检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：罗敏捷浙江大学

学位级别：博士

目的:该研究采用同一患者结直肠正常粘膜、腺瘤和腺癌组织分别作为检测(Tester)和驱赶(Driver)cDNA进行两两比较.分别获取同一患者结肠远端粘膜、腺瘤和腺癌组织的cDNA,运用SSH法筛选差异表达的基因,并构建三个相应的差减文库,即以腺瘤... 详细信息

目的:该研究采用同一患者结直肠正常粘膜、腺瘤和腺癌组织分别作为检测(Tester)和驱赶(Driver)cDNA进行两两比较.分别获取同一患者结肠远端粘膜、腺瘤和腺癌组织的cDNA,运用SSH法筛选差异表达的基因,并构建三个相应的差减文库,即以腺瘤为检测cDNA、远端粘膜为驱赶cDNA的差减A-N文库;以腺癌为检测cDNA、远端粘膜为驱赶cDNA的差减T-N文库和以腺癌为检测cDNA、腺瘤为驱赶cDNA的差减T-A文库.结论:1.通过SSH法建立了三个差减杂交文库,文库差异表达片段在3~4×10<\'2>间,核苷酸序列分析和GenBank同源搜索明确了部分基因片段的意义,也发现还有许多未知序列的存在.2.差减效率分析、文库筛选、测序与序列的同源查询、VirtualNorthernBlot和RNADotBlot验证以及对已知基因的分析, 都证实了SSH法的敏感、有效,是理想的差减方法.3.对肿瘤相关基因进行综合分析的必要性,提出肿瘤发生中分子间相互作用模块的存在及意义.4.进一步的工作包括对已知基因的深入分析和对未知基因的探索.

关键词：结直肠癌基因表达非同位素检测

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B2基因结构及其在结直肠癌中的表达

引用

中华病理学杂志 2003年第1期32卷 14-19页

作者：邵丽娜黄琼罗敏捷来茂德浙江大学医学院病理与法医研究所杭州310031

目的　明确B2基因与胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白 1(insulin likegrowthfactorbindingproteinrelatedprotein 1,IGFBP rP1)基因在结构上的关系以及其在结直肠肿瘤中的表达改变。方法　用 5′RACE(rapidamplificationofcDNAend)技术获得B2全长 ,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法和免疫组织化学SP法检测 76例结直肠癌组织和配对的正常黏膜以及 6个结肠癌细胞系(SW480 ,SW1116,SW62 0 ,HCT8,CoLo2 0 5和LoVo)中B2的表达水平。结果　获得的B2基因全长 112 5bp ,与IGFBP rP1一致性为 112 2 / 112 5。mRNA水平上 ,B2 /IGFBP rP1的表达水平从正常癌旁腺瘤腺癌逐步递增 (P <0 0 5 )。除SW480外 ,其余 5个细胞系中均无该基因的表达。蛋白水平上 ,腺癌与正常黏膜之间B2 /IGFBP rP1的表达阳性率差异有显著意义 (P <0 0 1)。B2 /IGFBP rP1在侵袭前沿肿瘤细胞中高表达的病例 ,发生淋巴结转移概率较高 ,肿瘤的浸润深度较深 ,B2 /IGFBP rP1的阳性程度也较高 (P <0 0 5 )。结论　B2与IGFBP rP1是同一个基因 ;B2 /IGFBP rP1的表达改变可能与结直肠肿瘤的发生、发展有关 ;高表达B2 /IGFBP

关键词： B2基因结直肠癌基因结构 RT-PCR 免疫组织化学SP法淋巴结转移肿瘤侵袭

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人乳头状瘤病毒致癌机制

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 1996年第3期16卷 147-150页

作者：罗敏捷浙江医科大学病理教研室

近年来发现人乳头状瘤病毒与人类许多不同部位肿瘤发生有关。不同类型人乳头状瘤病毒具有不同的致癌性，高危型病毒的致癌可能与其在癌中的物理状态Ｅ６和Ｅ７蛋白的转化作用以及其它因子的协同作用有关。

关键词：病毒生物转化肿瘤人乳头状瘤

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人乳头状瘤病毒与肛管及肛周尖脱湿疣、肛管癌关系——PCR、斑点杂交、免疫组化、原位杂交分析

人乳头状瘤病毒与肛管及肛周尖脱湿疣、肛管癌关系——PCR、斑点...

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作者：罗敏捷浙江医科大学

学位级别：硕士

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恶性胶质瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态及蛋白表达与患者临床预后的相关性研究

恶性胶质瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态及蛋白表达与患者临床预...

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作者：罗敏捷南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景恶性胶质瘤(WHO分级Ⅲ级、IV级)是临床常见的神经外科疾病,在中青年死亡原因中排名前列,因其治疗的复杂性,低生存率以及近年来逐渐增高的发病率,已成为神经外科领域现阶段研究的热点。恶性胶质瘤存在广泛浸润、颅内转移的特点,... 详细信息

研究背景恶性胶质瘤(WHO分级Ⅲ级、IV级)是临床常见的神经外科疾病,在中青年死亡原因中排名前列,因其治疗的复杂性,低生存率以及近年来逐渐增高的发病率,已成为神经外科领域现阶段研究的热点。恶性胶质瘤存在广泛浸润、颅内转移的特点,即使在手术中显微镜下全切肿瘤,术后短时期内仍有极高的复发率。因此术后放、化疗等综合辅助治疗在胶质瘤的治疗中具有很大的意义,对于改善患者生存质量,提高生存时间有很高的价值。而由于中枢神经系统存在血脑屏障等原因,恶性胶质瘤的化疗方案相对于全身其他系统恶性肿瘤的化疗不尽相同,大部分以烷化剂为化疗的基础。 06-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(06-methylguanine-DNA-methyltransferase MGMT)是哺乳动物机体中都存在的一种DNA烷基化损伤修复酶,它同时发挥转移酶与甲基接受体的作用,将烷化基团从O6-MG(06-甲基鸟嘌呤)的六位氧转到自身的半肤氨酸残基上,使DNA链上的鸟嘌呤损伤修复,阻止DNA交联形成。因此MGMT可抵消烷化剂对肿瘤细胞造成的DNA烷基化毒性作用,因此在肿瘤化疗的众多耐药因素中,起到重要作用。在胶质瘤烷化剂化疗中,MGMT活性被视为提示患者预后的一个极其重要的分子指标,在研究者间具有广泛的共识,MGMT活性高,则烷化剂化疗耐药性强,患者生存期预后差。反之则预示好的预后。 MGMT活性可通过MGMT的DNA、RNA、蛋白等各个层面的各种检测方法进行研究。因RNA提纯难度高,降解快等特点,在RNA层面进行的MGMT研究较少,难以形成综合分析。免疫组化法检测的MGMT蛋白表达在过去被一致认为是烷化剂耐药、患者生存期预后的高度可信分子预测指标,但是在近年来受到大量分析研究结果的挑战,认为IHC法检测的MGMT蛋白表达与同组标本组织启动子甲基化状态以及患者预后一致性差,尤其是其中一些META分析和多中心大样本研究对MGMT蛋白表达作为预后指标的质疑有一定的说服力。近些年来的研究证实肿瘤的发生与表观遗传学的改变有关。表观遗传学研究非基因序列改变所致的可遗传的基因表达水平的变化,基因启动子区CpG岛局部甲基化水平异常升高是属于表观遗传学改变的一种,可导致相关基因不表达,蛋白水平下降。使得肿瘤细胞耐药性降低,患者获得更好的预后。MGMT基因启动子甲基化状态作为烷化剂耐药、患者生存期预后指标,在近几年得到了广泛的认可。以往甲基化特异性的PCR (MSP)法作为大多数研究中检测启动子甲基化状态的首选方法,目前由于不能做定量分析等缺陷,该方法受到各种质疑,新研究的启动子甲基化检测方法中,可行甲基化状态的定量、半定量分析,各有优缺点。其中甲基化特异性-多重连接依赖性探针扩增技术(Methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification, MS-MLPA)由MLPA技术发展而来,是一种将探针杂交与PCR扩增相结合的基因甲基化检测技术。相比经典的MSP法,MS-MLPA法有明显的优势：所需检测样本量小；可省略亚硫酸氢盐转化步骤；同一引物对扩增所有探针增加了可靠性；可得到半定量的甲基化结果。可用于FFPE等局部降解的DNA；分辨率高,可以同时获得基因拷贝数信息等。是一种值得信赖的检验方法。本研究选用的MS-MLPA ME011-B1MMR试剂盒检测MGMT甲基化状态,大致实验步骤为：首先变性反应使靶序列成为为单链。随后杂交反应中,长、短探针中的杂交序列与单链靶序列杂交互补。MS-MLPA在杂交反应后分两部分进行。一半同常规MLPA的后续连接、扩增、电泳反应,提供拷贝数信息。另一半反应要在MLPA的连接反应步骤中同时加入甲基化敏感性限制性内切酶Hhal处理,以提供甲基化状态信息。在连接反应中同时加入Hhal内切酶,若靶序列的GCGC位点非甲基化,探针被连接的同时将被Hhal消化,不能在后续的PCR反应中被扩增；若GCGC位点是甲基化的,探针不会被Hhal消化,连接后的完整探针通过通用引物由PCR反应扩增,最终通过电泳分离,产生电泳峰值信号。信号数据经一系列校正和评估后,用计算机软件来计算,得出该序列的甲基化系数。目的研究MGMT基因启动子过甲基化状态、MGMT基因拷贝数、MGMT蛋白表达与患者生存预后关系以及与患者年龄、性别、病理分级等临床特点的关系,探讨MS-MLPA法检测基因甲基化状态的优势和不足,研究IHC法检测蛋白表达存在的各种问题,为MGMT活性高的胶质瘤术后综合治疗作出参考。研究方法实验标本：所有脑胶质瘤石蜡标本来自南方医科大学珠江医院病理科,所有非肿瘤性对照标本取自南方医科大学珠江医院神经外科手术。

关键词：恶性胶质瘤 06-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶蛋白表达启动子甲基基化预后

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恶性胶南瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态及蛋白表达与患者临床预后的相关性研究

恶性胶南瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态及蛋白表达与患者临床预...

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作者：罗敏捷南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景：\n 恶性胶质瘤（WHO分级Ⅲ级、Ⅳ级）是临床常见的神经外科疾病，在中青年死亡原因中排名前列，因其治疗的复杂性，低生存率以及近年来逐渐增高的发病率，已成为神经外科领域现阶段研究的热点。恶性胶质瘤存在广泛浸润、... 详细信息

研究背景：\n 恶性胶质瘤（WHO分级Ⅲ级、Ⅳ级）是临床常见的神经外科疾病，在中青年死亡原因中排名前列，因其治疗的复杂性，低生存率以及近年来逐渐增高的发病率，已成为神经外科领域现阶段研究的热点。恶性胶质瘤存在广泛浸润、颅内转移的特点，即使在手术中显微镜下全切肿瘤，术后短时期内仍有极高的复发率。因此术后放、化疗等综合辅助治疗在胶质瘤的治疗中具有很大的意义，对于改善患者生存质量，提高生存时间有很高的价值。而由于中枢神经系统存在血脑屏障等原因，恶性胶质瘤的化疗方案相对于全身其他系统恶性肿瘤的化疗不尽相同，大部分以烷化剂为化疗的基础。\n 06-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferaseMGMT)是哺乳动物机体中都存在的一种DNA烷基化损伤修复酶，它同时发挥转移酶与甲基接受体的作用，将烷化基团从06-MG（06-甲基鸟嘌呤）的六位氧转到自身的半肤氨酸残基上，使DNA链上的鸟嘌呤损伤修复，阻止DNA交联形成。因此MGMT可抵消烷化剂对肿瘤细胞造成的DNA烷基化毒性作用，因此在肿瘤化疗的众多耐药因素中，起到重要作用。\n 在胶质瘤烷化剂化疗中，MGMT活性被视为提示患者预后的一个极其重要的分子指标，在研究者间具有广泛的共识，MGMT活性高，则烷化剂化疗耐药性强，患者生存期预后差。反之则预示好的预后。\n MGMT活性可通过MGMT的DNA、RNA、蛋白等各个层面的各种检测方法进行研究。因RNA提纯难度高，降解快等特点，在RNA层面进行的MGMT研究较少，难以形成综合分析。\n 免疫组化法检测的MGMT蛋白表达在过去被一致认为是烷化剂耐药、患者生存期预后的高度可信分子预测指标，但是在近年来受到大量分析研究结果的挑战，认为IHC法检测的MGMT蛋白表达与同组标本组织启动子甲基化状态以及患者预后一致性差，尤其是其中一些META分析和多中心大样本研究对MGMT蛋白表达作为预后指标的质疑有一定的说服力。\n 近些年来的研究证实肿瘤的发生与表观遗传学的改变有关。表观遗传学研究非基因序列改变所致的可遗传的基因表达水平的变化，基因启动子区CpG岛局部甲基化水平异常升高是属于表观遗传学改变的一种，可导致相关基因不表达，蛋白水平下降。使得肿瘤细胞耐药性降低，患者获得更好的预后。MGMT基因启动子甲基化状态作为烷化剂耐药、患者生存期预后指标，在近几年得到了广泛的认可。\n 以往甲基化特异性的PCR(MSP)法作为大多数研究中检测启动子甲基化状态的首选方法，目前由于不能做定量分析等缺陷，该方法受到各种质疑，新研究的启动子甲基化检测方法中，可行甲基化状态的定量、半定量分析，各有优缺点。其中甲基化特异性-多重连接依赖性探针扩增技术(Methylation-specificmultiplexligation-dependentprobeamplification，MS-MLPA)由MLPA技术发展而来，是一种将探针杂交与PCR扩增相结合的基因甲基化检测技术。相比经典的MSP法，MS-MLPA法有明显的优势:所需检测样本量小;可省略亚硫酸氢盐转化步骤;同一引物对扩增所有探针增加了可靠性;可得到半定量的甲基化结果。可用于FFPE等局部降解的DNA;分辨率高，可以同时获得基因拷贝数信息等。是一种值得信赖的检验方法。\n 本研究选用的MS-MLPAME011-B1MMR试剂盒检测MGMT甲基化状态，大致实验步骤为:首先变性反应使靶序列成为为单链。随后杂交反应中，长、短探针中的杂交序列与单链靶序列杂交互补。MS-MLPA在杂交反应后分两部分进行。一半同常规MLPA的后续连接、扩增、电泳反应，提供拷贝数信息。另一半反应要在MLPA的连接反应步骤中同时加入甲基化敏感性限制性内切酶Hha1处理，以提供甲基化状态信息。在连接反应中同时加入Hha1内切酶，若靶序列的GCGC位点非甲基化，探针被连接的同时将被Hha1消化，不能在后续的PCR反应中被扩增;若GCGC位点是甲基化的，探针不会被Hha1消化，连接后的完整探针通过通用引物由PCR反应扩增，最终通过电泳分离，产生电泳峰值信号。信号数据经一系列校正和评估后，用计算机软件来计算，得出该序列的甲基化系数。\n 目的：\n 研究MGMT基因启动子过甲基化状态、MGMT基因拷贝数、MGMT蛋白表达与患者生存预后关系以及与患者年龄、性别、病理分级等临床特点的关系，探讨MS-MLPA法检测基因甲基化状态的优势和不足，研究IHC法检测蛋白表达存在的各种问题，为MGMT活性高的胶质瘤术后综合治疗作出参考。\n 研究方法：\n 实验标本:所有脑胶质瘤石蜡标本来自南方医科大学珠江医院病理科，所有非肿瘤性对照标本取自南方

关键词：恶性胶质瘤 06-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶蛋白表达启动子甲基化临床预后

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翻转课堂模式在高职院校英语教学中的应用研究

翻转课堂模式在高职院校英语教学中的应用研究

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作者：罗敏捷华中师范大学

学位级别：硕士

翻转课堂是一种颠覆我国传统以教师为主导的新型教学模式,我国在教育改革中将其大力推广应用于各大高校的课堂,取得一定成绩。它彻底改革了传统课堂的学习模式,传统的教学模式都是“先教后练”,然而自从“翻转课堂”流行以来,在各国都... 详细信息

翻转课堂是一种颠覆我国传统以教师为主导的新型教学模式,我国在教育改革中将其大力推广应用于各大高校的课堂,取得一定成绩。它彻底改革了传统课堂的学习模式,传统的教学模式都是“先教后练”,然而自从“翻转课堂”流行以来,在各国都取得了显著地成效。因为“翻转课堂”取得了如此大的成效,所以也想在高职院校的英语教学中采取“翻转课堂”的方法,从而提高教学效率,使目前高职院校的英语教学水平更上一个台阶。对高等职业院校英语课堂上所实行的“翻转课堂”的探索,可以从翻转课堂的定义及特点着手,重点探讨翻转课堂教学模式在高职英语课堂应用过程中的优势及问题,综合评价了翻转课堂教学模式在我国实践中的效果。本文以高职院校学生为教学对象,通过问卷和观察来了解莘莘学子对英语这一学科是否感兴趣,以及目前他们掌握这一语言的水平。在掌握了这些学子们的基本情况后,在英语课堂上开展“翻转教学”,在较短时间内探究、研发了相应的课程,且在具体的教学过程中得到应用。实践证明,实行“翻转教学”的英语课堂,提高了高职院校学子们的英语学习兴趣,并对学子们掌握这一语言的技术和能力有很大的发展空间。

关键词：英语教学翻转课堂高等职业院校模式

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偷税罪若干问题研究

偷税罪若干问题研究

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作者：罗敏捷吉林大学

学位级别：硕士

我国现行《刑法》对偷税罪进行了具体的规定,为预防和打击偷税犯罪起到了重要作用。但是,由于我国立法技术受社会经济条件的限制和法律本身所具有的抽象性与概括性特点以及税收工作的复杂性,因此还存在许多理论探讨的空间和司法实践中... 详细信息

我国现行《刑法》对偷税罪进行了具体的规定,为预防和打击偷税犯罪起到了重要作用。但是,由于我国立法技术受社会经济条件的限制和法律本身所具有的抽象性与概括性特点以及税收工作的复杂性,因此还存在许多理论探讨的空间和司法实践中难以把握的尺度。诚然,最高人民法院针对实践中的一些伸缩性问题和模糊问题作了一些司法解释和规定,为司法机关准确地定罪量刑提供了统一的标准,但是司法解释不能有效地解决实践中所有的问题,况且司法解释本身的合法性与合理性也值得探讨。因此,本文选择了偷税罪中理论上争议比较大,司法实践中难以把握的偷税罪主体问题、偷税罪标准问题和偷税罪罪状问题展开论述。首先,笔者在阐述我国偷税罪立法变革中明晰了偷税与偷税罪的概念。其次,对偷税罪主体是否为特殊主体,扣缴义务人、非法经营者和个私企业、单位是否为偷税罪主体深入地进行分析论证,进而提出了自己的主张。再次,对偷税罪罪状和偷税罪定罪标准进行了论述,指出了现行刑法中偷税罪罪状和偷税罪认定标准的缺陷和不足并提出了其立法完善的途径。

关键词：偷税罪犯罪主体行为方式认定标准立法完善

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高中历史课程标准中“教学活动建议”的研究

高中历史课程标准中“教学活动建议”的研究

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作者：罗敏捷福建师范大学

学位级别：硕士

本文依据我国“知”与“行”的辩证关系教育理论和当代的建构主义教育思想,围绕高中历史课程标准中的“教学活动建议”展开,从课程内容的角度诠释了“教学活动建议”的内涵,探讨了“教学活动建议”课程价值,并对不同类别的“教学活动建... 详细信息

本文依据我国“知”与“行”的辩证关系教育理论和当代的建构主义教育思想,围绕高中历史课程标准中的“教学活动建议”展开,从课程内容的角度诠释了“教学活动建议”的内涵,探讨了“教学活动建议”课程价值,并对不同类别的“教学活动建议”的进行设计、实施和评价,旨在为广大历史教师更好地把握“教学活动建议”,提供理论参考和实践借鉴。文献阅读法、理论分析法、以及案例研究法等是本文主要的研究方法。本文共分六个部分: 第一部分:问题的提出;对论文的由来、研究的方向、研究的目的,做简要的说明。第二部分:历史课程内容中的“教学活动建议”;主要对课程内容的界定、“教学活动建议”的含义及其设置的理论依据进行文献梳理、分析和概括,并力求从中挖掘出课程价值。第三部分:“教学活动”内容的类别及其设计、实施;主要从收集类“教学活动”、讨论类“教学活动”、调查类“教学活动”,三个方面进行设计、实施,并用案例加以说明,以落实“教学活动”的课程价值。第四部分:“教学活动”过程性评价;从“教学活动”的过程性评价原因和方案两方面加以阐述,并附以具体的评价表格,以便于师生的操作。第五部分:提出选择“教学活动建议”这一动态、弹性课程内容的建议。第六部分:最后提出五条结论。

关键词：历史课程 “教学活动”建议设计实施评价

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非同位素标记双向杂交法筛选差减文库

引用

中华医学遗传学杂志 2001年第6期18卷 493-494页

作者：罗敏捷来茂德浙江大学医学院病理教研室杭州310031

目前用于差减文库筛选的方法有多种,其共同的缺陷在于敏感性低,而且多数是运用同位素法进行的,具有一定的损伤性.我们运用DIG法标记双向差减文库探针进行差减文库筛选.1 材料与方法1.1 差减文库运用PCR SelectTM cDNA Subtraction Kit(C... 详细信息

目前用于差减文库筛选的方法有多种,其共同的缺陷在于敏感性低,而且多数是运用同位素法进行的,具有一定的损伤性.我们运用DIG法标记双向差减文库探针进行差减文库筛选.1 材料与方法1.1 差减文库运用PCR SelectTM cDNA Subtraction Kit(Clontech公司)构建3个差减文库,即以腺瘤为检测cDNA、远端粘膜为驱赶cDNA的差减A-N文库;以腺癌为检测cDNA、远端粘膜为驱赶cDNA的差减T-N文库;以腺癌为检测cDNA、腺瘤为驱赶cDNA的差减T-A文库.所用载体为pGEM-T Easy Vector(Promega公司),分子量为3015 bp.插入片段的两端带有接头序列,其中含有PCR扩增的引物序列,包括NP1引物:5′-TCGAGCGGCCGCCCGGGCAGGT-3′;NP2R引物:5′-AGCGTGGTCGCGGCCGAGGT-3′.

关键词：差减文库非同位素标记双向杂交法DIG法 PCR

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