本研究以裸花紫珠（Callicarpae Nudiflorae Folium，CNF）的水提取物（CNF water extract，WCNF）和醇提取物（CNF ethanol extract，ECNF）作用于HepG2.2.15细胞，体外评价CNF提取物对HBV的抑制作用，同时结合网络药理学探究CNF抗HBV...
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本研究以裸花紫珠（Callicarpae Nudiflorae Folium，CNF）的水提取物（CNF water extract，WCNF）和醇提取物（CNF ethanol extract，ECNF）作用于HepG2.2.15细胞，体外评价CNF提取物对HBV的抑制作用，同时结合网络药理学探究CNF抗HBV的潜在作用机制。体外实验采用CCK-8法测定CNF提取物对细胞的毒性；酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法检测乙型肝炎病毒e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）和乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）分泌量，实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-PCR）法测定乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA及关键靶点基因表达量。通过文献调研、TCMSP数据库检索CNF化学成分、Gene Cards数据库检索HBV相关靶点开展网络药理学研究；运用String数据库构建蛋白互作网络，DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析，Cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络可视化并进行拓扑学分析，AutoDock Vina软件进行CNF抗HBV关键成分与核心靶点的分子对接分析，并通过RT-PCR实验对关键靶点进行实验验证。体外实验结果表明CNF水醇提取物均可抑制HbeAg和HBsAg的分泌量，抑制HBV DNA的复制水平，并且水提物的抑制作用明显地强于醇提物。网络药理学结果显示，熊果酸、槲皮素、木犀草素、咖啡酸等化合物为CNF抗HBV的关键活性成分，肿瘤蛋白53（tumor protein 53，TP53）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、热休克蛋白90Alpha家族A类成员1（heat shock protein 90 alpha family class A member 1，HSP90AA1）为核心靶点，涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase /protein kinase B，PI3K/AKT）、丝裂原蛋白活化激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）等信号通路。此外，实验结果显示CNF提取物可抑制HBV关键基因IL-6、TNF及HSP90AA1表达并提高TP53基因的mRNA表达水平。以上研究揭示了CNF通过多成分、多靶点、多途径发挥抗HBV的作用。后续将以本研究为基础，进一步对其药效物质基础及作用机制进行深入探讨，为CNF抗HBV的临床应用及新药开发提供坚实的理论依据。
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