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西安交通大学学报（医学版） 2012年第5期33卷 527-532页

作者：裴建明李娟第四军医大学基础部细胞生物学重点学科生理学教研室陕西西安710032

低氧性肺动脉高压(HPH)尚缺乏较为理想的治疗方法。预防内皮功能失调和抑制平滑肌细胞的增殖是防治HPH新的潜在策略。κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50、488H既可以内皮依赖性地舒张正常大鼠的肺动脉又可显著舒张HPH大鼠的肺动脉,其作用机... 详细信息

低氧性肺动脉高压(HPH)尚缺乏较为理想的治疗方法。预防内皮功能失调和抑制平滑肌细胞的增殖是防治HPH新的潜在策略。κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50、488H既可以内皮依赖性地舒张正常大鼠的肺动脉又可显著舒张HPH大鼠的肺动脉,其作用机制与电压依赖性钾通道(KV通道)及一氧化氮(NO)途径密切相关,预防性给予U50、488H可显著升高HPH大鼠血液及肺组织NO水平的同时,降低内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,显著改善低氧诱导的内皮功能失调,另一方面发现U50、488H能有效降低HPH大鼠的平均肺动脉压(mPAP),并能明显减轻HPH大鼠的肺血管重建和右心室肥厚程度。另外,U50、488H可抑制低氧下的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖,这可能是其抑制肺血管重建的原因,提示U50、488H对大鼠HPH具有明确的防治作用。U50、488H内皮依赖性的舒张肺动脉、降低肺动脉压、改善内皮功能失调及抑制PASMC增殖等作用均由κ-OR所介导,提示κ-OR有可能成为临床防治HPH新的药理学靶点。

关键词：低氧肺动脉高压内皮功能失调平滑肌细胞增殖 κ-阿片受体 U50 488H

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κ-阿片受体兴奋抗低氧性肺高压的作用及其机制

κ-阿片受体兴奋抗低氧性肺高压的作用及其机制

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作者：李娟第四军医大学

学位级别：博士

背景:低氧性肺高压(hypoxicpulmonaryhypertension,HPH)是肺高压的主要临床类型,它是临床众多心、肺疾病发生、发展过程中重要的病理生理环节,其特征主要表现为肺血管收缩和肺血管重构,但其发生机制尚不完全清楚,并且仍缺乏较为理想的... 详细信息

背景:低氧性肺高压(hypoxicpulmonaryhypertension,HPH)是肺高压的主要临床类型,它是临床众多心、肺疾病发生、发展过程中重要的病理生理环节,其特征主要表现为肺血管收缩和肺血管重构,但其发生机制尚不完全清楚,并且仍缺乏较为理想的治疗方法。因此,阐明HPH的发病机制和积极寻找有效的防治措施一直是医学界面临的重大课题。研究表明,缺血或低氧可促进心脏合成和释放内源性阿片肽,从而对缺血心肌产生保护作用。我们前期研究发现,缺血后处理可促进K-阿片受体(kappa-opioidreceptor,κ-OR)内源性激动剂强啡肽(Dynorphin)的释放,并起到保护缺血心肌的作用。但Dynorphin对HPH的作用尚不清楚。另外,κ-OR外源性激动剂U50,488H可通过兴奋κ-OR舒张肺动脉、抑制肺血管重构从而起到抗HPH的作用。且前期研究表明低氧可上调κ-OR的表达,其潜在机制是否由于低氧促进κ-OR内源性激动剂Dynorphin的释放?及其在HPH中的作用及机制等问题尚不清楚。近年来研究发现,钙敏感受体(calciumsensingreceptor,CaSR)在HPH形成过程中发挥了重要作用,可能会成为防治HPH的重要靶点。研究表明,肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterysmoothmusclecells,PASMCs)可表达CaSR,低氧可促进其表达,后者通过信号传导介导了肺血管收缩与PASMCs增殖重构,最终导致HPH的发生。本室前期实验表明兴奋κ-OR可显著抑制低氧诱导的肺血管重构和PASMCs的增殖,从而缓解HPH的形成,同时预实验意外发现,κ-OR对CaSR蛋白具有负性调节作用。但兴奋κ-OR抗HPH的作用是否通过抑制CaSR信号实现的尚不清楚。另外,在低氧诱导的肺血管收缩反应、肺血管重构的过程中,往往伴随着炎症反应。我们前期的研究证实了兴奋κ-OR可以显著抑制心肌缺血导致的炎症反应,但是兴奋κ-OR是否可以抑制低氧诱导的肺动脉的炎症反应也未见报道。基于以上存在问题,本论文拟在前期研究结果的基础上,进一步研究(1)κ-OR内源性激动剂DynorphinA在抗HPH中的作用;(2)兴奋κ-OR是否可通过调节CaSR的作用进而发挥抗HPH的作用;(3)初步探讨κ-OR兴奋在低氧诱导的肺动脉炎症反应中的作用。通过以上研究以期深入阐明κ-OR介导的抗HPH的作用及其机制,并为临床应用阿片类药物防治HPH提供新的实验依据。目的:1.探讨κ-OR内源性激动剂Dynorphin在HPH中的作用。2.探讨κ-OR对CaSR的调节作用以及CaSR在κ-OR兴奋抗HPH中的作用。3.探讨κ-OR兴奋在低氧诱导的炎症反应中的作用。方法:1.将SD雄性大鼠置于低氧舱中模拟高原约5500m高度的气压环境,大气压约50kPa,氧浓度约10%,每日进行8h低氧处理,分别进行低氧1、2和4周。在整体水平,观察κ-OR激动剂DynorphinA、U50,488H和κ-OR阻断剂nor-BNI对HPH大鼠的平均肺动脉压力(meanpulmonaryarterialpressure,mPAP)的影响,检测CaSR激动剂新霉素和CaSR阻断剂NPS2143对HPH的血流动力学的影响。***试剂盒检测HPH大鼠血和肺组织中DynorphinA、ET-1和AngⅡ等因子水平的变化。3.血管张力测定实验检测DynorphinAl-13、U50,488H和nor-BNI对HPH大鼠的肺动脉张力的影响,检测CaSR激动剂Spermine和NPS2143对HPH的肺动脉张力的影响。检测U50,488H和NPS2143预先处理后的低氧组大鼠肺动脉对ACh的反应。***试剂盒和BrdU试剂盒检测DynorphinA1-13对低氧诱导的PASMCs增殖的作用,采用CCK-8试剂盒检测Spermine对常氧和低氧时PASMCs增殖的影响。5.免疫荧光组织化学法检测κ-OR与CaSR在低氧时PASMCs的表达变化及定位情况。6.免疫共沉淀法检测κ-OR与CaSR在PASMCs的相互作用关系。***-blot法检测U50,488H对HPH大鼠肺动脉CaSR的蛋白表达的影响;检测Spermine对正常和低氧时PASMCs的增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)、Erk和p-Erk等蛋白表达的影响。8.透射电镜检测U50,488H和NPS2143对HPH大鼠的肺血管内皮和右心室的超微结构的影响。9.液相微珠悬浮芯片检测血清细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemoa

关键词：低氧性肺高压强啡肽 κ-阿片受体钙敏感受体肺血管收缩肺血管重构平滑肌增殖炎症因子

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κ-阿片受体与β-肾上腺素能受体间的交互作用在慢性缺氧条件下的改变

κ-阿片受体与β-肾上腺素能受体间的交互作用在慢性缺氧条件下的...

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作者：单健北京大学

学位级别：博士

目的：交感神经系统在心脏功能的调节方面发挥着非常重要的作用.交感神经主要通过β-肾上腺素能受体（β-AR）发挥作用，后者为G蛋白偶联受体，B-AR与激动剂结合后激活Gs蛋白，Gs蛋白进一步激活腺苷酸环化酶（AC），AC催化ATP转化为cAMP... 详细信息

目的：交感神经系统在心脏功能的调节方面发挥着非常重要的作用.交感神经主要通过β-肾上腺素能受体（β-AR）发挥作用，后者为G蛋白偶联受体，B-AR与激动剂结合后激活Gs蛋白，Gs蛋白进一步激活腺苷酸环化酶（AC），AC催化ATP转化为cAMP,后者激活蛋白激酶A（PKA），PKA可以增加细胞膜上L型钙离子通道的钙内流，而细胞内钙离子浓度的增加会导致肌浆网钙通道开放，使细胞内钙离子浓度迅速增加从而增加细胞的收缩力.还观察了U50对于霍乱毒素（CTX）引起Gsa蛋白发生的ADP-核糖化（ribosylation）反应的影响、U50对于AC激动剂弗司扣林（forskolin）作用的影响，以及慢性缺氧条件下Gi蛋白和G蛋白βγ亚单位含量的变化.结论：该研究首次发现在慢性缺氧条件下，心脏κ-OR兴奋对于β-AR激动的抑制作用明显减弱，即κ-OR与β-AR之间的交互作用明显减弱.除了κ-OR的敏感性下降外，这种交互作用减弱的原因可能在于κ-OR对于Gs蛋白α亚单位ADP-核糖化的抑制作用减弱.κ-OR兴奋对于AC的抑制作用减弱也参与了这一过程.如果Gi蛋白和G蛋白βγ亚单位参与了这一过程，那么其改变可能是功能性的.

关键词： β-肾上腺素能受体 κ-阿片受体慢性缺氧心脏功能 Gs蛋白腺苷酸环化酶 cAMP 细胞内钙瞬态

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κ-阿片受体在低氧性肺动脉高压中的作用

κ-阿片受体在低氧性肺动脉高压中的作用

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作者：张丽君第四军医大学

学位级别：博士

背景：低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension，HPH）是由于各种呼吸系统疾病引起的低氧血症导致的肺动脉高压。慢性阻塞性肺病（chronic obstructivepulmonary disease，COPD）以及长期处于高原环境均可导致HPH的发生。低... 详细信息

背景：低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension，HPH）是由于各种呼吸系统疾病引起的低氧血症导致的肺动脉高压。慢性阻塞性肺病（chronic obstructivepulmonary disease，COPD）以及长期处于高原环境均可导致HPH的发生。低氧引起的肺动脉收缩（hypoxic pulmonary vasoconstriction，HPV）和肺血管增殖重构（pulmonary artery remodeling，PAR）是HPH的两个重要病理生理环节。首先，低氧引起的肺动脉收缩本是机体的一种代偿反应，可促进肺泡的血流从低氧区流向高氧区，改善肺的通气/血流比值。然而，长期的低氧环境可引起肺动脉的持续不可逆收缩，导致肺动脉高压的形成。其次，低氧早期可伴有舒张因子（一氧化氮、前列腺素等）和收缩因子（内皮素、血管紧张素Ⅱ等）的失衡，引起内皮功能的失调，并逐渐引起肺动脉平滑肌细胞的增殖与肺动脉血管的重构，最终导致肺动脉高压和右心室肥厚。因此，舒张肺动脉、预防内皮功能失调和抑制平滑肌细胞的增殖是防治HPH的潜在策略。研究发现，内源性阿片肽（endogenous opioid peptide，EOP）及其受体在心肺血管系统发挥了重要的调节作用，κ-阿片受体（Kappa-opioid-receptor，κ-OR）是其中之一。本室前期研究发现，心肌缺血/再灌注后给予κ-阿片受体激动剂U50,488H可对抗心律失常的发生，减少心肌细胞坏死与凋亡，抑制再灌注后的炎症反应，对心肌发挥直接的保护作用，其机制与κ-OR介导激活PI3K-Akt-eNOS信号通路、增加NO生成有关。Akt-eNOS信号通路障碍是内皮功能失调的重要机制之一，然而，在HPH时，κ-OR能否通过介导激活Akt-eNOS信号通路，恢复肺动脉内皮功能，目前尚不清楚。另外，HPV和PAR是肺动脉高压形成的基本环节，前期研究发现，U50,488H对肺动脉具有明确的血管舒张效应，对肺动脉平滑肌细胞的增殖具有明确的抑制作用，但是这些作用在HPH是否存在？是否由κ-OR所介导也不清楚。本研究拟采用大鼠HPH模型，研究激活κ-OR能否对抗HPH，并进一步从改善内皮功能失调、舒张肺动脉血管和抑制肺动脉血管增殖等方面阐明κ-OR在抗HPH中的作用及可能机制。研究结果可为HPH的预防和治疗提供新的受体靶点，也为临床应用阿片类物质预防和治疗HPH提供实验依据，因而具有一定的理论和临床应用意义。目的： 1.研究激活κ-OR在抗HPH中的作用。 2.探讨激活κ-OR对HPH大鼠肺血管的舒张效应。 3.探讨激活κ-OR对低氧引起的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响 4.探讨激活κ-OR对HPH大鼠内皮功能失调的影响方法： 1.模拟海拔5000～5500米气压环境（大气压50kPa,氧浓度约10%），通过低压低氧动物仓，构建HPH动物模型。在整体动物上观察κ-OR激动剂U50,488H与κ-OR阻断剂nor-BNI对HPH形成的影响。 2.自大鼠右侧颈外静脉插入直径为1mm的聚乙烯塑料导管，沿上腔静脉进入右心房、再通过三尖瓣口进入右心室，最后到达肺动脉干。运用RM-6280多道智能生理信号采集和记录系统，测量大鼠平均肺动脉压（mPAP）和右心室压力（RVP）等肺血流动力学指标，并通过该系统分析以上指标。 3.剖胸取出大鼠心脏，沿室间隔边缘分离出右心室（RV）和左心室以及室间隔（LV＋S），称重计算RV、LV+S，以RV/（LV+S）比值和RV/BW（体重）比值来反映右心室肥厚程度。Western blot法检测肺动脉上κ-OR的蛋白表达情况。ELISA试剂盒检测内源性的κ-OR激动剂强啡肽（DynorphinA）的变化。 4.分离HPH大鼠肺动脉，采用离体血管灌流技术，观察κ-OR激动剂U50,488H与内源性的κ-OR激动剂强啡肽（Dynorphin A）对HPH大鼠肺动脉血管环的舒张作用。 5.用3H-TdR掺入实验和细胞MTT活性检测，观察κ-OR激动剂U50,488H对低氧下培养的肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响。 6.采用离体血管灌流技术检测HPH大鼠肺动脉对内皮依赖性舒血管物质ACh的反应及U50,488H腹腔注射对该反应的影响， 7.用硝酸还原酶法检测血清NO水平的变化，并观察κ-OR阻断剂nor-BNI、PI3K抑制剂wortmannin、选择性Akt抑制剂AI以及非选择性NOS抑制剂L-NAME对U50,488H刺激NO生成作用的影响。 8.建立肺微血管内皮细胞（PMVECs）的原代和传代培养。采用T

关键词：低氧肺动脉高压 κ-阿片受体舒张平滑肌细胞增殖内皮功能一氧化氮

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κ-阿片受体激动剂U50488H对缺血/再灌注损伤大鼠冠状微循环和室性心律失常的影响

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中国急救医学 2008年第7期28卷 625-627页

作者：徐庆杰李培杰张正义秦静王映珍孙志江昝香艺兰州大学第二医院急诊内科 730030

目的探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对缺血/再灌注损伤大鼠冠状微循环和室性心律失常的影响,明确其对缺血/再灌注心肌是否有直接的保护作用。方法32只大鼠按照随机原则分为四组,每组8只,分别为假手术组(A组)、缺血/再灌注(I/R)组(B... 详细信息

目的探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对缺血/再灌注损伤大鼠冠状微循环和室性心律失常的影响,明确其对缺血/再灌注心肌是否有直接的保护作用。方法32只大鼠按照随机原则分为四组,每组8只,分别为假手术组(A组)、缺血/再灌注(I/R)组(B组),U50488H+I/R组(C组)和Nor-BNI(特异性阿片受体阻滞剂)+U50488H+I/R组(D组)。实验组通过开胸结扎冠脉前降支制备大鼠缺血/再灌注模型,观察各组大鼠的心肌超微结构的改变和对室性心律失常的影响。结果①C组与B、D组比较,微血管显著扩张(P<0.05);②C组与B、D组比较,室性心律失常的发生率明显下降。结论U50488H可通过激活心脏κ-阿片改善缺血/再灌注大鼠的微循环、降低大鼠心肌缺血/再灌注室性心律失常的发生率,从而发挥心脏直接保护作用,该作用也可被选择性κ-阿片受体阻滞剂Nor-BNI所拮抗。

关键词： U50488H κ-阿片受体心肌缺血/再灌注微循环室性心律失常

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κ-阿片受体信号通路介导针刺抗缺血性心律失常的机制

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中国中医基础医学杂志 2021年第5期27卷 830-833页

作者：陈安莉王圆圆周晨陆风燕辛娟娟刘群赵玉雪张雯晰高俊虹喻晓春中国中医科学院针灸研究所北京100700

心肌缺血引起的心肌细胞内钙超载与缺血性心律失常的发生关系密切,因而防止钙超载是减轻心律失常的有效举措。现代医学研究提示,κ-阿片受体(κ-opioid receptor,κ-OR)系统在心肌细胞内钙调节和缺血性心律失常的发生发展中具有重要的... 详细信息

心肌缺血引起的心肌细胞内钙超载与缺血性心律失常的发生关系密切,因而防止钙超载是减轻心律失常的有效举措。现代医学研究提示,κ-阿片受体(κ-opioid receptor,κ-OR)系统在心肌细胞内钙调节和缺血性心律失常的发生发展中具有重要的病理生理学意义,为临床治疗缺血性心律失常提供了新的靶点。而有关针刺镇痛的研究表明,针刺可增加体内阿片类物质并激活阿片受体,因此针刺极有可能通过作用于κ-OR系统,再经由κ-OR及其受体后信号传导通路,参与介导改善缺血性心律失常的保护作用。本文以κ-OR及其受体后信号传导通路为切入点,提出针刺改善缺血性心律失常机制研究的新思路,以期为缺血性心律失常的防治提供一条安全有效的新途径。

关键词：缺血性心律失常针刺钙超载 κ-阿片受体信号转导通路

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κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注损伤的直接保护作用

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第四军医大学学报 2009年第19期30卷 1913-1915页

作者：徐庆杰李培杰张正义秦静王映珍孙志江昝香艺北京老年医院北京100095 兰州大学第二医院急诊内科甘肃兰州730000

目的:探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤冠状微循环和心肌超微结构的影响,明确其对I/R心肌是否具有直接保护作用.方法:将32只大鼠随机分为4组,即假手术组,I/R组,U50488H+I/R组和Nor-BNI(特异性阿片受体... 详细信息

目的:探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤冠状微循环和心肌超微结构的影响,明确其对I/R心肌是否具有直接保护作用.方法:将32只大鼠随机分为4组,即假手术组,I/R组,U50488H+I/R组和Nor-BNI(特异性阿片受体阻断剂)+U50488H+I/R组,每组8只.实验组通过开胸结扎冠脉前降支制备大鼠I/R模型,观察各组大鼠心肌超微结构和冠状微循环的改变.结果:①U50488H+I/R组与I/R组和Nor-BNI+U50488H+I/R组比较,微血管显著扩张(P<0.05),毛细血管腔内血细胞明显减少,心肌间质中偶见红细胞.②U50488H+I/R组与I/R组和Nor-BNI+U50488H+I/R组比较,心肌超微结构损伤明显减轻.结论:U50488H可通过激活心脏κ-阿片受体,明显改善大鼠I/R心肌的微循环,减轻心肌超微结构的损伤,从而发挥对心脏的直接保护作用,该作用可被选择性的κ-阿片受体阻断剂Nor-BNI所拮抗.

关键词： US0488H κ-阿片受体心肌缺血-再灌注微循环超微结构

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电脱耦联延迟参与κ-阿片受体兴奋引起的心肌保护作用

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中国应用生理学杂志 2006年第1期22卷 64-70页

作者：陈宝平范芳燕毛红娇夏强绍兴文理学院医学院生理教研室浙江绍兴312000 浙江大学医学院生理教研室浙江杭州310031

目的:研究κ-阿片受体兴奋诱导的心肌保护作用是否与其对心肌缺血期间电耦联的影响有关,并探讨这种作用的可能机理。方法:采用雄性SD大鼠心脏Langendorff离体灌流模型。①全心停灌30min,复灌2h,观察不同浓度κ-阿片受体特异激动剂U50,48... 详细信息

目的:研究κ-阿片受体兴奋诱导的心肌保护作用是否与其对心肌缺血期间电耦联的影响有关,并探讨这种作用的可能机理。方法:采用雄性SD大鼠心脏Langendorff离体灌流模型。①全心停灌30min,复灌2h,观察不同浓度κ-阿片受体特异激动剂U50,488H(10-7、10-6、3×10-6、和10-5mol/L)及其特异阻断剂nor-BNI(5×10-6mol/L)和线粒体ATP敏感性钾离子通道特异阻断剂5-HD(10-4mol/L)对缺血/复灌心肌的作用。测量指标:以分光光度计在490nm波长下测定氯化三苯基四氯唑(TTC)与活细胞反应的产物formazan含量的方法测定心肌细胞活性、测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以及心室内压;②全心停灌70min,应用四电极法观察不同浓度U50,488H、nor-BNI和5-HD对缺血期间心肌整体阻抗和电脱耦联参数(电脱耦联时间、平台时间、电脱耦联最大速率和阻抗倍数)的影响。结果:①U50,488H可诱导心肌保护作用,并呈浓度依从性,与对照组比较,表现为for-mazan含量增加,LDH释放减少,心室功能恢复增强;②经较高浓度U50,488H(10-6、3×10-6、和10-5mol/L)预处理后,电脱耦联时间和平台时间均延迟,电脱耦联最大速率降低;③U50,488H在10-7-10-5mol/L范围内对电脱耦联时间的延迟与其对formazan含量增加和LDH释放减少的作用呈线形相关;④U50,488H对formazan含量增加、LDH释放减少和电脱耦联时间和平台时间延迟的作用均可被nor-BNI或5-HD所阻断。结论:κ-阿片受体兴奋对电脱耦联的延迟作用与其诱导的心肌保护作用有关,这种作用受到线粒体ATP敏感性钾离子通道的调节。

关键词： κ-阿片受体电脱耦联缺血/复灌整体组织阻抗心肌保护

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κ-阿片受体信号通路介导电针抗缺血再灌注性心律失常的机制研究

κ-阿片受体信号通路介导电针抗缺血再灌注性心律失常的机制研究

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作者：陈安莉中国中医科学院

学位级别：硕士

研究背景缺血性心脏病一直是全球范围内引起致残的最主要原因和致死的首位原因。缺血再灌注损伤是造成该病发病率和死亡率升高的主要因素之一。缺血再灌注损伤的典型表现之一就是心律失常。因此,寻找一种预防改善缺血再灌注所引起的心... 详细信息

研究背景缺血性心脏病一直是全球范围内引起致残的最主要原因和致死的首位原因。缺血再灌注损伤是造成该病发病率和死亡率升高的主要因素之一。缺血再灌注损伤的典型表现之一就是心律失常。因此,寻找一种预防改善缺血再灌注所引起的心律失常具有重要价值。针刺在预防和治疗疾病中发挥着积极的意义。临床研究证实,对于心肌缺血患者的临床症状,针刺能够达到改善的效果;同时,针刺能够明显的抑制心律失常的发生。基础研究也表明,针刺预处理可降低心律失常评分。本研究室以往的工作表明,电针能抑制心肌缺血性心律失常,而有关电针抗缺血再灌注性心律失常的机制,迄今鲜有人涉足。现代医学研究提示:κ-阿片受体(κappa opoid receptor,κ-OR)系统对于心血管系统生理、病理活动具有重要的调控作用;另一方面,针刺镇痛研究表明,针刺可以调节阿片受体表达、激活阿片受体系统,然而,阿片受体系统在针刺改善缺血再灌注心律失常效应机制中是否存在特异性的介导作用尚不清楚。本研究室前期研究表明:电针可改善心肌缺血性损伤,而κ-阿片受体特异性阻断剂可以部分阻断电针改善心肌缺血性损伤的保护效应,提示电针极有可能通过调节κ-OR及其受体后信号转导通路而改善缺血再灌注性心律失常,而将阿片受体及其信号转导路径的探讨引入到针刺改善心律失常的机制中的相关研究尚属空白。研究目的及意义观察电针对缺血再灌注性心律失常的保护作用,同时确定κ-OR是否参与介导电针干预的保护作用;并在此基础上探讨κ-OR后信号通路介导电针抗缺血缺血再灌注心律失常的机制。研究的完成不仅对于针刺防治缺血再灌注性心律失常的应用具有重要意义,亦将为系统探讨针刺心血管效应作用规律及其机制找到一条新思路或新的切入点。研究方法本实验总共分为两个部分进行:第一部分将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、阻断剂组通过观察心律失常评分。第二部分实验将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组。在再灌注结束后,取大鼠心脏左心室做western Blot检测κ-OR、Gq蛋白;酶联免疫吸附试验(Elisa法)观察各组大鼠心肌组织中三磷酸肌醇(IP3)、二酰甘油(DAG)、(cAMP)含量的变化;Forskolin(AC 激动剂)、8-Br-cAMP(PKA激动剂)、BayK-8644(L-Ca2+激动剂)、PMA(PKC激动剂)等κ-阿片受体后信号转导成分在激动剂的作用下,观察单个心肌细钙离子变化。探讨κ-OR后信号通路上哪些信号分子参与介导电针抗缺血再灌注性心律失常。研究结果1 电针改善缺血再灌注性心律失常疗效的确定与NC组相比,M组再灌注时的和EA组心律失常评分显著性升高(P<0.01),而经过电针干预后,EA组较M组再灌注时的心律失常评分与M组比较显著性降低(P<0.01),而在电针前给与κ-OR特异性拮抗剂——Nor-BNI,其再灌注时的心律失常评分组较与NC组和EA组比较均有心律失常评分明显升高增加(P<0.05或P<0.01)。2 κ-OR及其受体后信号通路在参与介导电针抗缺血再灌注心律失常中的作用2.1 κ-OR及其受体后直接信号通路在参与介导电针抗缺血再灌注心律失常中的作用2.1.1电针对心肌缺血再灌注大鼠κ-OR蛋白的影响M组κ-OR蛋白含量与NC组比较有所增加(P<0.05),考虑是心肌对缺血再灌注损伤的一种应激保护性反应;而EA组κ-OR蛋白含量与NC组和M组比较均有更为明显地增加(P均<0.01)。2.1.2电针对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Gq蛋白的影响与NC组比较,M组Gq蛋白的表达略有增加(P<0.05);而EA组Gq蛋白的表达与NC组和M组比较均有进一步的增加(P均<0.01)。2.1.3电针对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织中IP3的影响M组IP3的含量与NC组比较有所增加(P<0.01);而EA组IP3的含量与NC组和M组比较均有明显增加(P均<0.01)。2.1.4电针对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织中DAG的影响与NC组比较,M组DAG的表达有增加趋势,但无统计学差异;而EA组DAG的表达与NC组和M组比较均有明显增加(P均<0.01)。2.1.5 电针对模拟全心缺血再灌注大鼠心肌细胞PKC反应性的影响2.1.5.1单个心肌细胞在PKC激动剂-PMA作用下钙瞬变情况电针对模拟全心缺血再灌注大鼠分离的单个心肌细胞在PKC激动剂--PMA作用下钙瞬变的影响各组钙瞬变波形的波幅在PKC激动剂-PMA作用下均有不同程度的升高。与NC组相比,M组心肌细胞在PKC激动剂-PMA作用下钙瞬变幅度变化明显增加(P<0.01);与M组相比,经过电针后EA组增加的幅度减低(P<0.01)。2.1.5.2电针对模拟全心缺血再灌注大鼠分离的单个心肌细胞在PKC激动剂-PMA作用下收缩幅度的变化NC组与本组的Control相比较,心

关键词：电针心肌缺血再灌注损伤心律失常 κ-阿片受体信号转导通路

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κ-阿片受体在抗软脂酸钠诱导的血管内皮损伤中的保护作用

κ-阿片受体在抗软脂酸钠诱导的血管内皮损伤中的保护作用

引用

作者：杨帆第四军医大学

学位级别：硕士

背景:近年来,随着人们生活水平的不断提高,饮食结构不合理且缺乏运动,导致体内脂类代谢紊乱,最终引发高脂血症(Hyperlipidemia,HLP)。而由高脂血症引起的以胰岛素抵抗、肥胖等为代表的代谢综合症的发病率呈逐年升高的趋势。同时,高脂血... 详细信息

背景:近年来,随着人们生活水平的不断提高,饮食结构不合理且缺乏运动,导致体内脂类代谢紊乱,最终引发高脂血症(Hyperlipidemia,HLP)。而由高脂血症引起的以胰岛素抵抗、肥胖等为代表的代谢综合症的发病率呈逐年升高的趋势。同时,高脂血症可引起大血管病变,导致心血管疾病发病风险增加,严重危害人类健康[1]。而血管内皮结构改变和功能失调又是促进大血管病变形成的主要原因。有研究表明,高脂作用下,血管内皮细胞分泌的舒缩因子之间的平衡被打乱[2]。主要表现为,血管内皮细胞分泌的舒血管物质减少,缩血管物质增多,使血管的功能失调。因此,改善血管内皮功能和提高舒血管因子水平是防治高脂血症血管损伤的重要途径。另外,高脂血症患者体内肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和细胞粘附分子等水平显著升高。这些高水平的炎症因子会作用于血管引起血管功能的障碍。因此,抑制炎症因子的水平、控制炎症反应也是防治高脂血症血管损伤的重要途径。k-阿片受体(k-opioid receptor,k-OR)是一类广泛存在于心血管系统中的主要的阿片受体亚型[3],心脏产生的内源性k-阿片肽可作用于κ-OR,并对心血管系统的活动进行调节。前期研究表明,k-OR激动剂U50,488H可以通过激活κ-OR/PI3K/Akt/e NOS/NO信号途径对抗高脂血症引起的内皮功能失调和血管舒张功能障碍[4];可见,k-OR兴奋后可促进NO的生成进而保护血管内皮功能。众所周知,NO是最重要的血管舒张因子,内皮细胞可通过e NOS的磷酸化生成NO,而NO水平的降低被认为是内皮功能异常的关键标志。据文献报道[5],小窝蛋白(caveolin-1)可与e NOS直接发生作用,并抑制e NOS的活性,从而影响NO的生成,最终造成内皮细胞的损伤。然而,在高脂作用下是否存在caveolin-1的表达增加,导致NO的生成受到抑制尚不清楚。激活κ-OR对抗高脂血症引起的内皮功能失调的作用是否与调节caveolin-1的功能有关也不清楚。前期研究发现兴奋κ-OR可通过PI3K/Akt/e NOS通路抑制由心肌缺血再灌注损伤引发的心肌炎症反应,减少促炎因子TNF-α的产生[6],然而k-OR兴奋后可否抑制由高脂血症引起的TNF-α和IL-1β等炎症因子的释放,黏附分子的表达,单个核细胞(存在于外周血,包括淋巴细胞和单核细胞)和中性粒细胞与内皮细胞的黏附等炎症反应,仍有待于研究阐明。目的:基于以上事实,本研究的目的是:(1)观察兴奋κ-OR是否能够在高脂条件下发挥血管内皮保护作用,(2)如果是,明确其机制是否通过:一是调节caveolin-1表达、激活e NOS改善高脂条件下NO生成从而调节血管内皮功能;二是激活PI3K/Akt/e NOS信号通路抑制炎症反应从而减轻了炎性因子对血管内皮的损伤。材料与方法***经培养和鉴定后,用软脂酸钠(sodium palmitate,SP)诱导细胞损伤,48小时后进行后续实验。在SP浓度为300μmol/L时,Caspase 3的表达最为显著,提示细胞凋亡最为明显,后续实验随选取300μmol/L作为最适高脂诱导浓度。2.在SP诱导下,探讨k-OR通过caveolin-1/e NOS信号转导通路发挥的作用时将HUVECs分为6组:正常对照组、k-OR激动剂U50,488H组、SP组、SP+U50,488H组、SP+U50,488H+k-OR阻断剂nor-BNI组、SP+U50,488H+e NOS抑制剂L-NAME组;在SP诱导下,探讨k-OR通过PI3K/Akt/e NOS信号转导通路发挥的作用时将HUVECs分为8组:在正常对照组、k-OR激动剂U50,488H组、SP组、SP+U50,488H组、SP+U50,488H+k-OR阻断剂nor-BNI组、SP+U50,488H+PI3K抑制剂LY294002、SP+U50,488H+Akt抑制剂2206-2HCL、SP+U50,488H+e NOS抑制剂L-NAME组。3.采用CCK-8检测试剂盒检测细胞存活率。4.通过流式细胞技术分析各组细胞凋亡比率。5.采用一氧化氮还原酶法检测各组细胞培养上清中NO的含量。6.通过Western blot法检测各组细胞中Caspase 3、Caspase 1、NLRP3、caveolin-1、p-e NOS、total-e NOS等分子的蛋白表达情况。7.使用激光共聚焦检测细胞内caveolin-1和e NOS共定位情况。8.使用ROS试剂盒检测细胞内ROS水平的变化9.通过ELISA法检测各组细胞培养上清液中的TNF-α

关键词： κ-阿片受体高脂血症软脂酸钠人脐静脉内皮细胞内皮功能小窝蛋白炎症因子黏附分子抗炎作用

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