检索结果-内蒙古大学图书馆

有机化学 2020年第11期40卷 3828-3836,M0011页

作者：范亚飞张鄂郭恒牟柠陈单丹王文贵王守锋刘文济南大学化学化工学院山东省氟化学化工材料重点实验室济南250022 中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室上海200032 中国科学院上海有机化学研究所湖州生物制造中心浙江湖州313000

那西肽(NOS)是硫肽类抗生素的典型代表,具有非常好的抗菌活性,但水溶性差以及生物利用度低等问题限制了其临床上的应用.由于其结构复杂,采用化学全合成方式获得理化性质改善的类似物难以进行.在前期那西肽生物合成研究的基础上,以侧环3... 详细信息

那西肽(NOS)是硫肽类抗生素的典型代表,具有非常好的抗菌活性,但水溶性差以及生物利用度低等问题限制了其临床上的应用.由于其结构复杂,采用化学全合成方式获得理化性质改善的类似物难以进行.在前期那西肽生物合成研究的基础上,以侧环3-甲基-2-吲哚酸(MIA)类似物作为化学探针,通过探针分子与突变株共同发酵并结合发酵产物的高分辨质谱数据,探究了那西肽生物合成酶的底物容忍度.研究结果表明,那西肽生物合成酶对F, Cl, CH3取代的MIA类似物有一定的耐受能力,对大位阻取代基(NO2, CF3, Ph)的MIA类似物不能耐受,同时MIA上取代基团的结构大小和性质也影响了NOS生物合成途径中相关酶蛋白对其识别、转运和上载等步骤.不仅探究了NOS生物合成途径中相关酶蛋白的底物容忍度,有望通过生物合成途径工程获得NOS的类似物;同时为采用酶的定向进化技术以改善NOS生物合成过程中限速步骤酶的底物容忍度,拓展利用NOS产生菌获得更多类似物提供了借鉴.

关键词：那西肽 3-甲基-2-吲哚酸突变生物合成:化学小分子探针酶底物容忍度

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宫内发育迟缓对生长猪肠道形态、消化吸收功能及抗氧化能力的影响

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家畜生态学报 2020年第8期41卷 37-44页

作者：陈亚楠张玉莹张昊程康李思勉张莉莉王恬南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

为研究宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)对生长猪肠道形态、消化吸收功能及抗氧化能力的影响,该试验从30窝新生仔猪中选择了正常初生重(normal birth weight,NBW)和IUGR雄性仔猪各30头。所有仔猪断奶前自由哺乳,断... 详细信息

为研究宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)对生长猪肠道形态、消化吸收功能及抗氧化能力的影响,该试验从30窝新生仔猪中选择了正常初生重(normal birth weight,NBW)和IUGR雄性仔猪各30头。所有仔猪断奶前自由哺乳,断奶后分为NBW组和IUGR组,饲喂相同的商品日粮,每组6重复,每重复5头仔猪。90日龄时,每重复随机选择1头试验猪进行屠宰采样。结果显示:(1)与NBW组相比,IUGR显著降低了生长猪空肠绒毛表面积和回肠绒毛高度(P<0.05);(2)与NBW生长猪相比,IUGR生长猪空肠食糜脂肪酶活性显著降低(P<0.05);(3)同时,IUGR生长猪空肠黏膜麦芽糖酶、回肠黏膜蔗糖酶、碱性磷酸酶和Na^+/K^+-ATP酶活性也显著低于NBW生长猪(P<0.05);(4)与NBW组相比,IUGR显著升高了空肠黏膜丙二醛含量,显著降低了空肠、回肠黏膜总超氧化物歧化酶活性(P<0.05);(5)IUGR导致生长猪空肠和回肠黏膜钠/葡萄糖共转运载体1、超氧化物歧化酶2及空肠黏膜超氧化物歧化酶1转录水平明显减少(P<0.05)。上述结果表明,IUGR对90日龄生长猪肠道形态、消化吸收功能及抗氧化能力具有负面影响。

关键词：宫内发育迟缓生长猪肠道组织形态消化吸收功能抗氧化能力

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核仁素在兔出血症病毒感染与复制中的作用

核仁素在兔出血症病毒感染与复制中的作用

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作者：朱杰中国农业科学院

学位级别：博士

兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）为杯状病毒科的重要成员,对多个品种兔均具有高度致病性和致死性。长期以来,由于缺乏稳定的体外培养细胞系,RHDV生命过程中的许多分子机制尚不清楚。核仁素（Nucleolin,NCL）为... 详细信息

兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）为杯状病毒科的重要成员,对多个品种兔均具有高度致病性和致死性。长期以来,由于缺乏稳定的体外培养细胞系,RHDV生命过程中的许多分子机制尚不清楚。核仁素（Nucleolin,NCL）为宿主重要的多功能蛋白,我们前期的研究发现NCL可能参与RHDV的生命过程。鉴于此,本论文综合利用分子生物学方法和基因工程技术,系统研究了NCL在RHDV感染和复制中的作用及其分子机制。主要研究内容如下:（1）利用抑制剂及siRNA干扰技术,我们发现NCL在RHDV内化过程中发挥关键作用。然后,我们证明了NCL通过其N端结构域与RHDV衣壳蛋白（VP60）的保守区域DVN肽(472Asp-Val-Asn474)段特异性的相互作用。随后,利用人工合成的DVN肽阻断VP60与NCL之间的结合后,病毒的内化效率明显降低。此外,本研究还发现NCL与网格蛋白轻链（Clathrin light chain A,CLTA）特异性结合,进而参与网格蛋白依赖的内吞作用。动物实验结果表明,DVN多肽可以保护大部分实验兔免受RHDV感染。上述研究结果表明NCL通过网格蛋白依赖的内吞作用介导RHDV的内化过程。（2）利用RHDV复制子系统和蛋白亲和纯化技术,我们成功分离并鉴定了RHDV复制复合物（RC）的主要成分,发现NCL与病毒蛋白（RdRp、p16和p23）参与病毒RC的形成。随后,我们证明了RdRp与病毒其他非结构蛋白不存在相互作用,而是通过NCL间接结合p16和p23病毒蛋白以及其他宿主蛋白,进而形成RC。同时,我们成功鉴定了RdRp、p16和p23与NCL相互作用的活性区域分别位于RdRp（第448-478位肽段）、p16(35Cys-Ile-Arg-Ala38肽段)和p23（第90-145位肽段）。此外,利用人工合成的RdRp多肽和p16多肽阻断NCL与病毒非结构蛋白的结合,我们发现RHDV的复制水平均显著降低。上述研究结果表明,NCL在RHDV RC的形成过程中发挥关键的桥梁作用。（3）我们发现RHDV感染后宿主NCL的转录水平显著提高,而蛋白水平并无明显变化。同时,我们发现NCL通过与组蛋白去乙酰化酶2（Histone deacetylase 2,HDAC2）结合,发生去乙酰化,随之被泛素化降解。我们还发现HDAC2对RHDV具有抗病毒作用,病毒的复制水平与HDAC2的活性呈负相关性。此外,本研究还发现RHDV利用p16与HDAC2特异性结合降低HDAC2的去乙酰化酶活性。以上结果表明,HDAC2通过诱使NCL去乙酰化,导致其被泛素化途径降解,进而抑制RHDV的复制,而RHDV则利用p16蛋白拮抗HDAC2的抗病毒作用。综上所述,本论文首次发现RHDV通过劫持NCL完成入侵细胞的内化过程。同时,我们还发现NCL在RHDV复制复合体的形成过程中发挥关键的桥梁作用。此外,本研究还发现宿主蛋白HDAC2对RHDV具有抗病毒作用。上述研究成果使我们进一步认识了RHDV感染和复制的分子机制,为该病毒的防控提供了重要的理论基础。

关键词：核仁素兔出血症病毒感染复制组蛋白去乙酰化酶2

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结核分枝杆菌rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其粘附特性的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 199-202页

作者：李华芳曹俊刘松艳陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细... 详细信息

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细胞)互作,通过激光共聚焦显微镜观察到蛋白对细胞的特异性粘附。为进一步验证该试验结果,将rv0394c基因克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒p MV262中,将重组质粒电转化于非致病性的耻垢分枝杆菌中进行表达。构建的重组菌与A549细胞进行互作,结果表明重组菌可以粘附于A549细胞表面,而且这种粘附能够被RV0394c重组蛋白所阻断,这些结果表明RV0394c蛋白具有粘附细胞的能力,属于该菌的粘附蛋白之一。RV0394c蛋白粘附特性的鉴定为进一步研究该蛋白在致病性中的作用提供了实验依据。

关键词：结核分枝杆菌 rv0394c基因 pMV262 耻垢分枝杆菌粘附

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基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器

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分析化学 2012年第6期40卷 852-856页

作者：张洪才刘春燕刘国艳陈小连叶雨丹王艺如柴春彦上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室

利用免疫竞争抗制原理制备检测盐酸克伦特罗的免疫纳米金试纸条,盐酸克伦特罗与CLB-BSA复合物竞争性结合胶体金上抗体的有限位点,从而使试纸条上的检测带显色减弱或消失。将显色后的试纸条插入自行研制的光电型传感器的测试孔内,根据反... 详细信息

利用免疫竞争抗制原理制备检测盐酸克伦特罗的免疫纳米金试纸条,盐酸克伦特罗与CLB-BSA复合物竞争性结合胶体金上抗体的有限位点,从而使试纸条上的检测带显色减弱或消失。将显色后的试纸条插入自行研制的光电型传感器的测试孔内,根据反射光的强弱计算出克伦特罗的浓度。结果表明:用光电传感方法检测盐酸克伦特罗的线性范围为1～10μg/L,检出限为0.05μg/L,回收率为85.5%～96.0%。此光电型传感器检测克伦特罗具有简便、快速、灵敏、特异性强的优点。

关键词：盐酸克伦特罗光电型传感器免疫胶体金试纸条猪尿

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多壁碳纳米管和分子印迹膜修饰电极检测猪尿液中莱克多巴胺

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分析化学 2012年第1期40卷 95-100页

作者：张洪才刘国艳商璟翁芝莹柴春彦上海交通大学农业与生物学院上海兽医生物技术重点实验室

采用原位热聚合技术,分别以多壁碳纳米管(MWCNs)和分子印迹膜(MIM)修饰丝网印刷电极(SPE),与多壁碳纳米管和非分子印迹膜(NIM)修饰的丝网印刷电极组合在一起,并将其组合的丝网印刷电极通过电极插口与便携式电导仪相连接,组装成检测莱克... 详细信息

采用原位热聚合技术,分别以多壁碳纳米管(MWCNs)和分子印迹膜(MIM)修饰丝网印刷电极(SPE),与多壁碳纳米管和非分子印迹膜(NIM)修饰的丝网印刷电极组合在一起,并将其组合的丝网印刷电极通过电极插口与便携式电导仪相连接,组装成检测莱克多巴胺残留的电导型传感器,优化检测条件,并建立了检测莱克多巴胺的标准曲线,测试了实际猪尿样中莱克多巴胺的含量。通过扫描电镜分析了该分子印迹膜的表征结构。结果表明,在莱克多巴胺分子印迹膜表面形成了大量印迹微孔。本传感器装置检测莱克多巴胺具有很高的灵敏度和特异性,检出限为0.033 mg/L,线性范围为0.33～8.0 mg/L,基于猪尿样的检测回收率达到91%～98%,可实现现场快速检测。

关键词：多壁碳纳米管莱克多巴胺分子印迹膜电导型传感器

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分子印迹固相萃取和丝网印刷电极联用技术检测猪尿中盐酸克伦特罗

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上海交通大学学报（农业科学版） 2012年第3期30卷 25-30,44页

作者：张洪才叶雨丹刘国艳柴春彦上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

实验采用本体热聚合的方式合成盐酸克伦特罗的分子印迹物(molecularly imprintedpolymers,MIPs),通过扫描电镜、吸附实验和分子印迹固相萃取研究该印迹材料的性能。用盐酸克伦特罗分子印迹材料作为固相萃取剂,优化固相萃取条件,采用差... 详细信息

实验采用本体热聚合的方式合成盐酸克伦特罗的分子印迹物(molecularly imprintedpolymers,MIPs),通过扫描电镜、吸附实验和分子印迹固相萃取研究该印迹材料的性能。用盐酸克伦特罗分子印迹材料作为固相萃取剂,优化固相萃取条件,采用差分脉冲伏安法(DPV)对洗脱液进行电化学性能测试。结果表明,此印迹物的平衡吸附常数(b)为5.14mL/mol,电化学传感器的电流值与盐酸克伦特罗的浓度在0.056～2.78mg/L浓度范围内呈现良好的线性关系,检测下限为0.005mg/L,盐酸克伦特罗在猪尿样品中的回收率为89.3%～99.6%。此萃取方法也呈现出良好的选择性和稳定性。

关键词：盐酸克伦特罗分子印迹技术固相萃取丝网印刷电极电化学传感器

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检测猪肉中地西泮的分子印迹仿生传感器的研制

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分析化学 2010年第5期38卷 683-687页

作者：刘晓芳姚冰刘国艳柴春彦上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室

在一次性丝网印刷电极上原位制备地西泮的分子印迹膜,将丝网印刷电极通过电极插口与便携式电导仪相连接,组装成检测地西泮残留的电导型传感器,建立了检测地西泮的标准曲线并测试了实际肉类样品中的地西泮含量。通过扫描电镜分析了该膜... 详细信息

在一次性丝网印刷电极上原位制备地西泮的分子印迹膜,将丝网印刷电极通过电极插口与便携式电导仪相连接,组装成检测地西泮残留的电导型传感器,建立了检测地西泮的标准曲线并测试了实际肉类样品中的地西泮含量。通过扫描电镜分析了该膜的表征,与非印迹膜相比,印迹膜表面形成了大量印迹微孔。本传感器装置对地西泮具有很高的灵敏度和特异性,检出限为0.008mg/L,线性范围为0.039～1.25mg/L,基于肉品的检测回收率为91.3%～95.0%,可实现现场快速检测。

关键词：地西泮分子印迹膜电导型传感器

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微生物源性抗氧化剂对大鼠抗氧化及损伤修复的作用

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中国饲料 2010年第22期 11-15页

作者：陈小连孙婷婷徐建雄上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室

本试验以脂多糖(LPS)致氧化损伤大鼠为模型,研究微生物源性抗氧化剂对大鼠生长性能、脏器系数、抗氧化及损伤修复的作用。将64只70日龄SD大鼠随机分成4组,每组16只,雌雄对半。对照组和损伤模型组饲喂基础日粮,抗氧化剂组和损伤修复组饲... 详细信息

本试验以脂多糖(LPS)致氧化损伤大鼠为模型,研究微生物源性抗氧化剂对大鼠生长性能、脏器系数、抗氧化及损伤修复的作用。将64只70日龄SD大鼠随机分成4组,每组16只,雌雄对半。对照组和损伤模型组饲喂基础日粮,抗氧化剂组和损伤修复组饲喂基础日粮并添加0.8 mL/d.只微生物源性抗氧化剂。损伤模型组和损伤修复组腹腔注射LPS 1 mg/kg,对照组和抗氧化剂组注射等量的生理盐水,试验期22 d。结果显示,与对照组相比,抗氧化剂显著增加大鼠日增重,提高血清超氧化物岐化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量和一氧化氮(NO)水平(P<0.05),对脏器系数影响不显著。与损伤模型组相比,损伤修复组可提高大鼠抗氧化性能,修复损伤使大鼠抗氧化性能恢复至对照组水平,表明微生物源性抗氧化剂具有提高大鼠抗氧化性能、修复机体氧化损伤的作用。

关键词：微生物源性抗氧化剂氧化损伤自由基代谢大鼠

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上海屠宰样品中猪链球菌感染率调查研究

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国外畜牧学（猪与禽） 2010年第3期30卷 64-65页

作者：杨筱薇郑升博王开功周碧君文明袁聪俐杨志彪崔立贵州大学动物科学学院动物疫病研究所贵州贵阳550001 上海交通大学农业与生物学院人兽共患病与比较医学上海200240

采集上海地区屠宰场中扁桃体样品,进行猪链球菌分离。按照染色特性及PCR鉴定阳性细菌。根据CPS基因采用PCR方法进行2、7及9血清型鉴定工作,并检测分离株毒力因子携带情况。结果证实在231份样品中共确定24份猪链球菌,其中2型10株、7型3株... 详细信息

采集上海地区屠宰场中扁桃体样品,进行猪链球菌分离。按照染色特性及PCR鉴定阳性细菌。根据CPS基因采用PCR方法进行2、7及9血清型鉴定工作,并检测分离株毒力因子携带情况。结果证实在231份样品中共确定24份猪链球菌,其中2型10株、7型3株、9型2株,其余血清型待定。

关键词：猪链球菌屠宰样品毒力因子

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