检索结果-内蒙古大学图书馆

湖北大学学报（自然科学版） 2024年第2期46卷 158-166页

作者：王雄雄张圣权孙静毛传樨湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

Tau作为微管相关蛋白,对微管的稳定具有重要作用。为了在体内找到与tau互作的基因,我们以具有粗糙眼的tau高表达果蝇为模型,进行遗传学筛选。以具有粗糙眼的tau高表达果蝇为背景,采用RNA干扰手段来下调前期肌肉系统筛选出具有微管异常... 详细信息

Tau作为微管相关蛋白,对微管的稳定具有重要作用。为了在体内找到与tau互作的基因,我们以具有粗糙眼的tau高表达果蝇为模型,进行遗传学筛选。以具有粗糙眼的tau高表达果蝇为背景,采用RNA干扰手段来下调前期肌肉系统筛选出具有微管异常表型的基因,观察粗糙眼的变化,从而找出与tau互作的候选基因。发现雌雄果蝇有粗糙眼表型的有11株。为了研究粗糙眼表型是否对发育造成影响,通过免疫染色观察眼睛的成虫盘凋亡。发现在11株粗糙眼表型中有5株凋亡细胞数量增加,1株凋亡细胞数量减少,其他无变化。同时,我们对粗糙眼增强的基因型进行睡眠监测,发现有一株RNAi对于光线改变不敏感。因此,我们猜测该基因可能与tau有互作,这对我们找出新的微管调控因子提供了依据。

关键词： tau 微管粗糙眼凋亡睡眠监测果蝇

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果蝇微管互作蛋白的大规模筛选研究

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湖北大学学报（自然科学版） 2023年第5期45卷 657-663页

作者：王珊王雄雄金珊刘志华毛传樨湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

微管是一种具有极性的、管状的细胞内动态结构,是细胞骨架的重要组分.一些跟微管相关的基因发生突变时,有可能致使严重的人类疾病的发生.这些相关基因编码的蛋白即为微管互作蛋白.影响微管的基因众多,目前发现的影响微管正常组装的蛋白... 详细信息

微管是一种具有极性的、管状的细胞内动态结构,是细胞骨架的重要组分.一些跟微管相关的基因发生突变时,有可能致使严重的人类疾病的发生.这些相关基因编码的蛋白即为微管互作蛋白.影响微管的基因众多,目前发现的影响微管正常组装的蛋白还只是冰山一角,仍有诸多影响微管的互作蛋白等待人类“挖掘”.我们利用已有的果蝇RNAi文库,通过UAS/Gal4系统,对部分基因进行敲减(RNAi),使基因在果蝇幼虫肌肉中特异性沉默,经过免疫染色后观察这些基因功能敲降果蝇的肌肉微管形态,以此来筛选微管互作蛋白.我们共鉴定了541个基因,筛选出微管有表型的40个.其中一些基因在线粒体、内质网、高尔基体、过氧化物酶体等细胞器中具有特定的功能.因此,我们的筛选工作不仅为构建微管相关疾病模型提供了铺垫,为微管相关疾病治疗工作提供了一定的帮助;而且对细胞结构中微管的非中心体微管组织中心探究提供了思路.

关键词：微管互作蛋白筛选疾病

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Klotho调控果蝇幼虫的运动行为

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湖北大学学报（自然科学版） 2023年第2期45卷 223-228页

作者：李港胡君成毛传樨刘志华金珊湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

klotho基因在人体内行使诸多重要功能,其在延长寿命、改善肾脏功能和缓解神经退行性疾病等方面都具有一定的作用,但其作用机制目前尚不明确.在果蝇中,人类klotho的同源基因为CG9701(klotho),目前与之相关的研究较少.本实验通过CRISPR/C... 详细信息

klotho基因在人体内行使诸多重要功能,其在延长寿命、改善肾脏功能和缓解神经退行性疾病等方面都具有一定的作用,但其作用机制目前尚不明确.在果蝇中,人类klotho的同源基因为CG9701(klotho),目前与之相关的研究较少.本实验通过CRISPR/Cas9技术构建CG9701的无功能突变体***13-3表现出运动速率降低,翻滚时间延长,但其运动轨迹正常,提示klotho主要在果蝇幼虫肌肉系统中发挥作用.我们的结果为后续klotho基因功能和调控机制的研究提供基础.

关键词： klotho CRISPR/Cas9 运动行为

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微管剪切蛋白Fidgetin在黑腹果蝇神经发育过程中的功能初探

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湖北大学学报（自然科学版） 2020年第5期42卷 484-490页

作者：王其霖王珊李港毛传樨金珊湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

微管(microtubule,MT)是一种具有极性的细胞骨架.在微管动态变化过程中,有两类蛋白参与微管组装和解聚的动态调节.Fidgetin(Fign)的编码基因为CG3326,它是其中的去组装因子之一,参与微管剪切和末端解聚.本实验使用CRISPR/Cas9系统,构建f... 详细信息

微管(microtubule,MT)是一种具有极性的细胞骨架.在微管动态变化过程中,有两类蛋白参与微管组装和解聚的动态调节.Fidgetin(Fign)的编码基因为CG3326,它是其中的去组装因子之一,参与微管剪切和末端解聚.本实验使用CRISPR/Cas9系统,构建fidgetin无功能突变体果蝇品系(fidgetin^null),观察fidgetin功能缺失对果蝇的神经发育的影响.结果表明fidgetin^M14-2会导致神经肌肉突触(neuromuscular junction,NMJ)的扣结数增多.通过观察fidgetin^M14-2的表型从而初步判断fidgetin基因对神经系统发育的影响,为fidgetin基因功能与致病机制的进一步研究提供基础.

关键词：微管 CRISPR/Cas9系统 Fidgetin

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用CRISPR/Cas9系统构建原位表达d XPR1-GFP的果蝇品系

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湖北大学学报（自然科学版） 2019年第3期41卷 241-245页

作者：李云鹏胡君成牛晓晓毛传樨金珊湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

XPR1是最近鉴定出的一个原发性家族性脑钙化症(primary familial brian calcification,PFBC)的致病基因,它在果蝇体内的同源基因是CG10483(dXPR1).使用CRISPR/Cas9系统,构建原位表达dXPR1-GFP的果蝇品系,在CG10483终止密码子之前插入绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的编码序列,使果蝇表达dXPR1-GFP融合蛋白.该融合蛋白既可以被CG10483编码蛋白的抗体和GFP的抗体识别又能在激发光下发出绿色荧光,能为dXPR1编码蛋白提供准确的定位,从而为研究XPR1基因的功能提供方便.

关键词： CRISPR/Cas9系统 XPR1 GFP

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利用CRISPR/Cas9技术构建模拟微管乙酰化和去乙酰化的定点突变果蝇

利用CRISPR/Cas9技术构建模拟微管乙酰化和去乙酰化的定点突变果蝇

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湖北省细胞生物学学会2015年会员代表大会暨学术研讨会

作者：胡君成毛传樨文学张永清金珊湖北大学生命科学学院湖北大学生命科学学院中国科学院遗传与发育生物学研究所中国科学院遗传与发育生物学研究所

微管是细胞质骨架的重要组成成分,在维持细胞形态,调控细胞功能中发挥着重要的作用.细胞内存在多种微管翻译后修饰方式,其中乙酰化修饰因其存在的广泛性及在调控与微管功能相关的生物学过程中的独特作用而日益受到广泛的关注.例如,稳定...

微管是细胞质骨架的重要组成成分,在维持细胞形态,调控细胞功能中发挥着重要的作用.细胞内存在多种微管翻译后修饰方式,其中乙酰化修饰因其存在的广泛性及在调控与微管功能相关的生物学过程中的独特作用而日益受到广泛的关注.例如,稳定微管,可以有效的避免微管破坏引起的神经退行性疾病相关的表型;抑制HDAC6的活性能够增加微管的乙酰化,从而部分挽救tau蛋白的毒性等.为了进一步的研究微管乙酰化的生物学功能,本研究旨在获得模拟微管第40位氨基酸乙酰化和去乙酰化的果蝇品系.利用CRISPR/Cas9定点突变技术,将果蝇的-tublin 84B的第40位赖氨酸(K)突变成谷氨酰胺(Q)模拟微管的乙酰化状态,突变成精氨酸(R)模拟微管的去乙酰化状态.经过测序鉴定,我们得到了这两种品系的纯合果蝇,这是第一次在生物体水平上实现原位定点突变模拟微管的乙酰化和去乙酰化状态,为后续微管乙酰化相关的研究提供了模式材料.

关键词：

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微管剪切蛋白Katanin的体内功能解析

微管剪切蛋白Katanin的体内功能解析

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作者：毛传樨湖北大学

学位级别：硕士

微管剪切蛋白Katanin是ATPase家族的一员,由Katanin60和Katanin80两个亚基组成。其中Katanin80亚基没有酶切功能但可使Katanin定位于中心体。Katanin60亚基具有ATP酶活,行使微管剪切功能。目前对katanin体内功能的研究只限于模式动物线... 详细信息

微管剪切蛋白Katanin是ATPase家族的一员,由Katanin60和Katanin80两个亚基组成。其中Katanin80亚基没有酶切功能但可使Katanin定位于中心体。Katanin60亚基具有ATP酶活,行使微管剪切功能。目前对katanin体内功能的研究只限于模式动物线虫,尚没有在其他模式动物如果蝇和小鼠中研究,因此,体外实验的结果还没有得到体内试验的验证。其次,虽然体外的研究阐明了katanin突变可以导致其细胞中微管网络的破坏,但是由于这些研究是基于体外培养细胞的研究,因此不能完全解释Katanin在个体生长发育特别是神经肌肉系统发育过程中的作用。我们从VDRC(维也纳果蝇中心)购得katanin60RNAi果蝇工具株；并利用p因子定点跳出的方法获得了katanin60的突变体果蝇；通过扩增katanin60CDS连入pUAST载体,显微注射到果蝇胚胎后进行筛选和定位,得到katanin60过表达果蝇工具株。并从国外合作者处得到抗体,随后利用免疫染色和生化分子等方法检测katanin60过表达和敲减果蝇以及突变体的蛋白表达量和表达位置。在鉴定和验证以上各种工具后,我们用微管特异性抗体对果蝇三龄幼虫肌肉细胞的微管结构进行了观察,同时还用神经系统也以表达的蛋白观察了果蝇神经突触结构的发育。我们在果蝇体内进行了研究。免疫染色结果显示,在肌肉细胞中,过表达katanin60可以提高微管剪切的程度,且优先剪切细胞核周围的微管,造成细胞核周围微管密度减小,而敲减果蝇katanin60的表达可以造成细胞核周围微管密度增加。katanin60突变体果蝇的肌肉细胞微管成簇且延伸至细胞边缘。在冷冻处理恢复微管的实验中我们看到,Katanin功能的行使需要一定的微管密度。Katanin不仅影响果蝇肌肉微管的发育,同时影响神经系统的发育。在katanin60过表达和突变体果蝇中,神经肌肉接头卫星扣结数目较野生型明显增多。

关键词：果蝇微管 katanin CG10229 突触

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