检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：林绮萍华南农业大学

学位级别：硕士

目的:利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的模拟表位,探讨其对弓形虫病的免疫保护作用;体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(Dense granule protein 4,GRA4)基因,构建原核及真核表达重组质粒并表达,研究该基因体外表达产物的抗原性,纯... 详细信息

目的:利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的模拟表位,探讨其对弓形虫病的免疫保护作用;体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(Dense granule protein 4,GRA4)基因,构建原核及真核表达重组质粒并表达,研究该基因体外表达产物的抗原性,纯化原核表达产物,探讨其对弓形虫病的免疫保护作用;用脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleotide acid,DNA)免疫技术将真核重组质粒直接免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性.结论:利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的1个模拟表位,其序列为CTT CAGTTG GAT CGG GCT CCG TTT TGG AAT CAG GGT,能诱导对弓形虫的部分保护作用.通过PCR技术在国内首次克隆了弓形虫GRA4基因,并通过亚克隆法成功地构建了pGEX-GRA4和pET-GRA4两种原核表达重组质粒,在*** BL21(DE<,3>)中表达了具抗原活性的融合蛋白,并获得纯化,为进一步研究其免疫原性及用作诊断抗原创造了条件.将GRA4基因片段定向克隆入pVAC真核表达载体,在脂质体介导下转染哺乳动物细胞,在体外获得了瞬时表达;DNA免疫结果显示,pVAC-GRA4重组质粒可诱导小鼠产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫RH强毒株攻击感染的部分保护性免疫.该文通过对弓形虫抗原表位的研究及其致密颗粒蛋白GRA4基因克隆与表达的研究,为进一步研究弓形虫病的作用机理及免疫防治提供了必要的理论及实验依据.

关键词：弓形虫抗原表位致密颗粒蛋白4 克隆表达免疫

来源：评论

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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达

引用

中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 89-90页

作者：林绮萍吴少庭翁亚彪秦莉黄达娜袁仕善华南农业大学兽医学院广州510642 圳市疾病预防控制中心广东深圳518020 华南农业大学兽医学院广州510642 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系武汉430030 圳市疾病预防控制中心广东深圳518020 圳市疾病预防控制中心广东深圳518020

　　构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在HEK-293细胞中的表达情况.采用PCR方法自弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-GRA4重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入HEK-... 详细信息

　　构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在HEK-293细胞中的表达情况.采用PCR方法自弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-GRA4重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入HEK-293细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物.从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段,成功构建重组表达质粒pVAC-GRA4;转染GRA4的HEK-293细胞,RT-PCR检测可见一条约987bp的目的条带,表达产物经Western-blot鉴定,其分子量约为41kD,能被pET-GRA4重组蛋白免疫血清所识别.构建的真核表达质粒pVAC-GRA4能在HEK-293细胞中表达,为弓形虫疫苗的进一步研究打下基础.……