目的探讨曲古霉素A(trichostatin A,TSA)在ICR(Institute of Cancer Research,ICR)小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)向肝细胞体外分化中的作用。方法分离培养正常小鼠mBMMSCs,流式细胞仪检测mBM-MSCs...
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目的探讨曲古霉素A(trichostatin A,TSA)在ICR(Institute of Cancer Research,ICR)小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)向肝细胞体外分化中的作用。方法分离培养正常小鼠mBMMSCs,流式细胞仪检测mBM-MSCs表面抗原,实时荧光定量PCR检测肝细胞特异性基因甲胎蛋白(!-fetoprotein,AFP)和白蛋白(albumin,ALB),生化分析仪测定尿素分泌量,高碘酸-希夫反应测定肝细胞合成与储存糖原能力;检测TSA处理前后mBM-MSCs增殖、细胞周期和染色质结构的变化,Western blot测定mBM-MSCs组蛋白3(Histone 3,H3)和组蛋白4(Histone 4,H4)乙酰化程度改变。结果分离所得mBM-MSCs细胞表面CD44、CD73、SCA-1呈阳性反应,部分细胞CD90、CD105、STRO-1呈阳性反应,CD11b和CD45呈阴性反应;与未添加TSA组比较,诱导7d后,TSA处理组中AFP明显增高(P<0.05),ALB和尿素分泌量开始增多,继续诱导14和21d后,TSA处理组中ALB分别为(0.52±0.08)和(0.92±0.08),呈明显升高(均P<0.05),尿素分泌量分别为(0.23±0.02)mmol/L和(0.36±0.03)mmol/L,也呈明显升高(均P<0.05),且细胞储存的糖原更加丰富,而AFP水平逐渐下降;经TSA处理后,TSA浓度越大对mBM-MSCs增殖的抑制效应越强,细胞处于G0/G1期的比例明显增加,细胞核中异染色质的状态由浓缩、密集变为散状、疏松;Western blot结果显示2.0mmol/L TSA处理后mBM-MSCs组蛋白H3和H4的乙酰化水平显著增加(均P<0.05)。结论 TSA能够阻断mBM-MSCs组蛋白H3和H4的去乙酰化,打破组蛋白乙酰化的平衡状态,解除转录抑制,从而促进转录,提高其向肝细胞分化的效率。
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