检索结果-内蒙古大学图书馆

中华核医学杂志 2005年第2期25卷 97-99页

作者：张勇陈维真谢瑶高锦辉中山大学附属第三医院核医学科广州510630 中山大学基础医学院解剖学教研室中山大学基础医学院实验核医学教研室

目的　探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法　针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺... 详细信息

目的　探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法　针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果　2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论　该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖。

关键词：前列腺癌细胞增殖三螺旋形成寡核苷酸雄激素受体逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 放射配基结合分析法前列腺癌细胞株 LNCaP细胞细胞增殖活性胸腺嘧啶核苷 mRNA表达反义寡核苷酸反基因策略脂质体介导蛋白质表达序列设计

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人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)在提高基因打靶效率中的应用

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安徽农业科学 2013年第1期41卷 460-465页

作者：李和刚程文科江科任小利姜永平侯乐乐郝小静赵金山青岛市畜牧兽医研究所山东青岛266100 海南省畜牧技术推广站海南海口570203 山东省青岛市莱西市畜牧兽医局山东青岛266600 山东省青岛市莱西市日庄镇农业服务中心山东青岛266600

基因打靶技术是研究基因功能的重要手段,而基因打靶效率特别是体细胞的打靶效率非常低下。人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)是目前正在研究的提高打靶效率的方法。文中综述了这2种方法的基本原理、设计思路及在提高基因... 详细信息

基因打靶技术是研究基因功能的重要手段,而基因打靶效率特别是体细胞的打靶效率非常低下。人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)是目前正在研究的提高打靶效率的方法。文中综述了这2种方法的基本原理、设计思路及在提高基因打靶效率中的应用,并对2种方法的特点进行了分析比较,最后对其未来发展进行了展望。

关键词：基因打靶双链断裂锌指核酸酶归巢核酸内切酶三螺旋形成寡核苷酸

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乙型肝炎病毒(HBV)反基因与HBV的结合及对HBV复制的影响

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中华内科杂志 2001年第4期40卷 243-246,T001页

作者：高勇罗端德蔡淑清曾令兰李淑莉华中科技大学同济医学院附属协和医院传染病教研室武汉430022

目的　研究三螺旋形成寡核苷酸与ＨＢＶ基因的结合情况及其对ＨＢＶ复制的影响。方法　合成一段能与ＨＢＶ核心启动子位点（１７３４～１７５３ｎｔ）形成三螺旋的寡核苷酸（ＴＦＯ２０）并标记上生物素，分别用脂质体－ＴＦＯ２０及裸... 详细信息

目的　研究三螺旋形成寡核苷酸与ＨＢＶ基因的结合情况及其对ＨＢＶ复制的影响。方法　合成一段能与ＨＢＶ核心启动子位点（１７３４～１７５３ｎｔ）形成三螺旋的寡核苷酸（ＴＦＯ２０）并标记上生物素，分别用脂质体－ＴＦＯ２０及裸ＴＦＯ２０转染ＨｅｐＧ２．２．１５细胞，用链酶亲和素－生物素法（ＳＡＢＣ）检测其转染效率及其与ＨｅｐＧ２．２．１５细胞中ＨＢＶＤＮＡ的结合情况；并采用ＥＬＩＳＡ、半定量逆转录（ＲＴ）－ＰＣＲ及荧光定量ＰＣＲ法分别检测经寡核苷酸处理的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞及空白对照细胞上清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ及细胞中ＨＢＶＲＮＡ的水平。结果　脂质体－ＴＦＯ２０转染ＨｅｐＧ２．２．１５细胞的效率可达８０％，而裸ＴＦＯ２０转染率最高为４０％；ＴＦＯ２０主要定位于细胞核及胞浆中。ＴＦＯ２０处理组细胞上清中ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ含量分别较空白对照组降低３７．０％及７８．２％，ＨＢＶＤＮＡ水平较空白对照组明显降低；而细胞中２．４ｋｂ／２．１ｋｂＲＮＡ、３．５ｋｈ／３．４ｋｂＲＮＡ亦分别降低３１．６％及７０．２％。结论ＴＦＯ２０通过脂质体包裹后可以很好地进入细胞并与ＨＢＶ　ＤＮＡ结合；ＴＦＯ２０能?

关键词：乙型肝炎病毒三螺旋形成寡核苷酸 HBV 病毒复制反基因技术 TFO技术

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反基因及反义寡核苷酸体外抗前列腺癌作用的研究

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中华泌尿外科杂志 2005年第7期26卷 472-475页

作者：张勇陈维真谢瑶姚志彬温星桥中山大学附属第三医院核医学科广州510630 中山大学基础医学院解剖学教研室中山大学附属第三医院泌尿外科广州510630

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸(TFO)和反义寡核苷酸(ASO)对前列腺癌细胞雄激素受体(AR)表达和细胞增殖的影响。方法设计并合成针对AR基因的TFO和ASO,经脂质体介导转染前列腺癌细胞株LNCaP。MTT法检测细胞增殖活性,RTPCR检测AR基因表达,免... 详细信息

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸(TFO)和反义寡核苷酸(ASO)对前列腺癌细胞雄激素受体(AR)表达和细胞增殖的影响。方法设计并合成针对AR基因的TFO和ASO,经脂质体介导转染前列腺癌细胞株LNCaP。MTT法检测细胞增殖活性,RTPCR检测AR基因表达,免疫组化法检测AR蛋白表达,放射免疫分析检测PSA表达。结果转染后24、48、72h,TFO组LNCaP细胞ARmRNA平均表达水平分别为0.25、0.33、0.46,显著低于ASO组的0.44、0.54、0.60,P<0.05;TFO对LNCaP细胞的生长抑制率(51.8%、65.8%、36.2%)显著高于ASO(28.8%、42.6%、17.5%),P<0.05。TFO对AR蛋白表达的抑制作用强于ASO。转染后24hPSA表达水平[(0.5±0.1)ng/ml]显著低于ASO组[(0.8±0.2)ng/ml],P<0.05。结论在LNCaP细胞TFO对AR表达和癌细胞增殖的抑制作用明显强于ASO,反基因策略对于前列腺癌的治疗具有重要研究价值。

关键词：反义寡核苷酸抗前列腺癌 LNCaP细胞三螺旋形成寡核苷酸前列腺癌细胞株免疫组化法检测 LNcaP细胞体外细胞增殖活性 MTT法检测 0.05 蛋白表达抑制作用雄激素受体 ASO TFO 脂质体介导 PCR检测生长抑制率癌细胞增殖

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反雄激素受体基因TFO体外抗前列腺癌细胞增殖作用研究

反雄激素受体基因TFO体外抗前列腺癌细胞增殖作用研究

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作者：张勇中山大学

学位级别：博士

在全球范围内,前列腺癌的发病率在不断增高.临床上约有40％的前列腺癌在确诊时已进入晚期,失去了根治机会,主要依靠激素治疗来延缓肿瘤生长.虽然80%左右的前列腺癌在开始治疗时对激素治疗表现出敏感性,并可获得数月或数年的缓解期,但肿... 详细信息

在全球范围内,前列腺癌的发病率在不断增高.临床上约有40％的前列腺癌在确诊时已进入晚期,失去了根治机会,主要依靠激素治疗来延缓肿瘤生长.虽然80%左右的前列腺癌在开始治疗时对激素治疗表现出敏感性,并可获得数月或数年的缓解期,但肿瘤最终会进展到激素治疗抵抗状态而复发.目前对抗拒激素治疗的前列腺癌(HRPC)一般采用化学治疗和二线激素治疗,但作用均非常有限,患者的平均生存期只有4-15个月.近年来的研究表明,雄激素受体(AR)在HRPC的发生发展中发挥了重要作用.AR可能通过以下几个机制参与HRPC的形成:(1)去势治疗后,虽然血清睾酮水平可减少95%以上,但肾上腺来源的雄激素可转变为双氢睾酮激活AR来维持癌细胞的生长;(2)AR基因突变降低了AR与配体结合的特异性,雌激素、孕激素、肾上腺激素甚至雄激素拮抗剂均能与发生突变的AR结合并激活转录,使前列腺癌细胞在缺乏雄激素时,仍可依赖其他类固醇激素获得非雄激素依赖性生长;(3)基因扩增使AR表达增加,提高AR对低浓度雄激素的敏感性,使前列腺癌细胞可以充分利用治疗后残存的激素维持生长;(4)在缺少雄激素的环境中,一些生长因子和蛋白激酶可通过非配体依赖方式激活AR以维持前列腺癌细胞生长.已有研究显示,利用反义技术抑制AR表达可抑制前列腺癌细胞增殖,因此AR基因有望成为治疗前列腺癌的新靶点.该研究采用反基因技术抑制AR表达,探讨反基因治疗前列腺癌的潜在价值,为晚期前列腺癌的治疗提供新的手段.

关键词：前列腺癌雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸

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HBV反基因对HBV复制影响的研究

HBV反基因对HBV复制影响的研究

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作者：高勇华中科技大学同济医学院华中科技大学

学位级别：博士

目前关于TFO对乙型肝为病毒复制影响的研究只有一篇报道,该研究就此设计一段能与HBV核心启动子SP区(nt1734-1753)形成三螺旋的TFO并标记上生物素,转染HepG2.2.15细胞,检测其转染效率及其与HepG2.2.15细胞中HBV DNA及细胞中HBV RNA水平... 详细信息

目前关于TFO对乙型肝为病毒复制影响的研究只有一篇报道,该研究就此设计一段能与HBV核心启动子SP区(nt1734-1753)形成三螺旋的TFO并标记上生物素,转染HepG2.2.15细胞,检测其转染效率及其与HepG2.2.15细胞中HBV DNA及细胞中HBV RNA水平的影响;并利用裸鼠建立能够稳定分泌HBV的动物模型,初步研究HBV反基因在整体水平上对HBV复制的影响.该实验分为四个部分:第一部分,HBV反基因的设计.目的:测定HepG2.2.15细胞中HVB基因组的部分序列,根据测序结果及TFO设计原则设计出HBV反基因.结论:设计出TFO的序列为5'-CTCCTCCCCCAACTCCTCCC-3',命名为TFO20.第二部分,HBV反基因与HBV DNA的结合情况.目的:比较裸TFO20和脂质体-TFO20复合物转染效率的差别,观察TFO20与HBV DNA结合的情况.结论:TFO20通过脂质体包裹转染可以很好地进入HepG2.2.15细胞中并与HBV DNA结合.第三部分,HBV反基因对HBV复制的体外抑制作用.目的:检测TFO20对HepG2.2.15细胞或培养上清中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg水平的影响.结论:脂质体-TFO20复合物在体外能够有效地抑制HBV复制,发挥抗病毒作用.第四部分,HBV反基因对HVB复制的体内抑制作用.目的:检测TFO20在整体水平上对HBV复制的影响.结论:脂质体-TFO20复合物在整体水平上具有一定的抗乙型肝炎病毒作用,但有一定的局部毒性作用.

关键词：乙型肝炎病毒序列测定脂质体转染三螺旋形成寡核苷酸乙型肝炎病毒抗病毒作用

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适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用

适配子修饰PLGA纳米粒子靶向基因载体的构建及初步应用

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作者：邹琼中山大学

学位级别：硕士

研究背景及目的在全世界范围内，前列腺癌是男性第二位的恶性肿瘤，居男性肿瘤死亡病因的第六位。近半数前列腺癌在诊断时已进入晚期，或转化为抗拒激素治疗的前列腺癌，传统治疗方法如手术、放疗、内分泌治疗和化疗等疗效欠佳，仍需要... 详细信息

研究背景及目的在全世界范围内，前列腺癌是男性第二位的恶性肿瘤，居男性肿瘤死亡病因的第六位。近半数前列腺癌在诊断时已进入晚期，或转化为抗拒激素治疗的前列腺癌，传统治疗方法如手术、放疗、内分泌治疗和化疗等疗效欠佳，仍需要寻求安全有效的治疗措施。基因治疗是有效且序列特异性的治疗手段，可能有助于晚期前列腺癌的治疗，其中反基因技术通过三螺旋形成寡核苷酸（TFO）在靶基因局部形成DNA三螺旋从而在转录水平抑制基因的表达和细胞增殖。基因治疗的关键是选择高效的基因载体。高分子聚合物纳米粒子（NP）性能优良作为基因载体被广泛研究，但缺乏主动靶向性。适配子（Apt）因其高度特异性和亲和力，逐渐成为肿瘤靶向治疗的热点。本课题使用生物相容性好、生物可降解的聚乳酸-乙醇酸共聚物（PLGA）及靶向前列腺特异性膜抗原的A10适配子，制备包裹TFO的靶向纳米药物TFO-NP-Apt，检测其纳米表征和药理学特性并初步探讨其体外抑制前列腺癌细胞增殖的作用，为前列腺癌提供新的治疗药物。材料和方法 1、药物制备：通过酸胺缩合反应将PLGA-COOH与NH2-PEG-COOH连接生成PLGA-PEG-COOH，NH2-A10适配子与PLGA-PEG-COOH连接生成PLGA-PEG-Apt，核磁共振氢谱验证两步连接。采用双乳化溶剂挥发法制备包裹TFO的纳米药物TFO-NP-Apt。动态激光光散射法测定纳米粒子的平均粒径和分散系数，相位分析光散射技术测定表面zeta电位。扫描电子显微镜下观察纳米粒子的表面形态。核酸/蛋白分析仪间接测定TFO含量计算纳米药物对TFO的包封率和载药量，体外药物释放实验验证纳米药物的缓释性。 2、细胞实验：制备荧光标记的TFO-NP-Apt、TFO-NP和TFO，分别在与细胞共培养后30min、1h、2h在荧光显微镜下定性评价前列腺癌LNCaP细胞（PSMA+、AR+）的摄取情况，流式细胞术定量评价细胞摄取情况。CCK-8试验设立TFO-NP-Apt、TFO-NP、TFO和NP组，24h、48h和72h组检测药物抗LNCaP增殖的量效关系和时效关系。细胞实验选用前列腺癌PC3细胞（PSMA-、AR-）作为对照组。结果 1、核磁共振氢谱分别在3.3-3.9ppm和1.2-1.7ppm出现PEG和Apt的特征峰，验证了PLGA-PEG-Apt的合成;动态激光散射法结果显示制备的纳米粒子平均粒径为225.2±8.1nm（Mean±SD，n=3），分散系数为0.096±0.02，粒径分布较集中，zeta电位约-35.5±3.3mV;扫描电镜下观察纳米粒子呈圆形，表面光滑，粒径分布较均匀;包封率为25.4%±3.1%（n=3），载药量为1.34±0.16μg/mg;TFO-NP-Apt的释放呈现突释之后的持续缓释过程。 2、细胞摄取实验中，每个时间段（30min、1h、2h）LNCaP对TFO-NP-Apt的摄取都明显好于TFO-NP和TFO，LNCaP对TFO-NP-Apt的摄取明显好于PC3。流式细胞术定量地验证，随着时间的延长，LNCaP对TFO-NP-Apt的摄取逐渐增多（p均<0.001）。CCK-8试验表明，TFO-NP-Apt能较好地抑制LNCaP的增殖，这一效果优于TFO-NP和TFO（p<0.001）;并且随着时间的延长或剂量的增加，TFO-NP-Apt抗LNCaP增殖的作用逐渐增强（p=0.004、p<0.001）。NP不表现抑制细胞增殖的作用。各时间段，TFO-NP-Apt、TFO-NP、TFO抗LNCaP增殖的作用都强于抗PC3的增殖(p<0.05)。结论 1、本课题成功制备了A10适配子修饰的PLGA纳米基因药物TFO-NP-Apt。纳米粒子表征理想;载体对基因治疗药物TFO的包封率、载药量理想;药物缓释性较好。 2、在细胞水平验证了纳米药物抗前列腺癌细胞增殖的作用。TFO-NP-Apt提高了LNCaP细胞的药物摄取率，增强了抑制LNCaP细胞增殖的作用，并且其抗增殖作用呈现良好的时效关系和量效关系。

关键词：前列腺癌纳米粒子适配子反基因三螺旋形成寡核苷酸

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抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

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中国临床药理学与治疗学 2002年第6期7卷 574-576页

作者：余永胜陈有华上海市第六人民医院传染科上海200233 皖南医学院弋矶山医院传染科芜湖241001

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展 ,抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究 ,利用基因重组、转基因及反义核酸等技术 ,在细胞水平或通过动物实验阶段的研究 ,基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本文... 详细信息

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展 ,抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究 ,利用基因重组、转基因及反义核酸等技术 ,在细胞水平或通过动物实验阶段的研究 ,基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本文对转基因干扰素、DNA疫苗 (DNA免疫 )、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸 (反基因寡核苷酸 )。

关键词：乙型肝炎转基因干扰素 DNA疫苗反义寡核苷酸三螺旋形成寡核苷酸核酶

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