检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2022年第1期38卷 139-148页

作者：李伯阳赵艳玲田玉玲李慧莹章青李丹地孙利伟庞立丽裴银辉段招军华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山063000 长春市儿童医院长春130021 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起急性肠胃炎的主要病原体,分析RV感染患者的人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)有利于探讨人PBMC在清除RV中的作用。为此,本研究采集2019年2月-2019年6月长春儿童医院中RV感染患者和健康儿童血液,分离PBMC,通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术比较RV感染患者与健康儿童之间的RNA表达图谱,借助基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集分析DEGs,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术进行验证。结果显示,与健康对照组相比,RV感染轻症患者PBMC中有1619个DEGs;重症患者PBMC中有2816个DEGs,主要与干扰素(Interferon,IFN)反应、中性粒细胞、溶酶体、核小体、染色质等相关。qPCR验证轻症患者干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)15表达上调,白介素(Interleukin,IL)1β表达下调;重症患者IL15、ISG15表达上调,IL1β表达下调,与转录组结果相一致。本研究提示,RV感染可能激活人I型和II型IFNs反应抵御病毒感染,但也会抑制溶酶体相关基因,对细胞自噬过程产生影响。

关键词：轮状病毒(RV) 外周血单个核细胞(PBMC) RNA-Seq 差异表达基因(DEGs) 免疫反应

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人乳寡糖的分离制备及其在婴儿配方粉中的含量分析研究

人乳寡糖的分离制备及其在婴儿配方粉中的含量分析研究

引用

作者：李欣大连医科大学

学位级别：硕士

人乳一直被认为是婴儿最佳的食物来源,也是婴儿配方粉的黄金标准。其中,人乳寡糖(Human milk oligosaccharides,HMOs)是仅次于乳糖和脂肪的第三大固体组分,在促进婴儿肠道菌群生长、完善免疫系统功能和抵抗病原体侵染过程中发挥着不可... 详细信息

人乳一直被认为是婴儿最佳的食物来源,也是婴儿配方粉的黄金标准。其中,人乳寡糖(Human milk oligosaccharides,HMOs)是仅次于乳糖和脂肪的第三大固体组分,在促进婴儿肠道菌群生长、完善免疫系统功能和抵抗病原体侵染过程中发挥着不可替代的作用。然而,HMOs结构复杂,异构体众多且含量差异大,这些都对人乳结构与功能关系的研究造成了巨大的困难。因此,开发人乳寡糖合适的分离、纯化和结构表征方法尤为重要。婴儿配方粉一般以成熟的牛乳为原料,缺少人乳中普遍存在的绝大部分HMOs,只含有极低含量的唾液酸化寡糖,如3′-唾液酸乳糖(3′-Sialyllactose,3′-SL)和6′-唾液酸乳糖(6′-Sialyllactose,6′-SL)。随着HMOs生物合成技术的发展,为了更好的模拟人乳以满足婴儿成长发育中的需要,在美国和欧盟2′-岩藻糖乳糖(2′-Fucosyllactose,2′-FL)和乳-N-新四糖(Lacto-N-neotetraose,LNn T)已获批添加到婴儿配方粉中。因此,需要开发合适的方法来对婴儿配方粉中的HMOs进行准确的定性、定量分析。本文首先采用多维液相色谱,从人乳中纯化制备得到人乳寡糖后进行详细的结构解析,其次,开发了一种在线HILIC-HILIC方法测定婴儿配方粉中四种人乳寡糖的含量。主要研究内容和结果如下:1.采用多维液相色谱从人乳中分离制备得到34个寡糖单体,其中24个中性人乳寡糖是从聚合度为6-8的二维分离产物中纯化获得,包括IFLNH-III/MFLNH-III/MFLNH-I/MFLNn H等系列同分异构体;酸性人乳寡糖共10个,它们是从一维分离产物中纯化获得,包括3′-SL/6′-SL、LST-a/LST-b/LST-c等系列同分异构体。采用电喷雾-四极杆-飞行时间质谱法(ESI-Q/TOF-MS)对获得的部分人乳寡糖进行了详细的结构解析,并对其中的同分异构体进行了区分。以上结果为复杂人乳寡糖异构体的分离纯化、结构解析及新型寡糖结构的发现提供了理论依据。2.为了实现婴儿配方粉中人乳寡糖快速、准确地测定,我们开发了一种在线HILIC-HILIC的方法来对婴儿配方粉中4种人乳寡糖进行含量分析,其中包括添加的高含量寡糖:2′-FL和LNn T,以及牛乳中内源性的低含量寡糖:3′-SL和6′-SL。通过改进寡糖的提取方法和2-氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生化标记,将4种人乳寡糖匹配到两个平行的亲水作用色谱柱进行分离,再分别用紫外和荧光检测器进行检测,解决了寡糖含量差异大而难以同时定量的问题。该分析技术不但可应用于当下不同品牌婴儿配方粉中3′-SL和6′-SL的测定,也可以应用于添加各种不同HMOs的新型婴儿配方粉中寡糖快速、准确的定量。

关键词：人乳寡糖分离纯化结构解析婴儿配方粉

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GII.26型诺如病毒的组织血型抗原结合特征

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病毒学报 2021年第6期37卷 1310-1316页

作者：李涵博丛鑫段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 深圳市第二人民医院深圳市神经外科重点实验室深圳518037

诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起全球急性胃肠炎的常见病原。组织血型抗原(Histo-blood groups antigens,HBGAs)是NoVs黏附因子(受体),能促进病毒感染宿主细胞。NoVs主要衣壳蛋白突出(Protruding,P)区是与HBGAs结合的关键结构域。本... 详细信息

诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起全球急性胃肠炎的常见病原。组织血型抗原(Histo-blood groups antigens,HBGAs)是NoVs黏附因子(受体),能促进病毒感染宿主细胞。NoVs主要衣壳蛋白突出(Protruding,P)区是与HBGAs结合的关键结构域。本研究构建了非流行毒株GII.26型NoVs P区的原核表达重组质粒,以谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione s-transferase,GST)亲和层析纯化P蛋白,人鼻病毒的3C蛋白酶去掉GST标签,通过酶联免疫吸附实验探索P蛋白与HBGAs相互作用的特点,借助同源结构模拟以及结构重叠分析其与相应糖分子之间可能存在的对接位点。结果表明,P蛋白可与包括A型、B型、AB型、O型和非分泌型的215种唾液中的大部分发生结合,但只与19种寡糖中的H双糖结合;模拟的GII.26 P单体的空间构象与GII.17类似,可通过糖结合位点的5个氨基酸与H双糖特异性结合。本研究阐明了GII.26 P蛋白与HBGAs的结合特征及潜在分子机制,为进一步揭示GII.26 NoVs可能的流行趋势及研发潜在抗病毒药物奠定一定的基础。

关键词：诺如病毒(NoVs) P蛋白组织血型抗原(HBGAs) 受体

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神经节苷脂单体制备及结构表征

神经节苷脂单体制备及结构表征

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作者：张华林湖北民族大学

学位级别：硕士

目的:开发一种快速、稳定的离线多维色谱分离纯化方法,用于神经节苷脂的单体制备,开展神经节苷脂类物质的质谱解析规律研究,为神经节苷脂的结构解析奠定基础。方法:在单体的分离纯化方面,以实验室自主研发的X5H色谱柱,采用不同极性的溶... 详细信息

目的:开发一种快速、稳定的离线多维色谱分离纯化方法,用于神经节苷脂的单体制备,开展神经节苷脂类物质的质谱解析规律研究,为神经节苷脂的结构解析奠定基础。方法:在单体的分离纯化方面,以实验室自主研发的X5H色谱柱,采用不同极性的溶剂进行洗脱,实现了按照唾液酸数量的不同依次分级分离的效果,最终获得了GA(去唾液酸神经节苷脂)、GM(单唾液酸神经节苷脂)、GD(双唾液酸神经节苷脂)、GT(三唾液酸神经节苷脂)、GQ(四唾液酸神经节苷脂)等一维产物。对分级分离获得的一维产物采用自制的C8HC反相色谱填料进行二维纯化,最终获得了一系列的神经节苷脂单体。在单体结构表征方面,利用神经节苷脂的对照品,总结出神经节苷脂二级质谱断裂规律,并将其应用到制备的单体化合物中开展了结构解析工作;在神经节苷脂糖链母核鉴定方面,首先通过化学降解方法去掉脂链结构获得糖链结构,而后采用酶解方式除去糖链结构中的唾液酸获得糖链母核结构,通过与不同的糖链母核对照品色谱及质谱的比对,对单唾液酸神经节苷脂的组成及含量进行深度分析。结果:采用离线二维色谱分离纯化的方法,最终获得了28个神经节苷脂单体。利用对照品总结了质谱断裂规律,并依据此规律对获得的单体开展了结构解析工作。在神经节苷脂糖链母核鉴定中,通过与不同的糖型结构对照品比对,发现在GM1糖链母核中存在两种不同的糖型结构(Ganglio型和Neolacto型),其比例为98.2:1.8。结论:本论文针对神经节苷脂分离纯化和结构鉴定的难点问题,设计并应用多维色谱方法制备了神经节苷脂化合物,利用质谱方法对单体结构和糖链母核开展深入分析。本论文实验结果为神经节苷脂的纯化和结构表征提供了新的思路和手段,对神经节苷脂的物质基础研究具有重要的意义。

关键词：神经节苷脂多维色谱单体分离质谱鉴定

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