检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 1995年第5期17卷 326-332页

作者：程小款杜恺衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打... 详细信息

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。

关键词：白细胞介素2 受体重组克隆真核基因表达

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检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 321-324页

作者：李宏帆刘兴荣衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果... 详细信息

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。

关键词：基因表达热休克基因内参照RNA 逆转录一聚合酶链反应 Jurkat细胞

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人IL-2Rα基因在CHO细胞中的稳定整合和表达及其应用

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中国医学科学院学报 2000年第2期22卷 130-133页

作者：程小款杜洪震张玉建高军萍衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院

目的　应用本组制备的白细胞介素 2受体 (IL- 2 R) ,建立一种既安全又简便 ,并能定量检测白细胞介素2 (IL- 2 )生物活性的方法。方法　采用 Southern印迹杂交方法 ,检测重组分泌型 IL- 2 Rα亚基 (rs IL- 2 Rα)基因在高效表达的转染细... 详细信息

目的　应用本组制备的白细胞介素 2受体 (IL- 2 R) ,建立一种既安全又简便 ,并能定量检测白细胞介素2 (IL- 2 )生物活性的方法。方法　采用 Southern印迹杂交方法 ,检测重组分泌型 IL- 2 Rα亚基 (rs IL- 2 Rα)基因在高效表达的转染细胞基因组中的稳定整合 ;以 Western免疫印迹法测定 rs IL- 2 Rα的相对分子质量 ,建立定量检测人 IL- 2生物活性的受体与抗体夹心酶联免疫吸附测定 (r EL ISA)方法。结果　 (1) Southern印迹分析表明 ,rs IL- 2 Rα基因已稳定整合到高表达的转染 CHO细胞基因组中 ;(2 ) rs IL- 2 Rα的相对分子质量为 40 0 0 0左右 ;(3)应用建立的r EL ISA方法测定人 IL- 2标准溶液结果表明 ,IL- 2的标准曲线范围为 31.2 5～ 5 0 0 .0 0 U (r=0 .9995 ) ;预先将山羊抗人 IL- 2 Ig G与 IL- 2保温后 ,所得标准曲线的斜率明显降低 (P<0 .0 5 )。结论　与传统测定 IL- 2的方法相比 ,用rs IL- 2 Rα建立的受体 -抗体夹心 r EL ISA方法不仅具有准确、特异性强及操作简便的特点 ,而且 ,所得结果直接反映了被测样品中具有结合 IL- 2 R活性的 IL-

关键词：白细胞介素-2 IL-2Rα CHO细胞稳定整合

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白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节

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基础医学与临床 2001年第4期21卷 333-335页

作者：胡晶晶李宏帆程小款衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ... 详细信息

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL

关键词：白细胞介素2受体α亚基多聚二磷酸腺核糖聚合酶细胞凋亡 T淋巴细胞

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人IL-2Rα链基因负调控元件结合蛋白的分离纯化

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基础医学与临床 1999年第6期19卷 80-85页

作者：张玉健邢光新莽锐程小款衡凤燕吴宁华沈琲中国医学科学院基础医学研究所

淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGG... 详细信息

淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGGTTTGA-143NIRS）。本组曾通过紫外交联实验发现Jurkat细胞有一种蛋白质与NIRS和NRE特异结合。本文利用肝素-亲和柱层析及序列特异DNA亲和层析认1010Jurkat细胞中获得了分子量约为75kD的NRE特异结合蛋白。EMSA实验表明，纯化后的蛋白与NRE所形成的结合物能被NIRS及HIVLTR的负调控元件所竞争，提示该NRE结合蛋白不仅可能参与IL-2Ra基因的转录调控，而且可能在HIV基因表达过程中起某种作用。

关键词： IL-2Rα链负调控元件结合蛋白 DNA 亲和层析

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人淋巴细胞IL－2Rα基因转录起始位点的研究（简报）

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中国医学科学院学报 1995年第5期

作者：衡凤燕刘觉辉沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

人淋巴细胞ＩＬ－２Ｒα基因转录起始位点的研究（简报）衡凤燕，刘觉辉，沈珝琲（中国医学科学院，中国协和医科大学，基础医学研究所，医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）白细胞介素２受体α亚基（ＩＬ－２Ｒα）是在... 详细信息

人淋巴细胞ＩＬ－２Ｒα基因转录起始位点的研究（简报）衡凤燕，刘觉辉，沈珝琲（中国医学科学院，中国协和医科大学，基础医学研究所，医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）白细胞介素２受体α亚基（ＩＬ－２Ｒα）是在抗原或丝裂原刺激下诱导性地表达于Ｔ...

关键词：起始位点基因转录 IL

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重组人分泌型IL-2Ra与IL-2结合的生物活性及其分子量的测定(简报)

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中国医学科学院学报 1997年第5期 352-352页

作者：程小款高军萍衡凤燕吴宁华沈珝琲 100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室!北京

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白细胞介素2受体α基因表达中两组近端启动子活性的研究

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中国医学科学院学报 2002年第1期24卷 40-40页

作者：程小款衡凤燕刘觉辉吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素2受体（IL-2R）的由α、β和γ三个亚基组成。其中α亚基只在激活淋巴细胞上表达，并且只能与IL-2特异性结合。因此，IL-2Rα基因的活化过程参与决定淋巴细胞增殖和免疫应答强度的调控。

关键词：启动子转录调控白细胞介素2受体α基因基因表达

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人分泌型白细胞介素－2受体αcDNA的真核基因表达（简报）

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中国医学科学院学报 1995年第4期17卷 268-268页

作者：程小款杜恺衡凤燕王劲松吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

人分泌型白细胞介素－２受体αｃＤＮＡ的真核基因表达（简报）程小款，杜恺，衡凤燕，王劲松，吴宁华，沈　（中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）在机体免疫网络中具有重... 详细信息

人分泌型白细胞介素－２受体αｃＤＮＡ的真核基因表达（简报）程小款，杜恺，衡凤燕，王劲松，吴宁华，沈　（中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）在机体免疫网络中具有重要作用的白细胞介素－２受体（ＩＬ－...

关键词：受体α 真核基因表达分泌型白细胞介素

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抗三硝基苯-人血清清蛋白McAb的制备与提纯

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中国医学科学院学报 1983年第6期 342-342页

作者：王世中陈正之张正荣衡凤燕乔梅中国医学科学院基础医学研究所中国医学科学院基础医学研究所北京

我们曾报道用可溶性蛋白(人IgD)作抗原,制备相应McAb,其融合率及阳性率均不够高。不久前我们制备了三硝基苯-人血清蛋白(TNP-HSA),并以它为抗原作杂交瘤试验,共作4块24孔培养板,结果融合率为47％(45/96),经ELISA鉴定,45孔中18孔有抗TNP-... 详细信息

我们曾报道用可溶性蛋白(人IgD)作抗原,制备相应McAb,其融合率及阳性率均不够高。不久前我们制备了三硝基苯-人血清蛋白(TNP-HSA),并以它为抗原作杂交瘤试验,共作4块24孔培养板,结果融合率为47％(45/96),经ELISA鉴定,45孔中18孔有抗TNP-HSA抗体,阳性率为40％。选出一些阳性克隆,经三次有限稀释后,获得3株较稳定的效价较高的阳性克隆。经实验可初步推论,使用强抗原时(如TNP-HSA),融合率及阳性率均有所提高。至于此3株克隆能稳定到什么程度,因时间较短(只有12个月),

关键词： McAb 融合率阳性率抗原 TNP 氨乙基纤维素硝基苯

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