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子药效研究

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中国生物制品学杂志 1997年第4期10卷 240-243页

作者：杨桂云林殿海刘淑玲迟春萍李建平刘冬梅李龙云田建明卫生部长春生物制品研究所长春130062 吉林省中医中药研究院长春130021

应用本所研制的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF），按0．012和0．024mg／kg剂量静脉注射家犬可明显抗由环磷酰桉所致的白细胞减少和血小板减少；按0．075、0．15和0．3mg／kg剂量皮下注射经60Co照射致白细胞减少症的小... 详细信息

应用本所研制的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF），按0．012和0．024mg／kg剂量静脉注射家犬可明显抗由环磷酰桉所致的白细胞减少和血小板减少；按0．075、0．15和0．3mg／kg剂量皮下注射经60Co照射致白细胞减少症的小且有明显恢复作用：增加脾细胞集落、外周血白细胞、骨髓有核细胞及巨噬细胞数。其药效强度与进口升白能近似。

关键词： GM-CSF 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子药理学

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长链人胰岛素样生长因子-1在毕赤酵母中表达条件的优化

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 499-501页

作者：张文明洪静孙天玮黄国团梁军王大力林殿海浙江优诺金生物工程有限公司浙江安吉313300

目的优化长链人胰岛素样生长因子-1(Long chain Arg3 human insulin-like growth factor-1,LR3IGF-1)在毕赤酵母中的表达条件。方法考察甲醇诱导浓度(0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%和1.50%)、诱导温度(25、28、30℃)、pH值(4.75、5.00、5.25、5.50、5.75和6.00)及添加剂(0.1%的精氨酸、甘氨酸、组氨酸、吐温-20和吐温-80)对LR3IGF-1在毕赤酵母中表达的影响,优化LR3IGF-1的表达条件。以最佳表达条件在发酵罐中诱导表达LR3IGF-1,检测其表达量,并与初始发酵条件的表达量进行比较。结果甲醇浓度为0.75%及诱导温度为25℃时,LR3IGF-1的表达量最高,分别为76.5和98 mg/L;pH值为5.25,诱导24 h,LR3IGF-1的表达量较高,且降解程度低;添加吐温-20可使LR3IGF-1的表达量提高至271 mg/L。以优化的条件进行发酵,LR3IGF-1的表达量可达497 mg/L,较优化前(52 mg/L)提高了近9倍,且诱导时间从48 h缩短至24 h。结论优化了LR3IGF-1在毕赤酵母中的表达条件,为其规模化生产奠定了基础。

关键词：长链人胰岛素样生长因子-1 毕赤酵母基因表达优化

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分泌型重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化

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中国生物制品学杂志 1997年第3期10卷 132-135页

作者：林殿海杨桂云赵立欣刘淑玲迟春萍刘东梅李建平张秀霞金铎张春力卫生部长春生物制品研究所长春130062

GM－CSF工程菌W3100经发酵培养后，将菌体低渗裂解，经流水柱─分子筛─阴离子交换树脂的一系列层析，最后得到纯化的GM－CSF，其纯度为98％以上，比活性大于20×107。

关键词： GM-CSF 纯化粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

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人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白在糖基工程化毕赤酵母中的表达

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军事医学 2012年第11期36卷 843-846页

作者：高新宋海峰林殿海杨小盼万德友陈枢青浙江大学药学院杭州310058 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的在糖基工程化毕赤酵母中表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin G1 Fc fusion,TNFR-Fc),考察糖基工程化过程对其活性的影响。方法将编码TNFR-Fc的cDNA序列插入毕赤酵... 详细信息

目的在糖基工程化毕赤酵母中表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin G1 Fc fusion,TNFR-Fc),考察糖基工程化过程对其活性的影响。方法将编码TNFR-Fc的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPIC6αA中,构建重组表达质粒pPIC6-TF。用表达质粒转染N-糖基化工程改造的毕赤酵母菌株GSB,在含有杀稻瘟菌素的YPD平板上进行筛选。然后再使用HRP标记的羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行斑点印迹(dot-blot)筛选。选择表达量较高的工程菌株TNFR-Fc/GSB57进行高密度培养,通过Protein A亲和层析从发酵上清中纯化融合蛋白,利用鼠L929细胞对融合蛋白的抗TNFα活性进行分析。结果通过筛选获得了表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达菌株,纯化后的TNFR-Fc融合蛋白拮抗TNFα的EC50高于野生型毕赤酵母表达产物,而低于哺乳动物细胞的表达产物。结论糖基化改造改善了人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的抗TNFα活性,但必须进行进一步的改造才可能获得与哺乳动物细胞表达产物相似的活性。

关键词：肿瘤坏死因子受体毕赤酵母糖基工程化过程发酵纯化生物活性

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