检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2025年第4期41卷 1354-1371页

作者：张绥欣郑小迪倪鹏汪众刘彪汪洋胡翰刘滨磊湖北工业大学生命科学与健康工程学院武汉滨会生物科技股份有限公司

为研究以ⅱ型单纯疱疹病毒gD胞外域(ectodomain)为免疫原的circRNA疫苗诱导BALB/c小鼠出现的特异性免疫反应，并进行免疫研究评价，为单纯疱疹病毒mRNA疫苗的研发提供实验依据和技术参考，本研究通过PCR技术和同源重组技术，从pT7AMP-gD... 详细信息

为研究以ⅱ型单纯疱疹病毒gD胞外域(ectodomain)为免疫原的circRNA疫苗诱导BALB/c小鼠出现的特异性免疫反应，并进行免疫研究评价，为单纯疱疹病毒mRNA疫苗的研发提供实验依据和技术参考，本研究通过PCR技术和同源重组技术，从pT7AMP-gD Ectodomain质粒中获得gD基因，将gD基因克隆至pUC57载体，获得重组pUC57-circ-gD质粒并进行测序鉴定。进行PCR获得后续实验模板DNA后，以单纯疱疹病毒囊膜糖蛋白gD Ectodomain为免疫原，并同时将模板DNA进行体外转录(in vitro transcription, IVT)及环化，将得到的pUC57-circ-gD mRNA进行RNase R酶酶切验证、反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)成环验证，以确定是否成环；转染293T细胞，72 h后收集细胞上清，进行蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)以鉴定蛋白表达；采用脂质纳米颗粒(lipidnanoparticles,LNP)对合成的mRNA以微流控包封法进行包封；包封后，将其应用于模型动物BALB/c小鼠中实验，在第21、35天于眼底静脉丛采血，第49天麻醉后摘除眼球采血，后续进行酶联免疫吸附法(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)抗体检测，并对病毒中和抗体进行测定，在第49天取脾脏，后续通过固相酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospot, ELISpot)检测细胞因子IFN-γ的分泌情况。结果表明成功构建了重组质粒，测序结果正确；RNase R酶切验证后证实了环状RNA的存在，mRNA转染293T细胞后Western blotting验证有清晰的特异性条带；对疫苗进行质量检测，通过尺寸排阻高效液相色谱法(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography, SEC-HPLC)检测到疫苗的纯度约为90%，测量mRNA-LNP的粒径为82.76 nm，包封率达到98%左右；小鼠进行3次免疫后，在观察期内小鼠体重的增加和良好的存活率证明了该疫苗的安全性；在免疫后的小鼠血清中，IgG抗体滴度增加；在脾脏细胞中，检测到分泌特异性IFN-γ的T细胞数量升高。后续ELISA、中和抗体检测、ELISpot实验及攻毒实验说明pUC57-circ-gD mRNA免疫原性及持久性良好，并且可以抵御病毒的攻击。本研究为circRNA疫苗相关研究提供了参考。

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒 gD胞外域基因环状RNA mRNA疫苗免疫原性

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ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D的晶体结构解析(英文)

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生物工程学报 2011年第10期27卷 1499-1506页

作者：陈竹君逯光文齐建勋许翔张娜严景华王荣富安徽农业大学生命科学学院合肥230036 中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（Glycoprotein D,gD）在介导该病毒入侵到宿主细胞中起着关键作用。为了更好地研究gD在病毒侵入过程中的作用机制,利用杆状病毒表达系统表达了gD胞外部分区域（1~285 aa）,通过Ni-NTA亲和层析以及分... 详细信息

ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（Glycoprotein D,gD）在介导该病毒入侵到宿主细胞中起着关键作用。为了更好地研究gD在病毒侵入过程中的作用机制,利用杆状病毒表达系统表达了gD胞外部分区域（1~285 aa）,通过Ni-NTA亲和层析以及分子排阻层析纯化后,得到的带His标签的分泌型可溶蛋白,用悬滴法对该蛋白进行了晶体筛选,获得了高质量的晶体。晶体生长条件为0.1 mol/L Hepes缓冲液（pH 7.2）,5%（V/V）2-甲基-2,4-戊二醇（MPD）,10%PEG10000,18℃。晶体能够衍射到1.8℃,属于P21空间群,晶胞参数为a=63.6,b=55.4,c=65.3,β=96.3°。该晶体的获得将为进一步研究gD的结构提供了基础,也为gD等同类囊膜蛋白的表达、纯化及结构研究提供了重要的参考。

关键词：杆状病毒表达系统纯化 ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D结晶

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ⅱ型单纯疱疹病毒培养及gG-2基因特异片段的克隆

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中华男科学杂志 2009年第3期15卷 223-227页

作者：高建黄宇烽曹晶王浩洋陆金春南京师范大学生命科学学院江苏南京210046 南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002 南京医科大学基础医学院微生物与免疫学系江苏南京210029 武警江苏总队医院南京分院检验科江苏南京210028

目的:通过培养和扩增ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)并提取其全基因组,从而克隆包膜糖蛋白gG-2全长基因及其保守性较高、抗原性较强的特异片段。方法:将HSV-2病毒感染Hela细胞获得大量病毒液,用酚-氯仿法提取病毒全长基因组,并以此为模板扩增... 详细信息

目的:通过培养和扩增ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)并提取其全基因组,从而克隆包膜糖蛋白gG-2全长基因及其保守性较高、抗原性较强的特异片段。方法:将HSV-2病毒感染Hela细胞获得大量病毒液,用酚-氯仿法提取病毒全长基因组,并以此为模板扩增编码gG-2的US4基因,再根据氨基酸序列比对结果,选取其特异片段,设计带酶切位点的引物克隆gG-2基因特异片段。结果:成功地获得了大量HSV-2病毒液并提取了病毒基因组,克隆了gG-2全长基因以及特异片段,测序证实,两者均与GenBank中报道的序列相一致。结论:对于遗传特性相对稳定的HSV-2来说,通过病毒感染细胞的方法短时期内获得大量病毒液,并从病毒全基因组中克隆gG-2特异基因片段的方法是可行的,从而为进一步构建gG-2特异片段相关载体、表达相应蛋白奠定了基础。

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒 gG-2 病毒感染

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ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

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免疫学杂志 2010年第6期26卷 494-497页

作者：姜德玉刘坤张伟周朋李君丽王希良于三科西北农林科技大学动物医学学院杨凌硕士生712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10071

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体... 详细信息

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D Bac-to-Bac杆状病毒表达系统免疫原性中和活性

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ⅱ型单纯疱疹病毒的潜伏相关转录体

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广东医学 2007年第7期28卷 1181-1182页

作者：仕瑶慧杨慧兰樊建勇华南理工大学生物科学与工程学院广州510640 广州军区广州总医院皮肤科广州510010

潜伏相关转录体(eatency-associated transcripts,LATs)是HSV病毒在潜伏期间大量存在和被转录的RNAs,在70年代发现初期即被认为在HSV潜伏的建立、维持和再激活过程中起重要的作用.它是目前HSV潜伏与复发研究的一个热点.

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒潜伏期转录体 HSV病毒 RNAs 激活过程

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ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达

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动物医学进展 2010年第6期31卷 58-61页

作者：姜德玉刘坤赵晓燕张伟李君丽王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化***5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫... 详细信息

以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化***5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达HSV-2 gD蛋白,为下一步的工作奠定了基础。

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D Bac-to-bac表达系统

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ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白B的表位筛选与鉴定及糖蛋白D的真核表达

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白B的表位筛选与鉴定及糖蛋白D的真核表达

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作者：姜德玉西北农林科技大学

学位级别：硕士

ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)感染可造成一种常见而古老的性传播疾病——生殖器疱疹,其发病率在性病中仅次于淋病和梅毒。在HSV-2的11种糖蛋白中gD能诱导产生相对较高的中和抗体水平,gB可诱导产生中和抗体并能引起... 详细信息

ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)感染可造成一种常见而古老的性传播疾病——生殖器疱疹,其发病率在性病中仅次于淋病和梅毒。在HSV-2的11种糖蛋白中gD能诱导产生相对较高的中和抗体水平,gB可诱导产生中和抗体并能引起细胞毒性T细胞反应,因此成为亚单位疫苗的首选。糖蛋白B (glycoprotein B,gB)作为单纯疱疹病毒两个血清亚型的共有外膜蛋白,在维持病毒形态及病毒进入缩主细胞起着非常重要的作用。人及动物接种gB可诱发高水平的中和抗体并可以引起保护性T细胞免疫反应。因此,选取HSV-2 gB全基因序列利用生物学软件对B及HLA-A*0201限制性T细胞表位进行了预测,所筛选的B细胞中和表位能在小鼠体内诱发高水平的抗体,并且以介导Th2型免疫反应的IgG1亚型为主。同时,这两个B细胞中和表位诱发的抗体能特异性中和病毒(感染)。另外,利用免疫学方法检测从gB上筛选的T细胞表位是否能够刺激T2细胞表面稳定地产生HLA-A*0201复合物;筛选的T细胞表位在体内/外是否能够刺激产生有效的IFN-γ及有效的CD8+T细胞的杀伤作用。结果显示,预测的T细胞表位可以刺激T2细胞稳定产生HLA-A*0201复合物,并可以刺激T细胞分泌IFN-γ与CD8+T细胞毒作用。以HSV-2 333株的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glycoprotein D,gD)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化*** DH5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达了HSV-2 gD蛋白。为下一步的工作奠定了基础。

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白B 表位筛选糖蛋白D 真核表达

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山东省胶州市暗娼HIV、梅毒和ⅱ型单纯疱疹病毒感染状况分析

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中华流行病学杂志 2014年第10期35卷 1099-1104页

作者：李峥李东民刘慧鑫姜珍霞朱琳汪宁北京协和医学院公共卫生学院 100730 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心青岛市疾病预防控制中心

目的：了解山东省胶州市暗娼HIV、梅毒、ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）感染状况以及相关影响因素。方法采用方便抽样法招募山东省胶州市暗娼人群，通过匿名现场问卷调查收集相关信息，采集血样进行HIV、梅毒和HSV-2检测，并以梅毒螺旋体EL... 详细信息

目的：了解山东省胶州市暗娼HIV、梅毒、ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）感染状况以及相关影响因素。方法采用方便抽样法招募山东省胶州市暗娼人群，通过匿名现场问卷调查收集相关信息，采集血样进行HIV、梅毒和HSV-2检测，并以梅毒螺旋体ELISA检测与HSV-2抗体ELISA检测均为阳性定义为双重感染。结果共调查460名暗娼，其中HIV感染率为0.22%，梅毒感染率为5.9%，HSV-2感染率为43.0%，梅毒/HSV-2双重感染率为11.7%。22.8%的暗娼承认吸食过新型毒品，吸食新型毒品暗娼的梅毒感染率为12.4%，HSV-2感染率为55.2%，梅毒/HSV-2双重感染率为22.9%。多因素分析显示：梅毒感染的危险因素有吸食新型毒品（OR＝3.61，95%CI：1.62～8.06）、第一次商业性行为年龄＞20岁（OR＝2.80，95%CI：1.15～6.85）、最近1个月性服务场所数≥2个（OR＝4.37，95%CI：0.83～22.83）；而HSV-2感染的危险因素为吸食新型毒品（OR＝2.30，95%CI：1.43～3.70）、来自低档场所（OR＝2.61，95%CI：1.66～4.10）、在本地工作≥1年（OR＝2.01，95%CI：1.28～3.14）、第一次商业性行为年龄＞20岁（OR＝1.77，95%CI：1.16～2.69）、文化程度为文盲或小学（OR＝2.27，95%CI：1.18～4.36）；梅毒/HSV-2双重感染的危险因素有吸食新型毒品（OR＝3.95，95%CI：2.09～7.44）、文化程度为文盲或小学（OR＝2.43，95%CI：1.10～5.36）、年龄为21～30岁（OR＝2.95，95%CI：1.08～8.03）和≥31岁（OR＝7.05，95%CI：2.48～20.01）。结论胶州市暗娼梅毒、HSV-2及其重复感染率较高，特别是吸食新型毒品暗娼，应针对感染人群、吸毒人群进行有效的健康教育和行为干预。

关键词：人类免疫缺陷病毒梅毒 ⅱ型单纯疱疹病毒暗娼

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云南省某县HIV感染者ⅱ型单纯疱疹病毒感染及高危性行为研究

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中华流行病学杂志 2009年第11期30卷 1139-1142页

作者：傅卓华高眉扬陈莉康永然杨建华何纳复旦大学公共卫生学院流行病学教研室上海200032 云南省盈江县疾病预防控制中心

目的了解云南省某县HIV感染者中ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）感染率、HSV-2感染相关因素及高危性行为情况。方法从常规随访的HIV感染者中招募研究对象，问卷调查收集人口学、行为学信息，采集血标本检测HSV-2抗体和CD4^＋T淋巴细胞计数。... 详细信息

目的了解云南省某县HIV感染者中ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）感染率、HSV-2感染相关因素及高危性行为情况。方法从常规随访的HIV感染者中招募研究对象，问卷调查收集人口学、行为学信息，采集血标本检测HSV-2抗体和CD4^＋T淋巴细胞计数。结果共招募研究对象300人，其中105人检测为HSV-2抗体阳性，感染率为35．0％。多因素logistic回归模型显示，傣族（OR=0．300，95％CI：0．152—0．593）和景颇族（OR=0．376，95％CI：0．167～0．850）HIV感染者HSV-2感染风险低于汉族；经性途径感染HIV者HSV-2感染风险高于经注射吸毒感染HIV者（OR=4．244，95％CI：1．924～9．364）。105人合并感染HIV和HSV-2，其中60人最近3月内有性行为，未坚持使用或不使用安全套者占有性行为者的41．7％，主要见于婚内性行为。结论HIV感染者中HSV-2感染率较高,HIV／HSV-2合并感染者中有不安全性行为者比例高。

关键词：艾滋病病毒感染 ⅱ型单纯疱疹病毒高危性行为

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临床药师参与1例新生儿播散性ⅱ型单纯疱疹病毒感染的药学会诊

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中国药房 2022年第21期33卷 2676-2680,2684页

作者：李娜邹泽彭发兵王鑫李飞谢欠重庆市黔江中心医院药学部重庆409099 重庆市黔江中心医院新生儿科重庆409099 重庆市黔江中心医院产科重庆409099

本文介绍了临床药师参与1例首发症状为发热且不伴皮肤黏膜受累表现的新生儿播散性ⅱ型单纯疱疹病毒感染的诊治过程。临床药师通过评估患儿病情,到产科了解患儿母亲病史和用药情况,查阅文献资料,分析患儿发热可能与其母亲病史相关,考虑... 详细信息

本文介绍了临床药师参与1例首发症状为发热且不伴皮肤黏膜受累表现的新生儿播散性ⅱ型单纯疱疹病毒感染的诊治过程。临床药师通过评估患儿病情,到产科了解患儿母亲病史和用药情况,查阅文献资料,分析患儿发热可能与其母亲病史相关,考虑患儿存在新生儿HSV感染可能,建议完善病毒相关检测后即刻予静脉注射阿昔洛韦20 mg/kg,q8 h抗病毒治疗,并密切监测阿昔洛韦常见的不良反应。医师接受会诊建议。患儿确诊新生儿播散性Ⅱ型HSV感染,经治疗,患儿病情相对稳定,医师再次请临床药师会诊协助制定患儿后续药物治疗方案和监护计划。临床药师参考相关文献,建议静脉用阿昔洛韦21 d后,再口服阿昔洛韦300 mg/m2,q8 h治疗6个月,且在口服用药期间继续监测其常见不良反应,并随访评估患儿神经系统发育等情况。医师采纳药师意见。患儿静脉用阿昔洛韦期间未出现不良反应,好转出院后口服阿昔洛韦第4周出现血肌酐和尿素升高,停药后恢复正常。患儿随访至1岁,预后良好,未出现神经系统后遗症。临床药师通过参与药学会诊,协助临床医师明确了治疗策略,降低了新生儿的用药风险,在药物治疗过程中发挥了积极有效的作用,体现了临床药师在多学科协作诊疗中的职业价值。

关键词： ⅱ型单纯疱疹病毒临床药师药学会诊新生儿

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