目的:观察蛛网膜下腔出血后脑组织中EphA4的表达及其对大脑白质损伤的影响,初步探索EphA4对蛛网膜下腔出血后脑组织中炎症因子表达的影响。方法:1)将6-8周雄性SD大鼠随机分为正常组(Normal)、空病毒组(Vehicle)、EphA4慢病毒敲减组1(EphA4 si RNA1)、EphA4慢病毒敲减组2(EphA4 si RNA2)和EphA4慢病毒敲减组3(EphA4 si RNA3)共5组,通过侧脑室注射慢病毒后3周,采用冰冻切片检测病毒转染情况;通过免疫印迹(Western blot,WB)检测脑组织中EphA4表达,筛选敲减效率最佳慢病毒行后续实验。2)将6-8周雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、蛛网膜下腔出血组(SAH)、蛛网膜下腔出血+空病毒组(SAH Vehicle)和蛛网膜下腔出血+EphA4敲减2组(SAH EphA4si RNA2)共4组,通过颈内动脉穿刺法构建蛛网膜下腔出血大鼠模型,造模成功后24小时采用改良加西亚(Modified Garcia)和平衡木(Beam Balance)评分法评估大鼠蛛网膜下腔出血后神经功能情况;通过Western blot检测各组EphA4、MAG、MBP、TNF-α及IL-1β的表达;免疫荧光(Immunofluorescence,IF)检测各组中胼胝体区MAG和MBP表达;LFB分别观察各组胼胝体区髓鞘损伤情况。结果:1.验证慢病毒敲减效率:大鼠侧脑室定位注射EphA4敲减慢病毒后,通过Western blot检测脑组织中EphA4表达情况,发现EphA4 si RNA2组EphA4表达量最低(P<0.05)。2.动物行为学观察结果:SAH后各组神经功能评分均较Sham组下降,而下调EphA4表达后,同SAH Vehicle组相比,SAH EphA4 si RNA2组Modified Garcia评分和Beam Balance评分明显升高(P<0.05)。*** blot检测结果:与Sham组比较,SAH后大鼠脑组织中EphA4、TNF-α和IL-1β明显升高(P<0.05),MBP和MAG明显减少(P<0.05);与SAH Vehicle组比较,SAH EphA4 si RNA2组大鼠脑组织中EphA4、TNF-α和IL-1β降低(P<0.05),MBP和MAG升高(P<0.05);而SAH组和SAH Vehicle组中EphA4、TNF-α、IL-1β、MBP和MAG表达相当,差异无统计学意义(P>0.05)。***染色:除Sham组无明显髓鞘缺失征象外,SAH组和SAH Vehicle组大鼠存在明显神经髓鞘缺失,敲减EphA4表达后髓鞘损伤相对减轻(P<0.05)。5.免疫荧光结果:发现SAH组和SAH Vehicle组大鼠胼胝体区MAG和MBP的表达水平相当且均下降(P<0.01),而在SAH EphA4 si RNA2组中表达增多(P<0.05)。结论:SAH后EphA4在大鼠脑组织中异常高表达,参与了SAH后大脑白质损伤并且促进了炎症因子的表达。
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