检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：桓娇娇华中农业大学

学位级别：硕士

基因消除PCR (Removing PCR; R-PCR)技术是一种将聚合酶链式反应(PCR)技术和限制性核酸内切酶技术相结合的用以消除两个基因群体中的非目标基因从而获得目标基因的技术。与现有的筛选基因群体中目标基因的方法(抑制性差减杂交,基因芯片... 详细信息

基因消除PCR (Removing PCR; R-PCR)技术是一种将聚合酶链式反应(PCR)技术和限制性核酸内切酶技术相结合的用以消除两个基因群体中的非目标基因从而获得目标基因的技术。与现有的筛选基因群体中目标基因的方法(抑制性差减杂交,基因芯片,高通量测序)相比,该方法具有操作较为简单,假阳性率低,成本低廉,稳定性好,可重复性高,适用范围广等优点。玉米纹枯病是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani KUhn)引起的,在中国该病已成为制约玉米产量的主要病害。从转录组水平研究纹枯病菌诱导后玉米体内基因的差异表达,是从基因水平阐释玉米对纹枯病抗性机制的有效途径,从而为培育广谱、高效、稳定、持久抗病性品种提供理论基础。本研究提出了基因消除PCR技术的概念,初步建立起了单基因片段水平R-PCR和多基因水平R-PCR,试图为筛选基因群体中的目标基因提供一种新的技术手段。同时,将R-PCR技术成功运用到纹枯病菌诱导玉米差异表达基因的筛选中,为建立相关抗病基因表达谱和从全基因表达水平上深入探索玉米对纹枯病的系统抗病机制奠定基础。本实验以玉米自交系Y478和立枯丝核菌高致病性融合菌群AG-1-IA为研究对象,分别采集接种纹枯病菌6h,12h,24h,36h,48h,60h和72h的叶片,将该7个时间点取的叶片作为混合样本,利用R-PCR技术筛选出该样本相对于未受侵染的玉米叶片而言上调表达的基因,并采用荧光定量PCR技术对部分基因进行验证,获得主要结果如下： 1.以小麦小GTP结合蛋白基因片段为起始材料,基本建立起了单基因片段水平的R-PCR,并验证了R-PCR引物的特异性,证明了R-PCR技术在原理上是可行的。 2.以玉米Y478基因组DNA为起始材料,在单基因片段水平R-PCR的基础上进一步优化建立起多基因水平R-PCR,并取得较好的消除效果,进一步证明了R-PCR技术的可行性和高效性。 3.以接病的Y478cDNA和未接病的Y478cDNA为起始材料,采用R-PCR技术,获得纹枯病菌诱导玉米上调表达基因片段的R-PCR产物。将该R-PCR产物进行群体T-A克隆,得到的122个阳性克隆经过测序分析,获得53条唯一的EST序列。 4.将筛选得到的53条EST序列提交到Genbank中进行Blast比对分析,其中41条EST序列对应基因的功能是已知的,剩余12条EST序列无基因功能注释。对筛选到的差异表达且功能已知的基因根据相关文献进行简单的分类,发现其中有8个基因与抗病、防御反应直接相关,其它33个基因在纹枯病菌与玉米互作中的作用,有待进一步的研究。 5.对41条对应基因功能已知的EST序列中的23条序列设计荧光定量引物,对它们在接种纹枯病菌的玉米体内和健康玉米体内的表达量进行相对定量。其中14条EST序列所对应的基因被纹枯病菌诱导显著上调表达,另外9条EST序列所对应的基因上调表达倍数小于2。

关键词：基因消除PCR 差异表达基因玉米纹枯病 AG-1-IA

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利用基因消除PCR分离玉米接种立枯丝核菌诱导表达的基因

利用基因消除PCR分离玉米接种立枯丝核菌诱导表达的基因

引用

中国植物病理学会2014年学术年会

作者：桓娇娇万康康董五辈华中农业大学植物科学技术学院武汉430070

本文就玉米病害进行了研究，以玉米自交系Y478和立枯丝核菌高致病性融合菌群AG-1-IA为材料，分别采集接种后6h，12h，24h，36h，48h，60h和72h的叶片，将该7个时间点取的叶片作为混合样本，利用R-PCR技术筛选出该样本相对于未受侵染玉... 详细信息

本文就玉米病害进行了研究，以玉米自交系Y478和立枯丝核菌高致病性融合菌群AG-1-IA为材料，分别采集接种后6h，12h，24h，36h，48h，60h和72h的叶片，将该7个时间点取的叶片作为混合样本，利用R-PCR技术筛选出该样本相对于未受侵染玉米叶片的上调表达的基因，并采用荧光定量PCR技术对部分基因进行验证，获得了如下主要基因：calmodulin，omega-6fatty acid desaturase,translation initiation factor3,ATP synthase C,metallo山ionein-like protein l,NADP-malic enzyme,2,3-bisphosphoglycerate-independent phosphoglycerate mutase,anthranilate synthase component I-l,PHD finger-like domain-containing protein SA,aquaporin Aqyl,chitinase,farnesyl pyrophosphate synthetase。

关键词：玉米病害立枯丝核菌基因表达

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利用基因消除PCR分离玉米接种立枯丝核菌诱导表达的基因

利用基因消除PCR分离玉米接种立枯丝核菌诱导表达的基因

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：桓娇娇万康康董五辈华中农业大学植物科学技术学院

基因消除PCR是我们新建立的一项去除非目标基因从而克隆目标基因的PCR反向过程的新技术,简称为R-PCR(Removing PCR)。PCR是Kary ***在1983年建立的技术。30年后,我们建立了一项PCR的反向过程技术。若想扩增所想要的基因可用PCR;若想去... 详细信息

基因消除PCR是我们新建立的一项去除非目标基因从而克隆目标基因的PCR反向过程的新技术,简称为R-PCR(Removing PCR)。PCR是Kary ***在1983年建立的技术。30年后,我们建立了一项PCR的反向过程技术。若想扩增所想要的基因可用PCR;若想去除不想要的基

关键词：立枯丝核菌 PCR 目标基因

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逆转录转座子蛋白基因在病原菌诱导植物差异表达基因中的初步研究

逆转录转座子蛋白基因在病原菌诱导植物差异表达基因中的初步研究

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：桓娇娇张婷婷程梦兰董五辈华中农业大学植物科学技术学院

植物逆转录转座子（retrotransposon）作为一类可移动的遗传因子在植物界广泛存在,因其转座需经过由RNA介导的反转录过程而得名,具有高度的异质性。已有的研究表明,许多逆转录转座子均可以被原生质体分离、组织培养、冷害、低能离子的... 详细信息

植物逆转录转座子（retrotransposon）作为一类可移动的遗传因子在植物界广泛存在,因其转座需经过由RNA介导的反转录过程而得名,具有高度的异质性。已有的研究表明,许多逆转录转座子均可以被原生质体分离、组织培养、冷害、低能离子的辐照、水杨酸、真菌提取物、病毒、细菌接种等多种逆境所激活,并通过纵向和横向在物种内和物种间传递,对植物基因组的结构、功能和进化起着重要的作用。以自交系玉米掖478为材料,接种立枯丝核菌（AGI-IA）,采用本实验室建立的一种新的筛选特异基因的方法R-PCR（限制性PCR或者反向PCR）,筛选到了逆转录转座子蛋白基因片段,以筛选到的片段设计荧光定量引物,进行荧光定量验证:相对于未被立枯丝核菌感染的玉米,逆转录转座子蛋白基因表达量上调了数十倍。逆转录转座子蛋白基因在病原菌诱导植物的抗性反应中扮演的具体角色有待进一步研究。

关键词：逆转录转座子蛋白玉米纹枯病 R-PCR

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转细胞凋亡抑制基因p35和iap玉米抗纹枯病的研究

转细胞凋亡抑制基因p35和iap玉米抗纹枯病的研究

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：程梦兰黄珏张婷婷桓娇娇董五辈华中农业大学植物科学技术学院

玉米纹枯病(maize sheath blight)是一种分布范围广泛的世界性病害。其病原菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani k(u|¨)hn)具有强腐生性和宽寄主范围,至今未发现对纹枯病菌高抗的玉米品种。随着植物基因工程的发展,将多个基因共同转... 详细信息

玉米纹枯病(maize sheath blight)是一种分布范围广泛的世界性病害。其病原菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani k(u|¨)hn)具有强腐生性和宽寄主范围,至今未发现对纹枯病菌高抗的玉米品种。随着植物基因工程的发展,将多个基因共同转化植物已成为研究的热点之一。在基因构建中,利用连接肽进行多个基因融合的策略已引起广泛关注。以2A和LP4为连接肽构建的融合基因在植物中表达时会发生剪切,将两个基因分开。

关键词： p35 iap 纹枯病细胞凋亡抑制基因

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植物与病原物互作中的蛋白互作

植物与病原物互作中的蛋白互作

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：张婷婷史军伟桓娇娇程梦兰黄珏邝炜董五辈华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室

＜正＞植物与病原物的互作是一个十分复杂的过程,其中包含着形态、生理、生化、分子等变化过程。Flor基因对基因假说的提出,标志着对植物与病原物互作的认识深入到了基因水平,但基因信息并不足以解释及推测细胞的各种生命活动现象,蛋白...

＜正＞植物与病原物的互作是一个十分复杂的过程,其中包含着形态、生理、生化、分子等变化过程。Flor基因对基因假说的提出,标志着对植物与病原物互作的认识深入到了基因水平,但基因信息并不足以解释及推测细胞的各种生命活动现象,蛋白质才是细胞活性及功能的最终执行者,在植物与病原物的互作中也不例外。植物与病原物的分子互作主要包括对彼此的信号识别、信号的传导、防卫基因的激活等等,这些环

关键词：

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SSH技术原理与其设计的缺陷

SSH技术原理与其设计的缺陷

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：桓娇娇张婷婷程梦兰史军伟黄珏邝伟董五辈华中农业大学植物科学技术学院

自1996年Diatchenko等提出SSH技术(suppression subtractive hybridizaation)以来,SSH技术已经被广泛地运用到动物、植物、微生物等生物体生长发育,组织分化,逆境胁迫和病理诱导的基因差异表达的研究中。事实上我们更多地是关注它的优点... 详细信息

自1996年Diatchenko等提出SSH技术(suppression subtractive hybridizaation)以来,SSH技术已经被广泛地运用到动物、植物、微生物等生物体生长发育,组织分化,逆境胁迫和病理诱导的基因差异表达的研究中。事实上我们更多地是关注它的优点,忽略了它存在的诸多不足。首先,对于SSH技术,它所需mRNA量较大,一般的程序是先将mRNA反转录

关键词： SSH 技术原理

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一种基因消除PCR的方法

一种基因消除PCR的方法

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作者：桓娇娇吕茹婧张婷婷程梦兰董五辈 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号

本发明公开了一种基因消除PCR的方法，本项发明可以消除混合基因群体中的非目标基因。本项发明的技术要点是把非目标基因做成或人工合成短序列基因消除引物，把含目标基因的混合基因群体酶切加上带有一个碱基误配的限制性酶切位点及带有... 详细信息

标准号: CN102604932A

本发明公开了一种基因消除PCR的方法，本项发明可以消除混合基因群体中的非目标基因。本项发明的技术要点是把非目标基因做成或人工合成短序列基因消除引物，把含目标基因的混合基因群体酶切加上带有一个碱基误配的限制性酶切位点及带有Poly(dA)的接头，经过纯化作为模板，在PCR反应中，通过基因消除引物与模板退火延伸恢复正确的酶切位点，然后用耐热的限制性酶酶切从而消除非目标基因的接头，使其无法得到扩增。以上反应是利用PCR仪做如下循环：94℃，30秒；60℃，40秒；75℃，8分钟，经过12至18个循环，富集目标基因，然后常规PCR进一步扩增目标基因。本发明高效快速，操作简便，成本低廉，可重复性高，分离效果好且假阳性率低。

关键词：目标基因基因消除扩增酶切引物限制性酶切位点退火限制性酶酶切分离效果技术要点序列基因常规PCR 基因阳性率富集碱基耐热群体延伸

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一种基因消除PCR的方法

一种基因消除PCR的方法

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作者：桓娇娇吕茹婧张婷婷程梦兰董五辈 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号

标准号: CN102604932B

关键词：目标基因基因消除扩增酶切引物限制性酶切位点退火限制性酶酶切分离效果技术要点序列基因常规PCR 基因阳性率富集碱基耐热群体延伸

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选择性部位起搏对左室收缩同步性的影响

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南方医科大学学报 2014年第10期34卷 1551-1554页

作者：陈东骊汤娇娇陈泗林林纯莹刘烈张黔桓梁远红彭湖陈燕魏会强广东省人民医院//广东省医学科学院//广东省心血管病研究所广东广州510080

目的应用二维斑点追踪成像超声技术,通过计算起搏后左室各节段收缩时间的差异,比较右室心尖(RVA)起搏与右室流出道(RVOT)间隔起搏时对左室收缩同步性的影响。方法入选符合起搏器植入适应证的患者60例,随机分为RVA组30例,RVOT组30例。RV... 详细信息

目的应用二维斑点追踪成像超声技术,通过计算起搏后左室各节段收缩时间的差异,比较右室心尖(RVA)起搏与右室流出道(RVOT)间隔起搏时对左室收缩同步性的影响。方法入选符合起搏器植入适应证的患者60例,随机分为RVA组30例,RVOT组30例。RVA组患者右室电极植于右室心尖部,RVOT组患者右室电极植于右室流出道间隔部。所有患者术后程控心室电极100%起搏,应用二维斑点追踪成像技术,测量左室径向应变达峰时间的差异。结果 RVA组起搏后,左室6节段径向应变达峰时间的最大差、标准差分别为105.27±19.74 ms、42.71±17.63 ms;RVOT组起搏后6节段径向应变达峰时间的最大差、标准差分别为41.65±12.17 ms、17.63±5.62 ms,两组比较各指标均有差异(P<0.01)。结论 RVOT间隔部起搏后的左室收缩同步性优于RVA起搏。

关键词：右室流出道选择性部位起搏斑点追踪技术超声心动图同步性

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