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中华地方病学杂志 2016年第8期35卷 561-566页

作者：卢艳陈韶红储言红艾琳蔡玉春简莎娜陈家旭中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室、世界卫生组织热带病合作中心上海200025

目的分析田鼠巴贝虫可溶性抗原蛋白组分，寻找敏感、特异的诊断候选抗原。方法用田鼠巴贝虫感染BALB／c小鼠。待红细胞感染率达到高峰时（感染率〉70％），收集虫体，制备可溶性抗原；同时收集BALB／c小鼠的本底血清和感染田鼠巴贝虫7... 详细信息

目的分析田鼠巴贝虫可溶性抗原蛋白组分，寻找敏感、特异的诊断候选抗原。方法用田鼠巴贝虫感染BALB／c小鼠。待红细胞感染率达到高峰时（感染率〉70％），收集虫体，制备可溶性抗原；同时收集BALB／c小鼠的本底血清和感染田鼠巴贝虫7、14、21、28、35、42、49和56d后的血清；聚丙烯酰胺凝胶电泳法（***）分析可溶性抗原的蛋白组分，蛋白质免疫印迹法（Westernblot）分析可溶性抗原的免疫反应性，选择阳性反应条带进行质谱鉴定和序列分析。结果可溶性抗原经SDS—PAGE分析，可观察到9条主带和12条次带，蛋白条带的相对分子质量（Mr）介于（12～185）×10^3（kDa）；Westernblot结果显示感染后7d的混合鼠血清可识别Mr为40和45kDa的蛋白条带且反应较强，感染后14d的混合鼠血清可识别Mr为40、45、54和95kDa的蛋白条带．感染后21d的混合鼠血清可识别腑为27、40、45、54、95和110kDa的蛋白条带，感染后28d至感染56d的混合鼠血清均可识别Mr为27、40、45、54、95和110kDa的蛋白条带且随着感染时间的延长出现其他的弱反应条带。阳性反应条带通过质谱鉴定和序列分析，共确定336个蛋白，包括表面抗原、热休克蛋白70、血清反应抗原、含t-复合物多肽伴侣蛋白的Eta亚基1和未命名蛋白。结论田鼠巴贝虫可溶性抗原中Mr为40、45、54kDa的组分是较好的诊断候选抗原，在田鼠巴贝虫病诊断中的应用前景值得进一步研究。

关键词：田鼠巴贝虫可溶性抗原蛋白质免疫印迹法质谱

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应用COI基因对我国旋毛虫四个地理株的鉴定及虫体抗原的免疫组分分析

应用COI基因对我国旋毛虫四个地理株的鉴定及虫体抗原的免疫组分...

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作者：简莎娜中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

旋毛虫病(Trichinellosis)是一种因食用生的或未煮熟肉类感染旋毛虫而引起的重要人畜共患寄生虫病。我国存在旋毛形线虫(T. spiral is)和乡土旋毛虫(T. native),其中旋毛形线虫是引起人体旋毛虫病的主要病原体。因感染的旋毛虫虫种不同... 详细信息

旋毛虫病(Trichinellosis)是一种因食用生的或未煮熟肉类感染旋毛虫而引起的重要人畜共患寄生虫病。我国存在旋毛形线虫(T. spiral is)和乡土旋毛虫(T. native),其中旋毛形线虫是引起人体旋毛虫病的主要病原体。因感染的旋毛虫虫种不同、摄入虫体的量、感染程度及个体的免疫反应不同,旋毛虫病患者表现出不同的症状：如腹泻、恶心、发热、乏力,眶周浮肿、弥漫性肌痛、瘫痪样症状,甚至脑炎、心肌炎,其中心肌炎是导致病人死亡最主要的原因。因旋毛虫病临床症状的非特异性,其确诊常通过实验室辅助检查。活组织检查作为旋毛虫病的诊断金标准被国际旋毛虫病委员会推荐使用,但这种方法是损伤性检查,病人依从性低。该方法在畜牧业和屠宰业中使用较广,常因为感染早期假阴性率高、受取材部位、感染程度影响所致假阴性等导致漏诊。目前用于检测抗旋毛虫抗体的血清学方法以ELISA的敏感性最高,具有经济、检测方法标准化、特异性和敏感性比较稳定以及检测结果可信度高等优点,已被国际旋毛虫病委员会列为推荐应用的方法。旋毛虫病有效抗原成分的研究是免疫诊断研究的基础,本研究以旋毛虫云南地理株、湖北地理株、河南地理株和东北地理株为材料,通过酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)和免疫印迹分析(Western blot, WB)对各地理株的虫体抗原和排泄-分泌抗原进行研究,以期了解不同地理株抗原组分及免疫效果的差异。本研究以4个旋毛虫地理株为研究材料,以旋毛虫感染昆明小鼠(约500条／只)建立动物模型,感染后45 d解剖小鼠,通过人工消化法获得旋毛虫肌幼虫。对获得的虫体进行形态学观察,并用线粒体细胞色素氧化酶工基因(cytochrome c oxidase subunit I gene,COI)进行虫种鉴定。体外培养收集排泄-分泌抗原(excretory-secretory antigens, ESA),以冻融匀浆法制备虫体抗原(crude muscle larvae antigens, CLA)。通过ELISA试验观察不同地区来源旋毛虫肌幼虫抗原的敏感性、特异性及其与其他寄生虫感染血清的交叉反应。以聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)和免疫印迹法分析虫体抗原和排泄-分泌抗原的组分及有效免疫反应组分。结果,各地理株获得虫体均达40 000条,包囊在显微镜下呈梭形,虫体卷曲状,洗涤后虫体呈“C”形或卷曲运动,表皮光滑,两端钝圆,无突起和附器,杆状体约占虫体前2/3。4个旋毛虫地理株COI基因扩增产物均在约400bp处出现明显条带,序列测定并拼接后,云南株380bp、湖北株380bp、河南株380bp、东北株380bp,经BLAST与旋毛虫ISS413株AF129486.1基因比对,同源性均为99%,在第269位存在一个T-C转位位点；4个虫株该部分序列相似性为100%,均与旋毛形线虫亲缘关系较近,可能是同一虫种。以制备的4个地理株虫体抗原和排泄-分泌抗原进行ELISA试验,检测旋毛虫病患者血清敏感性100%,特异性100%。与血吸虫病、棘球蚴虫病、囊尾蚴病患者血清存在交叉反应,与华支睾吸虫病、裂头蚴病、钩虫病患者血清未见交叉反应。虫体抗原与血吸虫病人血清反应中,湖北地理株阳性率2.85%,东北地理株阳性率11.4%；虫体抗原与棘球蚴病人血清反应中,云南地理株阳性率11.7%,河南地理株阳性率5.8%；虫体抗原与囊尾蚴病人血清反应中,云南地理株阳性率为12%,湖北地理株阳性率16%,河南地理株阳性率32%,东北地理株阳性率12%。排泄-分泌抗原与血吸虫病人血清反应中,云南地理株阳性率2.85%,东北地理株阳性率11%；与囊尾蚴病人血清反应中,云南地理株阳性率为12%,湖北地理株阳性率8%,河南地理株阳性率24%,东北地理株阳性率12%。SDS-PAGE分析4个旋毛虫地理株虫体可溶性抗原抗原条带分子量范围为100000-10000,均含有8条主带,Mr为100000、66000、49000、45000、43000、30000、18000、12000；3条次带,Mr为82000、80000、53000。排泄-分泌抗原Mr范围为70000～10000,有8条主带,Mr为66000、53000、49000、43000、40000、34000、30000、16000。Western blot分析结果显示,旋毛虫肌幼虫虫体可溶性抗原可与旋毛虫病患者和感染小鼠血清的反应,条带以Mr95000、72000、53000、49000、43000为主,排泄-分泌抗原反应条带以Mr 53000、49000、43000、40000为主。云南地理株虫体抗原与血吸虫病

关键词：旋毛虫肌幼虫 COI ELISA Western blot

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旋毛虫病免疫诊断抗原的研究进展

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中国病原生物学杂志 2015年第4期10卷 384-384,I0001,I0002,F0003页

作者：简莎娜艾琳陈韶红蔡玉春卢艳陈木新吴秀萍田利光陈家旭中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

旋毛虫病的血清学诊断技术基于诊断抗原的研究。旋毛虫抗原分为排泄-分泌抗原、表面抗原、虫体抗原及重组抗原。排泄-分泌抗原是旋毛虫肌幼虫分泌排泄物,重要的组分有p49、p53和杆细胞相关颗粒抗原等,前者对旋毛虫病有诊断价值,p53可区... 详细信息

旋毛虫病的血清学诊断技术基于诊断抗原的研究。旋毛虫抗原分为排泄-分泌抗原、表面抗原、虫体抗原及重组抗原。排泄-分泌抗原是旋毛虫肌幼虫分泌排泄物,重要的组分有p49、p53和杆细胞相关颗粒抗原等,前者对旋毛虫病有诊断价值,p53可区分现症感染与既往感染,面后者则具早期诊断价值。旋毛虫虫体表面抗原的研究较少,处于起步阶段。旋毛虫的虫体抗原成分复杂,多与其他寄生虫病有交叉反应,用作诊断抗原的价值还有待考证。基因工程抗原研究较多的有旋毛虫氨基肽酶(TsAP)、副肌球蛋白(Ts-Pmy)、Ts87蛋白、组织蛋白酶样B蛋白酶(TsCPB)等,由于其均质性,可大量制备等倍受青睐。本文就旋毛虫抗原的研究进展作一综述,为旋毛虫病免疫诊断用抗原的研究提供参考。

关键词：旋毛虫病免疫诊断抗原综述

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四个旋毛虫地理株肌幼虫虫体抗原和排泄—分泌抗原的免疫学分析

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国际医学寄生虫病杂志 2015年第3期42卷 137-141页

作者：简莎娜艾琳陈韶红蔡玉春卢艳陈木新吴秀萍田利光陈家旭中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心

目的分析4个旋毛虫地理株肌幼虫的虫体抗原、排泄-分泌抗原的蛋白组成和免疫学特性。方法昆明小鼠16只，每只感染旋毛虫肌幼虫300条，45 d后人工消化法收集旋毛虫肌幼虫制备虫体抗原，幼虫体外培养获得排泄-分泌抗原。用聚丙烯酰胺... 详细信息

目的分析4个旋毛虫地理株肌幼虫的虫体抗原、排泄-分泌抗原的蛋白组成和免疫学特性。方法昆明小鼠16只，每只感染旋毛虫肌幼虫300条，45 d后人工消化法收集旋毛虫肌幼虫制备虫体抗原，幼虫体外培养获得排泄-分泌抗原。用聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）分析虫体抗原和排泄-分泌抗原的组分，并用感染小鼠血清和旋毛虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴虫病、裂头蚴病、鞭虫病、卫氏并殖吸虫病、囊尾蚴病、钩虫病患者血清与抗原进行免疫印迹反应，观察阳性反应抗原条带。结果经SDS-PAGE分析，4个旋毛虫地理株虫体可溶性抗原和排泄-分泌抗原均有8条主带，相对分子质量（Mr）分别为100 000、66 000、49 000、45 000、43 000、30 000、18 000、12 000和Mr 66 000、53 000、49 000、43 000、36 000、34 000、30 000、16 000。免疫印迹结果显示，旋毛虫肌幼虫虫体可溶性抗原与旋毛虫病患者和感染小鼠血清的反应条带以Mr 95 000、72 000、53 000、49 000、43 000为主，排泄-分泌抗原反应条带以Mr 53 000、49 000、43 000、40 000为主。结论各地理株不同抗原的组分和免疫学反应存在一定的差异，其中虫体可溶性抗原的Mr 95 000、72 000成分和排泄-分泌抗原的Mr 40 000成分是进一步研究的重点。

关键词：旋毛虫地理株幼虫虫体抗原幼虫排泄-分泌抗原

来源：评论

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社区结肠造口术后管理模式承接出院后患者管理的效果分析

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热带医学杂志 2015年第5期15卷 674-676页

作者：张毅钦简少云吴晓霞刘莎娜曾金楼戴济平广州市越秀区黄花岗街社区卫生服务中心广东广州510095 广州市红十字会医院广东广州510220

目的探讨社区结肠造口术后管理模式承接出院后患者管理的效果。方法选取广州市居住的出院造口患者62例,进行社区结肠造口术患者的管理,管理3个月,前后分别使用SF36生活质量评价量表和社会支持评定量表及健康行为能力自评量表进行管理效... 详细信息

目的探讨社区结肠造口术后管理模式承接出院后患者管理的效果。方法选取广州市居住的出院造口患者62例,进行社区结肠造口术患者的管理,管理3个月,前后分别使用SF36生活质量评价量表和社会支持评定量表及健康行为能力自评量表进行管理效果评估。结果 SF36生活质量评价量表调查问卷对患者干预前后生活质量进行多维评价。干预前后一般健康状况、精力、情感职能、精神健康以及总分的差异有统计学意义(P<0.05)。社会支持评定量表SSRS评价中,其中主观支持、对支持的利用度及总分差异有统计学意义(P<0.01)。健康行为能力自评量表SRAHP4个分量表干预后得分均高于干预前,其中营养、心理安适及总分的差异有统计学意义(P<0.01)。结论社区结肠造口术后管理模式承接出院后患者管理能提高造口患者的综合状态和生命质量,为社区开展出院后造口患者的继续康复提供可操作性的经验。

关键词：社区管理模式结肠造口术

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