检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：石瑜天津医科大学

学位级别：博士

目的:阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)的特征是睡眠中反复发生间歇性低氧血症和微觉醒,症状包括明显过度的白天嗜睡和认知缺陷。OSA有许多合并症,主要包括心血管疾病和2型糖尿病(T2DM)。认知功能障碍是T2DM的并发症之一,海马神经元凋亡是其主... 详细信息

目的:阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)的特征是睡眠中反复发生间歇性低氧血症和微觉醒,症状包括明显过度的白天嗜睡和认知缺陷。OSA有许多合并症,主要包括心血管疾病和2型糖尿病(T2DM)。认知功能障碍是T2DM的并发症之一,海马神经元凋亡是其主要病理机制。OSA合并T2DM对海马神经元和认知功能的影响尚不清楚。在中枢神经系统(CNS),低氧、高糖(HG)等物理刺激可诱导小胶质细胞活化,释放炎症介质。海马对低氧、HG、炎症等刺激最为敏感,可致海马神经元损伤,甚至凋亡,并最终引起认知缺陷的发生。然而小胶质细胞激活与海马神经元损伤之间的关系所涉及的相关机制尚未明确。高迁移率组蛋白B1(HMGB1)是一种非组蛋白DNA结合蛋白,可以从坏死细胞被动释放或从炎症细胞主动分泌至细胞外环境以引发炎症反应。作为一种损伤相关分子模式,细胞外HMGB1可能与小胶质细胞膜表面模式识别受体结合,如晚期糖基化终产物(RAGE)和Toll样受体(TLR)4等,导致促炎巨噬细胞或小胶质细胞表型,并介导各种细胞反应,包括细胞趋化运动和促炎细胞因子的释放(如TNF和IL-1)等。在间歇低氧(IH)合并HG(IH+HG)的刺激下HMGB1在神经炎症及神经元凋亡方面所扮演的角色尚未知晓。本研究以暴露于IH的T2DM动物模型KK-Ay小鼠和IH+HG处理的HT22海马神经元及BV2小胶质细胞为研究对象,以体内实验和体外实验两个方面互相验证,旨在探讨:***暴露对T2DM小鼠认知功能的影响;***暴露对T2DM小鼠海马神经元和小胶质细胞以及IH+HG暴露对HT22和BV2细胞的影响及相关机制;***1在BV2和HT22细胞共培养时发挥的作用及相关机制。方法:1.构建OSA合并T2DM疾病重叠动物模型。以C57BL/6(C57)小鼠为健康对照(NC)组,IH暴露的C57小鼠为IH组,KK-Ay小鼠为T2DM组,IH暴露的KK-Ay小鼠为IH+T2DM组。暴露结束后,对各组小鼠进行Morris水迷宫测试,测量实验小鼠海马功能的神经生物学参数,评估空间学习和记忆功能。2.各组小鼠暴露结束后,取海马组织,检测神经炎症与凋亡。应用TUNEL染色观察各组小鼠海马冰冻切片中神经元凋亡情况,同时采用DUFH-DA法检测海马组织中活性氧(ROS)水平;应用免疫荧光分析海马冰冻切片中小胶质细胞表型变化;通过western blot法定量分析海马组织中cleaved-caspase-3,p-Akt,p-GSK-3β,activeβ-catenin等凋亡相关蛋白以及iNOS,CD206,NF-κB-p65,TNF-α,IL-1β等炎症相关蛋白表达情况。对BV2及HT22细胞分别进行体外单独培养和transwell共培养。将BV2细胞分为NC组,HG组和IH+HG组,采用免疫荧光分析BV2细胞表型变化;检测各组BV2细胞内ROS水平;通过western blot法定量分析各组BV2细胞中iNOS,CD206,NF-κB-p65,TNF-α,IL-1β等炎症相关蛋白表达情况。将HT22细胞分为NC组,HG组和IH+HG组,以及Co-culture-NC组,Co-culture-HG组和Co-culture-IH+HG组,检测各组HT22细胞内ROS水平;通过western blot法定量分析各组HT22细胞中cleaved-caspase-3,p-Akt,p-GSK-3β,activeβ-catenin等凋亡相关蛋白表达情况。3.将BV2细胞分为NC组,HG组和IH+HG组,应用实时定量聚合酶链式反应(real time PCR)检测各组BV2细胞中HMGB1 mRNA的表达;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组BV2细胞培养基中HMGB1蛋白分泌情况;通过western blot法定量分析各组BV2细胞中加入HMGB1 siRNA后HMGB1蛋白表达水平。将HT22细胞分为NC组,IH+HG组,Co-culture(IH+HG)组,Co-culture(IH+HG)+HMGB1 siRNA组,应用TUNEL染色观察各组HT22细胞凋亡情况;通过western blot法定量分析HMGB1siRNA转染后共培养的HT22细胞中cleaved-caspase-3及BV2细胞中NF-κB-p65的蛋白表达情况。结果:一、IH暴露对T2DM小鼠认知功能的影响:1.在Morris水迷宫测试中,四个实验组在游泳速度上没有差异(P>0.05)。2.T2DM组和IH组之间的逃避潜伏期没有差异(P>0.05),但均高于NC组(P<0.05)。IH+T2DM组比T2DM组具有更长的逃避潜伏期(P<0.05)。3.T2DM组和IH组之间的平台穿越次数和在第四象限中花费的时间百分比没有差异(P>0.05),但

关键词： HMGB1 小胶质细胞激活海马神经元凋亡认知功能障碍间歇低氧 2型糖尿病阻塞性睡眠呼吸暂停

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基于微滴式数字PCR技术的甲型流感病毒绝对定量方法的建立及应用

引用

病毒学报 2017年第1期33卷 1-5页

作者：冯兆民赵翔邹晓辉朱闻斐陈永坤王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织全球流感参比和研究合作中心感染性疾病诊治协同创新中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

数字PCR(Digital PCR,dPCR)是核酸绝对定量的新方法,然而,基于dPCR的甲型流感病毒(Influenza A virus,FluA)绝对定量方法还未系统建立。本研究首先对微滴式dPCR的退火温度进行了梯度优化,确定了dPCR反应的最佳退火温度为64.4℃;利用Flu... 详细信息

数字PCR(Digital PCR,dPCR)是核酸绝对定量的新方法,然而,基于dPCR的甲型流感病毒(Influenza A virus,FluA)绝对定量方法还未系统建立。本研究首先对微滴式dPCR的退火温度进行了梯度优化,确定了dPCR反应的最佳退火温度为64.4℃;利用FluA核酸标准品,确定了微滴式dPCR对FluA的检测范围为37.7~8.22"104拷贝/#L,检测的检出限为3.77拷贝/反应。微滴式dPCR的检测结果与标准品拷贝数的相关系数为R2=0.9988,提示该方法检测结果具有较高的可信度。用建立好的微滴式dPCR方法可对待测临床样本中的FluA进行了拷贝数定量。因此本研究建立了基于微滴式dPCR的FluA绝对定量方法,可有效地对临床样本中甲型流感病毒载量进行绝对定量,为临床研究中病毒载量的测定提供了一种技术。

关键词：数字PCR 甲型流感病毒绝对定量

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数字PCR技术及其应用进展

引用

病毒学报 2017年第1期33卷 103-107页

作者：冯兆民舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织全球流感参比和研究合作中心感染性疾病诊治协同创新中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

数字PCR(Digital PCR,dPCR)是核酸绝对定量的新方法,该技术通过分液,将含有核酸模板的PCR反应体系分配到上万个反应器中进行PCR扩增,根据荧光信号的有或无,进行结果计数,通过泊松分布的统计处理,直接得出核酸的拷贝数。相比于实时荧光定... 详细信息

数字PCR(Digital PCR,dPCR)是核酸绝对定量的新方法,该技术通过分液,将含有核酸模板的PCR反应体系分配到上万个反应器中进行PCR扩增,根据荧光信号的有或无,进行结果计数,通过泊松分布的统计处理,直接得出核酸的拷贝数。相比于实时荧光定量PCR(Quantitative PCR,qPCR),dPCR不需要建立标准曲线,应用前景更广。本文对dPCR的发展历史、原理及其应用进行了综述。

关键词：数字PCR 绝对定量拷贝数实时荧光定量PCR

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