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烟草科技 2018年第5期51卷 39-45页

作者：李茹洋尚平平王宜鹏贾云祯孙培建孙学辉聂聪杨松中国烟草总公司郑州烟草研究院

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比。结果表明:... 详细信息

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比。结果表明:(1)A549细胞在三维细胞支架上可以吸附、增殖并融合形成细胞层,且在亲水改性支架上增殖更快;(2)培养21d后,三维细胞支架上A549细胞的吸光度(OD值)为3.601,高于二维平板上细胞长满(培养7 d)时的OD值(3.055);(3)3R4F和CM8卷烟烟气TPM浓度与二维平板和三维细胞支架培养的A549细胞存活率均具有良好的剂量-反应关系,且在高TPM浓度时,三维细胞体系下的细胞存活率高于二维细胞体系。该研究为卷烟烟气体外毒理学评价提供了一种新的三维细胞培养方法。

关键词：三维细胞支架二维平板细胞高内相乳液人肺腺癌细胞卷烟烟气细胞毒性评价

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三维细胞支架的构建及在烟气毒理学评价中的应用

三维细胞支架的构建及在烟气毒理学评价中的应用

引用

作者：李茹洋中国烟草总公司郑州烟草研究院

学位级别：硕士

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架，采用高内相乳液法制备材料，以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养，依据细胞增殖速度和细胞形态，获得了三维细胞支架的最佳制备参数。在三维细胞体系下，评价3R4F和CM8两种参... 详细信息

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架，采用高内相乳液法制备材料，以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养，依据细胞增殖速度和细胞形态，获得了三维细胞支架的最佳制备参数。在三维细胞体系下，评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性，并与二维平板细胞进行对比。主要研究内容如下:\n 1.根据后续烟气体外毒理学评价的要求，设计了三维细胞支架的合成模具。通过高内相乳液法，制备了不同单体（苯乙烯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸甲酯）、水相体积比(80％、85％、90％)、乳化剂用量（2.4 g、1.9 g和1.4 g）的三维细胞支架，通过扫描电镜和对支架的结构进行了表征。以其为载体进行A549细胞的三维培养，考察了不同时间的细胞增殖情况，通过扫描电镜观察细胞的生长形态。结果表明:1）在设计的三维细胞支架合成模具中，通过高内相乳液法可一次性大量合成特定形状的(直径:34mm，厚度:2mm)块状固体材料，可满足后续烟气体外毒理学评价的要求;2）不同单体制备的三维细胞支架均具有互通多孔结构，A549细胞在不同单体制备的三维细胞支架上都可吸附、增殖并融合形成细胞层，以St为单体制备的三维细胞支架上细胞的生长形态更好，最终选择St为单体制备三维细胞支架;2）当水相体积比从80％增加到90％时，材料的泡孔孔径从6.5μm增加到12μm。A549细胞在水相体积比为90％的支架上增殖最快，在不同水相体积比支架上的生长形态差异不大，制备三维细胞支架的较佳水相体积比为90％;3）当乳化剂用量从2.4 g（连续相的50％）降到1.4 g（连续相的30％）时，三维细胞支架的泡孔孔径增大，支架的互通性变差。A549细胞在乳化剂用量为2.4 g的支架上增殖速度最快，在三种支架上的生长形态差异不大，制备三维细胞支架的较佳乳化剂用量为2.4 g。\n 2.为了进一步提高三维细胞支架的细胞亲和性，采用在单体中加入亲水性单体或颗粒和在支架上包被聚赖氨酸两种改性方法，研究A549细胞在不同改性方法制备的三维细胞支架上的增殖情况。结果表明:1）加入丙烯酸(Aa)和丙烯酸异辛酯(EHA)亲水性单体改性的三维细胞支架泡孔孔径变大，加入亲水性颗粒羟基磷灰石(HAP)改性的支架泡孔完整性变差，孔壁变厚，但泡孔孔径不变。细胞在用Aa改性的支架上增殖速度最快，且细胞形态良好，在用HAP改性的支架上基本不增殖，在支架上只能看到细小的细胞碎片;2）细胞在用L构型的聚赖氨酸溶液包被的支架上增殖良好，在用D构型的聚赖氨酸溶液包被的支架上的增殖受到了抑制。其中在用分子量为70000-15000的L构型聚赖氨酸包被的支架上的增殖速度最快，且细胞形态良好;(3)两种改性方法相比，采用Aa改性的支架具有更高的细胞增殖速度，因此，三维细胞支架较佳的改性方法为在单体中加入亲水性单体Aa。\n 3.选用采用Aa改性的三维细胞支架培养细胞，进行烟气细胞毒性评价，并与二维平板细胞进行了比较。结果表明:1）细胞培养21d后，三维细胞支架上A549细胞的OD值为3.601，高于二维平板上细胞长满时的OD值(3.055);2)3R4F和CM8两种参比卷烟的TPM与二维和三维培养的A549细胞的存活率均有良好的剂量一反应关系，且在高TPM浓度时，三维细胞体系的细胞存活率高于二维细胞体系。

关键词：烟气毒理学评价三维细胞支架烟草化学

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离心粘结法制备孔隙连通的三维细胞支架

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中国生物工程杂志 2005年第10期25卷 39-46页

作者：陈际达刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科

目的:改进多孔支架制备技术,使多孔支架具有孔隙结构均匀、孔隙连通性良好的特性。方法:间歇离心技术与湿度粘结方法结合,改善致孔剂粘结的均匀性;溶液浇注/颗粒沥析技术制备三维多孔细胞支架;扫描电镜观察支架的孔隙结构,原子吸收光谱... 详细信息

目的:改进多孔支架制备技术,使多孔支架具有孔隙结构均匀、孔隙连通性良好的特性。方法:间歇离心技术与湿度粘结方法结合,改善致孔剂粘结的均匀性;溶液浇注/颗粒沥析技术制备三维多孔细胞支架;扫描电镜观察支架的孔隙结构,原子吸收光谱检测致孔剂残余,力学实验仪与重量法表征支架的其它物理性能与制备条件的关系。结果:三维多孔支架的孔隙呈球形、分布均匀、孔隙相互连通、通道呈规则的圆形;支架中无残余致孔剂。以聚乳酸为原料制备的支架,其孔隙率、压模量、吸水率分别高达94.7±0.5%、509±6kPa、208.2±20.3%。结论:间歇离心粘结——溶剂浇注/颗粒沥析技术,能够制备出孔隙结构均匀、孔隙相互完全连通的三维细胞支架,支架的孔隙大小和通道尺寸人为可控,支架的孔隙率和强度高,孔隙结构符合组织工程的要求,是一种比较理想的三维细胞支架制备方法。

关键词：离心粘结法制备方法孔隙连通三维细胞支架组织工程

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内部结构可控的大体积三维细胞支架制备研究

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中国生物工程杂志 2006年第1期26卷 1-5页

作者：陈际达刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院

目的：研究一种可以控制三维细胞支架内部孔隙结构的实验技术，用于制备孔隙结构可控的三维细胞支架，以满足组织工程对支架孔隙结构的要求。方法：均匀混合粘结剂与致孔剂，在离心力作用下去除混合物中多余的粘结剂，应用溶剂浇注／颗... 详细信息

目的：研究一种可以控制三维细胞支架内部孔隙结构的实验技术，用于制备孔隙结构可控的三维细胞支架，以满足组织工程对支架孔隙结构的要求。方法：均匀混合粘结剂与致孔剂，在离心力作用下去除混合物中多余的粘结剂，应用溶剂浇注／颗粒沥析方法制备三维细胞支架。结果：致孔剂粘结块的结构非常均匀，粘结程度可以通过实验条件控制。例如，直径为100-220μm的致孔剂，在离心力为161g，粘结剂浓度分别为20％和40％时，颗粒间粘结程度分别为33．78±5．56（134）μm和42．89±5．87（132）μm。并且，利用该技术制备的三维多孔支架，其内部孔隙大小取决于致孔剂颗粒大小，孔隙间的通道直径取决于致孔剂的粘结程度，即离心粘结与溶剂浇注／颗粒沥析技术相结合，能够方便地控制三维支架的孔隙结构。例如，当粘结程度为33．78±5．56（134）μm时，支架的通道直径为33．34±5．21（12）μm，两者之间无显著差异。结论：利用离心粘结与溶剂浇彰颗粒沥析技术结合，获得了孔隙呈球形、孔隙间完全连通的、结构均匀的大体积三维细胞支架，并且支架的孔隙以及孔隙间通道大小均可以实现人为控制。

关键词：组织工程致孔剂三维细胞支架粘结致孔剂

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内部结构可控的三维细胞支架制备技术研究

内部结构可控的三维细胞支架制备技术研究

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作者：陈际达上海第二医科大学上海交通大学

学位级别：博士后

(目的)开发出一类全水溶性球形致孔剂,并通过研究大体积致孔剂粘结技术,实现水溶性球形致孔剂的控制性粘结;结合溶液浇注/颗粒沥析技术,制备出内部结构可控的大体积多孔三维细胞支架,为组织工程研究和产业化提供理想的细胞支架制备技术.... 详细信息

(目的)开发出一类全水溶性球形致孔剂,并通过研究大体积致孔剂粘结技术,实现水溶性球形致孔剂的控制性粘结;结合溶液浇注/颗粒沥析技术,制备出内部结构可控的大体积多孔三维细胞支架,为组织工程研究和产业化提供理想的细胞支架制备技术.(方法)利用溶液分散技术将选定的致孔剂原料制备成球形颗粒,筛分致孔剂后获得各种直径的致孔剂微球.将盛有致孔剂微球的模具置于培养箱内粘结,利用显微镜观察模具中致孔剂的粘结程度、粘结均匀性与粘结方式、粘结条件之间的关系,获得粘结均匀性良好、粘结程度可控的最佳粘结方式和粘结条件.用聚乳酸(PDLLA)的氯仿溶液,浇铸于最佳粘结方式和粘结条件下获得的致孔剂粘结块,待浇注聚乳酸溶液的致孔剂粘结块干燥后,用蒸馏水溶出致孔剂粘结块中的致孔剂,获得三维多孔细胞支架.最后表征三维支架的结构、力学性能、降解行为等性质.

关键词：三维细胞支架溶剂浇铸颗粒沥析组织工程致孔剂大体积结构可控

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基于飞秒激光制备的三维细胞支架及其在神经网络构建中的应用

基于飞秒激光制备的三维细胞支架及其在神经网络构建中的应用

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作者：范胜颖中国科学技术大学

学位级别：博士

三维(3D)细胞培养接近于原生细胞的生长环境,可以更好地发挥细胞本身的功能以及加强细胞之间的联系,因此发展适用于细胞3D培养的3D细胞支架具有十分重要的意义。近年来,各类3D细胞支架相继出现,已广泛应用于生物芯片集成、血管组织生成... 详细信息

三维(3D)细胞培养接近于原生细胞的生长环境,可以更好地发挥细胞本身的功能以及加强细胞之间的联系,因此发展适用于细胞3D培养的3D细胞支架具有十分重要的意义。近年来,各类3D细胞支架相继出现,已广泛应用于生物芯片集成、血管组织生成以及3D神经网络构建等领域。神经元是一种存在特殊的轴突和树突结构的细胞,通过定制的3D支架可引导其形成复杂的神经网络,这引起科研人员浓厚的兴趣并进行了相关研究。但是,受限于制备技术的灵活性和精度,当前报道的3D神经细胞支架难以实现对单细胞的引导作用,这大大限制了生物神经网络体外建模的发展。据此,本文提出以飞秒激光双光子聚合技术加工3D神经细胞支架。飞秒激光双光子聚合技术可以突破光学衍射极限,从而实现亚微米尺度的加工分辨率,因此适合于制备形貌可控的高精度3D细胞支架。基于飞秒激光加工技术,本文制备了两种3D神经细胞支架,一种是微柱阵列,另一种是多孔中空微管阵列,通过这两种支架分别实现了 3D神经回路的构建以及神经细胞的加速定向生长。本文主要内容如下:(1)实现了神经干细胞向神经元的定向诱导分化以及原代胎鼠海马神经元的提取和培养。针对神经干细胞诱导分化的神经元,研究了血清浓度以及蛋白类型对神经元分化比例的影响。针对分化的神经元和提取的神经元,通过活细胞成像技术、免疫荧光成像技术、钙荧光成像技术以及扫描电镜成像技术,表征了细胞状态、细胞活性、细胞功能和细胞形态。(2)制备了 3D微柱支架,研究了其间距和高度对神经元生长形态和生长取向的引导作用。无论是线形排列还是圆形排列,该支架均可实现引导神经元定向生长形成3D神经回路。在圆形支架的引导下,神经元形成自体神经元的比例可以达到50%以上。通过钙成像技术,阐明了形成的3D神经回路中突触信号的传输机制,证实了功能性3D神经网络的成功形成。(3)制备了 3D多孔中空微管,阐述了微管内径、壁厚和长度对神经细胞的神经突加速定向生长的引导机制。本文制备的3D多孔微管模拟了轴突的髓鞘,该微管可加快神经突生长速度,最快可以提高10倍。此外,针对神经网络定向连接问题,本文进一步制备了一种磁性3D多孔中空微管,在磁场的辅助下,实现了神经簇选择性定向连接;同时,通过免疫荧光成像技术和钙离子成像技术,证实了两神经簇的成功连接,即形成了功能性神经网络。本文基于飞秒激光加工技术提出了促进体外神经加速生长及神经回路形成的微阵列,为体外3D生物神经网络建模提供了一种新的方法和思路,也进一步拓展了飞秒激光加工技术的应用。

关键词：三维细胞支架飞秒激光微柱多孔中空微管神经干细胞海马神经元神经网络

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具有自缓冲性能的三维细胞支架研制

具有自缓冲性能的三维细胞支架研制

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作者：王芳重庆大学

学位级别：硕士

组织工程学的科学意义不仅在于为解除病人痛苦提供了一种新的治疗方法,更重要的是提出了复制“组织”、“器官”的新思想,它标志着“生物科技人体时代”的到来,是“再生医学的新时代”,是“一场意义深远的医学革命”。细胞支架,不仅影... 详细信息

组织工程学的科学意义不仅在于为解除病人痛苦提供了一种新的治疗方法,更重要的是提出了复制“组织”、“器官”的新思想,它标志着“生物科技人体时代”的到来,是“再生医学的新时代”,是“一场意义深远的医学革命”。细胞支架,不仅影响细胞的生物学行为和培养效率,而且决定着移植后,能否与机体良好的适应、结合和修复,是限制组织工程应用于临床的一个关键因素。研制孔隙率高、孔隙连通性好、物化性能满足生物功能要求的细胞支架具有重要意义。本文针对细胞支架制备方法中存在的不足,采用喷雾法制备出不同孔径的磷酸氢二钠球形致孔剂,利用改进的溶液浇铸/粒子沥滤技术(混合压制成型技术),制备聚乳酸细胞支架,探讨了制备条件对支架孔隙结构、形态的影响;并在三维聚乳酸支架中加入微胶囊作缓冲体系,探讨了不同条件对微球成囊现象、包埋率、粒径分析及释放速度等的影响;观测支架的体外降解行为,探讨影响支架降解的因素,研究了支架的自缓冲作用。利用分光光度法测定小体积溶液酸度的方法,测定降解过程中支架内部溶液的酸度。本实验制备出了孔隙率达93%以上,直径为0.826±0.079 cm,高为0.314±0.016 cm的圆柱形多孔聚乳酸支架,支架内部孔隙形态规则、孔隙连通、整体均匀性好,从而证明混合压制成型技术是一种快速、实用的、能构建满足组织工程需求的聚乳酸细胞支架的方法。荧光倒置显微镜和扫描电镜观察表明,加入的微胶囊均嵌在聚乳酸支架壁内,支架孔隙形态、结构、连通性基本没有改变,表明混合压制成型技术制得的具有微胶囊自缓冲体系的细胞支架,集天然材料与合成材料优势于一体,内部结构可控,孔隙率高,孔隙连通性好。利用了分光光度法测定小体积溶液酸度的方法,正确评价支架降解过程中微环境的酸度变化规律,验证了小体积溶液酸度测定法是一种稳定、准确、精密度高而又简便、可行的测试技术。加入赖氨酸-壳聚糖微胶囊的支架的酸度变化比没有加微胶囊的支架要小,进而说明加入微胶囊缓释体系有效避免了支架材料因降解而引起的局部酸性累积。辅以降解过程中支架失重、分子量变化的测定结果,可得到降解介质、微胶囊含量对支架材料的降解影响较大,水解介质的更换情况、孔隙大小对支架降解速度影响较小等结论。支架降解过程中,内部与外部溶液酸度及其变化规律基本一致的实验结果,表明了支架的内部与外部降解介质具有良好的流通性质,从而进一步证实了支架具有良好的孔隙间连通性。综上所述,利用微胶囊缓释作用结合混合压制成型技术,可以制备出孔隙分布均匀、孔隙率高、连通性好的多孔细胞支架,该支架避免了聚乳酸的自催化降解或酸性产物积累缺陷,能满足组织工程需求,在组织工程中具有广泛的应用价值。同时也验证了小体积溶液酸度测定方法是一种具有潜在价值,可用于测定降解过程中支架内外降解液酸度的实用方法。

关键词：微胶囊自缓冲作用光度法测定小体积溶液酸度三维细胞支架生物降解

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基于丝素蛋白的反蛋白石结构三维细胞支架的构建研究

基于丝素蛋白的反蛋白石结构三维细胞支架的构建研究

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作者：汤栋梁东南大学

学位级别：硕士

蚕丝是一种古老的天然材料,被人利用的历史已经有几千年。丝素蛋白是从蚕丝中提取出来的一种天然蛋白,由18种氨基酸组成,其中富含的甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸多以-Gly-Ala-Gly-Ala-Ser-重复序列的多肽形式存在。丝素蛋白被用作手术缝合材... 详细信息

蚕丝是一种古老的天然材料,被人利用的历史已经有几千年。丝素蛋白是从蚕丝中提取出来的一种天然蛋白,由18种氨基酸组成,其中富含的甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸多以-Gly-Ala-Gly-Ala-Ser-重复序列的多肽形式存在。丝素蛋白被用作手术缝合材料应用于生物医学领域也已有数百年历史,其优异的生物相容性,生物可降解性,良好的机械性能和光学性能在目前的高科技研究平台下有了更广阔的应用空间。在治疗组织器官损伤方面,组织工程是最具前景的方式,它能够避免传统治疗方法中会出现的免疫排斥和供体短缺等问题。在组织工程的多个重点问题当中,细胞支架的结构和性质是在材料科学和生物医学领域最被广泛研究的。细胞支架的结构关系到细胞的粘附,细胞的增殖,营养物质的转移和代谢产物的排出等多个方面。丝素蛋白具有生物相容性和生物可降解性,是一种理想的细胞支架材料,我们希望将丝素蛋白应用于细胞支架中,制备成一种具有良好反蛋白石结构的三维细胞支架。本论文主要研究了一种基于丝素蛋白的反蛋白石结构三维细胞支架的有效制备方法,具体工作如下：1.丝素蛋白的提取及凝胶化试验：我们从生蚕茧中提取丝素蛋白,并对比了不同提取体系的特点;将提取的丝素蛋白制备成包括水凝胶、海绵、纳米纤维薄膜等不同形式,并评估三种不同形式丝素蛋白材料的不同性质。2.丝素蛋白反蛋白石结构三维细胞支架的构建：我们利用自制的微流控装置制备了三种材料的单分散性模板微球;通过对比确定聚己内酯材料为制备模板微球的最佳方案,并将其模板微球排列成密堆积结构的模板团聚体;将丝素蛋白浸润到模板团聚体空隙中复制模板结构,最后将模板微球除去即可得到反蛋白石结构的丝素蛋白三维细胞支架。3.丝素蛋白细胞支架的细胞培养试验：我们研究了丝素蛋白水凝胶材料和海绵材料在细胞培养试验中的优劣,认为海绵形式更好的机械性能使之相较于水凝胶形式更具优势;将丝素蛋白海绵的反蛋白石结构三维细胞支架应用于细胞试验,利用倒置荧光显微镜等方式表征了细胞的粘附和生长情况,并用MTT法评估了细胞的活性和增殖情况。

关键词：丝素蛋白微流控装置三维细胞支架反蛋白石结构细胞培养

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温敏性微凝胶用于可注射三维细胞支架材料的研究

温敏性微凝胶用于可注射三维细胞支架材料的研究

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作者：甘添天南开大学

学位级别：硕士

本文制备了两种温敏性水凝胶细胞支架材料：1. P(NIPAM-HEMA)微凝胶细胞支架的制备及表征以往的研究者多采用线性或枝型高分子来合成凝胶支架材料,在本文中我们尝试用高分子微球作为构建支架结构的单元。我们以N-异丙基丙烯酰胺(N-isopr... 详细信息

本文制备了两种温敏性水凝胶细胞支架材料： 1. P(NIPAM-HEMA)微凝胶细胞支架的制备及表征以往的研究者多采用线性或枝型高分子来合成凝胶支架材料,在本文中我们尝试用高分子微球作为构建支架结构的单元。我们以N-异丙基丙烯酰胺(N-isopropyl-acrylamide/ NIPAM)、甲基丙烯酸-2-羟基乙酯(2-hydroxyethyl methacrylate/HEMA)为单体,N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(N,N'-methylene-bis-acrylamide/BIS)为交联剂,制备了温敏性P (NIPAM-HEMA)微凝胶。该微凝胶具有良好的温度敏感性和生物相容性。粒度仪实验表明,该P(NIPAM-HEMA)微凝胶的相转变温度为29℃。然而流变实验表明,该凝胶分散液在温度高于其VPTT实仍保持稳定,说明疏水作用不能单独引发凝胶化。在加入氯化钙,即引入了离子键后,凝胶乳液在37℃下凝胶迅速凝胶化,而且增加CaCl2的浓度,凝胶水溶液的VPTT逐渐降低。SEM实验表明,该凝胶呈互穿的多孔结构,该多孔结构有利于培养物质的传递及细胞代谢物质的排泄。我们以293T细胞为模型,将单细胞分散液与浓缩后的凝胶水溶液在室温下混合,在37℃下加热形成凝胶支架,并置于培养箱中长期培养。MTT实验及荧光倒置显微镜实验表明,293T细胞在该支架材料中能正常生长增殖,但长期培养的293T细胞会变小,这是由于PNIPAM水凝胶的收缩作用导致的。 2.丙烯酸对PNIPAM微凝胶收缩作用的影响在第一个工作中,P(NIPAM-HEMA)水凝胶仍然存在不足。水凝胶中的293T细胞会变小,这是P(NIPAM--HEMA)水凝胶的收缩作用导致的,有可能会改变293T细胞的生理功能。因此,在第二个工作中,我们尝试在PNIPAM长链中引入丙烯酸基团(Acrylic acid/AAc),丙烯酸基团具有良好的亲水性及良好的生物相容性,通过丙烯酸的亲水作用使水凝胶部分亲水,从而减弱微凝胶的收缩作用。我们仍然以N-异丙基丙烯酰胺、丙烯酸(AAc)为单体,N,N’-亚甲基双(丙烯酰胺)为交联剂,合成系列不同丙烯酸含量的P(NIPAM-AAc)共聚微凝胶。在37℃下原位形成大块凝胶,并研究该系列凝胶的原位收缩现象。实验表明,AAc能有效改变PNIPAM微凝胶的相转变行为,系列P(NIPAM-AAc)大块凝胶在37℃下的收缩现象呈现出一定的规律性。我们选取了其中几个较低AAc含量的P(NIPAM-AAc)共聚微凝胶样品用于制备可注射细胞支架。将HepG2细胞与P(NIPAM-AAc)系列共聚微凝胶混合,在37℃下加热原位形成细胞支架,长期培养以观察细胞的生长情况。经系统观察,我们发现不同AAc含量的凝胶支架的细胞形态、数量明显不同,其中含量为AAc%=1%的P(NIIPAM-AAc)的细胞生长增殖现象最为明显,说明AAc%=1%的P(NIPAM-AAc)共聚微凝胶形成的细胞支架最为适合细胞生长。

关键词：温敏性微凝胶可注射三维细胞支架

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三维细胞支架的制备及在烟气细胞毒性评价中的应用

三维细胞支架的制备及在烟气细胞毒性评价中的应用

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中国烟草学会2018年学术年会

作者：李茹洋尚平平王宜鹏贾云祯孙培建孙学辉杨松聂聪中国烟草总公司郑州烟草研究院郑州市高新技术产业开发区枫杨街2号 450001

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比.结果表明:... 详细信息

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比.结果表明:①A549细胞在三维细胞支架上可以吸附、增殖并融合形成细胞层,且在亲水改性支架上增殖更快;②培养21d后,三维细胞支架上A549细胞的吸光度(OD值)为3.601,高于二维平板上细胞长满(培养7d)时的OD值(3.055);③3R4F和CM8卷烟烟气TPM浓度与二维平板和三维细胞支架培养的A549细胞存活率均具有良好的剂量-反应关系,且在高TPM浓度时,三维细胞体系下的细胞存活率高于二维细胞体系.该研究为烟气体外毒理学评价提供了一种新的三维细胞培养方法.

关键词：卷烟烟气毒性评价三维细胞支架

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